UNIVERCIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL 1° Informe de Laboratorio

“Año del buen servicio al ciudadano”

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA DE HIGIENE Y SEGURIDAD
INDUSTRIAL

NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO. MATERIAL DE

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL. LIMPIEZA, DESINFECCIÓN
Y ESTERILIZACIÓN DE MATERIAL

PRIMER LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGIA AMBIENTAL- BO-112

ANA SUAÑA HANCCO – 20162201F

LAURA ROMANÍ GÓMEZ – 20162651A

DOCENTE: MSc. Blgo. ALVARO MARTÍN MARTÍNEZ VILA

Lima, Perú
28 de Abril del 2017
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INDICE

I. RESUMEN ................................................................................................................................. 3
II. INTRODUCCIÓN ........................................................................................................................ 3
III. OBJETIVOS ................................................................................................................................ 4
A. OBJETIVO GENERAL: ........................................................................................................................ 4
B. OBJETIVOS ESPECÍFICOS: .................................................................................................................. 4
IV. MARCO TEÓRICO .................................................................................................................. 4
V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL ............................................................................................. 8
A. MATERIALES DE LABORATORIO........................................................................................................... 8
 MATRAZ DE ENLERMEYER. ................................................................................................................ 8
MEDIOS DE CULTIVO................................................................................................................................. 9
B. METODOLOGÍA ............................................................................................................................... 9
VI. CONCLUSIONES .................................................................................................................. 10
VII. RECOMENDACIONES .......................................................................................................... 11
VIII. FUENTES DE INFORMACIÓN ............................................................................................... 11
IX. APÉNDICE ............................................................................................................................... 12
A. DIAGRAMA DE FLUJO ..................................................................................................................... 12

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I. Resumen
Este presente trabajo se realizó con la finalidad de conocer las normas de
laboratorio, como también una adecuada limpieza, desinfección y esterilización de
materiales, las cuales son muy importantes para un adecuado uso del laboratorio.
En este caso el laboratorio de microbiología de la Facultad de Ingeniería Ambiental
de la UNI.

Un adecuado uso de laboratorio nos ayudara a no contraer enfermedades, ya que

en el laboratorio se trabajara con microorganismos que originan enfermedades que
pueden ser perjudiciales para la salud. De igual forma el adecuado uso de los
materiales del laboratorio nos favorecerá en nuestro trabajo.

II. Introducción

En el laboratorio de microbiología se trabaja con microorganismos infecciosos

como por ejemplo la salmonela que es causante de la enfermedad como la
salmonelosis, el simple hecho de manipular de una forma inadecuada los
materiales que están o se usaron para trabajar con este microorganismo puede
generar diferentes infecciones. Para ello las normas de seguridad y limpieza son
de suma importancia, yaqué con estas normas se pretende reducir a un nivel
aceptable el riego inherente a la manipulación de materiales que están
contaminados.

La esterilización de los materiales es un mecanismo por el que se consigue la

muerte o eliminación de todos los microorganismos vivos de una muestra, medio,
superficie o material de trabajo. Un objeto esterilizado está, por lo tanto,
totalmente libre de microorganismos incluyendo sus formas de resistencia. No hay
que confundir la esterilización con la desinfección en la que no se eliminan todos
los microorganismos, sino únicamente aquellos que pueden causar enfermedad
o efectos nocivos sobre los productos en los que se encuentran (en alimentos,
cosméticos, etc.). Un objeto desinfectado, por lo tanto, no está estéril.

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III. Objetivos
a. Objetivo General:
Conocer los aspectos básicos de bioseguridad y reglas generales para el
desarrollo de las actividades en el laboratorio de microbiología.

b. Objetivos Específicos:
Reconocer las metodologías existentes en la desinfección de superficies e
implementos de laboratorio de microbiología.
Aplicar algunos métodos utilizados para la esterilización de medios de cultivo,
materiales y accesorios utilizados en el laboratorio de microbiología.

IV. Marco Teórico

REGLAMENTO Y NORMAS DE TRABAJO EN EL LABORATORIO

 Deberá usarse siempre un mandil blanco y limpio.

