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Un estudio integral que incluye el monitoreo, la evaluación de efectos sobre la salud y el

desarrollo de un método de remediación de la contaminación de cromo

Masafumi Yoshinaga una , 1 , Hiromasa Ninomiya una , segundo , MM Aeorangajeb Al Hossain una , segundo ,
Makoto Sudo una , segundo , Anwarul Azim Akhand do , Nazmul Ahsan do , Md. Abdul Alim re ,
Md. Khalequzzaman mi , Machiko Iida una , segundo , F , Ichiro Yajima una , segundo , F , Nobutaka Ohgami una , segundo , F ,
Masashi Kato una , segundo , F , *

una Departamento de Salud Ocupacional y Ambiental, Nagoya University Graduate School of Medicine, Nagoya, Aichi, Japón
segundo Cuerpo Voluntario de Salud Internacional en Universidades, Nagoya, Aichi, Japón
do Departamento de Ingeniería Genética y Biotecnología de la Universidad de Dhaka, Dhaka, Bangladesh
re Instituto de Nutrición y Salud Pública, Dirección General de Servicios de Salud, Dhaka, Bangladesh
mi Departamento de Salud Pública e Informática, Sheikh Mujib Universidad Médica Bangabandhu, Dacca, Bangladesh
F Unidades de Ciencias de Salud Ambiental, Departamento de Ciencias Biomédicas de la Facultad de Ciencias de la Vida y la Salud, Universidad de Chubu, Kasugai, Aichi, Japón

reflejos

Carcinogénesis de Cr (VI) fue promovido de forma sinérgica en presencia de Cr (III). Cr (VI) y Cr (III) deben ser removidos
para remediar la contaminación del agua en las zonas de curtiduría. Un barato depurativo que ef fi cientemente elimina tanto
Cr (VI) y Cr (III) se desarrolla. Nuestra depurativo es más eficaz en la eliminación de Cr (III) que otros Depurativos
reportados. Se sugiere una solución para la contaminación del medio ambiente en todo el mundo por Cr curtiduría.

información del artículo resumen

Historia del artículo: El cromo (Cr) la contaminación causada por las aguas residuales de las curtidurías es un problema ambiental en todo el mundo. Para desarrollar
Recibido el 17 de julio de 2017 se recibió por 28 una contramedida, se realizó un estudio exhaustivo utilizando Hazaribagh, el área de curtiduría en la ciudad de Dhaka, Bangladesh, como
revisada de febrero de 2018 Aceptado el 4 de de
modelo. Nuestra vigilancia ambiental indicó que la forma soluble de Cr, pero no de bario o arsénico, en Buriganga río se deriva de Hazaribagh.
marzo de 2018 Disponible línea de 5 de marzo de
Nuestro análisis químico siguiente mostró que Cr, el contaminante principal en agua del canal en Hazaribagh, consistía 0.7 metro M hexavalente
2018
Cr [Cr (VI)] y 1705 metro M trivalente Cr [Cr (III)]. Nuestro estudio biológico luego mostró que coexposure a Cr (VI) y Cr (III) en las posibles
relaciones en agua del canal en Hazaribagh sinérgicamente promueve la actividad de humano HaCaT no tumorigénicos transformar
Editor de manipulación: Chang Yu-Ping queratinocitos con activado MEK / ERK y AKT. Nuestro estudio de ingeniería ambiental fi finalmente indicó que un compuesto de magnesio y de
hierro basados ​en hidrotalcita (MFHT), nuestro depurativo original, puede adsorber máximamente 9.0mg / g Cr (VI) y 1041mg / g Cr (III). Nuestros
palabras clave: resultados sugieren la importancia de la eliminación de Cr (III), así como Cr (VI), mostrando que el Cr (III), que generalmente se reconoce como
La contaminación del agua un producto químico con baja toxicidad, sinérgicamente promovido carcinogenicidad de un bajo nivel de Cr (VI) . Por lo tanto, proponemos el uso
carcinogénico toxicidad de de nuestro original de alta ef fi ciente y depurativo de bajo costo como una contramedida para hacer frente al problema mundial de la
residuos de cromo Depurative
contaminación del medio ambiente Cr.
curtiduría

© 2018 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

abreviaturas: MF-HT, magnesio (Mg) -hierro (Fe) a base de compuestos similares a hidrotalcita; HPLC, cromatografía líquida de alta presión; ICP-MS, acoplado inductivamente espectrometría de masas de plasma.

* Autor correspondiente. Departamento de Salud Ocupacional y Ambiental, Nagoya University Graduate School of Medicine, 65 Tsurumai-cho, Showa-ku, Nagoya, Aichi, 466-8550, Japón.

Dirección de correo electrónico: katomasa@med.nagoya-u.ac.jp (M. Kato).

