COMPARTAMENTALIZACION Y TRANSPORTE DE NEUROTRANSMISORES PEPTIDICOS EN NEURONAS Rebeca E. Franco-Bourland* Introducci6n las neuronas se sintetizan péptidos que son secretados de sus terminales axdnicas en respuesta a algiin estimulo para cumplir la funcién de mediadores qufmicos en la informacion nerviosa. Estos neuropéptidos son biosintetizados en los cuerpos neuronales en forma de precursores de alto peso molecular y llegan a las terminales nerviosas acarreados por un sistema de transporte ax6nico r4pido, en forma de especies biolégicamente activas, de bajo peso molecular y concentradas en vesiculas de secrecién. El procesamiento del precursor que resulta en el péptido activo, ocurre en diversos compartimentos intracelulares, Se inicia en el reticulo endoplasmico rugoso (RER), continéa en forma diferencial a través del aparato de Golgi (AG) y termina en las vesiculas de secrecién. En neuronas activadas, cl material recién sintetizado es descargado de inmediato. Cuando cesa cl estimulo, se inhibe la secrecin y el material permanece almacenado en las ncuronas hasta recibir una nueva sefial de descarga. Biosintesis y compartamentalizacién La biosfntesis de los neuropéptidos encapsuladas secretados de las terminales sindpticas ocurre en polisomas fijos a membrana (RER). Las cadenas nacien- tes de los precursores de estos péptidos de secrecién (asi como de proteinas de membrana 0 de hidrolasas lisosomales (19), poseen "secuencias sefiales” de na- turaleza muy hidrof6bica (6), que aseguran que los polisomas correspondientes * Departamento de Bioquimica. Instituto Nacional de la Nutriciéa Salvador Zubirén, 7Sse anclen a la membrana para que las proteinas nacientes penetren al interior de Ja cisterna del RER, en donde pueden continuar creciendo y se inicie su proceso de maduraci6n, Las proteinas transferidas al interior de organclos intracelulares -matrices mitrocondriales, nucleares y peroxisomales, por ejemplo— 0 que per- manccen en ¢] citosol, son biosintetizados en polisomas libres. Su distribucién intracelular también depende de ciertas secuencias amino terminales transito- Tias que, a diferencia de aquellas sintetizadas en el RER, operan a través de mecanismos de traslocacién post-traduccional (14). Mientras que, las protefnas que permanecen en ¢] citosol, supuestamente carccen de sefiales de distribucion. La traduccién del mensaje de una proteina (0 péptido) de secrecién se inicia en un polisoma inicialmente libre en el citosol (Fig. 1). Al parecer la secuencia sefial en el extremo amino terminal de la protefna nacicnte, interactda con una particula ribonucleoprotéica de reconocimicnto 11S (PRR), compuesta de seis polipéptidos diferentes y de una cadena de ARN 7S (19) que bloquca la sintesis de la cadena naciente, hasta que el conglomerado de ribosoma/ARNnyproteina/PRR interactéa con una protefna de anclaje de la membrana del RER (19), lo que altera de alguna forma la permeabilidad de la membrana y permite una traslocacién vectorial (irreversible) de la cadena naciente, hacia cl interior del lumen det RER. Este proceso no requiere de un potencial cléctrico ni de un gradiente idnico (19). Las protefnas de secrecién y las hidrolasas lisosomales son traslocadas {ntegramente hacia el interior del RER, mientras que la traslocaci6n de las proteinas de membrana se interrumpe al traducirse las “secuencias de alto” que, como las secuencias de sefial son ricas en aminodcidos hidrdfobos (25), Las secuencias de alto, impiden la uraslocacién transmembranal de la proteina, intercal4ndola en la membrana, forma en la que s¢ translada de un compartimento membranal a otro durante su procesamiento hasta integrarse a la membrana de] organelo que le corresponde. El procesamiento cotraduccional de las cadenas nacientes dentro del lumen del RER se inicia con la hidrdlisis del péptido-sefial por