Elaboración de una crema bloqueadora a partir del extracto metanólico del liquen

Usnea subfloridana Stirton

Nicolás Barragán Novoa

2320112059

Universidad de Ibagué

Facultad de Ingeniería

Programa Ingeniería Industrial

Ibagué – Tolima

2018

1
Elaboración de una crema bloqueadora a partir del extracto metanólico del liquen
Usnea subfloridana Stirton

Nicolás Barragán Novoa

2320112059

Asistencia de Investigación para la obtención del título como Ingeniero Industrial

Director: Olimpo José García Beltrán

Biólogo, M.Sc., PhD.

Universidad de Ibagué

Facultad de Ingeniería

Programa Ingeniería Industrial

Ibagué – Tolima

2018

2
NOTA DE ACEPTACIÓN

3
AGRADECIMIENTOS Y DEDICATORIA

A mis padres por ser tan especiales y brindarme la oportunidad

de cursar esta formación, a mi familia por su comprensión y apoyo.
A los Docentes por su constante acompañamiento.

N. Barragán

4
“EL AUTOR ES RESPONSABLE DE LAS IDEAS EXPUESTAS EN EL
PRESENTE TRABAJO”

(SRT 12 RES. 02 – 2013)

5
 CONTENIDO

Pág.

1. Introducción .............................................................................................................. 13

2. Planteamiento del problema...................................................................................... 14

2.1. Descripción del problema ......................................................................................... 14

2.2. Pregunta de investigación ......................................................................................... 14

3. Justificación .............................................................................................................. 14

4. Objetivos ................................................................................................................... 16

4.1. Objetivo general ........................................................................................................ 16

4.2. Objetivos específicos ................................................................................................ 16

5. Marco de Referencia ................................................................................................. 16

5.1. Marco conceptual ...................................................................................................... 16

5.1.1. Rayos ultravioleta ................................................................................................ 16

5.1.2. Efectos secundarios del sol .................................................................................. 19

5.1.3. Protectores solares................................................................................................ 20

5.1.4. Factor de protección solar (FPS) .......................................................................... 20

5.1.5. Liquen .................................................................................................................. 21

5.2. Marco Teórico........................................................................................................... 23

6
 6. Metodología .............................................................................................................. 25

6.1. Área de estudio ......................................................................................................... 25

6.2. Diseño experimental ................................................................................................. 25

6.2.1. Recolección del material vegetal ......................................................................... 25

6.2.2. Identificación del material vegetal ....................................................................... 25

6.2.3. Métodos de extracción de los metabolitos secundarios ....................................... 25

6.2.4. Análisis de metabolitos secundarios .................................................................... 25

6.2.5. Análisis del factor de protección solar (FPS) ....................................................... 26

6.2.6. Análisis de la varianza para validación estadística .............................................. 27

6.2.7. Estructuración de la crema ................................................................................... 28

7. Resultados ................................................................................................................. 34

7.1. Análisis del factor de protección solar (FPS) ........................................................... 40

7.2. Análisis de las propiedades fotoportectoras de los metabolitos presentes en líquenes

de la especie U. subfloridana. .............................................................................................. 48

7.3. Análisis de la varianza para validación estadística ................................................... 49

8. Conclusiones ............................................................................................................. 55

9. Recomendaciones ..................................................................................................... 57

10. Referencias Bibliográficas ........................................................................................ 58

7
11. Anexos ...................................................................................................................... 62

8
LISTA DE ABREVIACIONES

HCl: Ácido clorhídrico

H2SO4: Ácido sulfúrico

Na2SO4: Sulfato de sodio anhidro

C4H6O3: Anhídrido acético

NaOH: Hidróxido de sodio

FeCl3: Cloruro férrico

ºC: Grados centígrados

g: Gramo

L: Litro

ml: Mililitro

cm: Centímetros

mm: Milímetros

nm: Nanómetro

msnm: Metros sobre el nivel del mar

9
 LISTA DE TABLAS

Pág.

Tabla 1. Características de las diferentes radiaciones.................................................... 18

Tabla 2. FPS según su tipo. ............................................................................................. 21

Tabla 3. Relación del efecto eritemogénico (EE) vs Intensidad de la radiación (I) a una
longitud de onda (λ) descrita por (SAYRE, 1979). ............................................................... 27

Tabla 4. Estructura de metabolitos. ................................................................................. 34

Tabla 5. Absorbancia promedio. Resultado de FPS metabolitos 0,02 mg/ml. ................ 41

Tabla 6 Absorbancia promedio. Resultado de FPS 0,02 mg/ml de dióxido de titanio. ... 42

Tabla 7. Absorbancia promedio. Resultado de FPS metabolitos 0,2 mg/ml. .................. 43

Tabla 8. Absorbancia promedio. Resultado de FPS 0,2 mg/ml de dióxido de titanio. .... 43

Tabla 9. Absorbancia promedio. Resultado de FPS metabolitos 0,4mg/ml. ................... 45

Tabla 10. Absorbancia promedio. Resultado de FPS de dióxido de titanio 0,4 mg/ml. .. 46

Tabla 11. Absorbancia promedio. Resultado de FPS de metabolito 0,1 mg/ml +dióxido
de titanio 0,1 mg/ml. ............................................................................................................. 47

Tabla 12. Resumen de rresultados FPS para cada una de las concentraciones medidas.
.............................................................................................................................................. 48

Tabla 13. Descriptivos. .................................................................................................... 50

Tabla 14. Prueba de homogeneidad de varianzas. .......................................................... 51

10
Tabla 15. ANOVA. ........................................................................................................... 52

Tabla 16. Comparaciones múltiples. ............................................................................... 53

LISTA DE FIGURAS

Pág.

Figura 1. Tipo de radiaciones del espectro solar. ............................................................ 19

Figura 2. Diagrama de preparación.................................................................................. 31

Figura 3. Etiqueta del producto........................................................................................ 33

Figura 4. Análisis de varianza. ......................................................................................... 49

Figura 5. Gráfico de medias ............................................................................................. 54

11
 Resumen

Colombia es un país rico en diversidad de especies de flora, faunay recursos naturales,

ocupando el segundo lugar en el mundo entre los países mega biodiversos y con mayor
riqueza de especies (grupos de helechos, musgos y líquenes) en la región neotropical. Al
interior del país, se identifica la región Andina o cordillerana como la de mayor diversidad
registrando un número de 1,396 especies. En el grupo de los líquenes, se han identificado
más de 800 metabolitos secundarios, entre los que se encuentran los compuestos úsnicos,
los cuales han sido de gran interés por su alto potencial como analgésicos,
antiinflamatorios, antitumorales y absorbentes de la luz ultravioleta (UV). El objetivo de
este estudio fue realizar la extracción, separación, purificación e identificación química de
la familia de metabolitos secundarios mayoritarios presentes en el liquen U.
Subfloridana,aprovechar las propiedades de absorción de la luz UV y elaborar una
cremapara determinar su capacidad fotoprotectora por análisis in vitro del factor de
protección solar (FPS), brindando un producto con filtro natural necesario para la
protección diaria del sol.

Palabras Clave: Líquenes, cromatografía, U. subfloridana,factor de protección solar,

rayos ultravioleta.

12
 1. Introducción

El cambio climático es una de las amenazas que tiene el mundo, como consecuencia de
inadecuados procesos agrícolas, de transformación de combustibles fósiles, fábricas y
producción industrial, los cuales durante muchos años no han sido desarrollados de forma
amigable con el medio ambiente.

Según la Organización Mundial de la Salud (2016), el reconocimiento de los efectos

directos en la salud humana fue un estímulo muy importante para llegar al Protocolo de
Montreal, que tiene por objeto reducir la emisión de contaminantes que debilitan la capa de
ozono. Aunque este acuerdo internacional está demostrando su gran eficacia para reducir
los riesgos a largo plazo, la radiación ultravioleta sigue siendo un peligro para la salud.

