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UNIVERSITARIO DE ELCHE
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INDICE
INTRODUCCIÓN. ........................................................................................... 10
Introducción. ................................................................................................ 11
Objetivo del manual. .................................................................................. 12
CONCEPTOS GENERALES. .......................................................................... 13
Normas básicas generales. ........................................................................ 14
Volante de petición. ................................................................................... 14
Obtención de la muestra. ......................................................................... 15
Recogida de la muestra. ........................................................................... 15
Transporte. .................................................................................................... 15
Horario de recepción de muestras y teléfonos de contacto. ............. 16
Establecimiento de prioridades. ............................................................... 16
Criterio de rechazo de muestras. ............................................................. 17
UROCULTIVOS. .............................................................................................. 18
Introducción. ................................................................................................ 19
Cultivo de bacterias: orina obtenida por micción media. .................. 20
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 20
- Conservación y transporte. ..................................................................... 21
- Observaciones. ......................................................................................... 21
Cultivo de bacterias: orina de pacientes con catéter permanente. 22
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 22
- Conservación y transporte. .................................................................... 23
- Observaciones. ......................................................................................... 23
Cultivo de bacterias: orina vesical. .......................................................... 23
- Indicaciones . ............................................................................................ 23
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 23
Cultivo de micobacterias: orina. .............................................................. 23
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 23
- Conservación y transporte. ..................................................................... 23
- Observaciones. ......................................................................................... 23
- Criterios de rechazo de las muestras. .................................................... 23
COPROCULTIVOS. ........................................................................................ 25
Introducción. ................................................................................................ 26
Cultivo de bacterias: heces . ................................................................... 26
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 26
- Conservación y transporte. ..................................................................... 27
- Observaciones . ........................................................................................ 27
Cultivo de bacterias: hisopos rectales. .................................................... 27
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 27
- Conservación y transporte. ..................................................................... 28
- Observaciones . ........................................................................................ 28
Estudio virológico: heces. .......................................................................... 28
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 28
- Conservación y transporte. ..................................................................... 28
- Criterio de rechazo de las muestras. ..................................................... 29
PARASITOS INTESTINALES. ............................................................................ 30
Estudio parasitológico: heces. .................................................................. 31
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 31
- Conservación y transporte. ..................................................................... 31
Estudio parasitológico: aspirado duodenal. ........................................... 32
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 32
- Conservación y transporte. ..................................................................... 32
Estudio parasitológico: oxiuros (prueba de Graham). .......................... 32
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 33
- Conservación y transporte. ..................................................................... 33
- Criterios de rechazo de las muestras. .................................................... 33
TRACTO GENITAL FEMENINO. ..................................................................... 34
Introducción. ................................................................................................ 35
Exudados vaginales. ................................................................................... 35
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 36
- Conservación y transporte. ..................................................................... 36
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 36
- Observaciones. ......................................................................................... 36
Exudados cervicales. ................................................................................... 37
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 38
- Conservación y transporte. ..................................................................... 39
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 39
- Observaciones. ......................................................................................... 39
TRACTO GENITAL MASCULINO. .................................................................. 40
Exudados uretrales. ..................................................................................... 41
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 41
- Conservación y transporte. ..................................................................... 42
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 42
- Observaciones. ......................................................................................... 42
Muestras para el diagnóstico de prostatitis. ........................................... 42
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 43
- Conservación y transporte. ..................................................................... 43
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 44
- Observaciones. ......................................................................................... 44
HEMOCULTIVOS. .......................................................................................... 45
Hemocultivos. ............................................................................................... 46
- Introducción. .............................................................................................. 46
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 47
- Conservación y transporte. ..................................................................... 48
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 48
- Observaciones. ......................................................................................... 48
CATÉTERES. .................................................................................................... 50
Catéteres intravasculares. ......................................................................... 51
- Introducción. .............................................................................................. 51
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 51
- Conservación y transporte. ..................................................................... 51
Otros catéteres y drenajes. ........................................................................ 52
SISTEMA OCULAR. ........................................................................................ 53
Exudados conjuntivales. ............................................................................. 54
- Introducción. .............................................................................................. 54
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 54
- Conservación y transporte. ..................................................................... 54
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 55
Raspados corneales. .................................................................................. 55
- Introducción. .............................................................................................. 55
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 55
- Conservación y transporte. ..................................................................... 55
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 55
Lente de contacto: lente intraocular. ..................................................... 56
- Introducción. .............................................................................................. 56
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 56
- Conservación y transporte. ..................................................................... 56
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 56
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR. ............................................................ 57
Oído externo: exudado ótico. .................................................................. 58
- Introducción. .............................................................................................. 58
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 58
- Conservación y transporte. ..................................................................... 58
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 58
Oído medio: exudado ótico. .................................................................... 59
- Introducción. .............................................................................................. 59
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 59
- Conservación y transporte. ..................................................................... 60
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 60
Exudado faringo-amigdalino. ................................................................... 60
- Introducción. .............................................................................................. 60
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 60
- Conservación y transporte. ..................................................................... 60
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 60
- Observaciones. ......................................................................................... 61