accién de una peptidasa especifica (6). Luego son acarreados por fosfatos de dolicol ¢ insertados en la membrana, son transferidos a oligosacéridos complejos (formados por dos residuos de N-acetil-glucosamina, nueve de manosa y tres de glucosa) a los grupos amido de cicrtos residuos de asparaginina, los que gencralmente forman parte de una secuencia X-Thr-Ser. Una vez transferidos, estos oligosacdridos pierden répidamente las tres unidades de glucosa y una de manosa. Ademés, durante esta etapa de su procesamiento, se va conformando la estructura globular de la proteina a través de la formacién de puentes disulfuro, asegurandose asi la naturaleza vectorial de la translocacién (6, 19). Al completarse la secuencia primaria de la proteina (de secrecién o hidrolasa lisosomal), se libera en el interior del RER una cadena polipeptidica parcialmente modificada que es trasferida al AG para continuar ahora su procesamiento post-traduccional. 76Figure 1. Mecanismo de fljaciénde pollsorms u la membrana del retfculo endoplismiko, El proceso de Ajacion 8 membrana de polisomas de proteinas de secrecién, de proteinas de membrana y de hidrolasas lisosomales, involucra: “a” Disponibitidd de una partfcula ribonucleoproteinica de reconocmiento (PRR); “b” Reconocimiento entre la secuencia sefial hidrofdbica en el extremo NHo-terminal de la protefna nacientey la PRR; “ec” Reconocimiento entre la PRR fija a la proteina naciente y un receptor de la membrana que de alguna manera altera la permeabilidad de la membrana; y, “3” Internalizacién del ribosoma en la cisterna del RER y estabilizacién del ribosoma en la membrana a través de receplores espe-ificos. Terminadas las Jecturas de las mensajes y la primera fase del procesamiento de las proteinas de secreciGn o de las hidrolasas lisosomales, Gstas sc desprenden en el interior de la cisterna de! RER (“e"), para iniciar su transporte al AG. Las protefnas de membrana (“f") poseen sefiales de “alto” de naturaleza hidréfoba (“g") que intecrumpen su traslocaci6n, quedando asf integradas a la membrana (“hn”). Modificado de Walter P, R. Gilmore y G. Blobel. “Protein translocation across the endoplasmic reticulum”. Cell 38:5-8, 1984. El AG es un sistema membranal compartamentalizado que alberga un conjunto variado de enzimas que catalizan diversas modificacioncs post- traduccionales y en donde ocurre la clasificacién y ¢] envfo de las protefnas sintetizadas cn los polisomas fijos. La transferencia de estas proteinas del RER al AG ocurre en vesiculas, en las llamadas vesfculas de transicidn, si se trata de pre-proteinas de un PM mayor de 35 000 daltones, altamente glucosilada, o bien, a través de tibulos varicosos que comunican al RER con cl AG, si se trata de pre-proteinas con PM menor de 35 000 daltones, poco glucosilado (17). Los distintos eventos de modificacién quimica post-traduccional que se llevan a cabo en el AG, ocurren en compartimentos especificos segiin la distribucién diferencial en ellos de las enzimas que las catalizan y, de la naturaleza de la proteina misma (6, 14). Asf por ejemplo, la maduracion de 7los oligosac4ridos complejos asociados a la asparagina de las proteinas de secrcci6n o de las de membrana, ocurre en Ja porcién CIS de este organelo, donde existen diversas glucosidasas que remueven miltiples sitios de manosa (Fig. 2). Aquf también los residuos de Ser y Thr son glucosilados por accién de ciertas glucosiltransferasas. Ocurren otras glucosidaciones adicionales en Ja porci6n TRANS del AG. Por lo que toca a las proteinas lisosomales, una vez reconocidas como tales, précticamente no sufren modificaciones post-traduccionales antes de su envio a los lisosomas, a excepcién de la fosforilacién de algunas de sus cadenas de azticares para dar residuos de manosa fosforilada (Man-6P), En el AG también ocurrensulfataciones tanto de residuos