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Tesis Tribolium PDF
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1
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD REPELENTE E INSECTICIDA DE ACEITES
ESENCIALES EXTRAÍDOS DE PLANTAS AROMÁTICAS (CYMBOPOGON
CITRATUS Y TAGETES LUCIDA) UTILIZADOS CONTRA TRIBOLIUM
CASTANEUM HERBST. (COLEOPTERA: TENEBRIONIDAE)
DIRECTOR:
JESÚS TADEO OLIVERO VERBEL PH. D.
GRUPO DE INVESTIGACIÓN:
2
Dedicatoria
realidad.
3
Agradecimientos
4
Nota de aceptación
Jurado
Jurado
5
CONTENIDO
RESUMEN ............................................................................................................. 12
ABSTRACT ............................................................................................................ 13
INTRODUCCIÓN ................................................................................................... 14
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ............................................................. 17
2. OBJETIVOS .................................................................................................... 19
2.1 OBJETIVO GENERAL ..................................................................................... 19
2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS ........................................................................... 19
3. JUSTIFICACIÓN ............................................................................................. 20
4. MARCO TEÓRICO .......................................................................................... 21
4.1 SERVICIOS ECOLÓGICOS Y SU IMPORTANCIA ......................................... 21
4.2 ACEITES ESENCIALES: GENERALIDADES ................................................. 22
4.3 USO DE LOS ACEITES ESENCIALES COMO ALTERNATIVAS A LOS
PESTICIDAS QUÍMICOS EN COSECHAS Y GRANOS ALMACENADOS. .......... 23
5. ESTADO DEL ARTE: ACEITES ESENCIALES Y ACTIVIDAD BIOLÓGICA .. 27
6. METODOLOGÍA .............................................................................................. 36
6.1 RECOLECCIÓN DE MUESTRAS Y ADECUACIÓN DE LOS INSECTOS A
CONDICIONES DE LABORATORIO. .................................................................... 36
6.2 OBTENCIÓN DE ACEITES ESENCIALES ...................................................... 36
6.3 DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD REPELENTE DE LOS ACEITES
ESENCIALES ........................................................................................................ 37
6.4 DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD INSECTICIDA DE LOS ACEITES
ESENCIALES ........................................................................................................ 38
7. RESULTADOS ................................................................................................ 39
7.1 ACTIVIDAD REPELENTE ................................................................................ 39
7.2 MORTALIDAD ................................................................................................ 40
8. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES .................................................. 42
6
8.1 CONCLUSIONES ............................................................................................ 42
8.2 RECOMENDACIONES .................................................................................... 43
BIBLIOGRAFÍA ...................................................................................................... 44
7
LISTA DE GRAFICAS
pág.
8
LISTA DE TABLAS
pág.
9
LISTA DE SÍMBOLOS Y ABREVIATURAS
ABREVIATURAS
Abreviatura Término
ATCC American Type Culture Collection
(Colección Americana de Tipos de Cultivos Microbianos)
CENIVAM Centro Nacional de Investigaciones para la Agroindustrialización
de Especies Vegetales Aromáticas y Medicinales Tropicales
FAO Food and Agriculture Organization
(Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la
Alimentación)
Abreviatura Término
GRAS Genarally Regarded as Safe
10
(Generalmente Considerado como Seguro)
IAASTD International Assessment of Agricultural Knowledge, Science
and Technology for Development
(Evaluación Internacional de Conocimiento, Ciencia y
Tecnología para el Desarrollo Agrícola)
IPCC Intergovernmental Panel on Climate Change
(Panel Interguvernamental de Cambio Climático)
OPIDP Organophosphate-induced Delayed Polyneuropathy
(Polineuropatía Retardada inducida por Organofosfatos)
UNEP United Nations Environmental Programme
(Programa Ambiental de las Naciones Unidas)
USEPA US Environmental Protection Agency
(Agencia de Protección Ambiental de los Estados Unidos)
WHO World Health Organization
(Organización Mundial de la Salud)
11
RESUMEN
12
ABSTRACT
Essential oils are volatile mixtures of terpenes from plants. These products
possess insect repellent and insecticide. One of the most economically important
insects is the Tribolium castaneum Herbst. In order to evaluate the activity of
essential oils from Cymbopogon citratus plants in Colombia and (GRbgV02E),
Lippia origanoides (VEbgV07E) and Eucalyptus citriodora (MYbgV01E) repellency
tests were performed and mortality. To this end, the method was used to reference
area to assess the repellent activity, the CR50 for oils was 0.00021 (0.00097-
0.0004) for Cymbopogon citratus (GRbgV02E). The insecticidal activity was carried
out using filter paper impregnated with solutions of AE, the mortality rates show
that mortality caused at least 50% of the insects during the first 24 hours of
exposure. The results showed that AE have good repellent and insecticidal
properties for biological control of insects.