Exudados nasofaringeos. ........................................................................... 61
- Introducción. .............................................................................................. 61
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 61
- Conservación y transporte. ..................................................................... 61
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 61
- Observaciones. ......................................................................................... 62
Exudados de senos paranasales. ............................................................. 62
- Introducción. .............................................................................................. 62
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 62
- Conservación y transporte. ..................................................................... 62
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 62
Exudado de la cavidad oral. .................................................................... 63
- Introducción. .............................................................................................. 63
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 63
- Conservación y transporte. ..................................................................... 63
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 63
TRACTO RESPIRATORIO INFERIOR. ............................................................. 64
Introducción. ................................................................................................ 65
Esputo. ........................................................................................................... 65
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 66
- Conservación y transporte. ..................................................................... 66
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 67
Broncoaspirado. .......................................................................................... 67
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 67
- Conservación y transporte. ..................................................................... 67
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 68
Lavado broncoalveolar. ............................................................................ 68
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 68
- Conservación y transporte. ..................................................................... 69
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 69
Cepillado bronquial mediante catéter telescopado. .......................... 69
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 69
- Conservación y transporte. ..................................................................... 70
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 70
LIQUIDOS ORGANICOS. .............................................................................. 71
Liquido cefalorraquídeo. ........................................................................... 72
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 72
- Conservación y transporte. ..................................................................... 73
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 73
- Observaciones. ......................................................................................... 73
Otros líquidos orgánicos estériles. ............................................................. 74
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 74
- Conservación y transporte. ..................................................................... 75
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 76
- Observaciones . ........................................................................................ 76
PIEL Y TEJIDOS BLANDOS. ............................................................................ 77
Ulceras y heridas superficiales. .................................................................. 78
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 78
- Conservación y transporte. ..................................................................... 78
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 79
- Observaciones. ......................................................................................... 79
Úlceras crónicas. ......................................................................................... 79
- Introducción. .............................................................................................. 79
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 79
- Conservación y transporte. ..................................................................... 80
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 80
- Observaciones. ......................................................................................... 80
Exantemas. ................................................................................................... 81
- Introducción. .............................................................................................. 81
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 81
Abscesos cerrados. ..................................................................................... 81
- Introducción. .............................................................................................. 81
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 81
- Conservación y transporte. ..................................................................... 82
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 82
- Observaciones. ......................................................................................... 83
Fístulas y tractos. .......................................................................................... 83
- Introducción. .............................................................................................. 83
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 83
- Conservación y transporte. ...................................................................... 83
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 83
- Observaciones. ......................................................................................... 83
MICOSIS CUTÁNEAS. .................................................................................... 84
Recogida de muestras para estudio de hongos. .................................. 85
- Introducción. .............................................................................................. 85
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 85
- Conservación y transporte. ..................................................................... 87
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 87
SEROLOGIA INFECCIOSA. ........................................................................... 88
Serología infecciosa. .................................................................................. 89
- Introducción. .............................................................................................. 89
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 89
- Conservación y transporte. ..................................................................... 90
- Procesamiento en el laboratorio. ........................................................... 90
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 90
MICROBIOLOGIA MOLECULAR INFECCIOSA. .......................................... 91
Microbiologia molecular infecciosa. ....................................................... 92
- Introducción. .............................................................................................. 92
- Obtención de la muestra. ....................................................................... 92
- Conservación y transporte. ..................................................................... 92
- Procesamiento en el laboratorio. ........................................................... 93
- Criterios de rechazo. ................................................................................ 93
BIBLIOGRAFÍA. .............................................................................................. 94
ANEXOS. ........................................................................................................ 96
INTRODUCCIÓN
INTRODUCCIÓN
El diagnóstico de las enfermedades infecciosas se basa en el estudio de los
síntomas y signos clínicos, así como en la demostración de la presencia de su
agente productor, de sus productos o de la respuesta del sistema inmune frente a
dicho agente. El diagnóstico clínico es, en algunos casos bastante demostrativo
pero, en la gran mayoría de los casos, el diagnóstico es difícil y necesita el apoyo
del laboratorio. Es bien conocido que, un mismo microorganismo, puede dar una
gran variedad de cuadros clínicos, en una o varias localizaciones, y que la
sensibilidad a los antimicrobianos de un microorganismo es variada, dependiendo
de los mecanismos de resistencia que haya desarrollado cada aislado. Por todo
ello, la confirmación de la etiología de un proceso infeccioso, así como la ayuda
para su tratamiento es una información necesaria aportada por el laboratorio de
Microbiología.
Toda la información diagnóstica que el laboratorio de Microbiología puede
proporcionar, depende de la calidad de la muestra recibida. El término calidad
incluye la selección apropiada de la muestra, la recogida y su transporte al
laboratorio. Por ello, una muestra mal tomada, escasa o mal transportada,
determinará un posible fallo en la recuperación de los agentes patógenos, que
puede inducir a errores diagnósticos, e incluso a un tratamiento inadecuado del
enfermo. Este hecho debe ser bien conocido por las personas que realizan las
tomas en clínicas, centros de salud, salas y consultas hospitalarias, lo que hace
necesaria la preparación continuada de dicho personal sanitario, al que hay que
concienciar del coste económico inútil, así como de los errores en los resultados
obtenidos de una determinación microbiológica realizada a partir de una
muestra inadecuada.
La calidad de un laboratorio depende, en gran medida, de factores relativos a
la recogida de muestras, y a su procesamiento inicial. Así pues, se consideran
indicadores del nivel de calidad en cuanto a la fase preanalítica: el número de
muestras rechazadas, las muestras aceptadas contaminadas, la solicitud de
determinaciones repetida en un período corto de tiempo, la adecuación de las
peticiones a las muestras enviadas, etc.
Es imprescindible que la comunicación entre los microbiólogos y los clínicos sea
muy fluida y que esté claramente definido y asumido por todos, que el clínico
DEBE preguntar al microbiólogo para asesorarse sobre las muestras y técnicas más
útiles para el diagnóstico de la enfermedad que padece el paciente y que el
microbiólogo DEBE comunicarse con los clínicos, no sólo como asesor, sino
preguntando sobre aquéllas cuestiones que le van a permitir realizar un
diagnóstico más adecuado y rechazando las peticiones que no son rentables
desde el punto de vista del diagnóstico microbiológico.
Volante de petición.
Obtención de la muestra.
Recogida de la muestra.
Transporte.
Establecimiento de prioridades
Obtención de la muestra
Conservación y transporte
Observaciones
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Gasas.