de Tyr como de residuos de carbohidratos. Otras protefnas pueden aun incorporar residuos de 4cidos grasos (6). Aunque se desconoce el propdsito exacto de esa diversidad de modifica- ciones, existe evidencia experimental que sugicre que en ¢l AG ciertas secuen- cias especificas de aminodcidos y/o diferentes estados de glucosidacin, de sul- fataciOn o de fosforilacién son las sefiales 0 los marcadores de reconocimiento molecular, Estas scfiales van a dirigir la clasificaci6n y la distribucién de una gran varicdad de proteinas en su paso por este sistema (6, 17). Los marcadores de ciertas proteinas se van a asociar a receptores espccificos en sitios espectficos (porcién CIS o TRANS) de la membrana de Golgi (17) para iniciar la compar- tamentalizaci6n de una subpoblacién de proteinas en vesiculas especificas con destinos también especificos (Fig. 2). Es probable que el receptor con el que interactdan las protefnas, sea a su vez, el marcador de reconocimiento molecu- lar local del destino final de la vesicula recién formada. La identificacién y la distribuciGn de las enzimas lisosomales, por ejemplo, ocurre a través de un pro- ceso de reconocimiento entre residuos de Man-6P y receptores especificos en la membrana del compartimento CIS del AG. Por otra parte, las vesiculas que contienen material que va a ser exportado fuera de la célula (p. ej. neuropépti- dos/neurona), se desprenden de la cara TRANS del AG en forma de vesicu- Jas recubiertas con clatrina (9, 14), Esta se pierde en un momento dado y las vesiculas neuronales resultantes quedan listas para iniciar tal desplazamiento a las terminales de las prolongaciones neuronales en un sistema de transporte axdnico rapido, cuya descarga serd regulada por ligandos ex6genos. En algunos tipos celulares también hay proteinas de secrecién que no estan concentradas en vesiculas. Son secretadas en forma constitutiva. En tales células, la separacién de estas dos clases de proteinas de secrecién ocurren en el AG (6) y probablemente se deba a la ausencia de receptores capaces de atraparlas en las vesiculas. 78Figura 2 Esquenm del npurato de Golgl Se ilustra la organizaciin compartamentalizada de! AG (cisternas CIS, cisternas medianas y cisterna TRANS) que alberga, distribuidas diferencialmente, a las enzimas que catalizan las modificaciones post-traduccionales de las proteinas sintetizadas proteinas a su destino final dentro de la célula (hidrolasas lisosomales), a la membrana plasmética (receptores) 0 bien, fuera de la eétula (protefnas de secreciGn constitutiva “Co regulada “R"), en funcién de un proceso de discriminacién mediado por receptores especificos en la cara intema de la membrana del AG, los cuales son reciclados (#, receptor de hicrolasas lisosomales; 1, receptor de protefnas de secrecién regulada (Science 243; 192- 197, 1989). Las vesiculas que acurrean a Ias hidrolasas lisosomales se desprenden tanto de las cisternas CIS (Cell 36: 295- 307, 1984), como de las cisternas TRANS (J. Histochem. Cytochem. 31: 1-11, 1983). Modificado de Rothman JE. “Organizaciin compartimenta” del aparato de Golgi. dnvestigacién y Ciencia 48-60, 1987.Los dltimos eventos post-traduccionales a los que va a ser sometida una proteina precursora de especies peptidicas activas que seran exportadas fuera de la célula (neuropéptidos/neurona) ocurren en Jas vesiculas de secrecién (7). A diferencia de los procesos couaduccionales y post-traduccionales en el RER y en AG, respectivamente (que ocurren a pH neutro), las modificaciones post- traduccionales que ocurren en las vesiculas de secrecién se realizan a pH 5. Esta acidez del interior de las ves(culas es mantenida gracias al funcionamiento de una bomba de protones en la membrana (7). Las modificaciones que sufre la vesicula incluyen rupturas endoproteoliticas en sitios donde concurren aminodcidos basicos, 0 