Actualmente, se ha registrado según la Liga Contra el Cáncer (2016) un crecimiento

exagerado de cáncer de piel y envejecimiento prematuro, aumenta cada vez más el número
de personas diagnosticadas con cáncer o que recurren a especialistas para intervenir las
secuelas, todas estas causadas principalmente por la falta de un filtro natural que tenga los
mismos beneficios de los existentes para laprotecciónde la piel ante las exposiciones
solares.

Para esto, existen varias opciones de prevenir estos problemas de salud y son
protegiendo la piel sea a través de vestuario adecuado, restricciones de horario de
exposición y los bloqueadores solares, siendo estos últimos los más aconsejables de uso
diario debido a que el reflejo de los rayos UV son acumulativos en la piel.

Este trabajo, presenta la elaboración de una crema bloqueadora de nombreLiquen

Sunblock con un filtro natural con iguales beneficios de los productos existentes, resaltando
una composición a base de líquenes y otros ingredientes como dióxido de titanio, aceites y

13
esencias, lo cual es una alternativa innovadora en la fabricación de productos de protección
solar como en el aprovechamiento y reutilización de los recursos naturales.

2. Planteamiento del problema

2.1.Descripción del problema
Debido al incremento de casos de cáncer de piel por el desgaste en la capa de ozono y el
consecuente incremento en la radiación captada por especies vivas, se planteó la
preparación de una crema protectora a partir de propiedades foto protectora de los líquenes,
los cuales son capaces departicipar en reacciones fotoquímicas para consumir la energía
aportada por los rayos UV y proteger al organismo humano de sus efectos1.

2.2.Pregunta de investigación

¿Tendrán losmetabolitos secundarios mayoritarios presentes en líquenes de la especie U.

subfloridana, propiedadesfoto protectoras?

3. Justificación

La energía solar es indispensable para la vida y durante millones de años ha brindado a

los seres vivos el milagro de vivir, sin embargo, un exceso de esta sin la protección
adecuada puede tener efectos perjudiciales para la salud tanto a corto como a largo plazo.
Debido al aumento exponencial de la contaminación ha impactado drásticamente en el
cambio climático y efectos sobre la capa de ozono. Además, proyecciones muestran que

1
ESCARLET, Madelein. (2012). Determinacion de la absorbancia de compuestos susceptibles a la
radiación UV en muestras de líquenes y briófitos del páramo Mucubají – Mérida. Universidad Central de
Venezuela.

14
durante los próximos 20 años nuestros suelos, bosques y otros recursos naturales
experimentaran un daño creciente, como resultado se verán amenazados recursos vitales
como el agua, suelo, cambio climático, pérdida de la biodiversidad y el agotamiento de la
capa de ozono2.

El ozono se encuentra en cantidades de pocas moléculas por millón de partículas de aire

(0,01%). Sin embargo, cumple un rol esencial en la protección de la radiación UV3.La
disminución de la capa de ozono estratosférico y la exposición a radiaciones UV están
asociadas a un aumento del cáncer de piel, cataratas y alteraciones del sistema inmunitario4.

Según la Liga contra el cáncer (2016), el cáncer de piel es el más frecuente de todos los
tipos de cáncer y probablemente representa más de 50% de todos los casos. El número de
casos nuevos de melanoma en Colombia ha venido aumentando levemente en los últimos
40 años. En Colombia se presentan 1.488 casos nuevos cada año de melanoma, de los
cuales 328 mueren por esta causa y para el 2017 se proyectó un número de 4.291 casos
nuevos5.

Enel desarrollo de este trabajo se presenta la elaboración de un bloqueador solar con un

filtro natural que tiene los mismos beneficios de los existentes, a base de productos
naturalesdelíquenes, lo cual es una alternativa innovadora en la fabricación de productos de
protección solar. Para la fabricación y evaluación del bloqueador solar se analizó su factor
de protección solar (FPS) por medio de espectrofotometría siguiendo la metodología in
vitro.

2
SOLÍS, Luz María; LOPEZ, Jerónimo. (2003). Antecedentes Historicos de la Contaminación Ambiental,
2003). Mexico. P. 1
3
TODARA, R; PA, Newman. (2005). Introduction to stratospheric ozone. Recuperado de:
https://hyperion.gsfc.nasa.gov
4
ALBRITTON DL, AUCAMP PJ, MEGIE G, WATSON RT. (1994). Scientific assessment of Ozone depletion. En:
World Metereological Organization.
5
LIGA CONTRA EL CANCER. (2016). Cancer de Piel. Recuperado
dehttp://www.ligacontraelcancer.com.co/cancer-de-piel/

15
 4. Objetivos
4.1.Objetivo general

Elaborar una crema bloqueadora a partir del extracto metanólico del liquenU. subfloridana.

4.2.Objetivos específicos
Preparar la crema bloqueadora solar con extracto de liquen U. subfloridana
mezclando con los ingredientes escogidos.
Analizar el factor de protección solar (FPS) por medio de espectrofotometría UV-
Vis.

5. Marco de Referencia
5.1.Marco conceptual

5.1.1. Rayos ultravioleta

El sol es la más grande fuente de energía para los seres vivos la cual hace posible la vida
como la conocemos, la energía que produce el sol llega a la tierra en forma de radiación
pero la acción de la radiación solar en el ser humano puede traer efectos secundarios
perjudiciales para la salud.

Las cantidades significativas de radiaciones alcanzan la superficie de la tierra bajo la

forma de rayos ultravioletas visibles (UV-Vis) e infrarrojos (IR), estas categorías pueden
separarse en grandes categorías según su longitud de onda, de la más pequeña hasta la más
grande. Se distinguen los rayos ultravioleta C (UV-C) cuya longitud de onda comprende

16
entre los 200 y los 290 nanómetros (nm), los rayos ultravioleta B (UV-B) de 290 a 320 nm,
los rayos ultravioleta A (UV-A) de 320 a 400 nm, la radiación visible y los IR6.

Las radiaciones solares terrestres están constituidas en un 5% por radiaciones

ultravioletas y en un 95% en radiaciones visibles e infrarrojas. Las radiaciones UV-A
representan un 98% de las radiaciones ultravioleta. Las radiaciones UV-B poseen mayor
energía pero penetran poco en la piel. A corto plazo los UV-B son responsables del
enrojecimiento de la piel y a largo plazo de canceres de piel. Los UV-A son de menor
energía que los UV-B pero penetran más profundamente en la piel, sus efectos son
acumulativos a largo plazo yson responsables del envejecimiento cutáneo modificando
localidad de la fibras elásticas. Además, provocan las alteraciones de la epidermis que
participan en la génesis de cáncer de piel. Los rayos UV-C son los más peligrosos de todos
pero afortunadamente estos rayos son filtrados o bloqueados por la capa de ozono y no
llegan a la tierra (Tabla 1 y Figura 1)7

6
CASAS, Marco Antonio. (2013). Elaboración de una crema dermoprotectora para contrarrestar los daños
causados por los rayos uv. En: revista Universidad Nacional Abierta y a Distancia (UNAD). P. 9

7
VALDÉS, Rebeca. (2012). Guía para el uso y elección de protectores solares y componentes para la
industria cosmética y consumidores finales. En: Revista Universidad Autónoma de Mexico. P. 35-37

17
Tabla 1.Características de las diferentes radiaciones.
Tipo de radiación
Rayos UV-C
Rayos UV-B (0,1% de la
energía electromagnética total
que alcanza la tierra)
Rayos UV-A (4,9% de la
energía electromagnética total
que alcanza la tierra)
Luz visible (39% de la
energía electromagnética total
que alcanza la tierra)
Infrarrojos (39% de la
energía electromagnética total
que alcanza la tierra )
Fuente: Valdés (2012).
Espectro Características
200-290 Son absorbidos por la capa de
nm ozono
290-320 Poseen una intensa actividad físico-
nm patológica sobre la piel.
No penetran profundamente las
capas cutáneas. Son en gran parte
absorbidos justos encima de la dermis.
320-400 Poseen una energía mucho menor
nm que los UV-B. Sus efectos biológicos
son acumulativos (efectos a largo
plazo).
Penetran profundamente la dermis
Intervienen en los fenómenos del
foto envejecimiento y en la formación
de ciertos canceres de piel
400-700 La parte visible del espectro solar
nm puede ser nociva a nivel celular.
Juega un papel importante en elfoto
envejecimiento cutáneo.
700-3000 La acción prolongada del calor
nm puede provocar serios efectos
secundarios en la piel
18
Figura 1. Tipo de radiaciones del espectro solar.