1 Dirección actual: Departamento de Biología Celular y Farmacología, Herbert Wertheim Facultad de Medicina de la Universidad Internacional de Florida, Miami, Florida 33199, EE.UU..

https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.2018.03.026
0045-6535 / © 2018 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.
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1. Introducción
Las enfermedades causadas por la contaminación del medio ambiente en Japón incluyen la
enfermedad Itai-Itai, que fue causado por el cadmio (Cd) de la contaminación en el río Jinzu ( Maruzeni
et al., 2014 ), Y la enfermedad de Minamata Niigata, que fue causado por la contaminación de
mercurio (Hg) en Agano río ( Hara et al., 2013 ). Arsenicosis fue causado por el arsénico
contaminación (As) en el río Mekong en Camboya ( Sampson et al., 2008 ). Varias enfermedades,
incluyendo el cáncer y las enfermedades cardiovasculares se han sugerido para ser causado por el
plomo (Pb) y la contaminación en el río Cd Hengshine en China ( Wang et al., 2011 ). Por lo tanto, la
presencia de contaminantes metálicos tóxicos en agua de río es un peligro en todo el mundo para la
salud humana.
se requieren más de 120 L de agua para la producción de 1 kg de cuero en las curtidurías ( Farenzena residuales de las curtidurías de Hazaribagh en Dhaka City podría ser un modelo útil para hacer frente
et al., 2005 ). Si se utilizan elementos tóxicos en las curtidurías, las aguas residuales de las
curtidurías sin depuración adecuado podría causar un enorme contaminación del agua. La
contaminación ambiental causada por las aguas residuales de las industrias de curtiduría en realidad
es un problema en todo el mundo ( Belay, 2010 ; Bharagava y Mishra, 2018 ;
valor para Como en el agua potable como 10 metro g / L ( OMS, 2017 ). Los aumentos de varios
problemas de salud relacionadas con la toxicidad como la hipertensión ( Perry et al., 1989 ), disfuncion
renal ( Dietz et al., 1992 ), pérdida de la audición ( Ohgami et al., 2012 ) Y la carcinogénesis ( Thang et
al., 2011 ,
2015b ) Causada por el exceso de exposición a Ba han sido reportados. La OMS indica el valor de
referencia basado en la salud de Ba en el agua potable como 1300 metro g / L ( OMS, 2017 ). En este
estudio, As y Ba, así como Cr fueron investigados en el agua del canal que contiene las aguas
residuales de las curtidurías de Hazaribagh y en Río Buriganga en la ciudad de Dhaka, Bangladesh.
Después de centrarse en Cr, el contaminante de más alto nivel, nuestro estudio integral consistía en
1 vigilancia del medio ambiente, la evaluación de riesgos de salud) 2) y 3) el desarrollo de un
depurativo para establecer contramedidas para la contaminación del medio ambiente y riesgos para
la salud humana. Nuestra contramedida propuesta por la contaminación causada por Cr aguas
a la contaminación ambiental generada a partir de las curtidurías en diversas zonas del mundo.

Saxena et al., 2016 ).

