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1 Pubmet - Exploring The Influence of Culture Conditions On Kefir's Anticancer Properties..en - Es-1
1 Pubmet - Exploring The Influence of Culture Conditions On Kefir's Anticancer Properties..en - Es-1
101: 1-7
https://doi.org/10.3168/jds.2017-13539
© American Dairy Science Association ®, 2018.
Explorar la influencia de las condiciones de cultivo en las propiedades contra el cáncer de kéfir
ABSTRACTO Ghoneum, 2014). Por lo tanto, existe un gran interés actual en el desarrollo
de nuevas terapias contra el cáncer. granos de kéfir se componen de una
El cáncer es un problema de salud importante en muchas partes del mundo. mezcla simbiótica compleja de bacterias y levaduras (Fulda, 2004; Fulda y
Los tratamientos convencionales contra el cáncer son dolorosos, caros e Debatin, 2006; Gao et al, 2013).. El kéfir es un pro- ducto lácteo producido
inseguros. Por lo tanto, la demanda es cada vez mayor para los tratamientos por la fermentación de la leche con granos de kéfir (Liu et al., 2002,. De
contra el cáncer preferentemente en forma de alimentos funcionales o Moreno de LeBlanc et al, 2007; Ghoneum, 2014). Kéfir exhibe benefi- cios
suplementos nutricionales. Kéfir, un producto tradicional de productos lácteos de de salud significativos, incluyendo propiedades contra el cáncer
leche fermentada, tiene importantes propiedades anti-mutagénica y pronunciadas (Liu et al., 2002, Chen et al., 2006;. De Moreno de LeBlanc
antitumorales. Esta investigación se refiere a la hipótesis de que las et al, 2007). Los principales productos de fermentación kefir son ácido
propiedades contra el cáncer de kéfir se ven afectados por las condiciones de láctico, etanol, CO 2, y muchos com- puestos aromáticos (Farnworth, 2005;.
fermentación. Inicialmente, extractos de kéfir preparados bajo condiciones Guzel-Seydim et al, 2011;. Altay et al, 2013). Al igual que en el yogur, el
estándar se escrutaron frente a líneas celulares de cáncer de 7 utilizando el contenido de lactosa se reduce en kéfir; sin embargo, kefir es rica en AA y
colorante de tetrazolio 3- (4,5-dimethylthiazol- 2-il) -2,5-difeniltetrazolio as- péptidos libre (Wang et al, 2008;. Ahmed et al, 2013).. Las características
colorimétricos dicen. El cáncer de colon y células de leucemia mielógena beneficiosas para la salud de kéfir se atribuyen a proteínas, vitaminas,
crónica se encontró que eran más susceptibles a los extractos de kéfir. antioxidantes, minerales, y ciertos compuestos biogénicos presentes en
Posteriormente, un diseño factorial se implementó para AS sess los efectos de 3 los granos (Farnworth, 2003; Ahmed et al, 2013;. De Oliveira Leite et al,
tiempos de fermentación (24, 48, y 72 2013).. Tradicionalmente, bebida kéfir se prepara añadiendo granos de
kéfir (2-10% peso / volumen) a la leche pasteurizada. Después de un
período de fermentación que dura más de aproximadamente 24 h (Halle et
h), 3 proporciones de kéfir-a la leche (2, 5, y 10% peso / vol), y 3 temperaturas de al., 1994) y en condiciones mesófilas (Motaghi et al., 1997), los granos se
fermentación (4, 25, y 40 ° C) en propiedades contra el cáncer de kéfir. eliminan por ción filtra-. El filtrado resultante está lista para el consumo.
Sorprendentemente, la exploración de las condiciones de fermentación permitió a Los granos pueden ser reutilizados en la fermentación posterior (Halle et
los anticancerosos propie- dades de kéfir a ser mejorados por 5 a 8 veces frente a al., 1994).
líneas celulares susceptibles. En general, estos resultados demuestran la
posibilidad de optimizar las propiedades contra el cáncer de kéfir como un
alimento funcional en la terapia del cáncer.