13
INTRODUCCIÓN
Por ello, se está haciendo un esfuerzo inmenso en cambiar las antiguas prácticas
de siembra, riego, cultivo, fertilización, cosecha y postcosecha, donde los químicos
jugaban (y en muchas regiones del mundo todavía juegan) un papel casi que
imprescindible, por otras donde el equilibrio con el medio ambiente sea el objetivo
fundamental. A esto se le ha denominado, la “Verdadera Revolución Verde”
(Parrot y Marsden, 2002).
14
Lo anterior tiene mucha transcendencia en el caso de los pesticidas. Durante
décadas del siglo pasado, el uso indiscriminado de este tipo de sustancias,
condujo a numerosas secuelas. Entre estas podemos citar:
15
durante años (Holmes et al., 1988); y, la destrucción de ecosistemas acuáticos,
especialmente ríos y lagos (Nielsen y Lee, 1987).
16
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Entre los principales insectos que atacan a los granos se encuentra el gorgojo
castaño de la harina, Tribolium castaneum (Herbst), artrópodo, perteneciente a la
familia Tenebrionidae. Un número relativamente pequeño de esta familia son
plagas de granos y otros productos almacenados, los cuales son considerados,
por lo general, plagas secundarias de los granos y primarias de los productos de
su molienda (FAO, 1985), constituyendo una de las plagas más importantes por su
amplia distribución mundial, la cual incluye desde humus del suelo, raíces y tallos
de plantas, hasta hábitats con condiciones áridas (desiertos).
17
vegetales, una alternativa recuperada de la agricultura de subsistencia y que, en
evaluaciones con rigor científico, ha demostrado actuar como repelente, deterrente
de la ovoposición y la alimentación, regulador de crecimiento, e insecticida, tanto
en adultos como en larvas (Lagares, 1994).
En los últimos años, los aceites esenciales se han presentado como una
alternativa en el control insecto-plaga (Benzi et al., 2009). Estos aceites, extraídos
de diversas plantas, han sido ampliamente estudiados con el objetivo de evaluar
su actividad repelente aprovechando su baja toxicidad frente a especies diferentes
a las plagas.
18
2. OBJETIVOS
19
3. JUSTIFICACIÓN
Para evitar que hongos, insectos y otros organismos ataquen los granos y otros
productos alimenticios, se utilizan en forma incontrolada plaguicidas que generan
consecuencias negativas tanto en el ambiente como en la salud de los
consumidores. Una alternativa a esta problemática es el uso de productos
naturales derivados de plantas nativas de Colombia para el control integrado de
plagas, aprovechando sus propiedades insecticidas y teniendo en cuenta que
estos bioinsecticidas pueden ser más rápidamente degradados en el medio
ambiente que los compuestos sintéticos (Koul y Dhawiwal, 2001).
20
4. MARCO TEÓRICO
21
Dentro de la variedad de los servicios ecosistémicos, el control natural de plagas
es un aspecto sumamente importante. Cerca del 99% de las plagas que afectan a
las cosechas son controladas por enemigos naturales como aves, arañas, avispas
parásitas, enfermedades virales y otros organismos (DeBach, 1974). Este control
natural de plagas no sólo minimiza el uso de químicos sintéticos, sino que protege
las cosechas y también ahorra grandes cantidades de dinero que serían gastadas
en componentes químicos (Naylor y Ehrlich, 1997).
El origen de la palabra “aceite esencial” se cree que proviene del nombre acuñado
en el siglo XVI por el alquimista suizo Paracelso von Hohenheim, el cual denominó
a los componentes efectivos de los medicamentos como Quinta essentia (Burt,
2004).
22
aromáticos, óxidos, éteres, alcoholes, ésteres, aldehídos y cetonas que
determinan el aroma y bioactividad característicos de la planta de la cual
provienen (Batish et al., 2008).
