dividen en dos: los que absorben y hacen
María Teresa Sanabria Céspedes,
Sebastián Tanco y Johan Sebastián
Vásquez Abella
Fotosíntesis
RESUMEN
La fotosíntesis es el proceso bioquímico
más importante de la biosfera, en él se
transforma la energía lumínica en energía
química, que será utilizada por todas las
formas de vida existentes. La preparación
del ambiente adecuado para el surgimiento
de la vida, se da gracias a los intercambios
gaseosos que se obtienen en éste proceso;
por esta razón el estudio y la cuantificación
de la teoría es tan importante y esencial, ya
que a partir de él se puede mejorar las
condiciones para su producción de biomasa
y demás bioproductos involucrados en éste
proceso.
INTRODUCCIÓN.
La fotosíntesis es el proceso bioquímico
que transforma la energía lumínica en
energía química, utilizable en todos los
seres vivos de forma indispensable. La
fotosíntesis se divide en dos procesos
globales diferenciables; el primero, tiene
que ver con la transducción de energía y el
segundo con la reducción y fijación del
carbono. Éste conjunto complejo de
procesos ha sido punto de estudio y se han
logrado postular dos conceptos
fundamentales para el primer proceso que
son las reacciones fotoquímicas; el primero
hace referencia al concepto de unidad
fotosintética proclamado por Emerson y
Arnnon en 1932, en el cual se postula que
en todos los sistemas fotosintetizadores los
pigmentos encargados de absorber la luz se
transferencia de la energía hacia el centro
de reacción y los que conforman este centro
que lo constituye unas moléculas
particulares de clorofila (Chl a P680 y Chl
A P700) que llevan a a cabo la reacción
lumínica y el segundo es el concepto de dos
fotosistemas formulado por Hill y
Bendal,en 1960, en el cual se estipula que
la luz induce el proceso de la fotosíntesis
provocando la transferencia de electrones
vectoriales, el cual requiere la cooperación
de dos fotosistemas llamados PSI Y PSII,
que funcionan como una máquina
fotoeléctrica, el agua es usada como
donador de electrones el cual induce una
separación de cargas en el PSII, con el
resultado de la liberación de oxígeno como
bio producto. En el PSI, la reducción del
electrón aceptado dona un electrón a la
ferredoxina el cual reduce el NADP+ que al
final se utilizará en la conversión de CO2 a
carbohidratos. El flujo de los electrones en
el PSII y PSI está relacionado a una serie de
reacciones químicas de transferencia de
electrones a través de plastoquinonas, el
complejo citocromo b6/f , y la
plastocianina. Todas las reacciones
descritas están adaptadas al consumo y
liberación de protones en los dos lados de
la membrana tilacoidal ocasionando una
diferencia en el potencial electroquímico
necesario para la síntesis de ATP con la
intervención de la ATPasa protónica. Los
dos fotosistemas tienen su propio
conglomerado de pigmentos antena
formados por las clorofilas y las moléculas
de carotenoides Los cuatro complejos que
permiten realizar la fotosíntesis se
distribuyen en el cloroplasto: PSII se
encuentra ubicado en el grana, PSI en las
lamelas, la ATPasa en las lamelas y el
complejo del citocromo en el grana y sus
márgenes.
Los conceptos relacionados con la
reducción y fijación de CO2 a moléculas
orgánicas con la continuidad de los
subproductos de la primera reacción , fue
arreglada por Bassham en 1954 y otros
quienes complementaron la ruta de la
asimilación del dióxido de carbono con sus
intermediarios y enzimas involucradas en
este proceso. El ciclo de Calvin (ruta C3)
representa la ruta común en el proceso de la
reducción del CO2. El ciclo C3 da inicio
cuando la enzima Ribulosa 1-5 bifosfato
carboxilasa oxigenasa (Rubisco) realiza la
carboxilación del CO2 al aceptor ribulosa-
1,5-bisfofato RuB-P y da como resultado
el primer producto estable de este proceso
dos moléculas de 3- fosfoglicerato que
luego va a hacer reducido a gliceraldehido
3-P, una triosa que ayudará a la
regeneración de RuB-P a la síntesis de
sacarosa y almidón.
Existen otros procesos que se adaptaron
posteriores al ciclo C3. La adaptación
anatómica especial de la hoja, con dos tipos
diferenciados de células fotosintéticas, que
separan los procesos de fijación y
reducción, incluyeron una ruta adicional
con respecto a la concentración de CO2, la
cual ha sido denominada C4. El proceso da
inicio en las células del mesófilo con la
fijación de CO2 por carboxilación del
fosfoenol piruvato, reacción química
catalizada por la enzima Fosfoenol Piruvato
Carboxilasa (PEPC), formando un ácido de
4 carbonos (malato o aspartato), estos
ácidos formados se transportan hacia las
células del haz vascular donde son
descarboxilados formando de nuevo el
CO2 que es fijado por Rubisco para iniciar
el ciclo C3 normalmente y el ácido pirúvico
que regresa al mesófilo para regenerar el
fosfoenol piruvato.