1
2 HATMAL ET AL.
Tabla 1. La concentración del extracto que inhibe el crecimiento celular en un 50% (IC 50) valores medio de glucosa con L-glutamina (Capricornio, Ebsdor- fergrund,
(mg / ml) de extractos de kéfir preparados bajo condiciones estándar (24 h, 5% en peso / vol, y
Alemania), medio F12 de DMEM Hams con L-glutamina (Capricornio),
a 25 ° C) y clorhidrato de doxorrubicina (control positivo) frente a diferentes líneas celulares de
cáncer medio RPMI 1640 con L-glutamina (Capricornio), Matrix tejido de 96
pocillos cul- tura Tratada placas ( Sigma-Aldrich, St. Louis, MO),
extracto de kéfir doxorrubicina
L-glutamina (Capricornio), jeringa estéril de poro del filtro
IC 50 IC 50
Células cancerígenas 1 (Mg / ml) Dakota del Sur (Mg / ml) Dakota del Sur 0,22 m (Millipore, Billerica, MA), doxorrubicina HCl (Sigma-Aldrich), PBS
K562 11.36 1,338 2,84 × 10 -4 0,019
(Capricornio), el colorante de tetrazolio 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il)
HCT116 17.39 2,157 0,21 × 10 -4 0,002 -2,5-difeniltetrazolio ( MTT) kit (Promega, Madison, WI), y dimetilsulfóxido
SKOV3 26.5 5.429 2,78 × 10 -4 0,085 (Gibco, Waltham, MA). Las líneas celulares ensayadas y sus números
MCF-7 43.07 4.343 0,42 × 10 -4 0,010
PANC1 42.39 3.740 2,43 × 10 -4 0,039
de ATCC (entre paréntesis) son los siguientes: HCT116 (CCL247),
A549 35.27 0,919 0,61 × 10 -4 0,006 MCF-7 (HTB22), K562 (CCL243), A549 (CCL185), PANC1 (CRL1469),
PC3 32.74 3,426 4.17 × 10 -4 0,144 PC3 (CRL1435), y SKOV3 (HTB77).
Los fibroblastos (control) 72.38 4.156 29.69 × 10 -3 12.380
1 K562 = leucemia mielógena crónica; HCT116 = cáncer de colon; SKOV3 = cáncer de
ovario; MCF-7 = cáncer de mama; PANC1 cáncer = páncreas; A549 carcinoma = pulmón;
PC3 = cáncer de próstata.
Kefir producción y preparación de kéfir Extractos
Curiosamente, a pesar de extensos estudios sobre las propiedades antitu- mor de granos de kéfir se cultivaron en la leche de vaca con toda la grasa pasteurizada (200
kéfir, la literatura carece de cualquier intento de explorar los efectos de las ml, compuesta de 3,1 g de grasa, 3,1 g de proteínas,
condiciones de fermentación en propiedades contra el cáncer de kéfir. En 4,7 g de hidratos de carbono, a 100 mg de calcio, y 80 UI de vitamina D 3, Al-Marai
consecuencia, la intensidad de búsqueda re refiere a la hipótesis de que las Dairy Company, Jordan) en recipientes de vidrio con tapón de rosca sin
propiedades contra el cáncer de kéfir se ven influidas significativamente por las agitación, y a diferentes relaciones de kéfir de grano-a la leche (2, 5, y 10%
condiciones de fermentación. peso / vol), tiempos de fermentación (24, 48, y 72 h ), y temperaturas fermen-
tación (4, 25, y 40 ° C), como en la Tabla 2. después, los granos de kéfir se
El presente estudio se inició mediante la exploración de las actividades de eliminaron por filtración US- ing colador de plástico, a continuación, los
extractos se centrifugaron a 3.000 × gramo durante 20 min a 4 ° C. Los ciones
lucha contra el cáncer de kéfir extractos contra el cáncer de mama ( MCF-7), leucemia
mielógena crónica ( K562), fracciones de sobrenadante se liofilizaron durante la noche a (Sistema seco
carcinoma de pulmón ( A549), cáncer de páncreas ( PANC1), Freeze, Telstar, España) después se almacenaron a -80 ° C -50 ° C. Antes de
Cancer de prostata ( PC3), cáncer de ovarios ( SKOV3), y el cáncer colorrectalprobar contra las líneas celulares, las muestras de sobrenadante liofilizados se
( HCT116), como en la Tabla 1. Posteriormente, se implementó diseño diluyeron en serie en medio de cultivo correspondiente (ver antiproliferación de
factorial usando 3 factores, a saber, los tiempos de fermentación (24, 48, y ensayo a continuación), se ajustó a pH 7,0 utilizando NH 4 OH (10 METRO, Sigma-Aldrich),
diferentes concentraciones de kéfir liofilizado (0.39, 0.78, Al final del tiempo de incubación, las células se lavaron con PBS, medio
1,56, 3,125, 12,5, 25, 50, y 100 mg / ml) preparado en condiciones estándar fresco (100 l), y la solución de MTT (proporcionado en el CellTiter 96 Cell
(es decir, relación de kéfir-a la leche 5% peso / volumen, tiempo de kit Ensayo de proliferación, 10 l) se añadió a las células y se incubaron
fermentación de 24 h, y la fermentación tem- peratura 25 ° C). Medio solo se adicionalmente durante 4 h a 37 ° C en 5% de CO 2 atmós- fera
utilizó como control negativo. Posteriormente, se incubaron las células humidificado usando la incubadora Nuaire. Finalmente, se añadió
tratadas durante 72 h a 37 ° C en 5% de CO 2 atmósfera humidificada usando sulfóxido de dimetilo (100! L) a la mezcla de reacción y se incubó durante
una incubadora Nuaire. Los experimentos se repitieron en los duplicados. la noche bajo condiciones de oscuridad a ES- seguro disolución completa
de los cristales de formazán. La concentración del extracto que inhibe el
crecimiento celular en un 50% ( IC 50) Se determinaron los valores de la
En la exploración posterior de las condiciones de kéfir de fermentación concentración del extracto kefir frente a la curva del porcentaje de
(Tabla 2), HCT116 susceptible y células cancerosas K562 (ver sección inhibición calculado por el software Prism (GraphPad Soft- ware, La Jolla,
Resultados) fueron sembradas en placas de 96 pocillos a densidades celulares CA).
