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RESUMEN
Las lagunas de estabilización son sistemas de tratamiento de efluentes que emplean microorganismos
especializados para la depuración de los residuos. Uno de los problemas de manejo que presenta este tipo de
residuos en las plantas extractoras de aceite de palma es la alta carga de aceites y grasas residuales
(aproximadamente 8.750 mg/.). La remoción de estas grasas puede realizarse mediante la preparación de un
cultivo biológico lipolitico, el cual tome las grasas presentes en el residuo, las metabolice y permita aprovechar
los nutrientes, minerales, carbohidratos y proteínas. En este estudio, realizado en la Plantación Palmar del Oriente
(Villanueva, Casanare), se aislaron cepas nativas con actividad lipolítica de cada una de las lagunas de estabilización
1 A (14,8%); 1 B (24,07%); 2 (27,77%); 3 (12,96%); y 4 (20,37%). De estas cepas se seleccionaron seis, las cuales
presentaron mayor actividad, tres pertenecientes al género Pseudomonas, una al género Enterobacter, otra al
género Bacillus y otra al género Staphylococcus . Con estas cepas se preparó un inoculo y se realizaron pruebas
en campo evaluando la remoción de grasas y aceite a partir de 8 tratamientos diferentes en volúmenes de 60 y
2 litros, incluyendo un tratamiento control. Simultáneamente se evaluó la degradación del aceite bajo condiciones
controladas en un reactor de 5 litros, el cual se mantuvo en aireación constante; a todos estos ensayos se les
realizaron mediciones de pH , temperatura y porcentaje de aceite y grasas (mg/l); con respecto a este último
parámetro se analizó el contenido inicial (tratamiento control) a los 8, 15 y 30 días durante un período de un
mes. El inoculo mixto de bacterias logran remover, como máximo, el 40% del aceite en el ensayo con canecas de
60 litros en un tiempo de 15 días a una temperatura de 33°C y pH de 7,0 ± 0,2; y un 20% de remoción de aceite
se obtuvo con el ensayo en un reactor de 5 litros (bajo condiciones controladas) .
SUMMARY
Stabilization ponds are biological wastemater treatment systems, in which specially adapted microorganisms
are essential. In palm oil mills, one of the most important problems associated with stabilization ponds is the
high contení in residual oils and lipids (aproximately 8.750 mg/l). The removal of lipids and oils using a lipolytical
bacteriological culture would generate a liquid with enough nutrients (minerals, carbohydrates and proteins)
that could have other end uses, such as soil fertilization. This study was carry out at Palmar del Oriente (Villanueva,
Casanare). Several native strains with lipolytical activity were isolated from the stabilization ponds 1 A (14.8 %);
1 B (24.07 %); 2 (27.77 %); 3 (12.96 %) and 4 (20.37 %). Among them six, belonging to the genera: Pseudomonas
1 Profesores. Depto. de Microbiología, Facultad de Ciencias, Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá, D.C., Colombia.
2 Estudiantes. Depto. de Microbiología, Facultad de Ciencias, Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá, D.C., Colom-
bia.
, Enterobacter, Bacillus and Staphylococcus, were selected based on their greater lipolytic activity. Afterwards,
amixed culture with these strains was prepared and tests were conducted in laboratory and on field, assesing
lipid removal in 8 different treatments in 2 and 60 Its, including a control treatment. At the same time lipid
degradation was assesed under strictly controlled conditions, in a 5 liter reactor, with constant aireation; pH,
temperature, and lipid content (mg/l), were measured in all assays. Lipid content was measured at days 0, 8, 15
and 30. The higher percentage of oll removal in the assay rehearsal with 60 Its was 40% in 15 days at 33°C and
pH of 7.0 ± 0.2. A 20% removal of oil was obtained with the assay in a reactor of 5 Its (under controlled condi-
tions).
Palabras claves: Aceite de palma. Aguas residuales. Lagunas de estabilización. Tratamiento de aguas residuales,
Bacterias lipolíticas, Biorremediación, Pseudomonas sp., Enterobacter sp., Bacillus sp.
