Producción de ácido glucónico a partir de glucosa por Aspergillus niger: condiciones de

crecimiento y no crecimiento

Resumen

La fermentación discontinua de glucosa a ácido glucónico se realizó utilizando Aspergillus niger en

condiciones de crecimiento y sin crecimiento utilizando oxígeno puro y aire como fuente de oxígeno
para la fermentación en reactores de tanque agitado de 2 y 5 l (reactor discontinuo). Produccion de
El ácido glucónico en condiciones de crecimiento se realizó en un reactor discontinuo de 5 l. Las
tasas de producción y crecimiento fueron más altas durante el período de suministro de oxígeno
puro que durante el suministro de aire, y la tasa de consumo de sustrato fue casi constante. Para la
producción de ácido glucónico en condiciones de no crecimiento, realizado en el reactor discontinuo
de 2 l, el efecto del caudal de oxígeno puro se investigó la concentración de biomasa en la
producción de ácido glucónico y se sugirió una ecuación empírica para mostrar la dependencia de
la tasa de producción rp de la concentración de biomasa Cx y la tasa de flujo de oxígeno Qt en
condiciones de operación constantes (30 ° C, 300 rpm y pH 5.5). La concentración de biomasa tuvo
un efecto positivo sobre la tasa de producción rp, y el efecto de Q sobre rp fue positivo a altas
concentraciones de biomasa.

1. Introducción

El ácido glucónico y sus sales son materiales importantes utilizados en farmacéutica, alimentaria,
textil, detergente, cuero, fotografía y otras industrias biológicas [1–3]. La producción de ácido
glucónico por Aspergillus niger es una fermentación aeróbica con una alta demanda de oxígeno. La
biotransformación de la glucosa en ácido glucónico representa una reacción de deshidrogenación
simple sin la participación de vías metabólicas complejas.

El ácido glucónico se forma por la hidrólisis de la gluconolactona (C6H10O6), el subproducto de la

reacción (H2O2) se descompone en agua y oxígeno por catálisis enzimática, que está presente en
las células vivas. El mecanismo de reacción global se puede describir de la siguiente manera [4]:

El oxígeno es uno de los principales sustratos directos de la bioconversión, donde durante la

fermentación con ácido glucónico, el DIOS de A. niger usa oxígeno molecular para oxidar la glucosa.
Se requiere oxígeno para la bioconversión, así como para la respiración micelial. El oxígeno
generalmente se proporciona en forma de aire, pero el oxígeno puro o el peróxido de hidrógeno
son opciones informadas para una conversión eficiente. Algunos investigadores han obtenido una
alta productividad volumétrica de ácido glucónico utilizando una presión relativamente alta (2-6
bar), lo que resulta en un aumento de la disolución disuelta. oxígeno hasta 150 mg l − 1 [5.

Las propiedades de A. niger permiten la producción de ácido glucónico tanto en condiciones de

crecimiento como de no crecimiento. En el caso de condiciones de no crecimiento, cuando la
concentración de biomasa en la fase líquida es constante, el oxígeno y la glucosa se consumen solo
para la producción de ácido glucónico. En condiciones de crecimiento, se consume oxígeno para
crecimiento de biomasa y para la formación de productos. En la Tabla 1 se muestra una comparación
de la producción de ácido glucónico en condiciones de crecimiento (fermentación) y sin crecimiento.
2. Materiales y métodos

2.1. Configuración de biorreactor

Todos los experimentos se llevaron a cabo en biorreactores de agitación mecánica de 2 y 5 l (Biostat,

B. Braun, Alemania). Los biorreactores estaban equipados con un electrodo de pH, un titulador de
pH, un electrodo de Po2 y un termostato. Durante el proceso de fermentación, los siguientes
parámetros se midieron y registraron en línea en una PC: concentración de oxígeno disuelto en el
medio, temperatura y presión de las corrientes de gas de entrada y salida y composición de la
corriente de gas de salida (contenido de O2 y CO2). Además, la temperatura del medio dentro del
reactor, el caudal de aire y el pH se midieron y controlaron en línea.

2.2. Microorganismo y condiciones de cultivo.

A. niger CCM8004 con una alta actividad de glucosa oxidasa y catalasa se consideró en este estudio
[7]. El micelio creció en forma de pellet. El inóculo se preparó en agitado. matraz durante 24 h. El
biorreactor con un volumen de 2 o 5 l.se inoculó al 2% de volumen. La temperatura del reactor fue
mantenido a 30 ◦C. Se eligió aire y oxígeno puro como fase gaseosa para experimentos. El caudal de
gas de 8 l min - 1 (a 298 K y presión atmosférica) se aplicó en un 2 y un 5 lreactor por lotes. El medio
de fermentación contenía: glucosa. 150 g l - 1, (NH4) 2SO4 0.59 g l - 1, KCl 0.25 g l - 1, KH2PO4 0.25
g l - 1, MgSO4 · 7H2O 0.25 g l - 1, Ca (NO3) · 4H2O 1.0 y 1,5 ml litro - 1 de un licor de maíz con 50%
de pendiente. El valor de pH de la el cultivo se mantuvo a 6.5 durante la fase de crecimiento y a 5.5
(actividad máxima de DIOS) durante la fase de producción mediante la adición de 11.7 M de
hidróxido de sodio. Los parámetros del regulador PID del controlador de pH se ajustaron para tener
en cuenta la capacidad de volumen del reactor para evitar un aumento indeseable de pH superior a
7. La biomasa producida en la fermentación de glucosa en un reactor discontinuo de 5 l se filtró y
luego se usó para los experimentos en condiciones de no crecimiento en un reactor por lotes de 2
l. Una solución con 150 g l − 1 de glucosa con un pH de 5.5 y un se aplicó la cantidad adecuada de
biomasa lavada para estos mediciones.
Fig. 1. Perfil de concentración de GA, glucosa y biomasa versus tiempo de fermentación en el experimento
por lotes (reactor por lotes) a 300 rpm, 30 ° C usando aire y oxígeno puro por separado como fuente de
oxígeno.
3. Resultados y discusión

3.1. Producción de ácido glucónico en condiciones de crecimiento.

El curso de las concentraciones de glucosa, ácido glucónico y biomasa durante la fermentación en

un reactor discontinuo de 2 l se muestra en la Fig. 1, cuando funciona a una agitación de 300 rpm y
una temperatura constante de 30 ° C utilizando aire y oxígeno puro por separado.