• Alcohol 70º C o solución yodada.
• Jeringa o aguja estéril.
• Recipiente estéril.
2. Técnica
• Se limpiará el catéter con una gasa humedecida en alcohol o solución
yodada.
• Dejamos secar unos minutos.
• Pinchar directamente con aguja estéril el catéter por la zona desinfectada,
aspirando entre 3-5 ml.
Conservación y transporte
Indicaciones
Obtención de la muestra
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Envase estéril de al menos 20 ml de capacidad, de boca ancha y cierre
hermético.
2. Técnica
• Deben mantenerse las normas generales correspondientes a la obtención de
muestras para el cultivo
• Recogida por micción estéril de la primera orina de la mañana.
• En cada micción se recoge toda la orina desechando en el WC sólo los
primeros mililitros.
3. Número de muestras y volumen mínimo
• 3 muestras obtenidas en días consecutivos.
• >20 ml.
Conservación y transporte.
Observaciones.
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Recipiente de boca ancha para recoger las heces (tipo orinal o similar). No es
necesario que esté estéril, sólo es preciso que esté limpio.
• Recipiente estéril de boca ancha y cierre hermético para enviar la muestra, si
es posible con cucharilla o, facultativamente, a criterio del laboratorio,
escobillón con medio de transporte de Cary Blair.
2. Técnica
• Si son formadas o pastosas, se seleccionan zonas donde haya sangre, moco o
pus.
• El volumen mínimo es de 1-2 g de heces formadas o pastosas y de 5-10 ml de
heces líquidas.
Conservación y transporte
Observaciones
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Hisopos rectales con medio de transporte.
• Guantes.
2. Técnica
• En general debe desaconsejarse su uso, aunque hay que recurrir a él si no se
puede disponer de heces, como en neonatos o adultos debilitados.
• Se ha demostrado eficaz en el aislamiento de Neisseria gonorrhoeae,
Campylobacter spp., Shigella spp. y en portadores anales de Streptococcus
agalactiae.
• No es válido para la búsqueda de antígenos.
• Para realizar la toma se introduce el hisopo sobrepasando un poco el esfínter
anal y se rota para hacer la toma de las criptas anales, dejar 10 a 30 segundos
para que se absorban los microorganismos y retirar.
• Una vez realizado se introduce en un medio de transporte.
Conservación y transporte
Observaciones
Obtención de la muestra
1. Material necesario.
• Recipiente estéril de boca ancha y cierre hermético para enviar la muestra, si
es posible con cucharilla
2. Técnica
• Se seguirá el mismo procedimiento que para cultivo bacteriológico.
3. Volumen mínimo.
• Si las heces son formadas o pastosas, para cultivo de virus se aconseja un
mínimo de 3 a 6 gr de heces.
• Si las heces son líquidas: 5-10ml.
Conservación y transporte
• Es preferible enviar las muestras para estudio virológico sin medio de cultivo,
pues éste diluye la partículas virales disminuyendo la sensibilidad.
• Si el envío se retrasa mucho, es necesario utilizar un medio de transporte para
virus. Se enviarán en recipientes colocados en hielo.
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Recipiente (orinal o similar) lo más amplio posible.
• Recipiente estéril de boca ancha, a ser posible con cucharilla, con o sin
conservante.
2. Técnica
• En los tres días previos al estudio parasitológico, el enfermo seguirá una dieta
en la que no podrá tomar: medicamentos, papilla de bario, patatas, verduras,
legumbres y frutas, pan tostado, pastas, arroz, huevos, hígado y sesos.
• En algunos casos es preferible y necesario administrar un purgante, con el fin
de aumentar la posibilidad del hallazgo de parásitos. Será un purgante salino,
como sulfato de sodio o fosfato y carbonato de sodio; no deben usarse
aceites minerales o compuestos de bismuto o magnesio, ya que las gotas o
cristales procedentes de ellos pueden enmascarar los parásitos o confundirse
con trofozoítos.
• Con una cucharilla se recogerá una pequeña cantidad de heces recién
emitidas y se enviarán en un recipiente estéril con tapa de rosca.
• Cuando macroscópicamente se hayan visto formas compatibles con parásitos
en el ano o en las heces, se recogerán en el recipiente y se añadirá una
pequeña cantidad de suero fisiológico.
3. Volumen mínimo
• Es suficiente un volumen de 2-4 g. de heces.
• Un estudio parasitológico completo debe constar de tres muestras recogidas
en días sucesivos, ya que la eliminación de parásitos puede ser intermitente.
Conservación y transporte
• Las muestras líquidas deben ser procesadas inmediatamente, puesto que los
trofozoitos de algunos parásitos se deterioran rápidamente. Esto es
fundamental en el diagnóstico de las diarreas por Entamoeba histolytica ya
que es imprescindible procesar las muestras en menos de 30 minutos.
• La muestra no líquida pueden mantenerse a temperatura ambiente o a +4ºC.
• Si se observan parásitos de forma macroscópica (gusanos adultos o anillos de
tenias), deben enviarse al laboratorio a temperatura ambiente en solución
fisiológica.
ESTUDIO PARASITOLÓGICO: ASPIRADO DUODENAL
Será la muestra adecuada para la búsqueda de Giardia intestinalis,
Strongyloides stercolaris, y Ascaris lumbricoides cuando los exámenes de heces
hayan sido repetidamente negativos.
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Recipientes estériles de boca ancha, tubo de tapón de rosca, tubo de vacío.
• Medio de transporte para parásitos.
• Solución salina.
2. Técnica
• Introducir el tubo a través de la boca hasta alcanzar el duodeno y aspirar.
• Para la búsqueda de G. intestinalis es necesario llegar a la tercera porción del
duodeno.
• Como método alternativo, existe la posibilidad de la cápsula duodenal
(entero-test).