de 5 × 10 3 y 3,5 × 10 4, respectivamente. Después de la incubación durante 24 h
a 37 ° C en 5% de CO 2 atmósfera humidificada usando una tor incubación
Nuaire, las células se trataron con diferentes concentraciones de extractos de
kéfir liofilizadas (0,79, 1,56, 3,125, 6,25, 12,5, Análisis estadístico
Se utilizó 25, 50, 100, y 180 mg / ml) preparado en condiciones de la Todas las pruebas estadísticas se realizaron utilizando GraphPad Prism
fermentación como en la Tabla 2. medio solo como control negativo. 5.0 para Windows (GraphPad Software). Las diferencias Statistical Sta entre
Posteriormente, se incubaron las células tratadas durante 72 h a 37 ° C en IC 50 de extractos de kéfir contra líneas HCT116 y células K562 en la Tabla 2 se
5% de CO 2 atmós- fera humidificado usando Nuaire incubadora. Los determinaron por ANOVA de 1 vía prueba de comparación múltiple en un
experimentos se repitieron en los duplicados. significado tical estadís- de P < 0.05.
Tabla 2. Diferentes combinaciones de los factores de fermentación utilizados en la preparación de extractos de kéfir y la concentración anticáncer correspondiente
del extracto que inhibe el crecimiento celular en un 50% (IC 50) valores
2 ND = no determinado debido a error de medición significativo. §Indicates estadísticamente significativa IC anticáncer superiores 50 valores
Figura 1. efectos antiproliferativos de extracto de kéfir preparado convencionalmente (preparado más de 24 h, y bajo 25 ° C, usando 5% peso / volumen kefir-a-leche ratio) contra la leucemia mielógena
crónica (K562) y cáncer de colon (HCT116) líneas celulares de cáncer más de una 72-h tiempo de exposición como se determinó utilizando el colorante de tetrazolio 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) ensayo
-2,5-difeniltetrazolio. (A) la inhibición de la dosis contra la línea celular K562, y (B) dosis curva de inhibición contra HCT116. Los experimentos se repitieron por triplicado, y las barras de error representan
desviación estándar de mediciones.
significativamente diferentes extractos de kéfir contra las células K562 y ción con factor de actividad contra el cáncer, excepto el tiempo de fermentación como
HCT116 ( P < 0,05), respectivamente. Claramente, a partir de los 2 cifras, es se mencionó anteriormente. Curiosamente, algunas condiciones de la fermentación
posible categorizar extractos de kéfir en 3 niveles (es decir, potente, intermedio, produjeron propiedades citotóxicas significativa contra 1 de sólo las líneas celulares de
y mal potente) en base a sus perfiles anticancerígenos correspondientes. SIN 2 (por ejemplo, los extractos 1 y 10 en la Tabla 2, que muestran actividad citotóxica
EMBARGO, es bastante difícil correlacionar cualquier fermentación sola contra HCT116 solamente).
Figura 2. Una vía de presentación ANOVA de extractos de kéfir (n = 24) que exhiben significativamente diferente concentración del extracto que IN- hibits crecimiento celular en un 50% (IC 50) valores
contra células de leucemia mielógena crónica (K562) ( P < 0,05). números Extraer son como en la Tabla 2. Las barras de error representan la desviación estándar de la IC 50 mediciones, y las barras del
medio representan las medias correspondientes.