INTRODUCCIÓN
El prensado de la masa de fruta se realiza por Los problemas de manejo de este t i p o de residuos
medio de una prensa de t o r n i l l o que funciona radican en la elevada temperatura, pH bajo y alta
continuamente. Los pasos subsiguientes son el carga de sólidos suspendidos y volátiles, grasas y
desarenado, la decantación, la separación de aceites residuales, siendo su composición muy
sólidos residuales, tales como el agua y el rema- constante, lo cual p e r m i t i r í a un t r a t a m i e n t o
nente de aceite . definido como es la remoción aeróbica del ma-
terial graso presente en estos residuos, después
La descarga de aceite obtenida se transporta a de pasar por un t r a t a m i e n t o anaeróbico que
un secador al vacío, y el aceite seco se bombea a remueva la materia orgánica; esto a partir de un
través de la unidad de enfriamiento al tanque cultivo biológico lipolítico aislado del agua re-
de almacenamiento (Dupjohann 1994). sidual, el cual tome las grasas allí presentes, las
m e t a b o l i c e y p e r m i t a a p r o v e c h a r el a l t o
En el proceso de extracción de aceite de palma contenido de materia nitrogenada, minerales y
existen puntos de producción de aguas residua- p r o t e í n a s allí c o n t e n i d a s en procesos de
les, tales como: aguas lodosas provenientes de fertilización agrícola.
la clarificación, los condensados de esterilización
y los efluentes de los hidrociclones.
MATERIALES Y MÉTODOS
Todos estos e f l u e n t e s r e c i b e n d i f e r e n t e s
tratamientos, de los cuales el más importante es Las muestras de aguas residuales para este
en las lagunas de estabilización (García et al. t r a b a j o se o b t u v i e r o n de las l a g u n a s de
1995). Sin embargo, la falta de un diseño apro- estabilización 1 A, 1 B, 2, 3 y 4 de la planta
piado, el desconocimiento de los procesos de extractora de Palmar del Oriente. Las muestras
degradación y el complejo manejo de éstos, han se t r a n s p o r t a r o n en frascos de v i d r i o y se
hecho que en la mayoría de los casos los sistemas mantuvieron refrigeradas hasta el momento de
se saturen rápidamente y no cumplan con los procesarlas. Posteriormente se sembraron en
objetivos deseados. Hace aproximadamente tres medios de cultivo no selectivos, a partir de los
años se p l a n t e ó la necesidad de m e j o r a r el cuales se recuperaron 55 cepas.
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Evaluación de la capacidad degradadora de aceite por bacterías lipoliticas en el lodo residual de la extracción de aceite de palma
La siembra se realizó por punción, con el f i n de Esto se realizó en un erlenmeyer de 5 litros con
poder medir más fácilmente el diámetro de los desprendimiento lateral en la base y con airea-
halos formados por éstas en el medio. ción constante, a una temperatura de 37°C.
Paralelo al ensayo a n t e r i o r , en 2 litros del agua La población bacteriana fue más alta en la la-
residual sin esterilizar se aplicaron los mismos guna 2, con un 27,77%, comparada con las lagu-
tratamientos, manteniéndolos a una nas 1 A y 1B con un 14,8 y 24,07%, respec-
temperatura de 37°C durante 1 mes con aireación tivamente. Esto se debe a que estas lagunas son
(bomba aireadora) permanente. a n a e r o b i a s , y por lo t a n t o la m e t o d o l o g í a
aerobia utilizada no permitió su recuperación.
Se m i d i e r o n los m i s m o s p a r á m e t r o s de La laguna 2 presenta un pH 7,2, la temperatura
temperatura, pH y recuentos microbiológicos en y los n u t r i e n t e s n e c e s a r i o s p a r a q u e los
agar Tributirina, así como el contenido de grasas microorganismos aerobios se desarrollen allí.
y aceites a los 15 y 30, días con previo análisis Además, el contenido de grasas y aceites que
del contenido inicial de aceite. presenta no es tan alto en las dos primeras lagu-
nas (aproximadamente un promedio de 14.385
Los modelos estadísticos usados para el ensayo mg/l) ni tan bajo como en las últimas (trazas de
del r e a c t o r de 5 l i t r o s f u e r o n K o l m a g o r o v aceite).
Smirnov, un análisis de varianza de una sola vía
y una prueba a posteriori de Tukey. En las lagunas 3 y 4 se r e c u p e r a r o n menos
m i c r o o r g a n i s m o s p o s i b l e m e n t e p o r el b a j o
En el ensayo con canecas de 60 litros, los datos contenido de nutrientes que éstas presentan y
se analizaron mediante la prueba de Kruskall- el alto pH en el que se encuentran.