Fuente: Guía para el uso y elección de protectores solares y componentes para la industria
cosmética y consumidores finales (2012).

5.1.2. Efectos secundarios del sol

Aunque el color de la piel bronceada se asimila a la buena salud, el sol puede provocar,
dos tipos de trastornos: los visibles y los invisibles. Los rayos infrarrojos dan sensación de
calor pero no queman; los rayos UV-A ocasionan el fenómeno de la pigmentación
inmediata. Las personas que han abusado del sol pueden experimentar, con el tiempo,
manchas en la piel, arrugas y cataratas, y con el tiempo cáncer cutáneo o tumoraciones
superficiales.

A largo plazo, los rayos UV-B son absorbidos por el ADN y causan alteraciones en el
genoma, los rayos UV-A también se absorben y se transforman en radicales libres, que
alteran el material genético y saturan los sistemas defensivos de la piel. Por tanto, cuando

19
las exposiciones solares son excesivas y los protectores están desbordados, las células
anormales proliferan y acostumbran a formar carcinomas o melanoma8.

5.1.3. Protectores solares

Los protectores solares son preparados de origen químico, físico y biológico, se aplican
de forma tópica y previenen los efectos nocivos del sol una vez aplicados sobre la piel. Con
ellos se intenta prevenir la inflamación, manchas, epiteliomas, melanomas, eritema solar y
reducir el riesgo de cáncer cutáneo, prevenir elfoto envejecimiento y reducir el riesgo de
fotodermatosis y/o fotosensibilizaciones. En el mercado se comercializan diferentes
presentaciones: cremas, lociones, geles, barras, aerosoles, bálsamos labiales y algunos otros
productos9.

5.1.4. Factor de protección solar (FPS)

El FPS es un índice que indica el tiempo que podemos exponernos al sol sin riesgo de
quemaduras. Cuanto más alto es el FPS, más alta es la protección de los rayos solares. Si
una persona es capaz de estar 20 minutos expuesta al sol sin quemarse, la elección de un
fotoprotector 8 le supondrá una protección 8 veces superior10.

El FPS se obtiene del "cociente entre la mínima cantidad de energía necesaria para
producir eritema mínimamente detectable (dosis mínima eritema: MED) en piel con
fotoprotección y la energía requerida para producir la MED sin la aplicación del
fotoprotector".

8
CASAS, Marco Antonio. (2013). Elaboración de una crema dermoprotectora para contrarrestar los daños
causados por los rayos uv. En: revista universidad nacional abierta y a distancia (UNAD). P. 9

9
VALDÉS, Rebeca. (2012). Guía para el uso y elección de protectores solares y componentes para la
industria cosmética y consumidores finales. En: Revista Universidad Autonoma de Mexico. P. 35-37

10
Ibíd., P. 9

20
Ecuación FPS

Esto permite clasificar a los fotoprotectores en 5 tipos según su nivel de fotoprotección

según la Tabla 2:

Tabla 2. FPS según su tipo.

Tipo FPS
Bajo 2-4-6
Medio 8-10-12
Alto 15-20-25
Muy Alto 30-40-50
Ultra 50+

Fuente: Metodos empleados para deterinar el grado de proteccion de los fotoprotectores

frente a la radiación ultravioleta (2010).

El sistema de numeración de los factores de protección no es lineal. Los valores bajos

del FPS poseen una capacidad de reducción de la radiación, en una
gradientecomparativamente mayor a los valores altos, esto quiere decir que un FPS de 15
protege más del 90%, uno de 30 más del 96% y uno de 60 más del 98%11.

5.1.5. Liquen

Un liquen es una asociación simbiótica entre un hongo y un organismo fotosintético

como un alga o una cianobacteria. En el caso de los líquenes la simbiosis es de tipo
mutualista, ya que ambos organismos se benefician por la asociación, aportándose

11
VERAMATUS, Carlos E. (2010). Metodos empleados para deterinar el grado de proteccion de los
fotoprotectores frente a la radiación ultravioleta. En: Revista Universidad Peruana Cayetano Herededia
(UPCH). P. 5-6.

21
mutuamente protección y alimento12.El hongo, en el entorno liquénico, es incapaz de
obtener hidratos de carbono de otra fuente que no sea el alga, de modo que la simbiosis
liquénica implicaría un mecanismo de transferencia de carbohidratos, como productos
resultantes de la fotosíntesis del alga, desde el fotobionte al micobionte13.

Los líquenes son seres enigmáticos y complejos, el más común son los hongos
ascomicetos y un socio fotosintético (fotobionte), unicelular o cenobial, que es el que
sintetiza los azúcares necesarios para el metabolismo, liberando oxígeno en el proceso que
pueden ser cianobacterias de color verde azulado (procariotas) y/o algas verdes unicelulares
(eucariotas)14.-

El número de especies conocidas de líquenes se estima entre 17.500 a 20.0000, con

cerca de 1.500 hongos liquenícolas15. Estos tienen la capacidad de desarrollarse sobre
cualquier tipo de sustrato ya sea inherente u orgánico, además de cualquier tipo de altura, la
mayor diversidad la alcanzan en los trópicos y además son cosmopolitas, pueden
encontrarse en ambientes terrestres y acuáticos16.Los distintos colores que tienen los
líquenes son debidos a la acumulación de diversos metabolitos secundarios, llamados
substancias liquénicas o ácidos liquénicos, que son compuestos químicamente complejos,
actualmente se conocen más de 800 tipos.

12
HILL, D. Jackson. (1980). The physiology of lichens. En: Lichenology: Progress and Problems, Academic
Press, New York. New York
13
CRISTOBAL, Mara Sacristán. (2010). Acción de lectinas fúngicas sobre la estabilidad del cloroplasto y el
reconocimiento de fotobiontes de líquenes. En: Revista Universidad Complutense de Madrid. P.4
14
BARRENO, Eva; Pérez, Sergio. (2003). Líquenes de la Reserva Natural Integral de Muniellos. Asturias.
15
KIRK, P.M.; CANNON, P.F.; MINTER, D.W. (2008). Dictionary of the Fungi. Editorial Cabi. 10th edition.
Europe-UK
16
BOUSTIE, J.; GRUBE, M. (2005). Lichens a promising source of bioactive secondary metabolites. P .
273-287.

22
5.2.Marco Teórico

Los líquenes se han empleado como alimentos por los animales y por el hombre, para
fabricar perfumes, tintes para tejidos, elaboración de bebidas, decoración y medicina
tradicional. Los líquenes del género Usnea también se han utilizado para tratar
enfermedades del cuero cabelludo en las Islas Británicas. En Irlanda el liquen U.
subfloridana fue utilizado para realizar una loción especial para los ojos adoloridos, junto
con otras mezclas17.

Basado en diversos estudios se ha encontrado que los pigmentos hallados en hongos

liquenizados y no liquenizados, logran absorber una radiación UV-B (320-400 nm) y
eliminan los radicales libres formados por esta radiación18.

Los compuestos secundarios tales como los ácidos carboxílicos fenólicos, las xantonas,
los dibenzofuranos como el ácido úsnico y las antraquinonas, que ocupan la corteza de los
líquenes y que son sintetizados por éstos a partir de las vías del ácido mevalónico y del
acetato polimalonato, presentan absorbancias que oscilan entre los 200 y 400 nm 19.

Constituyentes como el ácido úsnico fue aislado en 1844 por Knopp20 y quizá sea el
metabolito liquénico más estudiado y uno de los pocos que se ha comercializado. Es un
efectivo inhibidor de las bacterias grampositivas, por ello, su mayor poder curativo reside
en que combate las infecciones, el ácido úsnico es empleado en medicina, perfumería y

17
ILLANA-ESTEBAN, C. (2012). Líquenes usados en medicina tradicional.
18
JAGGER, J. (1967). Introduction to Research in UV Photobiology. P.57
19
HARBORNE, J.B. (1964). Biochemistry of phenolic compounds. Academic.