3. Volumen mínimo
• De 0,5 a 3 ml de aspirado duodenal.
Conservación y transporte
Obtención de la muestra
EXUDADOS VAGINALES
Muchos de los agentes productores de infecciones genitales (vaginitis,
cervicitis, uretritis….) en la mujer tienen un área especifica donde la rentabilidad
diagnóstica es mayor.
Las muestras para investigación de Virus herpes simple (VHS) y Papilomavirus
(VPH) necesitan de protocolos y material especifico.
Los principales microorganismos productores de infecciones vaginales en la
mujer son los siguientes
Vagintis:
Frecuentes Raros
Cándida spp
Trichomonas vaginalis Virus herpes simple (VHS)
Papilomavirus (VPH)
Infec. polimicrobianas
(Vaginosis bacteriana)
Gardnerella vaginalis
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Camilla ginecológica.
• Espéculo estéril
• Torundas de alginato cálcico o Dracon, con medio de transporte
2. Técnica
• Explicar a la paciente la exploración a realizar
• Colocar a la paciente en posición ginecológica e introducir un espéculo "sin
lubricante" (utilizar agua templada si es necesario).
• Recoger la muestra, bajo visión directa, con una torunda, haciéndola rotar
durante unos segundos sobre la zona con mayor exudado, o en su defecto,
del fondo del saco vaginal posterior.
• Repetir la operación con la segunda torunda.
3. Número de muestras
• Se obtendrán al menos dos torundas, una destinada al estudio microscópico y
el resto para los cultivos.
• Para cultivo de micoplasma/ureaplasma y/o clamidias obtener muestras
complementarias con las torundas apropiadas.
Conservación y transporte
Criterios de rechazo
Observaciones
EXUDADOS CERVICALES
Los exudados cervicales son las muestras más adecuadas cuando se sospecha
infección por N. gonorrhoeae y C. trachomatis.
Los principales microorganismos productores de infecciones cervicales
(cervicitis) en la mujer son los siguientes:
U. urealyticum
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Camilla ginecológica.
• Espéculo estéril.
• Torundas secas sin medio de transporte (para limpieza de exocérvix).
• Torundas de alginato cálcico o Dracon con medio de transporte tipo Stuart-
Amies.
• Torundas con medios de transporte específicos para micoplasmas y clamidias
(consultar con el Laboratorio de Microbiología).
2. Técnica.
• Con la paciente en posición ginecológica se introduce suavemente el
espéculo sin lubricar (o lubricado con agua templada).
• Limpiar el exocérvix de secreciones vaginales, con una torunda seca.
• Comprimir cuidadosamente el cérvix con las palas del espéculo e introducir
una torunda en el canal endocervical con un suave movimiento de rotación.
• Se repetirá la operación con las diferentes torundas.
3. Número de muestras y volumen
• Deberán recogerse dos torundas, una destinada al examen microscópico y
otra al cultivo.
• Para investigación de Mycoplasma y Chlamydia se recogerá con las torundas
correspondientes, con medio de transporte específico.
4. Etiquetado
• Incluir en la etiqueta el tipo de muestra y los datos del paciente
• Indicar el diagnostico de sospecha
Conservación y transporte
Criterios de rechazo
Observaciones
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Torunda uretrales finas, de alginato cálcico o Dracon con medios de
transporte tipo Stuart-Amies.
• Gasas estériles.
• Asa de siembra de platino.
• Torunda y medio de transporte especial para C. trachomatis (consultar con el
Laboratorio de Microbiología)
2. Técnica
• Cuando exista exudado franco puede recogerse con una torunda o con un
asa de siembra de platino/ iridio. El exudado puede estimularse exprimiendo la
uretra. Cuando no se obtenga exudado se introducirá una torunda
suavemente con un movimiento de rotación hasta penetrar unos 2 cm. dentro
de la uretra (3-5 cm para investigación de C. Trachomatis torunda especial).
• Repetir la operación con una segunda y una tercera torunda.
3. Número de muestras
• Deberán enviarse tres torundas, una destinada al examen microscópico otra
para cultivo y otras para la investigación de clamidia/micoplasma.
Conservación y transporte
Criterios de rechazo
Observaciones
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Se preparará el mismo material que para un urocultivo y cuatro contenedores
estériles que deberán ir identificados de la siguiente forma:
- "F-1" o "Frasco-1" (primera orina).
- "F-2" o "Frasco-2" (micción media premasaje).
- "F-3" o "Frasco-3" (masaje prostático).
- "F-4" o "Frasco-4" (orina post-masaje).
2. Técnica
• Retraer el prepucio y limpiar el meato y el glande igual que para un urocultivo.
• Pedir al paciente que orine, recogiendo los primeros 10 ml. en el primer
contenedor "F-1".
• Recoger los siguientes 10 ml. en el segundo contenedor "F-2". Esta porción
corresponde a la "micción media".
• Interrumpir la micción antes de que se haya vaciado totalmente la vejiga
• Hacer un masaje prostático y recoger el fluido en el tercer contenedor ("F-3"
masaje prostático). Si no se produce fluido, presionar la uretra en su totalidad
30 segundos. Tras el masaje, acabará saliendo fluido prostático por el meato.
• Finalmente se pedirá al paciente que orine y se recogerán los 10 ml. primeros
de orina en un cuarto recipiente ("F-4" orina postmasaje).
3. Número de muestras y volumen mínimo
• Frasco 1: 10 ml.
• Frasco 2: l0 ml.
• Frasco 3: Toda la muestra que se obtenga.
• Frasco 4: 10 ml.
• Incluir en cada uno de los frascos etiquetas con información del paciente y el
número de frasco.