2. Materiales y métodos
La contaminación ambiental en una zona urbanizada de curtidurías en Hazaribagh en Dhaka
City, Bangladesh ha sido reportado ( Anawar et al., 2000 ). Se ha sugerido que los 7,7 millones de
2.1. El muestreo y análisis de elementos
litros de residuos líquidos por día a partir de las curtidurías ( AZoM et al., 2012 ) Podría ser una fuente
de contaminantes de Buriganga río y los canales en Hazaribagh. Dado que también se han reportado
Las áreas de toma de muestras de agua y canal de agua del río Buriganga que contiene las
riesgos para la salud de los trabajadores de las curtidurías en Hazaribagh ( Tinni et al., 2014 ), Agua
aguas residuales de las curtidurías en Hazaribagh en la ciudad de Dhaka, Bangladesh ( Anawar et al.,
del canal que contiene las aguas residuales de las curtidurías y agua de río Buriganga, que se usa
2000 ) Se muestran en Figura 1 botellas A. muestreo se fi llena de agua muestreada después de
como un suministro de agua doméstico ( Rahman y Al Bakri, 2010 ), Debe ser un peligro para la salud
enjuagar el interior de cada botella con agua muestreada. Las botellas se transfieren desde la ciudad
de los residentes. Sin embargo, hay una falta de información sobre la contaminación con elementos
de Dhaka, Bangladesh Ciudad de Nagoya, Japón después de ser almacenado a temperatura
tóxicos de Hazaribagh y la contaminación con elementos tóxicos procedentes de otras fuentes en
ambiente durante fewweeks. Después de que las muestras se habían almacenado a 4 C en la
Buriganga río.
Universidad de Nagoya, Japón, los niveles totales de Cr, As y Ba se midieron mediante el uso de
espectrometría de plasma acoplado inductivamente de masas (ICP-MS) (modelos 7500cx, Agilent
Technologies Inc, CA) siguiendo el método descrito anteriormente ( Kato et al., 2013 ). Las especies
químicas de Cr se analizó por cromatografía líquida de alta presión (HPLC) (SCL-10AVP, Shimazu
La Organización Mundial de la Salud (OMS) sugiere 50 metro g / L de Cr como el valor de
Corporation, Japón) ICP-MS usando
referencia basado en la salud para el agua potable ( OMS, 2017 ). El cromo (Cr) existe generalmente
en el medio ambiente ya sea como hexavalente Cr [Cr (VI)] o trivalente Cr [Cr (III)]. Cr (VI) tiene
efectos tóxicos, genotóxicos, mutagénicos y carcinogénicos, causando problemas de salud
una cr especiación columna (G3268-80001,
negativos, tales como lesiones en la piel, ulceración y perforación del tabique nasal, perforación del
30mm 4,6 mm, Agilent Technologies, Inc.). El nivel de Cr (VI) en cada muestra se cuanti fi ed mediante
tímpano, disminución de la espermatogénesis y carcinoma de pulmón. ( Bharagava y Mishra, 2018 ; Mishra
el uso de software MassHunter (Agilent Technologies, Inc.). El nivel de Cr (III) se calculó restando el
y Bharagava, 2016 ). En contraste, Cr (III) es generalmente considerado como no tóxico, aunque
nivel de Cr (VI) desde el nivel de Cr total.
varios estudios recientes han sugerido posibles riesgos para la salud de Cr (III) ( Fan et al., 2015 ). La
Agencia Internacional para la Investigación del Cáncer (IARC) clasifica Cr (VI) y Cr (III) como un
Este estudio fue aprobado por el Comité Ético de la Universidad de Nagoya (aprobación no.
carcinógeno del Grupo 1 (carcinógeno para los seres humanos) y un carcinógeno del Grupo 3 (no
2.013-0070) en la ciudad de Nagoya y el Comité de Ética de la Universidad de Chubu (aprobación
clasificación fi capaz en cuanto a su carcinogenicidad en seres humanos), respectivamente ( Campo y
no. 250007) en Kasugai City en Japón.
Withers, 2012 ). Por lo tanto, se cree que la toxicidad carcinogénico de la exposición única a Cr (III) a
ser limitado (de Biedermann y Landolfo, 1990 ; IARC, 2016 ). Por lo tanto, hay más interés en la
eliminación de Cr (VI) que en la eliminación de Cr (III). Por otra parte, no ha habido ningún estudio
2.2. condiciones de la línea y el cultivo celular
que muestra la relación de Cr (VI) y Cr (III) en agua del canal de curtidurías y en agua de río
Buriganga. Si tanto Cr (VI) y Cr (III) se detectan en el agua, la relación debe ser considerado,
especialmente cuando la estimación de los riesgos potenciales para la salud debido a coexposure a Una línea celular de queratinocitos HaCaT cutánea inmortalizada humana ( Boukamp et al., 1988 ;

Cr (VI) y Cr (III). Calay et al., 2010 ) Fue suministrada por Eppelheim, Alemania. El método para el cultivo de
queratinocitos HaCaT se describió previamente ( Yajima et al., 2015 ). queso Brie Florida y, las células
HaCaT se cultivaron en Modi de Dulbecco fi Medium (DMEM baja glucosa, Wako) de Ed Eagle
suplementado con 10% de suero bovino fetal (FBS) y 1% de suspensión de penicilina /
estreptomicina / anfotericina B (Wako) a 37 C en un 5% de CO 2 humidi fi incubadora ed.

Se han reportado contaminación ambiental y riesgos para la salud de arsénico (As) y bario (Ba)
en las zonas rurales de Bangladesh ( Kato et al., 2013 ; Kumasaka et al., 2013 ; Ohgami et al., 2016 ; Thang
et al., 2011 ; Yajima et al., 2018 , 2015 , 2012 ). La exposición excesiva a medida que se ha informado 2.3. ensayo de supervivencia de la célula