20
MARTINO, D. (2015). Estudio Químico del liquen Flavopunctelia Flaventior (Stirt.) Hale. Universidad
Nacional de Ingeniería. Chile. P.28

23
cosmética, como parte de la composición de cremas, pasta dentífrica, enjuagues bucales,
desodorantes y protectores21.

Buffoni, Hall; Bornman, JF; Björn, LO (2002),identificaron cambios en el contenido

fenólico y acumulación diferencial de pigmentos de un liquen fruticoso (Cladonia
arbuscula ssp. mitis) como respuesta a la exposición a rayos UV en condiciones de
laboratorio; encontraron que los líquenes expuestos a esta radiación presentaron un
incremento en la acumulación de compuestos absorbentes de radiación UV 22.Algunas de las
sustancias liquénicas más comunes y conocidas son: ácidos úsnicos, vulpinico y
rizocarpico, y en la médula los ácidos lecanorico, giroforico, norestictico, salazinico,
tamnolico, barbatico, etc23.

Resultados indican que las especies del género Usnea presentan cierta absorbancia en el
rango de longitudes de onda UV-B (280-320nm.) y el máximo de absorbancia se encuentra
en las longitudes de onda correspondientes al rango UV-C (200- 280nm). Dado el
incremento de la radiación UV, estos organismos han desarrollado mecanismos protectores
contra los efectos, uno de estos es la acumulación de compuestos absorbentes de radiación
UV, los cuales son principalmente fenólicos24.

En el presente trabajo se usó la especie de liquen U. subfloridana para diseñar a partir de

esta, una crema dermatológica con funciones bloqueadoras contra rayos UV emitidos por el
sol, que sin un cuidado preventivo pueden provocar enfermedades en la piel y causar
problemas en el futuro.

21
Ibid., P.5
22
BUFFONI, Hall; BORNMAN, JF; BJÖRN, LO. (2002). Alteraciones inducidas por los rayos UV en el
contenido de pigmentos y la penetración de luz en el liquen fruticoso Cladonia arbuscula ssp. Mitis
23
ESCARLET, Madelein. (2012). Determinacion de la absorbancia de compuestos susceptibles a la
radiación uv en muestras de líquenes y briófitos del páramo mucubají – mérida. Universidad Central De
Venezuela
24
FABÓN, G; MARTINEZ, J; TOMÁS, R; NUÑEZ, E. (2010). Effects of enhanced UV-B radiation on
hydroxycinnamic acid derivatives extracted from different cell compartiments in aquatic liverwort
Jungermanniaexsertifolia subsp. En: Cordifolia. Physiologia Plantarum 140. P. 269–279

24
 6. Metodología
6.1.Área de estudio

El área de estudio corresponde a la parte alta del río Combeima, corregimiento de

Juntas, entre el sector conocido El Silencio y El Rancho, de la ciudad de Ibagué en el
departamento de Tolima.

6.2.Diseño experimental
6.2.1. Recolección del material vegetal

La recolección del material liquénico se realizó en la parte alta del río Combeima,
corregimiento de Juntas, entre el sector conocido el Silencio y el Rancho, de la ciudad de
Ibagué en el departamento de Tolima. Una vez colectado se llevó al laboratorio de Síntesis
Orgánica de Productos Naturales, de la Universidad de Ibagué.

6.2.2. Identificación del material vegetal

Muestras del material liquénico recolectado fueron enviadas al Herbario de la

Universidad Distrital de Colombia para su identificación taxonómica hasta el nivel de
especie.

6.2.3. Métodos de extracción de los metabolitos secundarios

El material del liquen U. subfloridana, fue secado a temperatura ambiente y se trituró

manualmente. Un total de 500 g fueron sometidos a extracción por maceración en frío con
metanol en un recipiente de 5 L, durante 15 días con agitación diaria. Cada tres días el
extracto se concentró a presión reducida en el rotaevaporador. El extracto obtenido fue
estudiado por cromatografía de capa fina (CCF) para obtener las fases de separación.

6.2.4. Análisis de metabolitos secundarios

25
 Se empleó un sistema Thermo Scientific Dionex Ultimate 3000
UHPLC/ORBITRAP/MS/MS para la identificación química de los metabolitos secundarios
mayoritarios presentes en el liquen U. subfloridana.

6.2.5. Análisis del factor de protección solar (FPS)

Las formulaciones preparadas con el extracto de U. subfloridanase sometierona análisis

por espectrofotómetro en la región de la radiación UV (290-320 nm), principal responsable
de los daños en la piel. El análisis en el espectrofotómetro son parte de la metodología de
comprobación del FPS in vitro descrita por Mansur J.(1986)25.

Se prepararon diluciones sucesivas de las formulaciones de U. subfloridana en etanol al

70% hasta la concentración de 0,02,0,2 y 0,4 mgde la formulación por ml de la solución.
Estas diluciones se analizaron en el espectrofotómetro y los resultados obtenidos fueron
utilizados en la siguiente ecuación para el cálculo del FPS.

Dónde:
CF = factor de la corrección (igual a 10)
EE (λ) = efecto eritemogénico de la
Radiación de longitud de onda λ;
I(λ) = la intensidad del sol en la longitud de onda
Abs (λ)= absorbanciade la solución en la longitud de onda

25
MANSUR J, BREDER M, MANSUR M, AZULAY R. (1986). Determinación del factor de protección solar
(SPF) por espectrofotometria. En: An. Bras. Dermatol. P. 121-124.

26
Los valores de EE x I son constantes. Fueron determinados por (SAYRE, 1979)26como se
muestra en la Tabla 3:

Tabla 3. Relación del efecto eritemogénico (EE) vs Intensidad de la radiación (I) a una
longitud de onda (λ) descrita por (SAYRE, 1979).

Longitud de onda EE x I
(nm)
290 0,0150
295 0,0817
300 0,2874
305 0,3278
310 0,1864
315 0,0839
320 0,0180

Fuente:SAYRE (1979)citado por el articulo determination of sun protection factor (SPF) of

suncreens by ultraviolet spectrophotometry (2004).

6.2.6. Análisis de la varianza para validación estadística

El análisis de la varianza estudia el efecto de una o varias variables independientes

denominadas factores sobre la variable dependiente. Es una generalización del contraste de
medias para dos muestras con datos independientes y se aplica en las situaciones en las que
sean tres o más de tres los grupos que se quieren comparar27, este análisis fue aplicado a las

26
SAYRE. (1979). Comparación de las pruebas in vivo e in vitro de las fórmulas de protección solar.En:
Photochem. Photobiol. , Oxford, V. 29. P. 559-566

27
ORDAS SANZA, J.A., MELGAR HIRALDO, M.D.C., RUBIO CASTAÑO, C.M. métodos estadísticos y
econométricos en la empresa y para finanzasEn: Departamento de Economía, Métodos Cuantitativos e
Historia Económica Universidad Pablo de Olavide.

27
diferentes muestras para analizar la posible existencia de diferencias en las absorbancias
medias de las muestras según el tipo de concentración y el tipo de formulación utilizado.

Paraconfirmar resultados del ANOVA e identificar si existen medias que difiere otras se
utilizó un tipo particular de contrastes denominados comparaciones múltiples post hoc o
comparaciones a posteriori. Estas comparaciones permiten controlar la tasa de error al
efectuar varios contrastes utilizando las mismas medias, es decir, permiten controlar la
probabilidad de cometer errores tipo I.

6.2.7. Estructuración de la crema

6.2.6.1 Selección de la materia prima

Con base en la preparación de una crema dermatológica natural casera, fue importante
escoger materia prima de primera calidad, para que el producto final contaracon las mejores
características ycon filtro natural sin causar efectos secundarios sobre la piel.

6.2.6.2 Ingredientes

Además de tener en cuenta el material liquénico como filtro natural y principal

compuesto, se usaron otros ingredientes como dióxido de titanio, aceites y esencias, lo cual
es una alternativa innovadora en la fabricación de productos de protección solar.

