Reacciones enzimáticas

Factores que las afectan

Temperatura: las enzimas tienen una temperatura óptima a la cual funcionan de manera
más eficiente. Las enzimas funcionan como catalizadores a una temperatura constante,
pero su actividad aumenta con la temperatura pero a temperaturas muy elevadas
disminuye ya que se desnaturalizan.

pH: Toda enzima tiene un pH óptimo. Las enzimas citosólicas tienen un pH de 7-8. La
pepsina, secretada por las células gástricas tiene un pH óptimo de 1,5-2, la tripsina y
quimootripsina tienen un pH óptimo alcalino. Las anzimas lisosomales tienen un pH óptimo
ácido. El pH ejerce una carga iónica sobre las cadenas laterales de aminoácidos de las
enzimas.

Definición de actividad enzimática

Una unidad internacional de enzima cataliza la conversión de 1 micromol de sustrato en

producto por minuto. La actividad de la enzima se mide en condiciones definidas
(temperatura, pH y concentración de tampón, sustrato y coenzima). El Katal es la unidad de
medida, 1kat = 1mol/s.
La actividad específica de las enzimas es variable entre tejids y depende de la su función
metabólica, su acticidad específica se usa para calcular pureza, entre más actividad más
pureza.
La reacción catalizada por una enzima se da por los residuos de aminoácidos que se
encuentran en el centro catalítico de la enzima, el centro activo se forma por el sustrato y
centro catalítico. La especificidad del sustrato depende del tamaño, estructura, cargas,
polaridad e hidrogobicidad. Hay un grupo de enzimas que catalizan la hidrólisis de los
enlaces peptídicos de una proteína, sus especifidades de sustratp son distintas por la
estructura.
A las enzimas se les asigna un número de clasificación enzimática para organizar enimas que
catalizan miles de reacciones. El primer dígito indica una de las 6 principales clases de
enzimas. Los siguientes dígitos muestran subclases y sublcases de sustratos. También hay
isoenzimas, misma reaccieon pero distinta estructura.

Funciones coenzimas

Son moléculas facilitadoras. Las coenzimas unidas por enlace covalente se llaman
holoenzimas, una holoenzima sin coenzima se llama apoenzima. Las coenzimas solubles se
unen de manera reversible, se modifican en la reacción enzimática y después se disocian de
la enzima y son recicladas por otra enzima. La coA ayuda al transporte de intermediarios de
una enzima a otra en la secuencia de reacciones. La mayoría de coenzimas derivan de
vitaminas.

Cinética enzimática

Tienen múltiples pasos y constan de varias reacciones parciales. El modelo Michaelis-

Menten dice que el sustrato S se una a la enzima E formando un complejo enzima-sustrato
(ES) que reacciona en la superficie de la enzima y se descompone en E + P (producto). El
paso E + P es el limitante de la velocidad de catálisis. La velocidad depende de la energía de
activación de la reacción catalizada por la enzima. La constante catalítica Kcat es una
constante de velocidad qu emuestra la rapidez con la que una enzima cataliza la reacción.
Es el # de moléculas de sustrato convertidas en producto por molécula de enzima y unidad
de tiempo.

[𝑆]
𝑣 = 𝑉𝑚á𝑥 .
𝐾𝑚 + [𝑆]

La constante de Michaelis Km se expresa en unidades de concentración y corresponde a la

concentración del sustrato en la que v es el 50% de la velocidad máxima, es decir

1 𝑉𝑚á𝑥
[𝐸𝑆] = [𝐸]𝑡 𝑣 =
2 2

Km es una constante para calcula la afinidad de una enzima por su sustrato. Enzimas con
Km alta necesitan concentración de sustrato elevada para actividad eficiente. Km bajo ipera
de manera eficiente con pequeñas cantidades de sustrato.
E, S y ES están en equilibrio, E y ES son las únicas formas presentes de la enzima, la
conversión de ES en E+P es un paso IRREVERSIBLE Y LIMITANTE.
Gráficas Lineweaver-Burk y Eadie-Hofstee

En una gráfica de velocidad de reacción vs concentración de sustrato, la primera se acerca

a la velocidad máxima Vmáx asintóticamente por lo que no da valores pecisos de Vmáx y
Km.

Gráfica de Lineweaver-Burk
La gráfica de 1/v vs 1/[S] tiene una pendiente de Km/Vmáx, intersección de 1/v de 1/Vmáx
y 1/[S] de -1/Km. El hecho de calcular valores recíprocos de los datos induce a un error
experimental, especialmente concentraciones de sustrato bajas.

Gráfica Eadie-Hofstee
La representación de v frente a v/[S] tiene un eje y de vmáx, intersección del eje x (v/[S]) de
Vmáx/Km de una pendiente de -Km.