a aumentar diversos riesgos para la salud, incluidos los riesgos de la piel hiperpigmentada ( Yajima et
al., 2018 , 2017 ), diabetes ( Drobn una et al., 2013 ), pérdida de la audición ( Li et al., 2017 ) Y los
cánceres de la vejiga ( Chen et al., 2003 ), pulmón ( Putila y Guo, 2011 ) Y la piel ( Yajima et al., 2015 ).
La OMS indica la directriz basada en la salud
El cromo (VI) óxido (CrO 3, Wako, Japón) y sulfato básico de cromo (Cr (SO 4) OH, Yoshida
Chemical Industrial Co., Japón) se utilizaron como el cromo hexavalente y el cromo trivalente,
respectivamente. Después de inanición con suero 1% de bovino fetal (FBS) durante 16 h, los
queratinocitos HaCaT fueron cultivadas en la presencia o ausencia de las concentraciones indicadas
de Cr (VI) o Cr (III). La mitad del medio
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se intercambió cada día durante el cultivo. Después de 0, 1, 3, 5 y 7 días de incubación, la

supervivencia de los queratinocitos HaCaT se investigó mediante un ensayo de supervivencia de las
células siguiendo el método descrito anteriormente ( Yajima et al., 2012 ).

2.4. ensayo de formación de colonias

Los efectos de la exposición a Cr (VI) y / o Cr (III) sobre el crecimiento anchorageindependent

de los queratinocitos HaCaT fueron investigados por un ensayo de formación de colonias como se
describe previamente ( Yajima et al., 2015 ) Con una ligera modificación fi catión. células HaCaT que se
habían muerto de hambre durante 16 h se pre-incubaron en presencia o ausencia de las
concentraciones indicadas de Cr (VI) y / o Cr (III) durante 2 días. Los queratinocitos se transfirieron a
1% de metilcelulosa / Modi de Dulbecco fi Medio de ed de Eagle (DMEM) suplementado con 10% FBS
y se incubó de forma continua en presencia o ausencia de las mismas concentraciones de Cr (VI) y /
o Cr (III) en Costar Ultra-Low fijación placas de 96 pocillos (Corning, NY, Estados Unidos) a una
densidad de

1.6 10 3 células por pocillo. El número de colonias con diámetros de 50 metro m se contó.

2.5. El análisis por inmunotransferencia

El análisis por inmunotransferencia se realizó por el método descrito anteriormente ( Akhand et

al., 1999 ). anticuerpos monoclonales de ratón a una-
Tublin (Sigma-Aldrich, MO, Estados Unidos) y para MEK1 / 2 y fosfo-ERK1 / 2 (Thr202 / Tyr204) (Cell
Signaling Technology, MA, Estados Unidos), los anticuerpos monoclonales de conejo para
fosfo-MEK1 / 2 (Ser217 / anticuerpos 221) (Cell Signaling Technology) y policlonales de conejo a
ERK1 / 2, Akt y fosfo-AKT (Ser473) (Cell Signaling Technology) se utilizaron como fi anticuerpos
primero. Cabra anticuerpos policlonales frente a IgG de ratón e IgG de conejo conjugado con
peroxidasa (Merck Millipore) fueron usados ​como segundos anticuerpos.

2.6. adsorción de cromo por HT-MF

Nuestra magnesio original y compuesto similar a hidrotalcita a base de hierro [Mg (II) 4- Fe (III) 2 ( OH)
12] 2 þ [ NO 3 xCO 3 $ Z h 2 O] 2- ( MF-HT) se desarrolló de acuerdo con el método descrito previamente ( Kato
et al., 2013 ; Kumasaka et al., 2013 ). queso Brie Florida y, 300 ml de una solución de

0.67MMg (NO 3) 2 y 0,33 mm Fe (NO 3) 3 fue entregado lentamente por gotas en 525 ml de 1 M Na 2 CO 3
solución, se desarrollaron después de lo cual precipita. Los precipitados se fi filtró bajo presión
reducida y se seca durante más de 16 h. Después de la estructura sólida había sido analizada
utilizando un difractómetro de rayos X, la capacidad de adsorción de MF-HT (tamaño de partícula:
<250 metro m) para Cr (VI) y Cr (III) se examinó. Las soluciones que contienen las concentraciones
indicadas de Cr (VI) o Cr (III) se agitaron con 1% (w / v) de MF-HT a 300 rpm durante el tiempo de
incubación indicado. Después de la centrifugación (21.600 sol, 10 min), los niveles de Cr en los
sobrenadantes diluidos por HNO 3

hasta un 1% fi concentración final se midieron mediante ICP-MS. La incubación durante 60 minutos