extraproteoliticos en ¢] extremo carboxiterminal de la protefna. Otros eventos enzimaticos propios de las vesiculas de secrecién incluyen N-acctilaciones y amidaciones de los residuos de glicina. ‘Transporte axénico réipido El tansporte axdnico r4pido (200 mm al dia) de las vesiculas que acarrean protefnas que se van a integrar a la membrana del axGn o bien, de las ves{culas de secrecién a las terminales nerviosas, sucede en un sistema de microtidbulos (MT). En el MT las vesiculas son impulsadas por la energfa generada durante la asociaciOn transitoria de una o varias enzimas con los MT y/o vesiculas transportadoras. En los axones existe también un sistema de transporte ax6nico lento en el que Ja tubulina, espectrina, las proteinas tau y los neurofilamentos son transportados a una velocidad de aproximadamente 1 mm al dia (21). En los pasados diez afics, se han logrado avances muy importantes en el conocimiento de] mecanismo molecular de] transporte axdnico rapido, gracias al estudio por videomicroscopia (1) de este sistema de transporte en ¢l axoplasma aislado del axn gigante de calamar (4, 5, 13). Morris y Lasek (13) establecieron Jas condiciones 6ptimas para mantener e] axoplasma aislado (un cilindro gelatinoso) en las mejores condiciones posibles para asegurar su integridad estructural y metab6lica. Brady et al. (4) encontraron las condiciones éptimas para mantener el transporte axdnico rapido en estas preparaciones por periodos largos. Posteriormente, mediante la aplicacién de la videomicroscopia de Allen a estas preparaciones (5) fue posible analizar el movimiento de organelos individuales en un modelo viviente, Estos estudios han permitido comenzar a detallar algunos de los mecanismos moleculares que gobiernan el transporte ax6nico r4pido. La ausencia de la membrana plasmAtica en estas preparaciones de axoplasma, ha permitido identificar el efecto de una gran variedad de elementos sobre el transporte ax6nico r4pido de organelos, incluyendo el efecto de especies macromoleculares, tales como Jos anticuerpos. En esta forma han quedado establecidas algunas de las propiedades del transporte ax6nico répido G, 23): 80a) El transporte ax6nico rdpido ocurre bidireccionalmente en forma simulténea. Se ha visto que en su mayorfa son vesiculas pequefias (40-60 nm) y mitocondrias normales, las que se mueven en sentido anterégrado. Los organelos mas grandes (100-300 nm) como las estructuras prelisosomales y mitocondrias en etapas avanzadas de degeneracién se mueven més lentamente en direcci6n retrégrada. Ademés, se ha observado que la velocidad retrégrada de los organelos es inversamente proporcional a su tamafio, mientras que la velocidad de las particulas en direccién anter6grada es independiente de su tamafio. b) El transporte axénico rapido esta asociado exclusiva ¢ fntimamente a los MT, polimeros largos de a y @ tubulina, alineados longitudinalmente con el eje largo del ax6n. En este tipo de transporte, no participan directamente ni las proteinas contractiles, miosina y tropomiosina, ni los microfilamentos (polime- Tos de actina), Con el empleo del modelo de axoplasma aislado, se ha podido demostrar rigurosamente que el transporte axdnico répido no es regulado por Cat+, lo que apoya su independencia de la miosina, aunque es necesaria una pequefia cantidad del catién divalente para permitir su translocacién. La adici6n a las preparaciones de axoplasma de anticuerpos antimiosina, antineurofilamen- tos (otros polfmeros que corren longitudinalmente con Jos MT) y antiactina, no afectan el movimiento de las partfculas a lo largo de los MT. El tnico anticuerpo capaz de alterar este transporte es la antitubulina. Estas y otras observaciones, sugieren que los microfilamentos tienen un papel estructural en el transporte axOnico, La presencia de una red de microfilamentos intacta incrementa