Mecanismo de acción enzimática

Las reacciones enzimáticas implican a grupos funcionales en enzimas, coenzimas, sustratos

y productos. El mecanismo varía según las enzimas, algunas veces la catálisis se realiza sobre
el sustrato unido a la enzima de manera reversible y no covalente. Otras, toda la acción
tiene lugar en una coenzima que forma un enlace covalente con el sustrato. Las serina
proteasas forman un intermediario covalente con sus sutratos, estas enzimas rompen los
enlaces peptídicos en las proteínas y grupos funcionales de las cadenas laterales de los aa
participan en la reacción catalizada por la enzima. Un residuo de serina en el centro activo
cataliza el rompimiento del enlace peptídico. Para aumentar la actividad en las serina
proteasas, el residuo de serina forma parte de una tríada catalítica, 𝐴𝑠𝑝102 , 𝐻𝑖𝑠 57 y 𝑆𝑒𝑟 195.
**

Inhibición enzimática

Muchos fármacos actúan como inhibidiores enzimáticos, aunque la mayor parte de los
inhibidores actúan de manera reversible, hay irreversibles que modifican
permanentemente las enzimas diana.
Inhibidores competitivos
Producen aumento aparente de Km sin modificar Vmáx. La enzima puede ser inhibida
competitivamente por sustances de estructura química similar a la del sustrato, se unen al
centro activo y compiten con el sustrato por el centro activo de la enzima. La inhibición es
el resultado sobre el acceso del sustrato al centro activo.
La constante de inhibición (Ki) es la constante de disociación del complejo enzima-inhibidor
(EI), a menor Ki más eficiente la inhibición de la actividad enzimática. Independientemente
de la Ki, la velocidad de la reacción catalizada por una enzima en presencia de un inhibidor
competitivo puede aumentarse incrementando la concentración de sustrato porque el
sustrato a una concetración más alta, compite de forma más eficaz con el inhibidor.

Inhibidores acompetitivos
Da lugar a una disminución aparente de Vmáx, se fija únicamente al complejo enzima-
sustrato, pero no a la enzima libre. En este caso Ki es la constante de disocición para el
complejo enzima-sustrato-inhibidor (ESI). El inhibidor disminuye la Vmáx porque una
fracción de ES es desviada por el inhibidor hacia el complejo ESI inactivo. La unión de
inhibidor y aumento del complejo ESI puede afectar la disociación del sustrato,
disminuyendo Km.
Estos inhibidores también pueden unirse a sitios de unión fuera del centro activo y
modificar Km y Vmáx de la enzima.
Regulación de la actividad enzimática

Para regular una vía metabólica se deben controlar enzimas que participan en el paso
limitante de la velocidad. Participan 5 mecanismos independientes.

- Expresión de proteína enzimática, cambia la respuesta a variaciones del entorno

celular o demandas metabólicas.
- Las enzimas se pueden activar o desactivar irreversiblemente por enzimas
proteolíticas.
- Las enzimas pueden ser in/activadas reversiblemente por moedificaciones
covalentes.
- La regulación alostérica modula la actividad de enzimas clave por fijación reversible
de moléculas pequeñas en lugares distintos del sitio activo.
- La degradación de las enzimas por proteasas intracelulares en el lisosoma, también
determina las visas medias de las enzimas y la actividad enzimática por más tiempo.

Activación proteolítica de las enzimas digestivas

Las enzimas digestivas se almacenan como proenzimas en vesículas secretoras del

páncreas. Luego osn secretados al jugo pancreático y se acrtivan en el tubo gastrointestinal.
El tripsinógeno se convierte en tripsina por la enteropeptidasa que está en la superficie
interna del duodeno e hidroliza un péptido N-terminal del tripsinógeno inactivo.

Regulación alostérica de las enzimas que catalizan los pasos limitantes en las vías
metabólicas

Las enzimas isotéricas tienen una curva de saturación hiperbólica mientras las alostéricas
tienen curvas de velocidad de reacción frente a concentración de sustrato [S] en forma de
S. Una molécula alostérica se fija a la enzima en un sitio distinto y físicamente alejado del
centro de fijación del sustrato y afecta la unión del sustrato a la Kcat.
El sustrato puede ejercer efectos alostéricos  homotrópico: afecta fijación de una
segunda molécula en un centro activo.
Efector alostérico distinto al sustrato  heterotrópico: la reacción de una molécula de
sustrato con una enzima multimérica afecta la fijación de una segunda molécula de sustrato
un un centro activo distinto de la enzima.

Cooperatividad positiva y negativa

Positiva: la reacción de un sustrato con el centro activo facilita la reacción de otro sustrato
en centro activo. Valor de H positivo e inferior a 1.
Negativa: reacción de un sustrato como centro activo dificulta la reacción de otro sustrato
en otro centro activo. Valor de H inferiores a 1.
En ausencia de sustrato la enzima tiene afinidad baje y está en estado tenso. También puede
estar en estado relajado ( R).

Medición enzimática de la glucosa sanguínea