• Dióxido de titanio: El dióxido de titanio en forma de nano-partículas se utiliza como

decolorante en cremas y lociones, y actualmente está aprobado como filtro UV para
protectores solares.
• Cera de abejas: En cosmética, se utiliza en forma de cremas o de ungüentos, debido a
las propiedades antiinflamatorias y cicatrizantes de muchos de sus componentes.

28
• Lanolina: La lanolina es una cera natural producida por las glándulas sebáceas de
algunos mamíferos, especialmente del ganado ovino, preparada y que se aplica para
diversos usos industriales, farmacéuticos y domésticos. Se la considera un potente
hidratante y emoliente. Es pura, hipo alergénica y bacteriostática. Como es aplicable
sobre pieles secas, ásperas y agrietadas, se utiliza como base o excipiente de pomadas,
ungüentos, cosméticos, lubricantes.
• Aceite mineral: Es la base de muchos cosméticos, cremas y productos de cuidado
corporal, y es que entre sus beneficios resaltan sus propiedades pata tratar problemas
tópicos de la piel.
• Manteca de cacao: Es una excelente opción para el cuidado de nuestra piel pues tiene
la propiedad de penetrar profundamente en los distintos niveles epidérmicos,
proveyendo de lozanía y brillo.
• Aceite de almendras: Obtenido a partir de almendras dulces. Contiene sustancias
vitales (vitaminas A, B y E), minerales y oligoelementos (magnesio, potasio, calcio,
fósforo, hierro, zinc y cobre). Deja una fina película protectora sobre la piel y tiene
grandes propiedades nutritivas. Las vitaminas E y C protegen las membranas
celulares.
• Propilparabeno y metilparabeno: Los parabenos, o parabenes, son un grupo de
productos químicos utilizados como conservantes en la industria cosmética y
farmacéutica, efectivos en variadas formulaciones. Estos compuestos y sus sales son
usados principalmente por sus propiedades bactericidas y fungicidas.
• Vitamina E: Su función principal en las células es actuar como antioxidante, se ha
considerado que la adición directa de vitamina E sobre la piel debe ejercer un efecto
protector. Además, el alfa-tocoferol impide la penetración de la radiación ultravioleta,
es decir, actúa en la piel como un filtro solar. De hecho, está demostrado que la
aplicación de vitamina E previene el desarrollo de cáncer de piel inducido por esa
radiación.
•

29
 6.2.6.3 Preparación

Para una proporción de 50 g de crema bloqueadora, se colocaron 30 g delanolina

(hidratada) equivalente a un 60% de la formulación base, junto a 10 g de aceite de
almendras (20%), 5 g de manteca de cacao (10%) y 5 g de cera de abejas (10%) dejando la
mezcla en baño maría (temperatura de 70ºC - 80°C), con agitación constante hasta la
homogenización; cuando toda la mezcla se encontraba en estado líquido se dejó reposar a
temperatura ambiente y poco a poco se adicionaron gotas de aceite mineral hasta que tomó
una textura oleosa;posteriormente, se adicionaron100 mg del dióxido de titanio y 100 mg
del extracto de metabolitos de U. subfloridanaque se mezclaron hasta lograr una
formulación totalmente homogénea, luego se adicionaron los preservantes, propilparabeno
y metilparabeno y por finalmente lavitamina E. Cada uno de estos ingredientes fue
agregado solamente cuando el anterior logró el punto de incorporación total, es decir,
solamente cuando la mezcla fuera homogénea.

Al tener la mezcla se continuó agitando a temperatura ambiente y pasados 40 minutos se

envasóen un recipiente estéril para verificar la textura yhomogeneidad de los componentes
(Figura 2).

30
Figura 2. Diagrama de preparación.
50 gr

Lanolina (hidratada) Aceite

Liquen TiO Metil…
30 g
Manteca de Cacao 5 g Mineral ₂ Propil…
Cera de abejas 5 gr
Aceite de almendras V.
10 gr E
70°C - 80°C Crema base Crema base
liquida Textura deseada Crema

aa

Producto Mezcla
homogénea
final

Fuente: Autor.

6.2.6.4 Características del producto

La crema bloqueadora, está diseñada para evitar el daño en la piel causado por los
peligrosos rayos UV-A y UV-B gracias a la combinación de extracto de metabolitos del
liquen U. subfloridana que protege los rayos UV-B y dióxido de titanio que protege UV-A.

Características físicas: Color: Blanco

Textura: Blanda, oleosa, suave (de fácil aplicación)

Olor:extracto de pétalos de rosa

Ingredientes:Cera de abejas, manteca de cacao, vitamina E, aceite de almendras, dióxido

de titanio, lanolina, aceite mineral, metilparabeno, propilparabeno, aroma a pétalos de rosa
y extracto de metabolitos del liquenU. subfloridana.

Antioxidante:Vitamina E

31
 Conservantes: Metilparabeno y Propilparabeno

Nombre: Liquen SunBlock

6.2.6.5 Empaque y etiqueta

El empaque utilizado para la presentación del producto fue un tubo colapsible el cual es
un envase de forma cilíndrica, cuyo fondo lo constituye una arista, su tapa es troncocónica
y el contenido es vaciado al presionarlo. La cabeza del tubo colapsible tiene un orificio
dispensador y su forma “boca abajo” permite el completo aprovechamiento de producto,
además de una fácil y llamativa exhibición, con capacidad para 15, 30, 60, 120 y 500 ml. Se
utilizó este envase con el fin de mantener las características y propiedades del producto por
más tiempo y aprovechar su uso completo.

Una vez listo el producto final se procedió a envasar. En la etiqueta se establecieron

tanto los componentes, como las características físicas y modos de utilizar en la piel del ser
humano, ya que por sus componentes puede ser utilizada para su objetivo principal.

La etiqueta cuenta con una presentación de letras de color verde de contraste natural que
permite al consumidor relacionarlo con la naturaleza y mostrarun producto 100% natural,
además posee una imagen de varios talos que representa su principal componente del
liquen U. subfloridana (Figura 3).

32
Figura 3. Etiqueta del producto.

Fuente: Autor.

33
 7. Resultados

En la Tabla 4 se evidencia la estructura y fórmula molecular de cada uno de los

metabolitos secundariosmayoritarios encontrados en el extracto metanólico del liquenU.
subfloridana.

Tabla 4. Estructura de metabolitos.

Compuesto Estructura
7 Ácido
Haematamnolico

9 Ácido
Sifulelico

18 Ácido
Salazinico

20 Ácido
Fisodalico

34
 21 Ácido
Constico

23 Ácido
Hipoconstico

24 Ácido Conorstico

25 Ácido
Menegazziaico

29 Ácido
Sifulelico

31 Ácido
Lecanorico

32 Ácido
Galbinico

35
34 Ácido
Tetrahydroxydoc
osanoico

35 Ácido
Norstictico

37 Ácido
Tetrahidroxitrico
sanoico

39 Ácido
Cryptostico

41 Ácido
Tetrahidroxidiox
oheneicosanoico

42 Ácido
Tetrahidroxitrico
sanoico

43 1,6-etil-6-n-
pentilpentadecan
-4,5,7,8,15-
pentol-15-acetato

47 Ácido
Trihidroxitrioxod
ocosanoico

36
49 Ácido
Tetrahidroxihexa
cosanoico
52 Ácido
Tetrahidroxidiox
otricosanoico

57 Ácido
Trihidroxitrioxot
etracosanoico

59 Ácido
Neodihidromurol
ico

61 Ácido
Murolico

63 Metil 8-
hidroxi-4-O-
dimetilbarbatate

85 Hydroxytrio
xotricosanoic
acid

66 Muronic acid

37
68 Ácido
Trihdroxitrioxop
entacosanoico

70 Ácido
Barbático

71 Ácido
Sekikaico

72 Ácido 8-
hidroxibarbatico

73 Ácido
Lobarico

75 Ácido
Norcaperatico

38
 78 Ácido Úsnico

81 Ácido
Perlatolinico

84 Ácido
Caperatico

85 Ácido
Hidroxitrioxotric
osanoico

Fuente: Autor.