Conservación y transporte
Criterios de rechazo
Observaciones
Introducción
Obtención de la muestra
Conservación y transporte
Criterios de rechazo
Observaciones
Introducción
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Guantes de goma estériles
• Gasas estériles
• Pinzas y tijeras estériles
• Recipiente estéril con tapa de rosca
• Alcohol etílico o isopropílico al 70%
• Alcohol iodado al 2% o un iodóforo al 10%
2. Técnica
• Lavado de manos y utilización de guantes estériles.
• Desinfectar con alcohol una zona de piel de unos 10 cm correspondiente a la
zona de entrada del catéter. Hacerlo de forma circular comenzando por el
centro.
• Repetir la misma operación, pero con el alcohol iodado o iodóforo, dejando
que se seque un minuto.
• Retirar el catéter con la máxima asepsia, una vez extraído, con la ayuda de las
pinzas y las tijeras estériles cortar 3-4 cm de la porción intravascular e
introducirlo en el recipiente estéril.
Conservación y transporte
Introducción
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Torundas de alginato cálcico o Dacron con medio de transporte Stuart-Amies.
• Suero salino estéril.
• Medio de transporte para Chlamydia y virus, si procede (consultar con el
laboratorio de Microbiología).
2. Técnica
• Debe obtenerse la muestra antes de la instilación de los analgésicos locales,
colirios o antibióticos.
• Con una torunda mojada en un suero fisiológico frotar sobre la conjuntiva
tarsal inferior y el fórnix.
• Para la investigación de Chlamydia trachomatis, everter el párpado y frotar
con una torunda especial la superficie conjuntival.
3. Número de muestras
• Deberá utilizarse una torunda para cada ojo.
• Conservación y transporte
• El transporte deberá ser inmediato. Cuando no sea posible, se utilizaran hisopos
con medio de transporte tipo Stuart-Amies, que se mantendrá a temperatura
ambiente. Para Chlamydia o virus se utilizará medio de transporte específico.
Conservación y Transporte
Criterios de rechazo
Introducción
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Espátula de platino flexible de Kimura.
• Anestésico local (clorhidrato de propacaína al 0,5%).
• Portas limpios con círculos marcados.
• Vaso de Koplin con metanol al 95% o fijación por calor.
• Medios de transporte y/o cultivo específico
2. Técnica
• Instilar uno o dos gotas de anestésico. Preferentemente se utilizará clorhidrato
de propacaína, ya que es el anestésico local que inhibe menos el crecimiento
bacteriano.
• Raspar suavemente con la espátula de Kimura la conjuntiva tarsal inferior, sin
inducir el sangrado.
• Realizar el raspado de múltiples áreas de ulceración.
• Es importante que cada raspado se inocule directamente en el medio de
cultivo, por lo que se avisará previamente al Servicio de Microbiología Clínica
que desplazará al personal y/o material necesario para ello.
Conservación y transporte
Criterios de rechazo
Introducción
1. Material necesario
• Tubo o tarro estéril.
2. Técnica
• Remitir la lente y/o cuerpo extraño.
• Las soluciones de las lentes de contacto se debe enviar en la mayor cantidad
posible.
• Si la lente de contacto ha provocado una úlcera, la realización de raspado
corneal con espátula estéril es indispensable. La muestra se debe tomar del
lecho y borde de la úlcera previa limpieza de la lesión.
Conservación y transporte
Criterios de rechazo
Introducción
Los exudados óticos están indicados en las otitis externas. Los principales
agentes causales son bacterias y hongos.
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Torundas de algodón o espátulas.
• Un antiséptico suave (ej. Cloruro de Benzalconio al 1/100)
2. Técnica
• Limpieza del oído externo con un antiséptico suave. Se tomará la muestra
mediante frotis con torunda, raspado o aspiración del fluido en caso de
abscesos.
• Se obtendrá la muestra del borde activo y el exudado o las secreciones de las
zonas profundas.
3. Número de muestras
• Una torunda para cada oído.
Conservación y transporte
Criterios de rechazo
Introducción
1. Material necesario
• El de una miringocentesis (Timpanocentesis).
• Torundas estériles.
• Contenedor estéril.
• Medio de transporte para anaerobios.
• Povidona iodada al 10%.
2. Técnica
a) Timpanocentesis:
• Debe obtener la muestra un especialista en O.R.L. o personal entrenado para
ello.
• Se limpiará el canal auditivo externo con una torunda impregnada en
Povidona iodada.
• Se puncionará el tímpano a través de un otoscopio estéril.
• La muestra se enviará en un contenedor estéril. Cuando sea escasa se tomará
con torunda, aunque no es lo más recomendable.
• Si se desea la investigación de anaerobios, se enviará el fluido en un medio de
transporte específico.
• Las muestras en torunda no sirven para cultivo de anaerobios.
b) Muestras con tímpano roto:
• Tras la limpieza del canal externo se tomará la muestra con torunda a través
de un otoscopio estéril.
• Estas muestras no son válidas para anaerobios.
• El fluido suele colonizarse con flora de CAE, con lo que la interpretación de los
resultados es siempre complicada.
3. Número de muestras y volumen mínimo
• Se intentará obtener la mayor cantidad de exudado posible.
Conservación y transporte
Criterios de rechazo
Introducción
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Depresor lingual.
• Torunda de algodón con medio de transporte
2. Técnica
• Con la ayuda de un depresor lingual, bajo visión directa, se tocará con la
torunda en todas las partes con exudado, membranas o inflamación. Se
deben frotar las criptas tonsilares y la faringe posterior. No tocar nunca la
mucosa oral, lengua o úvula.
3. Número de muestras
• Sólo una torunda.
Conservación y transporte
Criterios de rechazo
Observaciones
EXUDADOS NASOFARINGEOS
Introducción
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Torundas flexibles de alginato cálcico.
• Para aspirados: Tubo aspirador de Teflón o jeringa y catéter.