la efi- ciencia e integridad del transporte rapido, pero no es requerida directamente para movilizar las particulas a lo largo del MT. De hecho, no hay duda que otras aberraciones en Ja organizaciGn del citoesqueleto pudieran tener efectos criticos aunque indirectos sobre el transporte axénico, alterando la distribucién de los organelos transportados que a su vez, pudieran causar alteraciones de la funcién neuronal o incluso la muerte celular, c) Los MT no son estrucuras rigidas ni est4ticas. Cuando se desprenden de su citoesqueleto, se mueven y doblan activamente. El impacto de su colisién con las particulas libres deforma los MT, los cuales recuperan su estructura original en el momento en que rompe esa uni6n. d) El transporte axGnico r4pido es un proceso dependiente de ATP y de una enzima generadora de energia que se asocia transitoriamente a los MT en una u otra direccidn, A la fecha, s6lo ha sido identificada una enzima generadora de energfa (2, 3) asociada a MT en presencia de un andlogo no hidrolizable de ATP, el adenilil-imidofosfato (AMP-PNP). Esta protefna posee actividad ATP-dsica. Es muy probable que se trate de la misma especie identificada por Langford et al. (11) por microscopfa electrénica, también en presencia de AMP-PNP. Estos autores, describen a esta protefna como brazos asociados a los MT 0 bien a las 81vesiculas, Vale et al, (18) también han identificado una macromolécula asociada a MT en presencia de AMP-PNP que han denominado “cinesina” la que por ¢] contrario a Ja especie identificada por Brady (2, 3) no posee actividad ATP-dsica, aunque tiene la capacidad para provocar el transporte de organelas a los largo de los MT, una propiedad que no ha sido demostrada por Brady para su ATPasa. E] tratamiento con la enzima identificada por Brady con N-etil-maleimida, aumenta su interaccién con los MT e inhibe el movimiento de los organelos tanto en direccién anterégrada como retrograda. Esta y otras observaciones han Hevado a especular Ja existencia de un solo mecanismo de transporte independientemente del sentido del movimiento de las partfculas. Este es determinado por la orientacién de la enzima liberadora de energia sobre el MT. Ademés los andlisis morfométricos de Miller y Lasck (12) han demostrado la existencia de los mismos brazos 0 puentes entre las ves{culas y los MT de modo independiente del sentido de su desplazamiento, sugiriendo la existencia de una enzima generadora de energia comin para cl transporte ante y retrégrado (Fig. 3). En este modelo de transporte, se propone que las enzimas gencradoras de energia (brazos 0 puentes) existen en un estado activado, listas para proporcionar la energia necesaria para el transporte de una particula dada enel momento de su interaccién con el MT, Una vez que ha ocurrido el movimiento y que se ha consumido la energia, los puentes asumen un estado transitorio de Teposo. Para asegurar la continuidad del movimiento se ha propuesto ademés, que la unidad funcional minima para el transporte se compone de dos puentes gue funcionan de manera alterna. Como en los axones intactos no parece haber un mecanismo que aumente © disminuya la velocidad de transporte de una particula dada, aun bajo condiciones fisiolégicas mas extremas (22) (la deshidratacién en las ratas no modifica la velocidad de transporte de 1a vasopresina, ni de Ja oxitocina, aunque aumenta notablemente su biosintesis), se postula también que las enzimas gencradoras de energia opcran continuamente, pero en forma independiente de la presencia o ausencia de material susceptible de ser uansportado (“free-running”). Sin embargo, en Ja carpa sometida a estimulacién eléctrica del transporte, se ha descrito aumento en la velocidad de transporte de las vesiculas de secrecion, a 2 mm por minuto de] nels) preéptico a la neurohipofisis. Alteraciones neurodegenerativas