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Evaluación de la capacidad degradadora de aceite por bacterías lipoliticas en el lodo residual de la extracción de aceite de palma
Muchos microorganismos encontrados podrían ejemplo, Staphylococcus sp. (Innes, 1956), Clos-
pertenecer a la microflora del suelo que rodea tridios (Willis, 1960), Pseudomonas sp., flavo-
las lagunas de oxidación (García, Comunicación bacterias marinas (Hayes 1963) y otros.
personal).
Como sustancia reaccionante, este m e d i o de
Las características morfológicas de las colonias c u l t i v o contiene t r i b u t i r i n a , a p a r t i r de cuya
que crecieron son de color cremoso, con bordes degradación por acción de lipasas extracelulares
irregulares y elevadas; al microscopio se observan se producen halos de aclaramiento alrededor de
bacilos Gram negativos y Gram positivos espo- las colonias de microorganismos lipolíticos, en
rulados. contraste con el resto del medio de cultivo que
permanece t u r b i o (Merck 1994).
De las cepas que se lograron aislar sobresale una
con la característica especial de producir un Pruebas de antagonismo
pigmento verde amarillento difusible en el medio,
característica particular del género Pseudomonas. A partir de las pruebas realizadas no se encontró
antagonismo entre las seis cepas evaluadas, por
Este p i g m e n t o es muy i m p o r t a n t e , ya que le lo que todas se usaron para conformar un inóculo
c o n f i e r e a la bacteria la p r o p i e d a d de per- mixto sin contrarrestar su actividad y crecimiento
manecer por largo tiempo en el campo (Zinsser
1994) y esto ayuda a cumplir con los objetivos Curva de crecimiento
d e s e a d o s ; a d e m á s , este p i g m e n t o , s e g ú n
Neilands (1984), sirve como agente transportador Esto se realizó con el f i n de conocer el momento
de hierro , actúa como fitotoxina u hormona de en el cual los microorganismos alcanzaban su fase
crecimiento para las plantas según lo reportado máxima de multiplicación (Meyer et al. 1985) y
por Gross y Cody (1985); así como también tiene así poder aplicarlos a un reactor, inoculando cada
la propiedad de actuar como agente antibiótico. vez que se cumple el t i e m p o de la fase loga-
rítmica equivalente al tiempo de retención en las
A partir del último tanque de recuperación de lagunas de oxidación.
aceite (trampa de grasas) no se l o g r ó aislar
n i n g ú n t i p o de microorganismo debido a sus La cepa No. 2 alcanza rápidamente su fase loga-
c a r a c t e r í s t i c a s de e l e v a d a t e m p e r a t u r a , y rítmica a las 24 horas, mientras la cepa No. 7 la
posiblemente por no encontrarse en contacto alcanza entre las 48 y 72 horas. La cepa No. 3
con la microflora del suelo. alcanza su fase logarítmica a las 115 horas. Las
cepas No. 1, 1A y 1B tienen un comportamiento,
Siembra en agar tributirina parecido puesto que alcanzan su fase máxima de
multiplicación a las 96 horas (Fig. 1).
De las 55 cepas sembradas en agar Tributirina se
escogieron 6, las cuales presentaron un halo de
lipólisis de diámetro mayor a 2,5 cm (Novo 1982).
El crecimiento de los microorganismos en agar
Tributirina se evidencia por la formación de un
halo claro de contraste con el resto del medio de
cultivo.
Con estos datos, se decidió tomar 5 días, como el que está unida a glóbulos de grasa presente en
tiempo promedio en el que se podía alcanzar la los lodos livianos, la degradan , los compuestos
fase l o g a r í t m i c a el i n ó c u l o m i x t o , y en ese grasos son liberados y por lo t a n t o el contenido
m o m e n t o realizar la segunda a p l i c a c i ó n de de grasas aumenta con el t i e m p o (Rodríguez
microorganismos. 1996).
Lo a n t e r i o r p u e d e e x p l i c a r s e a p a r t i r de
investigaciones realizadas por la compañía EXRO
en 1990, en las cuales evalúan la actividad que
realizan las bacterias , al degradar inicialmente
las grasas libres que se encuentran en los lodos
livianos, y cuando estos componentes se agotan,
Figura 2 Degradación del contenido de aceite a los 0, 8, 15 y
los microorganismos t o m a n la materia orgánica
30 días en reactor de 5 litros.