2. Técnica
Frotis:
• pasar la torunda a través de la nariz suavemente, hasta llegar a la nasofaringe.
• Hay que mantener la torunda cerca del septum y suelo de la fosa.
• Rotar la torunda y extraerla.
Aspirado:
• Aspirar el moco, pasando el tubo de teflón o un catéter conectado a una
jeringa por vía pernasal, de igual forma que la torunda.
3. Número de muestras
• Se obtendrá una muestra.
Conservación y transporte
Criterios de rechazo
Observaciones
• Los microorganismos encontrados en fosa nasal no tienen por que ser los
mismos que se aíslan en el seno en caso de sinusitis, por lo que los cultivos de
exudados nasales no sirven para el diagnóstico etiológicos de las sinusitis y no
pueden sustituir nunca a la punción del seno.
Introducción
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Povidona iodada al 10%.
• Contenedor estéril.
• Medio de transporte para anaerobios.
• Material quirúrgico de O.R.L.
2. Técnica
• Desinfectar el lugar de la punción con povidona iodada.
• Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior, o en
el seno frontal por debajo del marco supraorbital del ojo.
• Aspirar el líquido del seno. Cuando no se obtenga líquido, instilar 1 ml. de suero
salino estéril y aspirarlo nuevamente.
• Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y
enviar el resto en un contenedor estéril o en la propia jeringa.
3. Número de muestras y volumen mínimo
• Se intentará obtener al menos 1 ml. de muestra.
Conservación y transporte
Criterios de rechazo
Introducción
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Torundas de algodón sin medio de transporte.
• Portas limpios.
2. Técnica
• Se pedirá al paciente que se enjuague la boca con agua.
• Tras enjuagar la boca, frotar o raspar las lesiones con una espátula o con una
torunda y hacer una extensión sobre un porta.
3. Número de muestras
• 1 extensión en porta + 1 torunda.
• Se repetirá la toma con una segunda torunda para cultivo (sólo para la
investigación de Candida albicans).
Conservación y transporte
ESPUTO
Si el esputo contiene gran proporción de saliva, no constituye una muestra
representativa de la situación existente en el tracto respiratorio inferior por su
mezcla con secreciones procedentes de todo el tracto traqueo-bronquial y con
la flora saprofita de la orofaringe.
La presencia en la muestra de gran número de células epiteliales indica
contaminación con flora orofaríngea, por lo que estas muestras no deben ser
cultivadas, excepto para cultivo de Legionella spp.
Por lo tanto:
• Se debe instruir correctamente al paciente para reducir el número de muestras
inadecuadas.
• La muestra mejor es la obtenida de la primera expectoración de la mañana.
• Todos las muestras del tracto respiratorio inferior deben manejarse con las
precauciones necesarias para trabajar con Mycobacterium tuberculosis.
• Las muestras de esputo no son útiles para el cultivo de anaerobios.
• Una muestra única, recogida adecuadamente, suele ser suficiente para el
diagnóstico de infección bacteriana del tracto respiratorio inferior.
• Para el estudio de micobacterias (diagnóstico de tuberculosis) es conveniente
obtener 2 ó 3 de muestras de días diferentes. Si el paciente no está ingresado,
puede mantener las muestras en la nevera hasta obtenerlas todas, y llevarlas a
la vez al laboratorio.
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Frasco estéril de boca ancha y tapón de rosca.
• Suero fisiológico estéril y nebulizador (sólo para esputo inducido).
2. Técnica
• Instruir al paciente sobre la diferencia entre expectoración (esputo) y saliva.
• Hacer que el paciente se enjuague la boca con agua. Para pacientes con
dentaduras postizas, éstas deben ser quitadas primero.
• Explicar al paciente que debe obtener un esputo tras una expectoración
profunda, preferentemente la primera de la mañana.
• Recoger el esputo directamente en el contenedor (frasco estéril), y tapar bien
con el tapón de rosca.
• Si el paciente no consigue expectorar espontáneamente puede inducirse el
esputo con nebulizaciones de suero fisiológico estéril (15 ml en 10 minutos),
(esputo inducido), siendo útil además realizar un drenaje postural o fisioterapia
respiratoria.
• Rotular el frasco con los datos del paciente.
Conservación y transporte
Criterios de rechazo.
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Lidocaína (2%) (preferentemente), para anestesia.
• Solución salina o lactato de Ringer.
• Fibrobroncoscopio.
• Contenedor tipo Lukens.
• Jeringa de 20 ml.
• Lubricante.
2. Técnica
• A realizar por un especialista debidamente entrenado.
• Rotular con la información del paciente.
• Indicar el procedimento de obtención realizado.
Conservación y transporte
Criterios de rechazo.
LAVADO BRONCOALVEOLAR
Igual que el broncoaspirado se obtiene a través de un broncoscopio.
Consiste en el lavado de un segmento pulmonar, previo anclado del
broncoscopio, introduciendo de 20 a 50 ml de suero fisiológico estéril.
Es útil sobre todo en procesos pulmonares intersticiales. Constituye la mejor
muestra para detección de P. jiroveci.
Los resultados de los cultivos cuantitativos suelen ser más útiles para
interpretar los resultados.
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Lidocaína (2%) (preferentemente), para anestesia.
• Solución salina o lactato de Ringer.
• Fibrobroncoscopio.
• Contenedor tipo Lukens.
• Jeringa de 50 ml.
• Lubricante.
2. Técnica
• Mediante broncoscopia, hecha por un especialista debidamente entrenado.
• Rotular con la información del paciente.
• Indicar el procedimento de obtención realizado.
Conservación y transporte
Criterios de rechazo
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Lidocaína (2%) (preferentemente), para anestesia.
• Solución salina o lactato de Ringer.
• Fibrobroncoscopio.
• Catéter telescopado.