asociadas al sistema de transporte ax6nico rapido Es probable que algunas alteraciones patolégicas de los MT, as{ como de otros elementos importantes del citoesqucleto, estén asociadas a ciertos transtornos 82A — curnrO. SULTIVESICULAR, VESCUA cy GS curKe9 = MULTIVES CULAR, Figura 3. Tramsporte axénice ripido, “A”. Secci6n de un ax6n en Ia que sc ilustea el transporte axGnico r4pido de vesiculas, cuerpos multivesiculares y mitocondrias a lo largo de microtdbulos entre el cuerpo neuronal y la terminal sin4ptica. “B". Amplificacin de un segmento de laseccidn de axGn mostrada en “A”. Se ilustra el transporte de vesiculas (“b") y de cuerpos multivesiculares (“c”) impulsados por una enzima generadora de fuerza (representada por los brazos transversales) que alternan entre un estado activado (brazos oscuros) y uno inactivado (brazos claros). La activacién puede ocurrir em el mismo microtdbulo (“a”) o por unin a un organelo (“b” 6 "e"). Modificado de Allen R.D. “El microtdbulo, motor intracelular”. Investigacidn y Ciencia 127: 18-25, 1987. 83neurodegencrativos del sistema nervioso central (8). En la enfermedad de Alzheimer, por ejemplo (10, 24), se ha demostrado la acumulaci6n progresiva de protefnas tau (proteinas de bajo peso molecular, por lo regular asociadas a MT). Se ha supuesto que la presencia de las proteinas tau podria producir pérdida de la eficacia de] transporte de moléculas y organelos, lo cual eventualmente levarfa a la muerte neuronal]. Como causa de la enfermedad de Alzheimer (16), también se ha propuesto la presencia de algunas fosforilaciones aberrantes de los neurofilamentos a nivel del cuerpo neuronal. Ademés, una falla en ¢] balance de las cinasas dependientes de calmodulina, podria afectar el estado de fosforilaci6n de los MT (20), lo que trastornaria el transporte axénico rapido. Conclusién A partir de sus estudios sobre la vasopresina, Sachs y Takabatake (15) emitieron su hip6tesis sobre la existencia de formas biosintéticas precursoras (sintetizadas en el cuerpo neuronal) y de neuropéptidos con actividad biolégica (secretados en las terminales nerviosas). Mucho se ha avanzado desde entonces en el conocimiento detallado de los eventos moleculares de maduracién o procesamiento de precursores biosintéticos no sélo de neuropéptidos, sino de muchas otras proteinas. Por ello, se reconoce la universalidad de este proceso, asi como de su compartamentalizacién y distribuci6n intracelular. Con el advenimiento de la videomicroscopia de Allen (1), también se han logrado avances én €] conocimiento de los mecanismos del transporte axonal rapido de diversas particulas incluidas Jas vesiculas de secreci6n. No obstante, aGn quedan muchas incégnitas por resolver. iCudl es el significado biolégico preciso de cada una de las modificaciones post-traduccionales que sufre una prote(na durante su procesamiento? 4Cudntas secuencias-sefial existen para asegurar la clasificacién y envio correcto de las protefnas una vez que han adquirido su conformacién biolégicamente activa? 4Realmente, s6lo existe un mecanismo para ¢l transporte axonal rapido bidireccional de particulas intracelulares? éAcaso nunca responde a estimulos externos? De ser asi, dcSmo explicar la aceleracién del wansporte de las vesiculas de secreci6n en cl sistema secretor de Ja carpa estimulada eléctricamente? Dado el gran interés cn e] campo, no hay duda de que pronto tendremos las Tespuestas a muchas de nuestras dudas. Bibliografia 1. Allen, R., Allen, N.y Travis, J. Video-enhanced contrast, differential interference contrast (AVEC- DIC) microscopy: a new method capable af analyzing microtubule-related motility in the reticulopodial network of Allogromia laticollaris. Cell Mot. 1: 292-302, 1981. 842 Brady, S.T. A novel brain ATPase with properties expected for the fast axonal transport motor. Nature 317 73-75, 1988. 