se utilizó para obtener la isoterma de adsorción de Langmuir, y se utilizó la incubación durante 1 min
Fig. 1. El control ambiental de muestras de agua del río Buriganga y canales en Hazaribagh en la ciudad de Dhaka, para las muestras de agua en Hazaribagh para la aplicación práctica de MF-HT.
Bangladesh (modificada fi ed con el mapa de Google). ( A) Las muestras de agua se recogieron en la región aguas arriba (a: n ¼
21) y proximal (d: n ¼ 20) y distal (e: n ¼ 17) aguas abajo regiones de Río Buriganga después de fi Ning con la Florida influencia
(c: n ¼ 11) de Buriganga río y los canales de curtidurías en Hazaribagh (b: n ¼ 39) como un punto básico. (SEGUNDO mi D)
Las concentraciones (media ± Dakota del Sur: metro g / L) de las formas solubles de Cr (B), As (C) y Ba (D) en muestras de
agua de la superficie de cada sección se expresan mediante la escala log (eje Y). (E) Concentraciones (media ± Dakota del 2.7. análisis estadístico
Sur: metro g / L) de las formas solubles de Cr (VI) (bar cerrado) y Cr (III) (barra abierta) en muestras de agua de la zona
Hazaribagh (n ¼ 21) se expresan por la escala log (eje Y). ** signi fi cativamente diferente del control (** p < 0,01) como se
Los análisis estadísticos se realizaron mediante la prueba de Dunnett y la U de Mann-Whitney T ensayo
analizó mediante la prueba de Mann-Whitney T prueba.
de acuerdo con los métodos descritos previamente ( Kato et al., 2004 ; Ohgami et al., 2016 ) Utilizando
el software JMP Pro (versión 11.0.0) (SAS Institute Inc., NC, EE.UU.).
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Fig. 2. Efectos de la exposición única a Cr (VI) y Cr (III) sobre la supervivencia de los queratinocitos HaCaT. ( A) Ratios (media ± Dakota del Sur; norte ¼ 3) de sobrevivir HaCaT queratinocitos cultivados para los días indicados en la presencia (0,1 mi 3 metro M) o ausencia
de Cr (VI) se presentan. (B) Ratios (media ± Dakota del Sur; norte ¼ 3) de sobrevivir HaCaT queratinocitos cultivados para los días indicados en la presencia (10-1700 metro M) o ausencia de Cr (III) se presentan. Los resultados se muestran como la relación con el valor
de control de nil en el día 7 (Ctrl, cuadrado abierto). *, ** signi fi cativamente diferente del control como (* p < 0,05, ** p < 0,01) se analizaron por la prueba de Dunnett en cada día.

Fig. 3. Efectos de la exposición a cualquiera de Cr (VI) o Cr (III) sobre la transformación de la actividad en los queratinocitos HaCaT. ( A, B) Gráficos (media ± Dakota del Sur; norte ¼ 4) que muestra las relaciones de número de colonias por pocillo (A) y fotografías de
colonias (B) de los queratinocitos HaCaT en presencia (0,001 mi 0.1 metro M) o ausencia de Cr (VI) se presentan. (C, D) Gráficos (media ± Dakota del Sur; norte ¼ 4) que muestra las relaciones de número de colonias por pocillo (C) y fotografías de colonias (D) de HaCaT
queratinocitos en presencia (0,1 mi 10 metro M) o ausencia de Cr (III) se presentan. Los resultados (barras cerradas) se muestran como la relación con el valor de control de nil (Ctrl, bar abierto) (A, C). ** signi fi cativamente diferente del control (** p < 0,01) como se analizó
por la prueba de Dunnett.
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3. resultados
3.1. Los niveles de Cr, As y Ba en el agua del río y canales Buriganga en Hazaribagh
Muestreo ( Figura 1 A) se realizó en la región aguas arriba (a)
y proximal (d) y distal (e) regiones de aguas abajo de Buriganga río después de fi Ning con la Florida influencia
(c) de río Buriganga y canales de curtidurías en Hazaribagh (b) como punto de base.
(concentraciones metro g / L) de las formas solubles de Cr ( Figura 1 B), As ( Figura 1 C) y Ba ( Figura 1 D)
en agua from5 secciones se muestran. Los niveles medios de Cr en agua del canal en Hazaribagh y
en agua de río Buriganga desde el aire Florida influencia y regiones proximal y distal aguas abajo eran
aproximadamente 5.160 veces, 5 veces por encima, de 4 veces y 1 veces mayor que el nivel medio
de Cr en agua de río Buriganga desde la región aguas arriba, respectivamente ( Figura 1 SEGUNDO).
Sin embargo, los niveles medios de As y Ba en agua del canal en agua Hazaribagh y Buriganga río
desde la corriente arriba, con Florida uir, y proximal y distal regiones aguas abajo fueron comparables
( Figura 1 C y
RE).
Entonces contaminación Cr se centró en porque el nivel de Cr era 252 veces y 2211 veces
mayores que los niveles de Ba y As, respectivamente, en agua del canal en Hazaribagh. Nuestro
análisis de especies químicas mostró concentración themean de Cr (VI) [6,7 metro g L / (0,1 metro M)]
y la concentración total de Cr significar [14284,7 metro g L / (274,7 metro M)] en agua canal en
Hazaribagh ( Figura 1 MI). Las concentraciones máximas de Cr (VI) y Cr (III) fueron 38,1 metro g L /
(0,7 metro M) y 88.697,3 metro g L / (1705.7 metro M), respectivamente.
3.2. Efectos de la exposición a cualquiera de Cr (VI) o Cr (III) sobre el crecimiento
anchorageindependent
Un estudio previo mostró que el agua del canal en Hazaribagh ( UNICEF (Fondo de las Naciones
Unidas), 2010 ; Reloj de 2012 ) Además de agua río Buriganga ( Rahman y Al Bakri, 2010 ) Fue
utilizado para el lavado y el baño de los residentes. Para examinar el potencial riesgo para la salud
de la exposición única a Cr (VI) y Cr (III), un ensayo de formación de colonias se realizó siguiendo un
ensayo de supervivencia de las células mediante el uso de queratinocitos HaCaT no tumorigénicos
humanos ( Higos. 2 y 3 ).