• Tubo con 1 ml de suero salino estéril.
• Lubricante.
2. Técnica
• Mediante broncoscopia hecha por un especialista debidamente entrenado.
• Enviar al laboratorio de microbiología el cepillo en un tubo que contenga 1 ml
de suero fisiológico estéril.
• Rotular con la información del paciente.
• Indicar el procedimiento de obtención realizado.
Conservación y transporte:
Criterios de rechazo.
Obtención de la muestra
Criterios de rechazo
Observaciones
Obtención de la muestra
Conservación y transporte
Criterios de rechazo
Observaciones
Obtención de la muestra
1.Material necesario
• Guantes estériles
• Suero fisiológico o solución de Ringer lactato
• Jeringa y aguja estériles
• Torundas con medio de transporte tipo Stuart-Amies
2. Técnica
• Lavar cuidadosamente la superficie de la herida. Recoger el pus mediante
jeringa y aguja, aspirando preferentemente de zonas profundas.
• Cuando la muestra sea insuficiente, instilar suero o solución de Ringer lactato y
aspirarlo nuevamente en la jeringa.
• Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles, podrá utilizarse una
torunda, frotando en las zonas profundas.
3. Número de muestras y volumen mínimo
• Para muestras líquidas se intentará obtener de 1 a 10 ml. En el resto de las
ocasiones la muestra debe ser de suficiente volumen como para poder
procesarla en aerobiosis y anaerobiosis. En el caso de remitir torunda, es
aconsejable enviar dos escobillones.
Conservación y transporte
Observaciones
ÚLCERAS CRÓNICAS
Introducción
Obtención de la muestra
1.Material necesario
• Guantes estériles
• Gasas estériles
• Jeringa y aguja estériles
• Suero fisiológico o solución de Ringer lactato
• Cureta ó bisturí estériles
• Jeringa y aguja estériles
• Medio de transporte para anaerobios
2. Técnica
• Lavar cuidadosamente la úlcera.
• La recogida se hará de la zona más profunda, se prefiere el curetaje o
raspado.
• Cuando la muestra sea insuficiente, instilar solución de Ringer lactato y
aspirarlo mediante la jeringa.
• En caso de absceso se hará aspiración mediante jeringa o aguja en la zona
central y la interfase entre tejido viable y el absceso.
• Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles, podrá utilizarse una
torunda, frotando en las zonas más profundas.
• La biopsia de la úlcera puede ser necesaria cuando se sospecha
degeneración maligna y debe incluir todo el espesor de la base. Si se
sospecha osteomielitis contigua, la biopsia del hueso debe realizarse.
3. Número de muestras y volumen mínimo
• Para muestras líquidas se intentará obtener de 1 a 10 ml. En el resto de las
ocasiones la muestra debe ser de suficiente volumen como para poder
procesarla en aerobiosis y anaerobiosis. En el caso de remitir torunda, es
aconsejable enviar dos escobillones.
Conservación y transporte
Criterios de rechazo
Observaciones
EXANTEMAS
Introducción
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Gasas estériles
• Alcohol etílico o isopropílico al 70%
• Povidona iodada al 10%
• Jeringa estéril
• Aguja IM
• Medio de transporte para anaerobios
2. Técnica
• Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones. Cuando
no sea suficiente, instilar una pequeña cantidad de suero salino estéril y
aspirarlo.
ABSCESOS CERRADOS
Introducción
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Gasas estériles
• Alcohol etílico o isopropílico al 70%
• Povidona iodada al 10%
• Jeringa estéril
• Aguja IM
• Medio de transporte para anaerobios
2. Técnica
• Desinfectar la piel, limpiando la zona con alcohol, de forma concéntrica
comenzando por el centro. Abarcar una zona de unos 10 cm.
• Repetir la operación con Povidona. En pacientes con hipersensibilidad al yodo,
en lugar de Povidona se utilizará alcohol dos veces consecutivas.
• Dejar secar al menos 1 minuto para que la Povidona ejerza su acción
antiséptica.
• Realizar una punción-aspiración del absceso con jeringa y aguja.
• Desinfectar la superficie de goma del tapón del medio de transporte para
anaerobios con Povidona e inyectar con la misma jeringa, introduciendo una
pequeña cantidad de la muestra. Si el medio tiene una coloración azul
deberá desecharse. El resto de la muestra se remitirá al laboratorio en la
jeringa o bien en un contenedor estéril.
3. Número de muestras y volumen mínimo
• Deberá enviarse un volumen de muestra entre 1 y 5 ml.
4. Etiquetado
• Deberá etiquetarse correctamente tanto el medio de transporte como la
jeringa, en el caso de aspirar de sitios diferentes deberá reflejarse
correctamente para su posterior interpretación.
Transporte y conservación
Criterios de rechazo
Observaciones
Introducción
Obtención de la muestra
1. Material necesario
• Gasas estériles
• Alcohol etílico o isopropílico al 70%
• Povidona iodada al 10%
• Jeringa y aguja
2. Técnica
• Limpiar cuidadosamente la superficie cutanea con alcohol y luego con
Povidona. Aspirar el exudado de la parte profunda de la fístula con jeringa y
aguja.
3. Volumen mínimo
• El volumen óptimo para el cultivo es de 1-5 ml
Conservación y transporte
Criterios de rechazo
Observaciones
Introducción
Obtención de muestras
1. Material necesario
• Recipiente estéril hermético
• Placas de Petri estériles
• Lancetas, bisturí, espátulas, pinzas de depilar, tijeras, cortauñas, tijeras curvas y
finas. Todo el material estará preferiblemente estéril.
• Cinta de celofán transparente
• Portaobjetos
• Tubos estériles
• Jeringas y agujas estériles
• Medio de cultivo apropiados.