Otra adaptación se encuentra en plantas
denominadas CAM (metabolismo ácido de
las crasuláceas). Éstas plantas asimilan el
CO2 atmosférico en la noche y lo
almacenan en forma de malato en las
vacuolas, la mayoría de éste es consumido
en el día con producción de CO2; esta
adaptación corresponde a la conservación
de agua durante el día en zonas desérticas
donde los estomas permanecen cerrados
equilibrando esta pérdida. La asimilación
de dióxido de carbono por plantas con
metabolismo C4 está acompañado por dos
carboxilasa; la enzima citoplasmática
PEPC que actúa principalmente durante la
noche cuando el estoma está abierto
formando el malato o citrato productos de
fijación , acumulados en las vacuolas, y la
Rubisco que actúa en el día cuando los
estomas están cerrados. Durante el día
cuando la PEPC está siendo regulada por el
malato que pasa al citoplasma se activa la
enzima Rubisco en el cloroplasto y
consume el CO2 proveniente de la
descarboxilación del malato a través del
ciclo C3.
ENSAYO 2:. OBSERVACIÓN Y
CUANTIFICACIÓN DE ESTOMAS .
Materiales
Material biológico: hojas de tres especies
vegetales Otros materiales: Láminas porta y
cubreobjeto, esmalte transparente, cinta
pegante transparente, agua.
Equipos: Microscopio
Metodología
Determinar el área foliar y observar los
estomas de tres especies vegetales, verificar
su presencia en el haz y en el envés, y
cuantificar. i) Realizar observación directa
de la epidermis, para ello rasgar la hoja,
tomar los bordes más delgados donde se
muestra la epidermis, realizar el montaje
para observación bajo microscopio y
cuantificar. ii) realizar observación de la
impresión de los estomas sobre películas de
esmalte; para ello colocar en el haz y envés
de la hoja una capa de esmalte transparente,
dejar secar por tres a cinco minutos, colocar
una nueva capa de esmalte y permitir secar,
repetir el procedimiento una vez más,
posteriormente para retirar la impresión
colocar cinta pegante transparente sobre las
capas de esmalte, retirar la cinta y realizar
el montaje para observación bajo
microscopio y cuantificación de estomas. Si
la hoja presenta alta densidad de tricomas
es necesario depilar y posteriormente
realizar el procedimiento de impresión de
los estomas. Es necesario observar la
epidermis superior e inferior y calcular el
número de estomas por cm2 . Realizar la
cuantificación en diez campos visuales para
posteriormente calcular el valor en toda la
superficie de la hoja.
Resultados
Al seguir el procedimiento nos
encontramos con que el área foliar
determinada por el método directo en el
cual se destacan las mediciones de hojas a
partir de las siluetas dibujadas en papel
milimetrado, y luego, se mide tomando el
área de figuras circulares o cuadradas es :
18.56 cm2; al hacer el conteo por cm2 ,
encontramos los siguientes datos: 1.5 cm2
el número de estomas que se halló fue: 35,
en 2.0 cm2= 48, en 3 cm2 = 65, en 4 cm2=
72, en 4.06cm2= 76, en 4.0 cm2=68. El
total de estomas encontrados en la parte de
atrás de la hoja fue de:360. En la parte de
adelante no se encontraron estomas.
Area # estomas
1,5 35
2 48
3 65
4 72
5 76
6 80
total area 21,5 376
ENSAYO 3:EXTRACCIÓN Y
DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO
DE CLOROFILA A, B Y TOTAL, Y
CAROTENOIDES EN TEJIDO FOLIAR.
Materiales.
Material biológico: 0,1 g de hojas frescas
sin venas Reactivos: Nitrógeno líquido,
acetona, agua destilada. Preparación de
acetona-agua 80% (v/v): La acetona debe
encontrarse libre de agua antes de preparar
la solución al 80%. Para eliminar el agua
presente en la acetona agregar 5g de un
agente secante como el Na2SO4 anhidro, a
un litro de acetona, dejando reposar un día
completo, y posteriormente filtrar (Vogel
1989). Preparar la solución de acetona al
80% en un balón aforado, almacenar en
frasco oscuro y almacenar a -10ºC para su
uso inmediato.
Otros materiales:, tubos de reacción tipo
Eppendorf de 2,0 mL, juego de
micropipetas (rangos de 2 a 20 µL, 20 a 200
µL y 100 a 1000 µL), puntas para
micropipetas (rangos de 2 a 20 µL, 20 a 200
µL y 100 a 1000 µL), vasos de precipitados,
celda de cuarzo para espectrofotómetro de
1 cm de paso óptico, gradilla para tubos de
2,0 mL, espátula, mortero, equipo personal
de seguridad (guantes, gafas, bata de
laboratorio), toallas de papel absorbente,
agitador magnético. Equipos: centrífuga,
espectrofotómetro, balanza analítica o
semianalítica, cabina de extracción,
agitador tipo vórtex, tanque para transporte
de nitrógeno líquido, plancha de agitación.