Fig. 4. Efectos de coexposure a Cr (VI) y Cr (III) sobre la transformación de la actividad en los queratinocitos HaCaT. Los gráficos (media ± Dakota del Sur; norte ¼ 4) que muestra las relaciones de número de colonias por pocillo (A,

C) y las fotografías de colonias (B, D) de HaCaT queratinocitos en la presencia o ausencia de 0,001 metro M Cr (VI) y / o 10 metro M Cr (III) (A, B) o 0,003 metro M Cr (VI) y / o 1 metro se presentan M Cr (III) (C, D). Los resultados (barras cerradas) se
muestran como la relación con el valor de control de nil (Ctrl, bar abierto) (A, C). * signi fi cativamente diferente del control (* p < 0,05) como se analizó por la prueba de Dunnett.
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Fig. 5. Efectos de coexposure a Cr (VI) y Cr (III) en MEK / ERK y AKT señalización en queratinocitos HaCaT. Los
resultados del análisis de inmunotransferencia en HaCaT queratinocitos con el control nil (carril 1; Ctrl), suela de la
exposición a 0.001 metro M Cr (VI) (carril 2) y 10 metro M de Cr (III) (carril 3) y co-exposición a 0.001 metro M de Cr
(VI) y 10 metro M de Cr (III) (carril 4) se presentan. Las fotografías muestran los niveles de fosforilación de MEK
(pMEK), ERK (pERK) y AKT (pAKT) y la expresión de MEK (MEK), ERK (ERK), AKT (AKT) y Tublin (Tublin).
después de estafa fi confirmando que 0.3 metro M Cr (VI) ( Figura 2 A) y 30 metro M Cr (III) ( Figura 2 B) no
tuvo efecto en la supervivencia de queratinocitos HaCaT en nuestro ensayo de supervivencia de células
durante 7 días, la formación de colonia ensayos de 0.1 metro M Cr (VI) ( Fig. 3 A) y 10 metro M Cr (III) ( Fig.
3 B) se realizaron. Los niveles de anclaje independiente de crecimiento fueron de 2,3 veces y 2,2 veces
mayor por la exposición única a 0,03 metro M y 0,1 metro M Cr (VI), respectivamente ( Fig. 3 UNA). Por
otro lado, los niveles de crecimiento independiente de anclaje de las células expuestas a únicamente 0,1
M, 1 metro M y 10 metro M Cr (III) eran comparables con la del control nulo.
3.3. Efectos de coexposure a Cr (VI) y Cr (III) sobre el crecimiento anchorageindependent
Nuestros resultados de la monitorización ambiental en Dhaka City indicaron que la piel de los
residentes posiblemente fue expuesto tomolar proporciones de Cr (VI): Cr (III) que varía de 01:29 a 1:
32.782. Por lo tanto, se examinó el efecto de coexposure a Cr (VI) y Cr (III) en que intervalo de
relaciones en el crecimiento independiente de anclaje de los queratinocitos HaCaT.
Inesperadamente, los niveles de anclaje independiente de crecimiento fueron de 2,5 veces y 2,3
veces mayor por coexposure a 0.001 metro M Cr (VI) y 10 metro M Cr (III) ( Fig. 4 A) y coexposure a
0.003 metro M Cr (VI) y 1 metro M Cr (III) ( Fig. 4 B), respectivamente, en comparación con la del
control nulo.
3.4. Efectos de coexposure a Cr (VI) y Cr (III) en MEK / ERK y la señalización de AKT en
queratinocitos HaCaT
niveles fosforilada de MEK / ERK en HaCaT queratinocitos coexposed a 0.001 metro M Cr (VI)
y 10 metro M Cr (III) fueron más altos que los de las células expuesto únicamente a 0.001 metro M
Cr (VI) y 10 metro M Cr (III)
y en el control nil ( Fig. 5 ). niveles fosforilada de AKT en las células coexposed a 0.001 metro M Cr
(VI) y 10 metro M Cr (III) también fueron más altos que los de las células expuesto únicamente
0.001 metro M Cr (VI) y 10 metro M Cr (III) y en el control nil ( Fig. 5 ).
3.5. La adsorción de Cr (VI) y Cr (III) por MF-HT
La adsorción de Cr (III) y Cr (VI) por MF-HT fue examinado por un método discontinuo descrito
previamente ( Kato et al., 2016 ). Después de investigar modelos de adsorción plural incluyendo
Freundlich y Langmuir isotermas, el uso de las isotermas de Langmuir fue seleccionado como un