Fig. 2. Efecto de la concentración de biomasa en el perfil de concentración de GA para diferentes

caudales de oxígeno.
 Tabla 2
Tasa de producción (rp) y tasa específica (Kp) de
ácido glucónico para diferentes concentraciones
de biomasa y tasas de flujo de oxígeno puro

La producción de ácido glucónico comenzó a aumentar linealmente desde la segunda hora de

fermentación con una tasa de producción de 3.330 g l − 1 h − 1 hasta la undécima hora, cuando el
oxígeno fue reemplazado por aire. Desde la undécima hora, el perfil de ácido glucónico aumentó
lentamente con una tasa de producción de 0.766 g l − 1 h − 1 hasta la vigésima cuarta hora, cuando
el aire se reemplazó con oxígeno puro y a partir del vigésimo cuarto hora en adelante aumentó
linealmente con una tasa de producción máxima de 4.583 g l − 1 h − 1 mantenida durante 23 h. La
producción de ácido glucónico alcanzó una concentración final de 150 g l -1 en la quincuagésima
quinta hora debido al agotamiento del sustrato. En esta etapa se había consumido
aproximadamente el 99% de la glucosa. La tasa de consumo de sustrato fue casi constante durante
las primeras 44 h con un valor de 0.321 g l − 1 h – 1.

El crecimiento de la biomasa tuvo lugar en las primeras 46 h, alcanzando una concentración de 10 g

l − 1. Después de 46 h, la concentración de biomasa fue aproximadamente constante, es decir, la
fase de producción sin crecimiento.

No hubo una fase de retraso clara y esto puede deberse a que de los microorganismos se adaptan
rápidamente sin dificultades a las condiciones en el reactor (Fig. 1).

La producción celular fue mayor en presencia de oxígeno. que eso en presencia de aire. La tasa
máxima de producción celular fue 0.2712 gl − 1 h − 1 usando oxígeno puro y 0.2263 gl − 1 h − 1
usando aire, esto puede deberse al aumento de la actividad de algunas enzimas clave involucradas
en el ciclo metabólico básico de A. niger usando oxígeno puro, lo que lleva a aumentar la
concentración de biomasa. Los resultados también muestran que la formación del producto se
puede clasificar como no asociada al crecimiento, porque la formación del producto es
desproporcionada a la tasa de crecimiento celular, donde la formación del producto continuará
ocurriendo después de que cese el crecimiento (después de 46 h de fermentación).
3.2. Producción de ácido glucónico en condiciones de no crecimiento.

Para estudiar el efecto de la concentración de biomasa y la tasa de aireación (usando oxígeno puro)
en la producción de ácido glucónico sin crecimiento, diferentes concentraciones de biomasa 0.35,
0.91, 2.31 y 6.59 gl − 1, y cuatro tasas de aireación 4, 6, 8 y Se usaron 10 l min − 1.

Fig. 3. Predicción de la ecuación. (2) para los datos experimentales a diferentes velocidades de flujo
de oxígeno.
La figura 2 muestra los resultados para la producción de ácido glucónico bajo condiciones de no
crecimiento utilizando oxígeno puro como fuente de oxígeno. La concentración de biomasa tuvo un
efecto significativo sobre la acumulación de ácido glucónico (Fig. 2), donde a una concentración de
biomasa de Cx = 6.59 gl − 1, 10.5, 11.7, 13.5, aumento de 13.8 veces en la concentración de ácido
glucónico en comparación con una concentración de biomasa de Cx = 0.35 gl − 1 se observó a un
flujo de oxígeno de 4, 6, 8 y 10 l min − 1, respectivamente. Por lo tanto, a una velocidad de flujo de
oxígeno constante, aumentar la concentración de biomasa tiene un efecto positivo sobre el ácido
glucónico producido especialmente a una velocidad de flujo de oxígeno alta. Esto puede deberse al
aumento de la cantidad de catalizador u óxido de glucosa (GOD).

La tasa de producción rp, y la tasa específica Kp de glucónico el ácido se determinó a partir de la

pendiente de cada línea en la Fig. 2, usando la siguiente ecuación:

La tasa de producción rp varió tanto con la concentración de biomasa como con la tasa de flujo de
gas (Tabla 2), por lo que valió la pena encontrar una relación matemática para la rp con Cx y Q. La
siguiente ecuación empírica fue adecuada para representar la relación para rp, Cx y Q:

Eq. (2) obtenido para la producción de ácido glucónico bajo condiciones de no crecimiento utilizando
oxígeno puro a 30 ° C, 300 rpm y un pH de 5.5 sin considerar el efecto de las variables del proceso,
es decir, pH, temperatura y velocidad de agitación, ya que estas variables fueron constantes durante
el transcurso de los presentes experimentos. Para simular la producción de ácido glucónico en
condiciones de no crecimiento en diferentes condiciones, se deben tener en cuenta todas estas
variables.

Para verificar la validez de la ecuación. (2), una comparación con los datos experimentales se
muestran en la Fig. 3; representa el datos experimentales razonablemente