Metodología
Colectar hojas frescas, eliminar las venas
mayores y cortar en pedazos pequeños. En
un mortero ubicado sobre cama de hielo
colocar 1g del material vegetal fresco,
adicionar nitrógeno líquido sobre el
material vegetal y macerar hasta obtener un
polvo muy fino. Todo el proceso se debe
realizar en un sitio con baja luminosidad.
Del macerado y por triplicado tomar una
masa de 0,1g aproximadamente (anotar el
peso exacto de muestra), colocarla en tubos
de reacción oscuros de 2,0 mL debidamente
rotulados, y someter al siguiente proceso:
adicionar 1,5 mL de acetona 80% v/v a -
10ºC; mezclar en vórtex por dos minutos
asegurando el completo contacto del
material vegetal con la acetona; centrifugar
durante tres minutos a 10000 rpm y 4ºC;
retirar el sobrenadante usando una
micropipeta y colocarlo en el respectivo
frasco ámbar, rotular y cubrir con papel
aluminio; repetir el procedimiento hasta
obtener lavados sin coloración verde. El
sobrenadante debe quedar libre de
materiales en suspensión; de ser necesario
se debe filtrar o centrifugar. Transferir
cuantitativamente el sobrenadante
recuperado, que fue almacenado en el
frasco ámbar, a un balón aforado de 10 ó 25
mL de acuerdo al número de lavados y
aforar con acetona 80% (v/v) previamente
enfriada. Realizar lecturas de absorbancia a
las longitudes de onda 663nm, 647nm y 470
nm; si la absorbancia a 663 nm supera
0,600 realizar una dilución tomando 500 µL
y llevándola a 1mL con acetona al 80% v/v,
medir la absorbancia nuevamente. El
contenido de clorofilas y de carotenoides se
reporta como mg de clorofila o
carotenoides /g material vegetal. El blanco
analítico es acetona al 80% v/v.
Resultados.
Calculamos la absorbancia de las siguientes
ondas trabajadas 647nm, 470nm, 663nm, y
se obtuvieron los siguientes promedios de
absorbancia : 0.534, 0.743, 0.721,
respectivamente. Una vez obtuvimos el
promedio de absorbancia, utilizamos las
ecuaciones de Lichtenthaler, para obtener la
concentración de las clorofilas en mg/L; en
las cuales obtuvimos los siguientes
resultados:: Chl a:7.61 mg/L, Chl b: 7.69
mg/L, Chl T: 15.29 mg/L, y carotenoides:
3.63 mg/L. La concentración de clorofilas y
carotenoides en el material vegetal se
calcula multiplicando las concentraciones
obtenidas de las ecuaciones por el volumen
al cual se aforó, en este caso 0.0025 litros,
y dividiendo por la masa inicial de material
vegetal utilizado. Al realizar los cálculos
obtuvimos los siguientes resultados: la
concentración de clorofila a, clorofila b,
clorofila total y carotenoides fueron : 0.190
mg clorofila a/ mg material vegetal fresco,
0.192 mg clorofila b/mg material vegetal
fresco, 0.38225 mg clorofila total/ mg
material vegetal fresco, 0.090 mg de
carotenoides/ material vegetal fresco.
longitudde onda ABSORBANCIA
470 0,534
647 0,743
663 0,721
 La fotosíntesis se divide en dos procesos:
transducción de energía, en la cual actúan
los dos fotosistemas , reducción y fijación
de carbono.
Hay diferentes ciclos de fotosíntesis que se
han adaptado a las condiciones
ambientales, estos ciclos son: Ciclo C3, C4
y CAM .
En el proceso de fotosíntesis se articulan
tipo de Chl Contenido de Chl en mg/ L Contenido de Chl en gr varias aparatos que interactúan con
Chl a 7,61 0,14
Chl b 7,69 0,142
continuidad.
Carotenoides 3,63 0,04

Discusión.
Después de analizar los datos obtenidos en
la medición de la clorofila, podemos
observar que la mayor absorbancia que hay
en este tipo de hojas es para las ondas de
663, ya que el resultado es mayor en este
tipo de ondas. Respecto a las
concentraciones pudimos observar que en
la solución la concentración más alta es la
de clorofila b , aunque difieren de muy poco
con la clorofila a, esto puede explicar que la
absorbancia de la onda 663 sea mayor. El
cálculo de los estomas no ayuda a
reconocer la importancia del intercambio
gaseoso ya que estos órganos están
presentes en grandes cantidades.

Conclusiones.
La fotosíntesis es el proceso bioquímico
más importante.