I.

INTRODUCCIÓN

La microbiología ha sido tradicionalmente una disciplina manual. A diferencia de

otras áreas del laboratorio, la automatización de ésta no ha sido fácil,
principalmente debido a la gran variabilidad en el tipo de muestras, diversidad
y número de microorganismos a identificar y un volumen relativamente menor
de exámenes (en comparación con el número de exámenes químicos y
hematológicos), que hace menos rentable la incorporación de nuevas
tecnologías.

Sin embargo y a pesar de estas consideraciones, hay evidencia científica creciente

que demuestra que el pronóstico de un paciente crítico infectado, depende
del inicio precoz con el antimicrobiano adecuado, para lo cual es fundamental
que el laboratorio sea capaz de proveer identificación microbiana confiable y
oportuna, así como reportes de susceptibilidad estandarizados y reproducible.

Es así que durante muchos años, la identificación de microrganismos ha dependido

de la producción local de medios de cultivos para siembra y realización de pruebas
bioquímicas, con la consiguiente menor estandarización de estas pruebas.
Asimismo, el antibiograma ha sido realizado clásicamente por técnicas de
difusión manual, que si bien cada vez se han estandarizado mejor y están en la
actualidad adecuadamente validados, es una técnica laboriosa y que requiere
de más tiempo para obtener resultados que las técnicas automatizadas
disponibles actualmente.

En cuanto a la identificación bacteriana y los estudios de susceptibilidad, se

ha desarrollado un gran número de técnicas rápidas, semiautomatizadas
o automatizadas. Estos equipos aportan estandarización y velocidad, pero no
han logrado resolver toda la problemática que el estudio microbiológico, por lo que
aún es necesario complementar su uso con pruebas manuales. En relación a
la identificación, la incorporación del análisis proteómico de las especies
bacterianas o fúngicas aisladas, ha cambiado el paradigma microbiológico en
los últimos años.

Si bien el laboratorio de microbiología involucra además técnicas de

diagnóstico inmunológico (tanto para conocer el estado inmune de un paciente,
como determinar si hubo contacto reciente o antiguo con algún patógeno
específico), técnicas rápidas para detectar presencia de antígenos virales o
bacterianos en diversas secreciones o muestras, y técnicas de biología molecular,
que permiten detectar secuencias de ácidos nucleicos propias de cada patógeno,
así como factores de virulencia específicos, en el presente documento no se
abordará estas metodologías, que sin duda también han sido objeto de grandes
evoluciones hacia la automatización, circunscribiendo la discusión solamente al
ámbito de identificación y estudio de susceptibilidad de microorganismos
bacterianos y fúngicos por métodos fenotípicos.
 II. MARCO TEÓRICO

EQUIPOS AUTOMATIZADOS EN MICROBIOLOGIA

Identificación y Susceptibilidad
Sistemas Automatizados en Microbiología que permiten determinar la Identificación
de bacterias y levaduras así como la susceptibilidad antimicrobiana.
Equipos

 VITEX System
 MicroScan WalkAway
 Phoenix
 Sensitre ARIS
 Mini API

Métodos automatizados de estudio de susceptibilidad in vitro

VITEK System

El sistema Vitek es un sistema automatizado, fabricado por bioMerieux, Está basado

en el principio básico de fotometría.
Las bacterias utilizan un substrato que produce un cambio de color y densidad
óptica. Estos cambios son detectados por diodos emisores de luz y detectores
fototransistores.
Este sistema está compuesto por un módulo de filtro-sello, una incubadora con
lector, un módulo de computadora, una terminal de datos y una impresora. Este
sistema es capaz de identificar bacterias gram positivas y gram negativas,
anaerobios y levaduras. También realiza pruebas de susceptibilidad antimicrobiana.
Es capaz de realizar “Tamizajes” de orina con enumeración e identificación.
El sistema identificará Enterobacteriaceae en 4-6 horas y bacilos que no fermentan
en 6 a 18 horas.
MicroScan WalkAway

Estos instrumentos están basados en un principio de fotometría- fluorometría. Están

disponibles tres sistemas:

 TouchSCAN-SR: Lector de panel semiautomatizado con sistema de manejo de

datos. El lector leerá el panel manualmente y el sistema proveerá
automáticamente una interpretación.
 AutoSCAN-4: Lector de panel automatizado con sistema de manejo de datos.
El usuario carga el panel y el sistema leerá e interpretará el panel
automáticamente
 AutoSCAN- WA: Sistema completamente automatizado con automatización
libre de supervisión y sistema de manejo de datos.
Tipos de paneles

 Cromogénicos Convencionales:(Gram positivos y Gram negativos. (ID 18 a

24hr).
Principio colorimétrico: Desarrolla colores en la serie bioquímica y turbidez en el
antibiograma.