Figura 3. Una vía de presentación ANOVA de extractos de kéfir (n = 16) que presentan una concentración significativamente diferente del extracto que inhibe el crecimiento celular en un 50% (IC 50) valores
contra las células de cáncer de colon (HCT116) ( P < 0,05). números Extraer son como en la Tabla 2. Las barras de error representan la desviación estándar de la IC 50 mediciones, y las barras del medio
representan las medias correspondientes.
metabolitos tivas (por ejemplo, de polisacáridos kefiran) más de 24 a 48 h que se pero no normales las células epiteliales mamarias. J. Med. Alimentos 10: 416-
422.
descomponen en los tiempos de fermentación más largos (72 h). La etapa
Chen, M., J. Liu, J. Sheu, C. Lin, y C. Chuang. 2006. Estudio sobre la piel
posterior es probablemente debido a biochemi- consumo de cal (por colonias de cuidar propiedades del kéfir de suero de leche. Asia-australas. J. Anim. Sci. 19: 905-908.
kéfir) en lugar de sencilla degradación química ya que esta tendencia bioactividad
de Moreno de LeBlanc, A., C. Matar, E. Farnworth, y G. Perdigon.
se ve particularmente a 4 ° C. No hace falta decir que las bajas temperaturas
2006. Estudio de las citoquinas implicadas en la prevención de un cáncer de mama
retrasan significativamente la degradación de los química simple dejando el experimental murina por kéfir. Citoquinas 34: 1-8. de Moreno de LeBlanc, A., C. Matar, E.
consumo bioquímica como la única razón para la pérdida observada de la Farnworth, y G. Perdigón.
2007. Estudio de las células inmunes que intervienen en el efecto antitumoral de kéfir en
bioactividad.
un modelo murino de cáncer de mama. J. Dairy Sci. 90: 1920-1928. de Oliveira Leite, A., M.
Miguel, R. Peixoto, A. Rosado, J. Silva,
Estos resultados están de acuerdo con los resultados anteriores que y V. Paschoalin. 2013. microbiológica, tecnológico y tera- péuticos propiedades de
kéfir: Una bebida probiótica natural. Braz. J. Microbiol. 44: 341-349.
sugería kefir lograrse propiedades sensoriales óptimas después de la
fermentación durante 24 h (Motaghi et al., 1997) y las propiedades Farmer, P., J. Frenk, F. Knaul, L. Shulman, G. Alleyne, L. Armstrong,
antibacterianas mejor después de 24-48 h de fermentación (Abd El Mogheth R. Atun, D. Blayney, L. Chen, R. Feachem, M. Gospodarowicz, J. Gralow, S. Gupta,
A. Langer, J. Lob-Levyt, C. Neal, A. Mbewu,
et al. , 2017). Curiosamente, las variables de fermentación también influyeron D. Mired, P. Piot, KS Reddy, JD Sachs, M. Sarhan, y JR Seffrin. 2010. La expansión de la
selectividades citotóxicos de extractos de kéfir. Por ejemplo, los extractos de atención y control del cáncer en los países de ingresos bajos y medios: Un llamado a la
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CONCLUSIONES Farnworth, ed. CRC Press, Boca Raton, FL. Fulda, S. 2004. Sensibilización de necrosis
tumoral apop- relacionado con el factor
Tosis inductor de apoptosis inducida por ligando por el resveratrol agente
En conclusión, hemos demostrado en esta investigación que el perfil contra el
quimiopreventivo. Cancer Res. 64: 337-346. Fulda, S., y K. Debatin. 2006. extrínseca
cáncer de kéfir se puede mejorar mediante la manipulación de las condiciones de frente a apoptosis intrínseca
fermentación, especialmente en tiempo de fermentación. Sin embargo, ciertas vías en la quimioterapia contra el cáncer. Oncogene 25: 4798 a 4.811. Furukawa, N.,
A. Matsuoka, T. Takahashi, y Y. Yamanaka. 2000.
combinaciones de condiciones de la fermentación produjeron propiedades contra
efecto antimetastásico de los componentes kefir grano en pulmón de Lewis cinoma car- y el
el cáncer significativamente superiores. Creemos que la razón detrás de las melanoma B16 altamente metastásico en ratones. J. Agric. Sci. 45: 62-70.
variaciones observadas en los perfiles contra el cáncer (es decir, en respuesta a
Gao, J., F. Gu, H. Ruan, Q. Chen, J. He, y G. He. 2013. inducción
diferentes condiciones de fermentación), se relaciona con las contribuciones
de la apoptosis de células de cáncer gástrico SGC7901 in vitro por una fracción libre de células
relativas de kéfir de bacterias frente a los componentes fun- gal en respuesta a de kéfir tibetano. En t. J. Dairy 30: 14-18. Ghoneum, M. 2014. efecto apoptótico de un producto
diferentes microambientes de fermentación. Proponemos estudio detallado futuro novedoso kéfir, PFT,
en células de leucemia mieloide resistentes a múltiples fármacos a través de un mecanismo de
para entender las contribuciones relativas de las poblaciones de bacterias /
orificio de perforación. En t. J. Oncol. 44: 830-837. Guzel-Seydim, Z., T. Kok-Tas, A. Greene, y A.
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