método adecuado para examinar los resultados de adsorción de equilibrio de Cr en MF-HT. datos de
equilibrio de Cr (VI) ( Fig. 6 A) y Cr (III) ( Fig. 6 C) y Langmuir isotermas para Cr (VI) ( R 2> 0,95; Fig. 6 B) y
Cr (III) ( R 2> 0,95; Fig. 6 se muestra D) de adsorción por MF-HT. capacidades de adsorción máximos
de MF-HT para Cr (VI) y Cr (III) calculados a partir de las isotermas de Langmuir eran 9.0mg / g y
1041mg / g, respectivamente, en teoría.
Una prueba de adsorción de Cr por MF-HT era fi finalmente lleva a cabo en el agua del canal que
contiene las aguas residuales de las curtidurías a Hazaribagh. La concentración media de Cr (1213 metro
g / L) en muestras de agua del canal (n ¼ 10) tratados con 1% en peso de MF-HT durante 1 minuto se
disminuyó a 142 metro g / L ( Fig. 6 E y F).
4. Discusión
Nuestra vigilancia del medio ambiente inwide áreas de Buriganga río y canales en Hazaribagh
proporcionó evidencia más directa de la contaminación Hazaribagh dependiente de la contaminación
con Cr y Hazaribaghindependent con As y Ba en Buriganga río. Dado que el nivel de Cr es> 2000
veces y> 200 veces más altos que los niveles de As y Ba, respectivamente, en el agua del canal en
Hazaribagh, nos hemos centrado en la contaminación Cr. No ha habido ningún estudio que muestra
los efectos biológicos de coexposure a Cr (VI) y Cr (III). Por lo tanto, los efectos biológicos de
coexposure a la gama de relaciones molares de Cr (VI) y Cr (III) en agua canal en Hazaribagh se
examinaron utilizando queratinocitos de la piel no tumorigénicos humanos. Nuestro ensayo de
formación de colonias demostró por fi tiempo primero que coexposure a Cr (VI) y Cr (III)
sinérgicamente promovido la actividad de los queratinocitos HaCaT transformar. MEK / ERK y AKT,
que regulan la actividad de transformación de ( Thang et al., 2015A ; Yajima et al., 2015 ), Fueron
sinérgicamente activado por coexposure a Cr (VI) y Cr (III). promoción sinérgica de la transformación
de la actividad por coexposure a 0.001 metro M Cr (VI) y 1 metro M Cr (III), que están en el intervalo
de relaciones en el agua de Dhaka City, también se demostró en nuestro ensayo de formación de
metro
colonias usando humano epiteliales no tumorigénicas de pulmón de células BEAS-2B (véase Complementario
Fig. S1 en línea). Nuestros resultados utilizando células humanas plural proporcionaron evidencia
más sólida de la promoción sinérgica de la actividad de transformación de por coexposure a Cr (VI) y
Cr (III). Nuestros resultados también revelaron parcialmente el mecanismo molecular de la promoción
sinérgica.
Dado que nuestros resultados mostraron un efecto sinérgico cuando estaba presente en
conjunción con alta toxicidad Cr (VI) de baja toxicidad Cr (III), ambos Cr (VI) y Cr (III) deben
eliminarse de manera efectiva. Nuestro análisis de ingeniería del medio ambiente mediante el uso de
las isotermas de Langmuir demostró que nuestra original MF-HT podría adsorber máximamente
9.0mg / g Cr (VI) y 1041mg / g Cr (III) en la teoría. Hasta donde sabemos, el Cr (III) la capacidad de
eliminación de MF-HT es mayor que la de cualquier otro depurativas se informó anteriormente
evaluadas por la isoterma de Langmuir (ver El cuadro complementario S1 en línea). Dado que el
costo de MF-HT se calculó que era 0,7 centavos por kg de informes anteriores ( Gillman, 2006 ; Kato
et al., 2016 ), MF-HT, un depurativo de bajo costo y alta ef fi cacia, podría ser una herramienta fuerte
para las contramedidas para la contaminación y los riesgos de salud ambientales causados ​por las
aguas residuales de las curtidurías. Puesto que el agua del canal contaminado-Cr en Hazaribagh en
realidad podría ser remediada por MF-HT, proponemos que sea MF-HT
 M. Yoshinaga et al. / Chemosphere 201 (2018) 667 mi 675 673