39
7.1.Análisis del factor de protección solar (FPS)

Para el cálculo del FPS se realizaron mediciones enel espectrofotómetro Cary 60 de

Agilent de longitud de onda vs Absorbancia. Se analizaron 10 muestras cada 5 nm en la
zona UV-B rango entre 290 – 320 nm yademás se midió la absorbancia entre 190-700 nm
para el análisis de varianza.Los resultados obtenidos fueron utilizados en la ecuación
descrita por Mansur J.(1986)28 para el cálculo del FPS de la zona UV-B.

La primera concentración de 0,02 mg/ml del extracto demetabolitos de U. subfloridana,

obtuvo un resultado de 0,24 FPSque, según Sordo Veramatus29 indica un FPS bajo y no
alcanzó a brindar la protección deseada, por lo tanto fue aumentada la concentración(Tabla
5).

28
MANSUR J, BREDER M, MANSUR M, AZULAY R. (1986). Determinación del factor de protección solar
(SPF) por espectrofotometría. En: Revista An. Bras. Dermatol.P. 121-124.

29
VERAMATUS, Carlos E. (2010). Metodos empleados para deterinar el grado de proteccion de los
fotoprotectores frente a la radiación ultravioleta. En: Revista Universidad Peruana Cayetano Herededia
(UPCH). P. 5-6.

40
Tabla 5. Absorbancia promedio. Resultado de FPS metabolitos 0,02mg/ml.

Λ(nm) EE x I Abs (EE x I ) x

promedio Abs
290 0,015 0,02676 0,0004014
295 0,0817 0,0438 0,00357846
300 0,2874 0,02745 0,00788913
305 0,3278 0,01767 0,005792226
310 0,1864 0,02329 0,004341256
315 0,0839 0,0255 0,00213945
320 0,018 0,0247 0,0004446
Ʃ 0,024586522

Fuente: Autor.

Los resultados de la segunda muestra, de dióxido de titanio a igual

concentración,persistieron en una muy baja protección pues 0,16fue su FPS final, lo cual
esto llevótambién a aumentar su concentración.

41
Tabla 6.Absorbancia promedio. Resultado de FPS 0,02mg/ml de dióxido de titanio.

Λ(nm) EE x I Abs (EE x I ) x

promedio Abs
290 0,015 0,01462 0,0002193
295 0,0817 0,0096 0,00078432
300 0,2874 0,01976 0,005679024
305 0,3278 0,01703 0,005582434
310 0,1864 0,01633 0,003043912
315 0,0839 0,01499 0,001257661
320 0,018 0,02301 0,00041418
Ʃ 0,016980831

Fuente: Autor.

De acuerdo a la tabla arrojada por el espectrofotómetro, ya en la concentración de 0,2

mg/ml del extracto de metabolitos de U. Subfloridana se evidenció su capacidad de
absorción de la radiación UV ya que el resultado del FPS ascendió de 0,24 a 3 FPS
brindando una alta protección contra los rayos UV producidos por el sol.Ademásse
demostró la mayor absorbancia exactamente en el espectro UV-C con una longitud de onda
de 230 nm, desde que inicióen el rango en 190 nmempezó a crecer de forma gradual hasta
que entró en el rango de 200 – 250 nm, donde se encontró su pico más alto a 230 nm.

42
Tabla 7. Absorbancia promedio. Resultado de FPS metabolitos 0,2mg/ml.

Λ(nm EE x I Abs (EE x I ) x

) promedio Abs
290 0,015 0,35945 0,00539175
295 0,0817 0,33252 0,027166884
300 0,2874 0,30375 0,08729775
305 0,3278 0,30779 0,100893562
310 0,1864 0,29365 0,05473636
315 0,0839 0,33862 0,028410218
320 0,018 0,47636 0,00857448
Ʃ 0,312471004
Fuente: Autor.

El dióxido de titaniopresentóabsorción completa en todo el rango de longitud de onda,

desde 190 hasta 700 nmcon una concentración de 0,2 mg/mlllevó su FPS a 15, claramente
siendo un filtro solar usado en el mercado actualmente, se vieron reflejados sus resultados
mayores a las anteriores muestras. Así el dióxido de titanio se puede utilizar para
absorbertoda radiaciónUV que penetra la capa de ozono.

Tabla 8. Absorbancia promedio. Resultado de FPS 0,2mg/ml de dióxido de titanio.

Λ(nm) EE x I Abs (EE x I ) x

promedio Abs

43
 290 0,015 1,73681 0,02605215
295 0,0817 1,63343 0,133451231
300 0,2874 1,56203 0,448927422
305 0,3278 1,48889 0,488058142
310 0,1864 1,415 0,263756
315 0,0839 1,30311 0,109330929
320 0,018 1,14154 0,02054772
Ʃ 1,490123594

Fuente: Autor.

De acuerdo a los resultados anteriores, se observóque aumentando la concentración en

los dos filtros utilizados, se incrementótambién el nivel de absorbanciade la longitud de
onday el FPS; al momento de doblar la concentración a 0,4 mg/ml del extracto
demetabolitos de U. Subfloridanala absorción en las longitudes de 210, 225, 235, 255 nm
presentó los picos más altos con la mayor absorbancia en cada uno; así mismo, se apreció
que se volviómás amplio el rango absorbido pues tiende a la línea de cero hasta llegar a la
longitud de 665 nm abarcando así un amplio rango de espectro y favoreciendo al extracto
demetabolitos como un excelente filtro solar (Tabla 9), en este caso, el factor de protección

44
resultó en 25 FPS conla mayor concentración analizada que según Veramatus (2010)30
brinda un alto grado de protección para la piel pues el liquen actúa como fotoprotector.

Tabla 9. Absorbancia promedio. Resultado de FPS metabolitos 0,4mg/ml.

Λ(nm) EE x I Abs (EE x I ) x

promedio Abs
290 0,015 2,87611 0,04314165
295 0,0817 2,64146 0,215807282
300 0,2874 2,5699 0,73858926
305 0,3278 2,40032 0,786824896
310 0,1864 2,33078 0,434457392
315 0,0839 2,10364 0,176495396
320 0,018 1,82235 0,0328023
Ʃ 2,428118176

Fuente: Autor.

30
VERAMATUS, Carlos E. (2010). Metodos empleados para deterinar el grado de proteccion de los
fotoprotectores frente a la radiación ultravioleta. En: Revista Universidad Peruana Cayetano Herededia
(UPCH). P. 5-6

45
 El filtro solar más usado en el mercado es el dióxido de titanio por su capacidad
absorbente de la radiación UV, en la Tabla 10 están los excelentes resultados de absorción,
evidenciándolo desde todo el rango 190-700 nm, brindandoultra protección a una
concentración de 0,4 mg/ml y un factor de protección de 80 FPS, hasta ahora el más alto
analizado.

Tabla 10. Absorbancia promedio. Resultado de FPS de dióxido de titanio 0,4 mg/ml.

Λ(nm) EE x I Abs (EE x I ) x

promedio Abs
290 0,015 3,5916 0,053874
295 0,0817 10 0,817
300 0,2874 8,90572 2,559503928
305 0,3278 10 3,278
310 0,1864 4,56722 0,851329808
315 0,0839 3,68927 0,309529753
320 0,018 6,91998 0,12455964
Ʃ 7,993797129

Fuente: Autor.

La última muestra en la tabla 11, se realizó con una concentración entre el extracto
demetabolitos de U. subfloridana y dióxido de titanio a 0,1 mg/ml cada una. Gracias a la
capacidad de absorción en el rango UV-C y UV-B del extracto demetabolitos deU.

46
subfloridana y la absorción en el rango UV-A corta y larga del dióxido de titanio, los dos
filtros se complementaron entre sí, dando al producto final creado, un factor de protección
de 15 FPSun alto factor que protege en un 90%, brindando calidad y bienestar al
consumidorconuna protección completa y eficaz contra la radiación UV.

Tabla 11. Absorbancia promedio. Resultado de FPS de metabolito 0,1 mg/ml +dióxido de
titanio 0,1 mg/ml.