23
De los 32 órdenes de insectos, solamente tres, Coleoptera (gorgojos), Lepidoptera
(mariposas y polillas) y Psocoptera (piojos de los libros), contienen especies que
se encuentran como plagas de granos almacenados (Rees, 2004).
Existen unas 1000 especies de insectos que infestan los productos almacenados,
siendo las de mayor importancia económica las que se encuentran dentro de las
dos primeras órdenes ya mencionadas (Nerio et al., 2009).
24
asociados con estos insecticidas sintéticos han conducido a la necesidad de
encontrar alternativas más efectivas y amigables con la salud de los seres
humanos y el ambiente. Además, la lucha contra la contaminación ambiental y sus
efectos sobre la salud del hombre y de los sistemas ecológicos se constituye en
uno de los más serios retos de nuestro mundo moderno. Como consecuencia, los
aceites esenciales son algunos de los productos naturales más analizados hoy en
día, como consecuencia de las diferentes acciones biológicas de estos derivados
de las plantas en el control de las plagas de alimentos almacenados (Golob et al.,
1999; y, Rajendran y Sriranjini, 2008).
25
Todas estas propiedades beneficiosas de los aceites esenciales permiten su uso
en áreas especialmente sensibles, como escuelas, restaurantes, hospitales y
hogares. Aunque el beneficio real que poseen sería mejor aprovechado por los
agricultores de los países en vías de desarrollo, quienes no puede costear
insecticidas químicos y que están envueltos en la agricultura orgánica y sistemas
de producción en invernaderos (Batish et al., 2008).
26
5. ESTADO DEL ARTE: ACEITES ESENCIALES Y ACTIVIDAD BIOLÓGICA
De los aceites esenciales que más destacan por sus aplicaciones como pesticidas,
antifúngicos y antibacteriales a nivel mundial y local, encontramos los provenientes
del eucalipto de limón (Eucalyptus citriodora), pronto alivio (Lippia alba), ylang-
ylang o flor de cananga (Cananga odorata), culantro cimarrón (Eryngium
foetidum), romero (Rosmarinus officinalis), naranja (Citrus × cinensis), hierba limón
(Cymbopogon citratus), y tarragón mexicano o pericón (Tagetes lucida), siendo
estas dos últimas especies las consideradas en el presente estudio.
27
Entre los productos maderables y no maderables de las especies del género
Eucalyptus, los aceites esenciales encontrados en su follaje son los más
importantes y, además de emplearse como insecticidas, también tienen usos muy
extensivos en alimentos, perfumería e industria farmacéutica. Adicionalmente,
estos aceites poseen un amplio espectro de actividad biológica, incluyendo,
actividad antimicrobiana, fungicida, herbicida, acaricida y nematicida (Batish et al.,
2008).
28
El aceite esencial de Lippia alba, posee estudios relacionados principalmente con
su actividad antibacterial, virucida, antimicótica, e incluso, antiprotozoaria, aunque
son muy pocos los concernientes a repelencia o insecticidad. Así, los extractos
metanólicos y etil acetálicos pertenecientes a las raíces de esta planta han
demostrado ser efectivos contra Staphylococcus aureus (ATCC 6538P),
Staphylococcus aureus (ATCC 6538) y Klebsiella pneumoniae (ATCC 10031)
(Filho et al., 2006), mientras que los extractos de cloroformo, acetona y etanol de
raíces, y de hexano, metanol y etanol de hojas, actuaron inhibitoriamente frente a
Micrococcus luteus, Bacillus subtilis, Mycobacterium smegmatis, Candida albicans,
y Monilia sitophila (Aguiar et al., 2008).
Por su parte, concentraciones de 0,4 - 32,6 μg/mL del aceite esencial de L. alba
causan la reducción del 50% del número de virus del dengue en placa (Ocazionez
et al., 2010), y, concentraciones alrededor del 4% fueron efectivas contra de
Aspergillus niger, uno de los hongos más resistentes en lo que concierne a
inhibición por parte de aceites esenciales (de Souza et al., 2005). Además,
también se ha probado la efectividad de los extractos acuosos de las hojas de L.
alba, en contra de Aspergillus flavus y la producción de aflatoxinas por parte del
mismo, en 11 especies de leguminosas, entre las que se encontraban Lens
culinaria (lenteja) y Phaseolus vulgare (fríjol rojo), sin efectos negativos en la
germinación o consumo posterior de las mismas (Shukla et al., 2009).