 Antes de comenzar cualquier trabajo, el alumno deberá lavarse las manos
usando agua y jabón y secarse con una toalla limpia.
 Los libros y cuadernos de notas, nunca deben colocarse sobre la mesa de
trabajo.
 Antes de comenzarse el experimento, deberá leerse detenidamente elexperi
mento a realizarse.
 Queda terminantemente prohibido comer o fumara dentro del laboratorio.
 Por ningún motivo deberá llevarse el lápiz o cualquier objeto a la boca.
 La superficie de la mesa deber ser cuidadosamente desinfectada antes y
después del trabajo.
 El material usado (tubos, matraces, frascos, etc.,) debe colocarse
inmediatamente en los recipientes dispuestos para este fin.
 Las asas de Kolle y pinzas infectadas, deberán ser esterilizadas por flameo
inmediatamente después de ser usadas.
 Está prohibido pipetear con la boca.
 Las pipetas y portaobjetos usados, deberán ser colocados en los recipientes
que contengas solución desinfectante de fenol al 0,5%.

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 Las envolturas, tapones de algodón etc. No deben tirarse nunca al suelo,

deben depositarse en recipientes para desperdicios.
 Todo accidente, tales como cortes en las manos, volcaduras de líquidoscont
aminados, absorción de los mismos al pipetear deberá informarseinmediata
mente.
 Antes de dejar el laboratorio se deberá ubicar cada cosa en su lugar y las
mesas convenientemente limpias.
 Terminado el trabajo deberá lavarse las manos con jabón desinfectante y
alcohol.
 No se manejarán los autoclaves o el material recién esterilizado si no se
dispone de guantes apropiados.

ESTERILIZACION
Entendemos por esterilización todo tratamiento de un material con un agente físico o
químico que acarrea la eliminación de toda forma de vida en él. Una vez estéril, el
material sigue estéril indefinidamente con tal de que esté encerrado en un
compartimento estanco, sellado y libre del contacto con microorganismos del
ambiente exterior. Centrándonos de nuevo en el calor, la inactivación parcial o la
esterilización se pueden lograr por calor húmedo o por calor seco.

La inactivación por calor se debe a la desnaturalización de proteínas y a la fusión de

lípidos de membrana, debido a que se rompen muchos enlaces débiles, sobre todo
los puentes de hidrógeno entre grupos -C=O y H2-N-. Estos enlaces se rompen más
fácilmente por calor húmedo, debido a que las moléculas de agua pueden desplazar
a los puentes de hidrógeno.

CONTROL MICROBIANO MEDIANTE AGENTES FÍSICOS

a) La temperatura:

Es uno de los parámetros ambientales más importantes que condicionan el

crecimiento y la supervivencia de los microorganismos. La temperatura afecta a la
velocidad de crecimiento. Cada bacteria muestra una curva característica de tasa de
crecimiento en función de la temperatura.

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b) Desecación sobre las bacterias:

La desecación al aire (sin vacío) mata a las células vegetativas bacterianas, pero no
a las endosporas. La sensibilidad a la desecación varía de una especie a otra. La
mayor eficacia de la desecación al aire se logra con 50% de humedad relativa.

c) Efecto de las ondas sonoras

Las bacterias son variables en cuanto a su susceptibilidad a las vibraciones sonoras.

En general, son más sensibles las Gram-negativas y más resistentes las Gram-
positivas. Sin embargo, ante un tratamiento por ultrasonidos siempre cabe la
posibilidad de que sobrevivan algunos individuos, por lo que este método no tiene
utilidad para la esterilización

DESINFECCIÓN

Conjunto de operaciones destinadas a eliminar o matar todos o casi todos los

microorganismos contenidos en un objeto o sustancia, con excepción de las esporas".
También se le puede denominar proceso mediante el cual se produce la destrucción
o eliminación de agentes infecciosos y contaminantes que se encuentran fuera del
organismo, o sobre la piel. Por la aplicación directa de medios físicos o químicos". En
este caso se considera un adecuado proceso de desinfección a aquel que permite
una reducción de un 99,999 % de los microorganismos que existían al comienzo de
la desinfección limpieza:

LIMPIEZA

Es la eliminación mediante el fregado y el lavado de la superficie en la cual se

comienza a trabajar o se concluye la misma, se recomienda utilizar agua caliente
jabón o algún detergente adecuado o el empleo de alguna aspiradora, para así poder
eliminar algunos agentes infecciosos y las sustancias orgánicas que se encuentran
en la superficie en las cuales estos se pueden encontrar condiciones adecuadas para
sobrevivir.

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CONTAMINACIÓN

Es la presencia de un agente infeccioso en la superficie del organismo y también

nosotros lo poder tener o está impregnado en nuestra vestimenta, juguetes, en los
propios instrumento s quirúrgicos u otros objeto inanimados o sustancias como por
ejemplo el agua.

CONTROL MICROBIANO MEDIANTE AGENTES QUIMICOS

a) Fenol y compuestos fenólicos

Son bacterias o bacteriostáticos, dependiendo a la concentración a la que se usen. El

fenol se emplea en disolución acuosa al 2-5% para desinfectar mesas y material de
laboratorio. Aun se usa, aunque otros desinfectantes son más eficaces a
concentraciones más bajas.

b) Alcoholes

El alcohol etílico de 60-95° es un desinfectante eficaz contra células vegetativas, pero

no actúa contra las esporas bacterianas. La concentración más eficaz es al 70% v/v
en agua (70°). Actúa en menos de diez segundos. El alcohol metílico es menos eficaz
y muy toxico, por lo que apenas se usa. Los alcoholes de 3 a más carbonos son más
eficaces que el etílico, pero se usan poco.

c) Halógenos y sus compuestos

Son eficaces por su acción oxidante y también por su acción halogenante de

moléculas orgánicas.

Iodo Es uno de los germicidas más antiguos y eficaces. Actúa contra todas las
bacterias. También tiene propiedades esporicidas, fungicidas y antivirales, aunque
su actividad depende de las condiciones ambientales. Es uno de los mejores
desinfectantes de la piel humana y este es su principal uso.

3.2 Cloro y compuestos clorados

El cloro gaseoso es muy eficaz como desinfectante, pero su manipulación requiere

equipo especial. Se usa principalmente para desinfectar agua en plantas
purificadoras. Los hipocloritos más utilizados son el de sodio y el de calcio (NaClO y

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Ca(ClO)2). Se comercializan disoluciones de hipoclorito de sodio al 5-12 % para uso

doméstico (lejía) que, diluyéndolas aún más, se usan como desinfectantes (de manos,
de agua, etc.).

d) Ácidos y álcalis

Los pH extremos son letales para la inmensa mayoría de los microorganismos. Son
excepcionalmente resistentes el micro bacterias y pocos microorganismos más. Los
ácidos son, en general, más eficaces que los álcalis.

e) Esterilizadores gaseosos

Óxido de etileno

Es un poderoso germicida utilizado para esterilizar salas en hospitales, industrias y

laboratorios y también muchos productos entre los que se encuentran las placas de
Petri desechables. Al ser un gas es muy penetrante. Su espectro de actividad es muy
amplio e incluye también las esporas.

V. Procedimiento Experimental
a. Materiales de laboratorio

 Matraz de Enlermeyer.  Autoclave.

 Probeta.  Esterilizador.
 Vaso de precipitados.  Centrífuga.
 Pipeta.  Microscopio óptico.
 Tubos de ensayo.  Frigorífico o cámaras.
 Placas Petri.  Refrigeradas.
 Balanza digital.  Contador de colonias.
 Baño María.  Asas de siembra.
 Incubadora.  Ph-metros.
 Laminas portaobjetos.  Cucharas y espátulas.
 Ozono.  Mechero.
 Cámara de neubauer.