4. Brady, S:T. Fast axonal transport in isolated axoplasm from the squid giant axon. Neurology Neurobiology 2S: 113-137, 1987. 4, Brady. S., Lasek, Ry Allen, R. Fast axonal transport in extruded axoplasm from the squid giant axon. Sciawe. 218 1129-1131, 1982 5. Brady. S., Lasek, R.y Allen, R. Videomicroscopy of fast axonal transport in extruded axoplasm: a new model for study of molecular mechanisms. Ceil Mot. S: 81-101, 1985, 6. Caplan, MJ., Rosenzweig, S.A. y Jamieson, J.D. Processing and sorting of proteins synthesized in the endoplasmic reticulum. Ea: Andreoli, TE., Hoffman, J.F., Fanestil, D.D. y Schultz, $.G. (Eds.) Physiology of membrane disorders. Plenum Press. New York, 1986, pp. 273-281. 7. Gainer, H., Rusell, J.T y Loh, Y.P The enzymology and intracellular organization of peptide precursor processing: The secretory vesicle hypothesis. Neuroendocrinology 40: 171-184, 1985. 8. Goldman, .E. y Yen, $.11. Cytoskeletal protein abnormalities in neurodegenerative diseases. Ann. ‘Neurol 19: 209-223, 1986. 9. Hammerschlag. R, y Stone, G.C. Further studies on the initiation of fast axonal transport. Newology Neurobiology 25: 37-51, 1987. 10. Kosik, K.S., Joachim, C.L. y Selkoe, DJ. Microtubule associated protein tau (7) is a major antigeniccomponent of paired helical filaments in Alzheimer Disease. Proc. Natl Acad Sci. 83 4044-4048, 1986. 11. Lang(ord, G.M., Allen, R.D.y Weiss, D.G. Substructure of sidearms on squid axoplasmic vesicles and microtubules visualized by negative contrast electron microscopy. Cell Motil. Cyuaskel. 6: 1986, en prensa. 12. Miller, RH. y Lasek, R. Crossbridges between wxonally transported vesicles and microtubules in cold blocked squid axoplasm. £. Cell Biol. 1985, en prensa. 13, Morris, J. y Lasek, R., Stable polymers of the axonal cytoskeleton: the axoplasmic ghost. Ceid Biol 92: 192-198, 1982. 14, Rodrfguez-Boulan, B., Misek, D.E., Vega de Salas, D., Salas, P.J.1. y Bard, E. Protein sorting in the secretory pathway. Cwrent Topics in Membranes and Transport 24 251-294, 1985. 15. Sachs, H. y Takabstake, Y. Evidence for a precursor in vasopressin biosynthesis. Endocrinology 75: 943-948, 1964. 16. Sternberger, N.FL, Sternberger, LA. y Ulrich, J. Aberrant neurofilament phosphorylation in Alzheimer disease. Proc. Natl Acad Sci. 82: 4274-4276, 1985. 17. Stone, G.C. y Hammerschlag, R.Molecular mechanisms involved in sorting of (ast-transported proteins. Newology Neurobiology 25: 15-36, 1987 18, Vale, RD., Reese, TS. y Sheetz, M.P. Identification of novel, force generating protein, Kinesin, involved in microtubule based motility. Cell 42: 39-50, 1985. 19. Walter, B, Gilmore, R. y Blobel, G. Protein translocation across the endoplasmic reticulum. Cell 38 S-8, 1984, 20. Wandosell, F, Serrano, L., Henéndez, M.A. y Avila, J. Phosphorylation of tubulin by calmodulin dependent protein kinase, J, Biol Chem. 261: 10332-10339, 1986, 21, Weisenberg, R.C., Gao, B., Awodi, S. y Flynn, J. Microtubule gelation-contraction in vitro and slow axonal transport. En: Smith, R.S.y Bisby, M.A. Axonal mansport. Alan R. Liss, New York, 1987. pp. 165-174. 22. Weiss, D.G. The mechanism of axoplasmic transport. En: Igbal, Z. (Ed.) Axoplasenic transport. CRC Press. Boca Raton. 1986, pp. 275-307. 23, Weiss, D.G. Seitz-Tutter, D., Langford, G.M.y Allen, R. The native microtubule as the angine for bidirectional organelle movements. Newology Neurobiology 25: 91-111, 1987.y tangles of Alzheimer disease 24, Wood, J.G., Mirra, $,5., Pollock, NJ. y Binder, LI. Neurofibrill: share antigenic determinants with the axonal microtubule-associated protein tau Proc. Natl Acad. Sci. 83: 4040-4043, 1986. Yost, C.S., Hedgepeth, J. y Lingappa, VR. A stop transfer sequence confers predictable transmem. brane orientation to a previously secreted protein in cell free systems. Cell 34: 759, 1983.