29
(Matos, 1996; Julião et al., 2003), y otros como carvon, piperitenon, piperiteneno,
β-bourboneno, bicicloesquifenaldreno (Ocazionez et al., 2010), x-elemeno, pineno,
ciscariofileno, carvacrol, timol y terpineol (Craveiro et al., 1981).
Los aceites esenciales de la flor de cananga (Cananga odorata), famosos por sus
aplicaciones en perfumería, también son importantes por sus actividades
fumigantes.
Los compuestos químicos que actúan como agentes activos en los aceites
esenciales del ylang-ylang comprenden principalmente ésteres,
sesquihidrocarburos y monoterpenos. De estos destacan linalool, benzil acetato,
benzil salicilato y benzil benzoato, con trazas de cedrol, miristicina, cupereno,
thujopseno, β-cariofileno, α-gurjuneno, y-terpinol, metilsalicilato, y 4-terpinol
(Sacchetti et al., 2005). Por su parte, los extractos de la corteza son ricos en o-
metilmoscatolina, liriodenina y ácido 3,4-dihidrozibenzoico (Rahman et al., 2005).
30
concentraciones de 0,01 mL/mL de fumigación (Papachristos y Stamopoulos,
2002).
Con relación a la hierba limón son diversos los estudios que se han hecho
confirmando su actividad insecticida y repelente. Por ejemplo, el aceite esencial de
C. citratus ha reportado actividad insecticida importante frente a A. obtectus, T.
castaneum, y S. oryzae (principalmente mortalidad por contacto) (Padin et al.,
2000), así como también contra termitas (Odontotermes obesus) (Gupta et al.,
2011) y mosquitos (Aedes aegypti L.), en los cuales se han alcanzado valores
repelentes del 50%, para soluciones con aceite esencial al 1% v/v y preparaciones
en forma de crema al 15% v/p, en un lapso de 2 a 3 horas (Oyedele et al., 2002).
31
El tarragón mexicano (Tagetes lucida) tiene amplias aplicaciones en América
Latina debido a sus propiedades plaguicidas y nematocidas. Por ejemplo, la
combustión de la planta se utiliza artesanalmente en las zonas rurales de México
para la fumigación de casas y corrales infestados con pulgas, y para ahuyentar
moscas y mosquitos, Culex sp., Aedes sp., Anopheles sp. (Diptera: Culicidae)
(Villavicencio-Nieto et al., 2010). De hecho, la actividad repelente contra mosquitos
es la más importante, y la que ha sido estudiada en mayor extensión: Compuestos
orgánicos aislados de los aceites esenciales de la planta son altamente efectivos,
por ejemplo, el 5E-ocimenoneno a 40 ppm es efectivo contra larvas de A. aegypti
en 24 horas, y las fracciones de etil acetato con éter de petróleo fueron tóxicas
(LD50) en contra de larvas de A. stephensi (entre concentraciones de 43 y 58
ppm). De la misma forma, la actividad nematocida de aceites esenciales de raíces
de Tagetes es considerable frente a M. javanica, M. arenaria, Heterodera
rostochiensis, Ditylenchus dipsaci, y Anguina tritici (Vasudevan et al., 1997).
32
Laurelia sempervirens (Toxicidad de contacto, LD50 = 39-44 µg/mg de insecto,
y toxicidad fumigante, LD50 = 1,6-1,7 µL/L de aire), y Drimys winteri (Toxicidad
de contacto, LD50 = 75-85 µg/mg de insecto, y toxicidad fumigante, LD50 = 9-
10,5 µL/L de aire) (Zapata y Smagghe, 2010).
Mentha × piperita L. (LD50 = 25,8 µL/L de aire y LD95 = 33,1 µL/L de aire, por 24
horas), y Mentha spicata (LD50 = 35,6 µL/L de aire y LD95 = 51,5 µL/L de aire,
por 24 horas) (Lee et al., 2002), Mentha microphylla K. Koch (LD50 = 4,51 µL/L
de aire, por 72 horas) (Mohamed y Adbelgaleil, 2008), y Mentha viridis (L.)
(Mortalidad del 100% a concentración de 0,75%) (Al-Jabar, 2006).