2. Técnica de la obtención del producto
• Según la zona afectada y el diagnóstico clínico el tipo de muestra será:
- Escamas
- Pelos
- Fragmentos de uña y tejido periungueal
- Mucosas
- Úlceras
- Biopsias cutáneas
2.1. Escamas
• Raspar con ayuda de una lanceta, portaobjetos, bisturí, sobre todo en la
periferia de la lesión, por el desarrollo centrífugo del hongo a partir del punto
de inoculación. Si la lesión es pequeña se raspa en su totalidad. Las escamas
se hacen caer en una placa de Petri.
• En el caso de pitiriasis versicolor, se aplica sobre la lesión un fragmento de
celofán transparente que se fija sobre un portaobjetos.
• En caso de lesiones cutáneas rezumantes se hace la toma con un escobillón
estéril humedecido con solución salina fisiológica.
2.2. Pelos
• Elegir los pelos parasitados. Los cabellos y/o pelos rotos o contorneados deben
ser arrancados del folículo piloso.
• Recoger el material en una placa de Petri estéril.
2.3. Fragmentos de uña y tejido periungueal
Micosis ungueales
• La toma se realiza en la base de la uña / surco periungueal (en onixis por
Candida), o en la extremidad de la misma, (en onicomicosis por dermatofitos).
• Hay que coger las escamas por debajo de las uñas introduciendo un bisturí o
lanceta en el lecho subungueal anterior, que suele estar despegado,
raspando pacientemente hasta llegar a la zona dolorosa, donde extraeremos
el material de mejor calidad. Posteriormente se cortan con una tijera fina y
curva fragmentos de la uña afectada. El material obtenido se recoge en una
placa de Petri y/o frasco estéril.
Perionixis
• En caso de lesiones supuradas de perionixis, se extrae el pus mediante presión
y se recoge con un escobillón estéril.
2.4. Exudados de mucosas
• La toma a nivel de mucosas se realiza por raspado con el borde romo del
bisturí, portaobjetos o escobillón estéril.
2.5. Exudados de úlceras
• En las úlceras de piel y mucosas, la toma se realiza raspando con bisturí los
bordes y fondo de la misma, poniendo especial interés en los bordes, para
obtener escamas dérmicas, así como las costras o porciones vegetantes si las
hubiera, ayudándose con las pinzas.
• En todas las lesiones ulcerosas o vegetantes es muy útil la biopsia que debe
tratarse como se señala posteriormente.
2.6. Biopsia cutáneas
• La biopsia es uno de los procedimientos más seguros para el diagnóstico de
una micosis. La pieza de biopsia se introduce en un tubo estéril con suero
fisiológico estéril o agua glicerinada al 25% estéril.
Conservación y transporte
Criterios de rechazo
Introducción
Obtención de la muestra
1. Material
• Guantes estériles
• Gasas estériles
• Tubos de presión negativa estériles
• Alcohol etílico o isopropílico al 70%
• Sistema de toma de sangre para tubos de presión negativa o sistema
tradicional
2. Técnica
• Desinfectar la piel con alcohol
• Dejar secar la piel para evitar la producción de hemólisis en la muestra de
sangre
• Extraer la sangre en un tubo seco con gel separador, sin anticoagulantes ni
conservantes.
3. Etiquetado
• Se identificarán las muestras con la etiqueta correspondiente.
Conservación y transporte
Procesamiento en el laboratorio
Criterios de rechazo
Introducción
Obtención de la muestra
1. Recomendaciones generales
• Es aconsejable obtener y procesar las muestras para biología molecular con
las mismas precauciones de esterilidad que para las técnicas de cultivo.
• Las muestras de LCR, biopsias, orina, muestras respiratorias se obtendrán
siguiendo los procedimientos indicados en las correspondientes secciones del
manual de toma de muestras en función del proceso infeccioso implicado,
mientras que la obtención de la muestra de sangre difiere según el
microorganismo implicado y son mencionadas a continuación.
• Indicaciones de las muestras de sangre:
- Plasma para carga viral de VIH, VHC, VHB y, estudio de resistencias de VIH
- Leucocitos de sangre periférica: PCR de virus y bacterias intracelulares
2. Técnica
Conservación y transporte
Centrifugar el tubo con la sangre a 1200 rpm durante 10 minutos. Con ayuda
de una pipeta de aspiración estéril transferir el plasma a un tubo estéril de 1.5-2 ml
con tapón de rosca. Es conveniente obtener varias alícuotas y congelar si es
posible a –70ºC. No se aconseja conservar las muestras a –20 ºC durante tiempos
prolongados, máximo 1 año.
Criterios de rechazo
1
2
5
6
Toma de muestra de orina en el hombre.
1
2
5
6
RECOGIDA DE MUESTRA PARA DETERMINACION DE CARGA VIRAL
1. EXTRAER LA MUESTRA POR SISTEMA DE VACÍO, CON EL TUBO VACUTAINER™
(REFERENCIA 362795. COD. CONSELLERIA SANIDAD)
PROCEDIMIENTO DE OBTENCIÓN DE HEMOCULTIVOS
1.- Rotular los frascos (tapón azul y tapón dorado) con las etiquetas del paciente,
indicando si es la 1ª o la 2ª extracción
2.- Desinfección de los tapones de los frascos con etanol
3.- Seleccionar la vena y desinfectar la zona de venipunción en círculos
excéntricos, primero con etanol (30 segundos), luego con povidona iodada (1
minuto). Dejar secar un minuto
4.- Utilizar guantes estériles para la extracción de sangre
5.- Inocular en cada frasco: aerobio (color azul) y anaerobio (color dorado) el
volumen adecuado de sangre (8 ml) comenzando por el frasco anaeróbico
6.- Agitar suavemente el frasco y enviarlo inmediatamente al servicio de
Microbiología. En el laboratorio de Microbiología se deben dejar a temperatura
ambiente.