Λ(nm) EE x I Abs (EE x I ) x Abs

promedio
290 0,015 1,59539 0,02393085
295 0,0817 1,56822 0,128123574
300 0,2874 1,51015 0,43401711
305 0,3278 1,46658 0,480744924
310 0,1864 1,39697 0,260395208
315 0,0839 1,3468 0,11299652
320 0,018 1,27928 0,02302704
Ʃ 1,463235226

Fuente: Autor.

47
Tabla 12.Resumen de rresultados FPS para cada una de las concentraciones medidas.

Concentración 0,02 0,2 0,4 0,1 mg/ml Liquen + 0,1

mg/ml mg/ml mg/ml mg/ml dióxido de titanio
FPS Extracto de 0,24 15 25 15
metabolitosdelliquen
FPS dióxido de titanio 0,16 3 80

Fuente: Autor.

7.2.Análisis de las propiedades fotoportectoras de los metabolitos presentes en

líquenes de la especie U. subfloridana.

Los metabolitos secundarios, localizados en la membrana celular o extracelular en forma

de masas amorfas o cristales tienen un rol biológico fundamental para el establecimiento de
la simbiosis, y para la protección del líquen, pues actúan como fotoprotectores,
antimicrobianos, insecticidas, antiherbívoros y fitotóxicos, entre otros.31Para demostrarlo se
establecieron tres concentraciones para tomar 10 muestras del extractode metabolitos de
liquen. Las 10 muestras se sometieron a análisis por espectrofotómetrico enla región de
190-700nm, observando que todas las muestras tuvieron reacción ante la exposición de
radiación UVen cada longitud de onda aplicada, permitiendo demostrar, de manera
concluyente, gracias a la capacidad de absorbancia ante este tipo de radiación, que los
metabolitos liquénicos exhiben propiedades filtrantes y fotoprotectoras de radiación
UV.Cuando los líquenes se encuentran bajo estrés abiótico por radiación UV intensa o por

31
BRODO, I., DURAN, S. & SHARNOFF, S. Lichens of North America. Yale University Press. (2001), P.795.

48
atmósferas altamente oxidantes, en respuesta, producen compuestos con propiedades
fotoprotectoras o antioxidantes.32

7.3.Análisis de la varianza para validación estadística

De acuerdo a los resultados se identificaron que el FPS del extracto de metanólico 0,1
mg/ml +de titanio 0,1 mg/ml, es el factor de protección final obtenido en la combinación de
las soluciones con un valor de 15 FPS, lo que permitió inferir que es un alto factor que
protege en un 90%. Para la verificación del nivel de significancia de las pruebas realizadas
en los diferentes rangos y niveles de combinación del extracto de metabolitos y dióxido de
titanio, se realizó verificación a través de análisis de varianza de ANOVA, y se
seleccionaron las variables de rango de pruebas como factor y las variables de absorbancia
promedio como dependientes en las diferentes relaciones del extracto de metabolitos mg/ml
+ dióxido de titanio mg/ml.

Según el análisis de varianza en la Figura 4, los puntos que representan a las medias de
cada grupo no aparecen dispersos a diferentes niveles; sobre todo por los intervalos que
están contenidos entre los rangos 295,300 y 305.

Figura 4. Análisis de varianza.

32
VALENCIA, N, A. BIOPROSPECCIÓN DE LÍQUENES DEL PÁRAMO DE SUMAPAZ, COLOMBIA COMO
FUENTE ORIGINAL DE SUSTANCIAS DUALES CON ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE Y FOTOPROTECTORA PARA LA
PREVENCIÓN DE PROBLEMAS DÉRMICOS ASOCIADOS A LA RADIACIÓN SOLAR. Departamento de Farmacia
Ciencias Bogotá. HERMES (2018).

49
Fuente: SPSS V. 21.

Estos resultados nos permiten concluir que los datos no se alejan del promedio y nos
permitió evaluar la confiabilidad de los resultados con respecto a las medias de la
absorbancia, especialmente en el rango UV-B.

Para contrastar la hipótesis de igualdad de varianzas se utiliza el ANOVA y se verifican

los primeros resultados en el análisis descriptivo del comportamiento de la variable
dependiente. La Tabla 13 contiene un análisis descriptivo de la variable dependiente por
grupos, así como, los límites superior e inferior para la media de cada grupo al 95% de
confianza.

Tabla 13. Descriptivos.

N Media Desv. Desv. 95% del intervalo de Mínimo Máxi

Desviació Error confianza para la mo
n media
Límite inferior Límite
superior
290 7 1,45724 1,4141250 ,53448 ,149401 2,765096 ,0146 3,5916
9 90
295 7 2,31843 3,5258895 1,3326 -,942471 5,579337 ,0096 10,0000
3 610

50
 300 7 2,12839 3,1363380 1,1854 -,772235 5,029023 ,0198 8,9057
4 244
305 7 2,24261 3,5359907 1,3364 -1,027635 5,512857 ,0170 10,0000
1 789
310 7 1,43474 1,6290743 ,61573 -,071894 2,941391 ,0163 4,5672
9 22
315 7 1,26027 1,3257359 ,50108 ,034174 2,486377 ,0150 3,6893
6 11
320 7 1,66960 2,4104563 ,91106 -,559697 3,898903 ,0230 6,9200
3 68
Tot 4 1,78733 2,4574446 ,35106 1,081470 2,493191 ,0096 10,0000
al 9 1 35

Fuente: SPSS V. 21.

La Tabla 14 corresponde a la prueba de homogeneidad de varianzas que contiene el

contraste de Levene sobre igualdad de varianzas, junto con el valor estadístico (.685- .298-
.298), aparecen los grados de libertad (gl 1=6, gl 2=42) y el nivel crítico (Sig. < .662-.934-
.932). Puesto que el nivel crítico es grande, se acepta la hipótesis de igualdad de varianzas y
se concluye, que la absorbancia promedio y las varianzas de los siete rangos son iguales.

El estadístico de Levene toma un valor lo suficientemente pequeño para no rechazar las

hipótesis de homocedasticidad a los niveles de significación habituales.

Tabla 14. Prueba de homogeneidad de varianzas.

Característica Estadístico de Levene gl1 gl2 Sig.

Absorbancia promedio Se basa en la media ,685 6 42 ,662
Se basa en la mediana ,298 6 42 ,934
Se basa en la mediana y ,298 6 25,99 ,932
con gl ajustado 7
Se basa en la media ,489 6 42 ,813
recortada

Fuente: SPSS V. 21.

51
 La Tabla 22 muestra el análisis ANOVA, en el cual el valor del estadístico de prueba,
F= 0.196 es significativamente mayor a 0,05 no se rechaza la hipótesis nula de igualdad de
medias y queda confirmada la primera impresión proporcionada por el gráfico de barras de
error.

Tabla 15. ANOVA.

Tipo de grupos Suma de Gl Media F Sig.

cuadrados cuadrática
Entre grupos 7,914 6 1,319 ,196 ,976
Dentro de grupos 281,960 42 6,713
Total 289,874 48

Fuente: SPSS V. 21.

Paraconfirmar resultados del ANOVA e identificar si existen medias que difiere otras se
debe utilizar un tipo particular de contrastes denominados comparaciones múltiples post
hoc o comparaciones a posteriori. Estas comparaciones permiten controlar la tasa de error
al efectuar varios contrastes utilizando las mismas medias, es decir, permiten controlar la
probabilidad de cometer errores tipo I (Probabilidad de rechazar la hipótesis cuando ésta es
verdad) al tomar varias decisiones.

Al correr la prueba Post Hoc,se utiliza el estadístico de Tukey, el cual asume varianzas
iguales en las variables. En la Tabla 16 la primera columna indica el método que se han
seleccionado y a continuación aparecen todas las posibles combinaciones dos a dos entre
los niveles de la variable factor (rangos), lasdiferencias entre los niveles de absorbancia
promedio obtenidos en cada una de las combinaciones del extracto de metabolitos mg/ml +
dióxido de titanio mg/ml, el error típico de esas diferencias y el nivel designificación
asociado a cada diferencia.

