UNIVERSIDAD NACIONAL HERMILIO VALDIZAN

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

E.P. INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

Asignatura : Microbiología de los Alimentos

Semestre Académico : II – 2019
Tema : Preparación de medios de cultivo
Docente : Mg. Eva Orizano Ponce
Jefe de práctica : ing. Y. Christina Malpartida Ortega
Integrantes : Basilo Capcha Yoel, Bravo Rojas Wilder, Espinosa Aquino
Yeisi, Guerra Barrueta José, Chinchilla Inga Augusto

GUÍA DE PRÁCTICA 03

1. INTRODUCCIÓN
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes
que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. La diversidad
metabólica de estos es tan grande que la variedad de medios de cultivo es enorme, no existiendo
un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos, ni siquiera refiriéndonos a las bacterias
con exclusividad, de las cuales son podemos encontrar 4 tipos:
MEDIOS GENERALES. Son aquellos que permiten el crecimiento de una gran variedad de
microorganismos.
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO. Son aquellos que favorecen el crecimiento de u
determinado tipo de microorganismo sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento de los demás.
MEDIOS SELECTIVOS. Son aquellos que permiten el crecimiento de un tipo de
microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás.
MEDIOS DIFERENCIALES. Son aquellos en los que se pone de manifiesto propiedades que
un determinado tipo de microorganismos posee.

2. OBJETIVOS
 Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de
los microorganismos
 Determinar la importancia principal que tiene los medios de cultivo en una
investigación.
3. REVISION BIBLIOGRAFICA

Medios de cultivo
Los medios de cultivo de microorganismos (hongos, bacterias, levaduras) son esenciales en el
Laboratorio de Fitopatología por lo que a diario se preparan y utilizan. Los medios de cultivo
son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas
óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. MOLINO.2009.
Condiciones que debe reunir un Medio de cultivo
 Para que los microorganismos crezcan adecuadamente, un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones:
 contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios
 disponer de oxígeno
 Temperatura adecuada
 Humedad
 PH.
 Exento de microorganismos contaminantes
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Disponibilidad de nutrientes en los Medios de cultivo.

Un medio de cultivo para que permita el crecimiento adecuado de microorganismos debe
contener como mínimo:
 Carbono
 Nitrógeno
 Azufre
 Fósforo
 Sales inorgánicas que suplan iones (K, Mg, Fe,Ca, etc.)
 Estos nutrientes generalmente se aportan con Extracto de malta, Peptona, Papa, extracto
de levadura, etc.
Esterilidad de los Medios de cultivo
Los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar otros microorganismos
puedan interferir con el crecimiento del que queremos cultivar. Los medios de cultivo se
esterilizan en el autoclave. MOLINO.2009.
Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en:
• Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen animal o
vegetal, las que son usualmente complementadas por la adición de minerales y otras sustancias.
En ellos no se conocen todos los componentes, ni las cantidades exactas presentes de cada uno
de ellos.
• Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una composición química definida
cualitativamente y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos de investigación. De
acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasifican en:
• Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el crecimiento de un tipo de
microorganismo en particular. Permiten aumentar el número de microorganismos de ese tipo.
Usualmente contienen una o más sustancias inhibidoras del crecimiento de los microorganismos
con excepción de los que se quieren cultivar.
• Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios
sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismos específicos.
• Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos derivados de la
actividad microbiana de los microorganismos. No contienen ningún tipo de sustancia con
actividad antimicrobiana. Permiten revelar características fisiológicas de los microorganismos.
Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de sus
constituyentes básicos, o por simple rehidratación de productos asequibles comercialmente
(medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el uso de los medios de cultivo
deshidratados porque, además de simplificar el trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad de
obtener resultados reproducibles. Para su preparación se deben tener en cuenta los siguientes
aspectos:
• Prepararlos sólo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedores que
suministren productos de calidad.
• Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y fisicoquímica
adecuada.
• Utilizar materiales de vidrio bien lavado y enjuagado con agua destilada o desmineralizada.
• Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilización. Nunca se deben
exceder las condiciones señaladas por el fabricante. RAFÍA Clavell 1992
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Almacenamiento de los medios de cultivo

Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados bajo las
condiciones que señale el fabricante. Generalmente se almacenan en un lugar fresco (entre 15 y
25°), con poca humedad y protegidos de la luz solar directa. Nunca se deben almacenar cerca de
autoclaves, hornos, ni otra fuente de calor o vapor. Los medios de cultivo deshidratados son
higroscópicos.
Cuando los envases de estos medios de cultivo deshidratados son abiertos para su uso inicial, se
debe tener la precaución de cerrarlos tan pronto como sea posible y mantenerlos bien cerrados
para prevenir la entrada de humedad.
La absorción de agua produce cambios de pH, formación de grumos, decoloraciones del polvo,
etc., lo cual indica que deben ser descartados porque pueden haber sufrido cambios químicos o
estar contaminados. Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado, puede
almacenarse a temperatura ambiente por un periodo máximo de 2 semanas protegido de la luz, o
por periodos mayores a 12 -15ºC. Sin embargo, almacenados bajo refrigeración entre 2 y 8°C se
prolonga la vida útil de los mismos, (nunca por debajo de 0ºC porque se destruye la estructura
del gel).
Los medios de cultivo se deben mantener en recipientes bien cerrados para evitar su
deshidratación y cuando se usa tapón de algodón, se debe colocar por encima una envoltura de
papel (Craft).
Otro punto importante a tomar en cuenta, es que cada lote de medio de cultivo preparado debe
pasar por un riguroso proceso de control de calidad, en donde se determinan sus propiedades
fisicoquímicas (apariencia, pH, etc.) y microbiológicas (esterilidad y promoción de crecimiento)
verificando que cumplan con los requisitos de calidad establecidos y por ende demostrar que
son aptos para su uso. RAFÍA Clavell 1992.
4. MATERIALES Y MÉTODOS
4.1. Insumos
 Agar saboraud
 Caldo peptonado
4.2. Materiales
 Placas
 Pipetas
 Matraz
 Balanza
 Tubos de ensayo

4.3. Métodos
4.3.1. Preparación de caldo peptonado al 1%
 Realizamos los cálculos correspondientes
 Pesar en un vidrio de reloj y mezclar en un frasco de 250ml con la
cantidad de agua destilada para preparar el volumen final.
 Adicionar en un frasco 90ml y luego adicionar en 5 tubos 9 ml de agua
peptona
 Tapar los frascos y los tubos, llevarlos al autoclave por 15 min y luego
a refrigerar hasta la próxima sesión.
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4.3.2. Preparación de agar saboraud

 Leer instrucciones del envase

 Pesar 47 g/L para 6 placas
 Homogenizar
 Ajustar pH a 5.4
 Acondicionar / codificar
 Esterilizar
 Enfriar a 50 °C
 Dispensar de 10-15ml c/u
 Rotular
 Almacenar (refrigeración)

5. RESULTADOS

El obtuvo un cultivo apto para utilizar. Se preparó 195ml de caldo peptona del cual se
utilizó 100ml del total añadiendo 10ml a diez tubos de ensayo y 90ml del agar
saboraund para seis placas Petri.

Cuadro 1: Se obtuvo los siguientes datos.

Muestra Parámetros Resultados

Caldo peptona pH 6.9
Color Regularmente lechoso
Consistencia Liquido
Agar saboraund pH 5.1
Color Marrón rojizo
Consistencia Gelatinosa o ligeramente
solido
Fuente: elaboración propia.

6. CONCLUSIONES
 Existen diferentes medios de cultivo para sembrar microorganismos, de los cuales se
preparó el caldo peptona y el agar saboraund.
 Aprendimos la importancia de preparar medios de cultivo, sus cálculos respectivos de
las cantidades necesarias para su preparación, los cuales sirven para identificar
diferentes microrganismo así como mohos, levaduras y bacterias.
 Se determinó la importancia principal que tiene los medios de cultivo en una
investigación en el campo de industria alimentaria ya que gracias a ello se puede hacer
el aislamiento de microorganismos tanto patógenos como benéficos, en el caso del
aislamiento de microorganismo benéficos se identifica con la finalidad para un uso
posterior.
 Los medios de cultivo son uno de los métodos más usados para el análisis de
microorganismos con varios fines, como el de multiplicación, identificación, entre
otros, se debe realizar de manera adecuada e higiénica para evitar la contaminación del
medio y la alteración de los resultados.
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7. RECOMENDACIONES
 Esterilizar los materiales que usaremos en la práctica de microbiología uno a dos
días antes, para que al momento de usarlo ya estén listos para la práctica.
 Pesar los medios sin jugar y cuidadosamente para no ocasionar un accidente
imprevisto.
 Obedecer al jefe de práctica del laboratorio de microbiología para no ocasionar
tragedias y desorden en el laboratorio.
 Usar correctamente los instrumentos del laboratorio, para no malograr o dañar un
equipo o instrumento del laboratorio de microbiología.

8. BIBLIOGRAFÍA
 MOLINO.2009. “Métodos de Fitopatologia”RAFÍA Clavell, L.; Pedrique de Aulacio,
M. 1992. Microbiología. Manual de Métodos Generales (2da edición). Facultad de
Farmacia. Universidad Central de Venezuela.
9. ANEXOS

FIGURA Nº1- Peso de la peptona FIGURA Nº2- Medimos 50ml de agua destilada
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FIGURA Nº3- Mezclado FIGURA Nº4- Calculando el PH

FIGURA Nº5- la muestra en tubos de ensayo FIGURA Nº6- Almacenado

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FIGURA Nº7- Pesado del agar FIGURA Nº8- Licuado

FIGURA Nº9- Esterilizado FIGURA Nº10- Rotulado