33
Rosmarinus officinalis (LD50 = 7,8 µL/L de aire), Citrus × limon (LD50 = 16,2
µL/L de aire), Pimenta racemosa (LD50 = 17,8 µL/L de aire), Citrus auratifolia
(LD50 = 17,9 µL/L de aire), Foeniculum vulare (LD50 = 25,9 µL/L de aire), Pinus
syvestris (LD50 = 27,0 µL/L de aire), Pimpinella anisum (LD50 = 30,9 µL/L de
aire), Maleleuca alternifolia (LD50 = 36,0 µL/L de aire), y Piper nigrum (LD50 =
87,6 µL/L de aire) (Lee et al., 2002).
Allium sativum L. (LD50 = 1,32 y LD95 = 1,86, en adultos) (Ho et al., 1996), e
Illicium verum (Mortalidad del 100% a concentración de 0,96 g/mL) (Ho et al.,
1995).
Eucalyptus nicholii (LD50 = 13,7 µL/L de aire y LD95 = 17,5 µL/L de aire),
Eucalyptus codonocarpa (LD50 = 18,2 µL/L de aire y LD95 = 19,6 µL/L de aire),
Callistemon sieberi (LD50 = 17,4 µL/L de aire y LD95 = 20,3 µL/L de aire),
Maleleuca fulgens (LD50 = 14,1 µL/L de aire y LD95 = 17,6 µL/L de aire),
Eucalyptus blakelyi (LD50 = 15,5 µL/L de aire y LD95 = 19,6 µL/L de aire), y
Maleleuca armillaris (LD50 = 13,7 µL/L de aire y LD95 = 16,5 µL/L de aire) (Lee
et al., 2004).
34
Ahora, con referencia a la actividad repelente, es posible destacar los siguientes
aceites esenciales provenientes de:
35
6. METODOLOGÍA
36
6.3 DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD REPELENTE DE LOS ACEITES
ESENCIALES
La actividad repelente de los aceites esenciales fue evaluada a través del método
del área de preferencia descrito por Tapondjou et al., 2005, utilizando hojas de
papel filtro de 9 cm y aplicando 0.5 mL de aceite esencial en el área tratada. Las
concentraciones escogidas para evaluar la actividad repelente fueron: 0.0001,
0.001, 0.01, 0.1 y 1%. Fue posible determinar la actividad repelente de 2 aceites
esenciales después de 2 y 4 horas de exposición.
Parámetros Condición
Tipo de ensayo Repelencia por el método del área de preferencia.
Iluminación Oscuridad
Temperatura. 26 ± 2 ºC.
Humedad relativa 70-85%
Recipientes Cajas de Petri.
Número de réplicas 3 para cada concentración de aceite esencial
Material biológico Insectos adultos de Tribolium castaneum (Herbst)
Condiciones de los Seleccionar los insectos con cuidado para evitar
insectos que se dañen algunas de sus partes.
Disolvente Acetona
Duración de la prueba 24 horas
Control negativo Acetona
37
6.4 DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD INSECTICIDA DE LOS ACEITES
ESENCIALES
38
7. RESULTADOS
39
Al comparar los porcentajes de repelencia conseguidos entre 2 y 4 horas de
exposición, no se encontraron diferencias estadísticamente significativas, sin
embargo, existe una leve tendencia a la disminución de la actividad repelente con
el aumento del tiempo de exposición, prueba de esto es el aumento en los valores
de RD50, este hecho puede ser atribuido a la alta volatilidad de los metabolitos
presentes en los aceites.
7.2 MORTALIDAD
40
Los dos aceites esenciales evaluados provocaron la mortalidad de al menos el
50% de los insectos durante las primeras 24 horas de exposición a una
concentración del 4%(v/v) en aceite, siendo tóxica para la especie Rhizopertha
dominica. Además el aceite Eucalyptus citriodora (MYbgV01E), se logró la
mortalidad del 100% de los organismos durante las primeras 24 horas de
exposición a una concentración del 3% en el aceite.
100 100
80 80 0%
% Mortalidad
% Mortalidad
0% 1%
1%
60 60 2%
2%
3%
3%
40
40 4%
20
20
0
0
0 20 40 60 80 100 120 140
0 20 40 60 80 100 120 140
Tiempo de exposición (h)
Tiempo de exposición (h)
41
8. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
8.1 CONCLUSIONES
42
8.2 RECOMENDACIONES
43
BIBLIOGRAFÍA
44
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