52
 Tabla 16. Comparaciones múltiples.

(I) (J) Diferencia de Desv. Sig. Intervalo

Pruebas Prueb medias (I-J) Error confianza al
as 95%
Límite Límite
inferior superior
290 295 -,8611843 1,3849519 ,996 -5,148366 3,425998
300 -,6711457 1,3849519 ,999 -4,958328 3,616036
305 -,7853629 1,3849519 ,997 -5,072545 3,501819
310 ,0225000 1,3849519 1,000 -4,264682 4,309682
315 ,1969729 1,3849519 1,000 -4,090209 4,484155
320 -,2123543 1,3849519 1,000 -4,499536 4,074828
295 290 ,8611843 1,3849519 ,996 -3,425998 5,148366
300 ,1900386 1,3849519 1,000 -4,097143 4,477220
305 ,0758214 1,3849519 1,000 -4,211360 4,363003
310 ,8836843 1,3849519 ,995 -3,403498 5,170866
315 1,0581571 1,3849519 ,987 -3,229025 5,345339
320 ,6488300 1,3849519 ,999 -3,638352 4,936012
300 290 ,6711457 1,3849519 ,999 -3,616036 4,958328
295 -,1900386 1,3849519 1,000 -4,477220 4,097143
305 -,1142171 1,3849519 1,000 -4,401399 4,172965
310 ,6936457 1,3849519 ,999 -3,593536 4,980828
315 ,8681186 1,3849519 ,996 -3,419063 5,155300
320 ,4587914 1,3849519 1,000 -3,828390 4,745973
305 290 ,7853629 1,3849519 ,997 -3,501819 5,072545
295 -,0758214 1,3849519 1,000 -4,363003 4,211360
300 ,1142171 1,3849519 1,000 -4,172965 4,401399
310 ,8078629 1,3849519 ,997 -3,479319 5,095045
315 ,9823357 1,3849519 ,991 -3,304846 5,269518
320 ,5730086 1,3849519 1,000 -3,714173 4,860190
310 290 -,0225000 1,3849519 1,000 -4,309682 4,264682
295 -,8836843 1,3849519 ,995 -5,170866 3,403498
300 -,6936457 1,3849519 ,999 -4,980828 3,593536
305 -,8078629 1,3849519 ,997 -5,095045 3,479319
315 ,1744729 1,3849519 1,000 -4,112709 4,461655
320 -,2348543 1,3849519 1,000 -4,522036 4,052328

53
 315 290 -,1969729 1,3849519 1,000 -4,484155 4,090209
295 -1,0581571 1,3849519 ,987 -5,345339 3,229025
300 -,8681186 1,3849519 ,996 -5,155300 3,419
063
305 -,9823357 1,3849519 ,991 -5,269518 3,304846
310 -,1744729 1,3849519 1,000 -4,461655 4,112709
320 -,4093271 1,3849519 1,000 -4,696509 3,877855
320 290 ,2123543 1,3849519 1,000 -4,074828 4,499536
295 -,6488300 1,3849519 ,999 -4,936012 3,638352
300 -,4587914 1,3849519 1,000 -4,745973 3,828390
305 -,5730086 1,3849519 1,000 -4,860190 3,714173
310 ,2348543 1,3849519 1,000 -4,052328 4,522036
315 ,4093271 1,3849519 1,000 -3,877855 4,696509

Fuente: SPSS V. 21.

Finalmente, se obtiene la Figura 5 con el detalle de las medias que sugiere un fuerte
crecimiento de niveles de absorbancia promedio en los rangos 295 y 305, lo cual
corresponde al resultado del FPS de metabolitos 0,1 mg/ml +dióxido de titanio 0,1 mg/ml.

Figura 5. Gráfico de medias

Fuente: SPSS V. 21

54
 8. Conclusiones

Los líquenesson una fuente natural que por medio de sus metabolitos tiene la capacidad
de absorber la radiación causada por el sol.La efectividad de protección de la crema Liquen
SunBlock resulta por la mezcla entre sus filtros (metabolitos de liquen y dióxido de titanio)
que según los resultados obtenidos generan confiabilidad en sus componentes.

Concentraciones de 0,4 mg/ml de extracto de metabolitos de liquenmuestran un FPS

promisorio frente a concentraciones más bajas.

La crema bloqueadora Liquen SunBlockes un producto que proporciona protección para

cualquier longitud de onda emitida por el sol dentro de un rango de 190 a 700 nm.

A pesar que en pequeñas concentraciones de los filtros (dióxido de titanio y extracto de

metabolitos de liquen) absorben poca radiación, se puede inferir que el FPS puede ser
proporcional al incremento en las concentraciones.

La crema bloqueadora Liquen SunBlockes un prototipo que puede aportar protección

naturala la piel, debido a que es a base de extractos naturales para la protección solar y

55
cuenta con ingredientes naturales antioxidantes y lubricantes para un mejor cuidado
dérmico.

Los componentes de la crema Liquen SunBlock presentan características físicas y

químicas que le dan un aspecto oleoso de fácil aplicación, que se adhiere fácilmente a la
piel, se absorbe rápidamente y además es resistente al agua.

De acuerdo al análisis de UHPLC/Orbitrap/MS/MS se demostróque metabolitos

secundarios mayoritarios presentes en líquenes de la especie U. subfloridana,tienen
propiedades fotoprotectoras.

Se pudo evidenciar que en ninguno de los grupos, las medias difieren significativamente
al nivel designificación establecido (0,05 por defecto), lo que quiere decir que no podremos
rechazar la hipótesis de igualdad y se puede afirmar que las muestras en diferentes
concentraciones preparadas no se diferencian en sus promedios poblacionales.

La precisión del método, mostró resultados satisfactorios. Los valores obtenidos

cumplen con lo establecido en cuanto a los coeficientes de variación para los métodos
espectrofotométricos.

Esta metodología aunque es in vitro presenta una buena correlación con los métodos in
vivo, pues relaciona la absorbancia del filtro o protector solar, con el efecto eritemogénico
de radiación e intensidad de la luz a una longitud de onda de 290-320 nm, espectro
específico del UVB.

La determinación del FPS por espectrofotometría ultravioleta utilizando la ecuación de

Mansur es un método sencillo, económico y reproducible, ya que es bastante fácil, por lo
que puede ser aplicado en la industria cosmética y farmacéutica para conocer y mejorar las
propiedades fotoprotectoras de extractos naturales.

56
 A partir del cálculo del FPS dela crema Liquen Sunblock protector solar se trazaron
estrategias de trabajo para nuevas generaciones que garanticen desarrollo en trabajos de
investigación, producciónde crema bloqueadora, desarrollo de un cultivo liquénico para
acercarse aún más al concepto ideal de fotoprotector.

El objetivo del ANOVA es comparar los errores sistemáticos con los aleatorios
obtenidos al realizar diversas muestras con diferentes concentraciones.

Los resultados proporcionados por las muestras analizadas a diferentes concentraciones

no contienen errores sistemáticos, pues los valores medios respectivos no difirieron mucho
los unos de los otros y su dispersión.

Los datos no se alejan del promedio y nos permitió evaluar la confiabilidad de los
resultados con respecto a las medias de la absorbancia, especialmente en el rango UV-B.

Puesto que el nivel crítico es grande, se acepta la hipótesis de igualdad de varianzas y se

concluye, que la absorbancia promedio y las varianzas de los siete rangos son iguales.

9. Recomendaciones

Se recomienda realizar trabajos de investigación donde se permita adoptar bajo

producciones controladas el cultivo de liquen para utilizar sus propiedades no solo como
filtros UV sino medicinales y uso industrial.

Invertir en producciones controladas para permitir su equilibrio ecológico y así utilizar

su cultivo en la elaboración de excelentes productos para la medicina, farmacéutica,
perfumería, homeopatía, entre otros.

57
 10. Referencias Bibliográficas

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61
 11. Anexos

Imágenes de ensayos con diferentes concentraciones para la identificación del FPS del
extracto demetabolitos de U. subfloridana y dióxido de titanio, tomadas por el
autor.

62
 Imágenes de ensayos aforados para determinar el FPS.

Imágenes de las características finales de la crema bloqueadora Liquen Sunblock.

63
64