 Cromogénicos rápidos: Permite la identificación en 04 horas, mide la actividad

enzimática formadas en el aislamiento primario: Haemophilus y Neisseria,
levaduras, anaerobios.
Rápidos: fluorométricas de 6 a 8 horas.

EQUIPOS - LINEA MICROSCAN

 AutoScan-4

Equipo semiautomatizado para identificación bacteriana y susceptibilidad

antimicrobiana, utiliza metodología colorimétrica.

Espectrofotómetro modificado con 6 longitudes de onda y sistema de fibras ópticas

para la lectura de los paneles en apenas 5 segundos

 Walk Away 40/96

Equipo automatizado para identificación bacteriana y susceptibilidad antimicrobiana

Presenta dos metodologías: colorimétrica y fluorométrica, contiene incubadora,
pipeta de reactivos, lectora fotométrica e impresora.

Además lectora de código de barras que identifican al panel en cualquier posición.

Capacidad de procesar simultáneamente 40 paneles (Walkaway40) o 96 paneles
(Walkaway 96).
Los paneles conteniendo pocillos múltiples son inoculados manualmente con un
dispositivo especial y luego colocados en la incubadora, el sistema dispensa
reactivos y realiza lecturas periódicas

Los equipos vienen acompañados de un completo programa de Gerenciamiento de

datos denominado LabPro.

Sistema de gestión de datos

Realiza búsquedas multíparamétricas, informes epidemiológicos completos,

flexibilidad, supresión de antibióticos, finalización automática, copia de seguridad en
disco, Normas CLSI.

VENTAJAS

 Para el Paciente

 Resultados rápidos: Esencial para pacientes de enfermedades críticas,

terapias más precisas, reducir el tiempo de estadía.
 Alternativas de antibióticos.
 Reducir combinación de terapias.
 Reducir la Infecciones Intrahospitalarias.

Laboratorio de Microbiología

Automatización.

Una buena carga del trabajo (ID+ Susceptib) lo realiza un solo equipo
Soporte científico y técnico.
Utiliza un software “experto” que revisa los datos generados, aplicandose reglas
para detectar fenotipos o patrones de resistencia imposible o inusual y permite
reconocer errores técnicos de los operadores.

Farmacia
Relaciona resultados microbiológicos con el record de farmacia del paciente.
Favorece la reducción de gastos por antibióticos.
Control de Infecciones Intrahospitalarias:
Datos epidemiológicos con estadísticas.
Monitoreo de las IIH y de la resistencia microbiana.

Hospital:
Mejorar calidad en el cuidado del paciente.

Reducir el gasto de antibióticos.

Reducir el tiempo de estadía del paciente.

Reducir las infecciones adquiridas en el hospital.

Cuerpo Médico:
Resultados precisos de Identificación y Antibiograma.
Recomendaciones para tratamiento empírico basados en antibiogramas
específicos del hospital.
DESVENTAJAS

Se debe todavía aislar las bacterias y preparar una suspensión bacteriana para el
inóculo.

Puede ser más caro el uso de insumos descartables.

Utiliza baterias de sensiblidad con antimicrobianos fijos, debiendo obligadamente
adoptarse algunos de los paneles.

Incapacidad de testar todos los grupos bacterianos clínicamente importantes.

Sobre los resultados de las pruebas de susceptibilidad se han reportado diversos

problemas, los fabricantes deben incluir sus limitaciones para algunas
combinaciones droga - microorganismo.

El control de calidad es dependiente del uso de cepas ATCC especificadas por el

fabricante, además NCCL no provee estándares al respecto.