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Evaluación de la capacidad degradadora de aceite por bacterias lipoiilicas en el lodo residual de la extracción de aceite de palma
Figura 3 Comparación del contenido de aceite y grasas entre Figura 4 Comparación del contenido de aceite y grasas entre
grupos de días en ensayo con reactor de 5 litros.
los 15 y 30 días en ensayo canecas de 60 litros.
A B
Figura 3 Comparación del contenido de aceite y grasas entre
grupos de días en ensayo con reactor de 5 litros.
Los resultados obtenidos, incluidos los cuatro que
contienen inoculo bacteriano no generaron
diferencias significativas e n t r e t r a t a m i e n t o s
(Anava Kruskall-Wallis: F=0,27 y p = 0 , 8 4 ) , esto
q u i e r e decir q u e s e p u e d e a p l i c a r c u a l q u i e r
t r a t a m i e n t o que contenga el inoculo bacteriano.
Cabe a n o t a r que al no ser necesario el e m p l e o
de sustancias, como los tensoactivos, los costos
en el t r a t a m i e n t o de e f l u e n t e s en las plantas
extractoras no se i n c r e m e n t a n . El c o n t e n i d o de
aceite y grasas en mg/l en los ocho t r a t a m i e n t o s
evaluados se observa en la Tabla 1. Figura 5. Comparación del contenido de aceite y grasas entre
De igual f o r m a se aplicó para d e t e r m i n a r T1 y T2 a los 15 días en ensayo con canecas de 60
litros.
diferencias e n t r e los días (F = 4 8 , 8 6 y p=0,000) y
se realizó una prueba a posteriori de Tukey con
un nivel de significancia del 0,05, con la q u e se los 15 días con una prueba de Chi Cuadrado, la
f o r m a r o n dos grupos h o m o g é n e o s : G r u p o A: cual mostró que existen diferencias e n t r e T1 (con-
Datos a los 15 días; Grupo B: Datos a los 30 días; t r o l ) y T2 (agua residual + inóculo bacteriano),
d e b i d o a una disminución g r a d u a l de aceite a con una h e t e r o g e n e i d a d o i n d e p e n d e n c i a de
los 15 días y un a u m e n t o considerable a los 30 12,33, p = 0 , 0 0 0 4 y Grados de I i b e r t a d = 1 . y 7 6 t t .
días (Fig. 4).
Partiendo de los resultados anteriores se decidió Datos p r o m e d i o de las dos repeticiones
analizar T1 y T2 (Fig. 5), d e b i d o a que T1 es el
El T 2 sólo contiene el inóculo bacteriano, y esto
control y T2 es el t r a t a m i e n t o e c o n ó m i c a m e n t e
rentable compuesto únicamente por el inóculo indica la capacidad para d e g r a d a r sustratos gra-
bacteriano. Se analizaron las dos repeticiones a sos por p a r t e de los microorganismos sin que sea
necesaria la presencia
Tabla. 1. Contenido de aceite y grasas en los ocho tratamientos evaluados en ensayo con canecas de nutrientes y tenso-
de 60 litros. activo. Estudios simila-
res r e a l i z a d o s en un
Proyecto de Efluentes
e n C e n i p a l m a (1994)
s u s t e n t a n este c o m -
p o r t a m i e n t o d e los
microorganismos.
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Evaluación de la capacidad degradadora de aceite por bacterias lipoliticas en el lodo residual de la extracción de aceite de palma
El pH d e l s u s t r a t o al a p l i c a r las b a c t e r i a s
lipolíticas presenta un incremento exponencial
como consecuencia de la acción de las bacterias
lipolíticas.
Figura 7 Comparación del contenido de aceite y grasas entre
los ocho tratamientos del ensayo con galones de 2
litros. La evaluación de grasas y aceites realizadas a los
15 y 30 días puede corresponder a una etapa
El pH presentó un a u m e n t o con respecto al intermedia de catabolismo de los ácidos grados,
t i e m p o , y la temperatura se mantuvo constante lo cual no correspondería a una medición real
durante t o d o el ensayo. de la capacidad degradadora de las bacterias
aisladas ya que la bioquímica de la reacción
Los recuentos microbiológicos realizados a los podría utilizar mayor tiempo.
o c h o t r a t a m i e n t o s después d e l a p r i m e r a
inoculación oscilaron entre 47x10 6 y 67x10 8 UFC7
ml, indicando que una vez se cumple la fase BIBLIOGRAFÍA
máxima de multiplicación y empiezan a disminuir
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