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Materiales de limpieza
 Iodo
 Fenol y compuestos fenólicos al 5%
 Alcoholes Isopropílico al 70%

Medios de cultivo

 Caldo nutritivo  Gelatina nutritiva  Agar EMB

 Caldo BHI
 Agar plate count
 Agua peptonada
 Agar B de king
 Agar urea
 Agar brucella
 Agar glucosado
 Indol y nitritos
 Agar de kligler
 Caldo lactosado
 Agar manitol
 Agar mcconkey
 Agar nutritivo
 Agar SS
 Caldo de selenito
 Medio S.I.M.

b. Metodología

Los métodos más importantes son para realizar una adecuada esterilización son:

Flameado: es un procedimiento simple y eficaz, consiste en la exposición de un

objeto a efecto de la llama hasta la incandescencia. Se esteriliza de esta forma, p. ej.
Ansas de cultivo de siembra.

Incineración: es el mejor sistema para esterilizar todas aquellos productos en los

que no importe su destrucción, p. ej. Material biológico.

Estufa: calor seco a alta temperatura, 20 minutos durante 180º, 60 minutos a 160º,
siendo suficiente la esterilización durante 60 minutos a 100-140º, se lo utiliza para
esterilizar material de vidrio debidamente envuelto en papel, metal. etc.

Autoclave: horno a presión, consiste en una cámara en la que el aire puede ser
sustituido por vapor de agua sometida a presión. Se opera a 121ºC y 1 ATM. de
presión durante 20 minutos. De esta forma se consigue destruir todas las formas

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vegetativas y esporas. Se lo utiliza para esterilizar todo material resistente a esa

temperatura y es muy utilizado para la esterilización de medios de cultivos.

Tindalización: (esterilización intermitente) consiste en someter el producto a

calentamientos intermitentes entre 56 y 100ºC durante 30 minutos con lo que se
asegura destruir las formas vegetativas. En los intervalos se mantiene a temperatura
ambiente o a 37ºC, las esporas germinan y las bacterias resultantes se hacen más
sensibles al calentamiento posterior.

Luz UV: es absorbida a una longitud de onda de 240 a 280 nm por ácidos nucleicos
causando daños genéticos alterando las bases. Se la utiliza en la preparación de
vacunas, cabinas de seguridad biológica, lugares de trabajo como mesadas de
laboratorios.
Radiaciones ionizantes: actúan lesionando ácidos nucleicos. Se la utiliza sobre todo
en procesos industriales para esterilizar dispositivos quirúrgicos, guantes, jeringas,
etc.

VI. Conclusiones

 Es importante saber cuáles son los materiales de microbiología y como

se utilizan además de su función.
 El material se esteriliza para no infectar de microorganismos el trabajo además de
ser útil para su nueva utilización aunque algunas cosas si se usan una vez ya no
se vuelven a utilizar puesto que se contaminan de microorganismos y esto hace
que ya no se puedan volver a utilizar.

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VII. Recomendaciones

 No deben mezclarse en un mismo recipiente productos antisépticos o

desinfectantes de distinta composición.
 Nunca se deben tapar utilizando cubiertas de metal, algodón, gasa, corcho o
papel. Usar la tapa original.
 Una vez que se vierte el contenido del desinfectante o antiséptico, no deben
retornarse a su envase original.
 Nunca debe llenarse un envase semivacío a partir de otro.
 Las diluciones deben hacerse a la temperatura, y según el procedimiento indicado
por el fabricante.
 Deben almacenarse en áreas secas, ventiladas y protegidas de la luz.
 Vigilar y controlar la fecha de vencimiento de los antisépticos y desinfectantes

VIII. Fuentes de información

Iáñez, E. (9 de mayo de 2005). Microbiología general. Obtenido de Microbiología

general: https://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia
Romero, M., Esquivel, J., Alvarado, F., Resendiz, M. d., & Rangel, M. (6 de junio de
2012). Microbiologia. Obtenido de Microbiologia:
http://realisaciondeanalisis.blogspot.pe/
The Journal of Applied Microbiology. (1998). A. Gilmour.

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IX. Apéndice
a. Diagrama de flujo

MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN

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