METODOS DE HEMOCULTIVOS

MANUALES LECTURA DE CO2 PRESION DE GASES

SIMPLES CONCENTRACION RADIOMETRICOS NO RADIOMETRICOS

MEDIO LIQUIDO LISIS CONCENTRACION INTERMITENTES CONTINUOS

MEDIO BIFASICOS LISIS CENTRIFUGACION

INDICADORES DE GAS

SISTEMAS AUTOMATIZADOS PARA HEMOCULTIVOS

Aparecieron en USA hace tres décadas.

BACTEC 460 (Becton Dickinson

Biosciences), el medio contenía CH con C14, al desarrollar el mcog, los substratos
eran utilizados con el C14 y liberado como CO2, que se detectaba.
Bactec 460®

- Bactec 460® (Becton Dickinson) radiométrico fue el primer sistema comercial de

Hemocultivos automático. Utiliza substratos marcados con 14C que al ser
metabolizado por los microrganismos libera 14CO2al medio, que difunde a la
atmósfera del frasco. En esta atmósfera se mide periódicamente el nivel de 14CO2
y se expresa como un índice de crecimiento cuando se compara con los niveles de
CO2 en frascos de control.
- La lectura está totalmente automatizada y se realiza por medio de una cabeza
móvil provista de dos agujas que perforan los tapones de goma de los frascos. Su
principal inconveniente es el manejo y posterior eliminación de los residuos
radiactivos. En la actualidad ha sido superado por otros sistemas y sólo se utiliza
para el cultivo de micobacterias.

SIISTEMAS AUTOMATIZADOS PARA HEMOCULTIVOS

PRIMERA GENERACION

DETECCION DE C02 POR METODO RADIOMETRICO Y NO RADIOMETRICO.

LECTURAS DIARIAS POR 7 DIAS

SUBCULTIVOS EN NEGATIVOS INNECESARIOS.

DETECCION PRECOZ.

Sistemas de Monitoreo Continuo de Hemocultivos

MONITOREO “CONTINUO”.
AGITACION E INCUBACION CONTINUAS.

AUTOMATIZADO

PROTOCOLOS DE 4-5 DIAS.

MENOR MANO DE OBRA

RECUPERACION MAS RAPIDA.

A partir de 1990 aparecen los Sistemas de Monitoreo Continuo de Hemocultivos.

El sistema Bact/Alert (bio Mériux) con capacidad para 240 frascos y detecta CO2 de
manera colorimétrica.

El sistema ESP (Trek Diagnostic Systems), monitorea los cambios de presión en el

frasco para gases como: O2, H2, N y CO2, producidos o consumidos por los
microorganismos.

SISTEMA BACTEC 9000

Presenta tres formatos el : 9240 (240 fcos), 9120 (120 fcos) y 9050 (50fcos).

En la base de cada frasco existe un sensor de CO2 y mediante un mecanismo de

sensibilidad fluorescente detecta el crecimiento del microorganismo al generar CO2.
Tiene varios medios:
- Aeróbico y Anaeróbico: caldo de caseina soya con resinas removedoras de
antibióticos
SISTEMA BACTEC

Medios pediátricos con resinas removedoras de antibióticos.

-Medio Myco/ F- lytic diseñado para mejorar la detección de hongos y

mycobacterias pero también soporta el desarrollo de bacterias patógenas.
- El sistema realiza lecturas cada 10 min.
-Alarmas de positividad luminosa y sonora

Bactec 9240

Fundamento:
- Presenta 240 fcos.
Cuando los microorganismos están presentes, metabolizan los nutrientes del medio
de cultivo, produciendo CO2. Un tinte en el sensor reacciona con el CO2. Este mide
la cantidad de luz que es absorbida por un material fluorescente en el sensor. El
fotodetector del instrumento mide el nivel de fluorescencia, lo cual corresponde a la
cantidad de CO2 producido. Esta medición es interpretada por el sistema de
acuerdo a los parámetros positivos preprogramados.

Sistema computarizado Bactec

a) Falso Positivo: Se refiere a las botellas que el instrumento llama positivas, pero
que no muestran microorganismos en el frotis ni en el subcultivo.
b) Falso Negativo: Ocurre cuando el instrumento no detecta crecimiento, pero el
organismo crece en el subcultivo.
.