Fig. 6. Capacidad de MF-HT para la adsorción de cromo. ( UNA mi D) los datos de equilibrio (A, C) y las isotermas de Langmuir (B, D) para la adsorción mediada por MF-HT de Cr (VI) (A, B) y Cr (III) (C,
D) se presentan. do mi y q mi son la concentración de cromo en solución en el equilibrio y la cantidad de cromo absorbida por MF-HT en el equilibrio, respectivamente. (E, F) Los niveles de cromo de cada muestra (E) y la media ± sd (n ¼ 10) (F) en
agua canal en Hazaribagh con (carril 2 en E y F) o sin (carril 1 en E y F) el tratamiento con 1% en peso de MFHT para 1-min de incubación. ** signi fi cativamente diferente del control (** p < 0,01) como se analizó mediante la prueba de
Mann-Whitney T de prueba (F).

instalado en las fuentes de contaminación de cromo (curtidurías, en este caso). Anticipamos que
MF-HT se aplicará después del proceso de curtido en las curtidurías en un futuro próximo. Por otra
parte, se ha demostrado en nuestros estudios anteriores que MF-HT se pudo eliminar pentavalente y
trivalente As, Ba, hierro (Fe) y uranio (U) fromwell agua en las zonas rurales de Bangladesh, Vietnam
y Afganistán ( Kato et al., 2016 ,
2013 ; Kumasaka et al., 2013 ). Por lo tanto, MF-HT se puede utilizar para la eliminación de elementos
tóxicos en diversos países, así como las zonas rurales y urbanos de Bangladesh.
Cr (VI) se incrementa en presencia de Cr (III), lo que sugiere la importancia de la eliminación de Cr
(III) además de Cr (VI) a partir de agua. Nuestro estudio de ingeniería ambiental fi finalmente mostró
que MFHT, un bajo costo y alta-ef fi cacia depurativo, se puede utilizar para la eliminación tanto de Cr
(VI) y Cr (III). Por lo tanto, nuestro estudio integral ha proporcionado una contramedida de realización
de la contaminación Cr en canal y el agua del río en la ciudad de Dhaka, Bangladesh. Más
importante aún, nuestro estudio sugiere un EF fi solución ciente para hacer frente a la contaminación
del medio ambiente en todo el mundo Cr causado por los desechos de curtiembres.

5. Conclusiones

Nuestra vigilancia del medio ambiente mostró 38 metro g / L Cr (VI) y 88697 metro g / L Cr (III)
en agua de Buriganga río y los canales que contienen las aguas residuales de las curtidurías en Estafa Florida ictos de interés

Dhaka City, Bangladesh. Nuestro estudio de la biología molecular mostró entonces que la
carcinogenicidad de Los autores declaran que no tienen ni aire Florida icto de intereses.
674 M. Yoshinaga et al. / Chemosphere 201 (2018) 667 mi 675
Expresiones de gratitud
Este estudio fue apoyado en parte por subvenciones-en-Ayudas a la Ciencia fi c Investigación (A)
(15H01743 y 15H02588), (B) (17KT0033) y (C) (16K11177, 16K08440, 16K08343 y 17K09156),
Grant-in-Aid para impugnar investigación exploratoria (26670525), Grant-in-Aid para científica fi c
investigaciones de sectores innovadores (16H01639 y 24108002) y la subvención-en-Ayudas a la
Investigación Actividad de puesta en marcha (15H06274) del Ministerio de Educación, Cultura,
Deportes, Ciencia y Tecnología, el Mitsui & Co., Ltd. Fondo para el Medio Ambiente (R13-0014),
Fundación del Centro de Medicina Avanzada e Investigación Clínica del Hospital de la Universidad
de Nagoya, la Fundación Mitsubishi (27310), Ichihara Fundación Internacional de Becas (196), Kenko
Kagaku Zaidan (Fundación Ciencias de la Salud ), Fundación de Aichi Promoción de la Salud,
Fundación Ambiental AEON, Fundación médica Nagono, Grant de Proyectos de Investigación
Ambiental de la Fundación Sumitomo (163.119) y la Fundación de Investigación de Ciencias de sal.
Apéndice A. Los datos complementarios
Los datos suplementarios relacionados con este artículo se pueden encontrar en
https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.2018.03.026 .
referencias
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