CLUB DE REVISTAS

Nature 514: 47 - 53 (2014)

02 de Octubre

CARLOS VALENCIA BASTO

MVZ
MSc BIOLOGÍA MOLECULAR Y BIOTECNOLOGÍA
 Brotes de ébola desde 1976 hasta 2005

Groseth, A; Feldman, H; Strong, JE. The ecology of Ebola virus. Trend

Microbiol. 15 (9): 408 – 416 (2007).
 Mecanismos de transmisión del virus

Groseth, A; Feldman, H; Strong, JE. The ecology of Ebola virus. Trend

Microbiol. 15 (9): 408 – 416 (2007).
 Manifestaciones hemorrágicas en primates No humanos

Feldman; H; Geisbert, TW. Ebola haemorragic fever. Lancet 377: 849- 862 (2011).
Aproximaciones vacunales y posibilidades de tratamientos
para la infección por Ébola

Feldman; H; Geisbert, TW. Ebola haemorragic fever. Lancet 377: 849- 862 (2011).
Feldman; H; Geisbert, TW. Ebola haemorragic fever. Lancet 377: 849- 862 (2011).
Comparación del modelo de infección del virus
del Ébola

Hoenen, T; Groseth, A; Falzarano, D; Feldmann, H. Ebola virus: unravealling

pathogenesis to combat a deadly disease. Trend Mol Med 12 (5): 206 - 215
 Estructura del Virus del Ébola

Booth, TF; Rabb, MJ; Beniac, DR. How do filovirus bend without breaking?. Trends
Microbiol. 21 (11): 583 – 593 (2013).
 Glicoproteínas implicadas en el proceso de infección del
virus del Ébola

Diammmond, MS; Fremont, DH. Ebola Images emerge from the cave. Cell Host Microbe
4 (2): 87 -89 (2008).
 TMV competente con
genes de Acs
Acs Monoclonales (mAcs)
MB03
Nicotiana benthamiana mAcs quiméricos de
ratón-humano
c13C6
m2G4
Tomado de: http://www.denniskunkel.com/DK/Viruses/
58420A.html m4G7

Tomado de: http://mycor.nancy.inra.fr/blogGenomes/?p=2853

American Society for Microbiology 2002

mAcs ZMAb
Planta transgénica productora Acs de murino
Booth, TF; Rabb, MJ; Beniac, DR. How do filovirus
de Anticuerpos monoclonales m1H3
bend without breaking?. Trends Microbiol 21 (11):
583 – 593 (2013).
m2G4
m4G7

Lee et al. Nature 454, 177-182 (2008) doi:10.1038/nature07082

 DISEÑO EXPERIMENTAL PARA SELECCIONAR LA MEJOR COMBINACIÓN DE Acs
MONOCLONALES
Hembras y Machos Macacos rhesus (Macaca
Cerdos de Guinea Hartley mulatta)
Hembras
6-8 semanas EBOV-K
(Kikwit)

Monitoreo de
supervivencia a los 28
días
1000 pfu IM
1000 X (DL50) del Virus Intraperitoneal
Tratamientos Evaluados (3dpi) - 1 Tratamientos evaluados (1 dpi) – 3
dosis única de 5 mg de: dosis hasta llegar a 50 mg de:
1. Acs SIN combinar PBS – Control negativo
c13C6 Cocktail original MB-003
h13F6 c13C6
c6D8 h13F6
2. Acs Combinados c6D8
a.  Zmapp 1 (c13C6+c2G4+c4G7)
b.  Zmapp 2 (c13C6+c1H3+c2G4)
c.  Zmapp 3 (c13C6+c1H3+c4G7)
d.  Cocktail original Zmab NO SE REALIZÓ CON ESTUDIO DOBLE CIEGO
e.  Cocktail original MB-003
SEGUNDO DISEÑO EXPERIMENTAL PARA SELECCIONAR LA MEJOR COMBINACIÓN
Zmapp1 y ZMapp2
GRUPO A GRUPO B
6 Macacos rhesus (Macaca mulatta) 6 Macacos rhesus (Macaca mulatta)

EBOV-K
(Kikwit)
4000 X TCID50 del Virus IM
2512 pfu
Monitoreo de
supervivencia a los 27
días post-infección

Tratamiento a intervalos de 3 días, comenzando 3 días post-infección IM

Dosis en ambos casos: 50 mg / Kg IV

GRUPO C - Control

PBS

2 Macacos rhesus (Macaca mulatta)

Ac de Control

NO SE REALIZÓ CON ESTUDIO DOBLE CIEGO

 TERCER DISEÑO EXPERIMENTAL PARA EVALUAR Zmapp1

GRUPO D GRUPO E
6 Macacos rhesus (Macaca mulatta) 6 Macacos rhesus (Macaca mulatta)

EBOV-K
(Kikwit)
1000 X TCID50 del Virus IM
628 pfu
Monitoreo de
Iniciaron tto 3 dpi supervivencia a los 28 Iniciaron tto 4 dpi
días post-infección

Tratamiento a intervalos de 3 días, comenzando 3 días post-infección IM

Dosis en ambos casos: 50 mg / Kg IV

GRUPO F
GRUPO G - Control

PBS
Ac de Control
6 Macacos rhesus (Macaca mulatta)
3 Macacos rhesus (Macaca mulatta)
Iniciaron tto 5 dpi

NO SE REALIZÓ CON ESTUDIO DOBLE CIEGO

EVALUARON in vitro LA REACCIÓN CRUZADA DE Zmapp (EFICAZ CONTRA EBOV-K)
CON EL SEROTIPO EBOV-G

Tomado de: http://www.leinco.com/sandwich_elisa

http://virus.usal.es/web/demo_microali/enterotoxina/set.html
EVALUARON in vitro LA REACCIÓN CRUZADA DE Zmapp (EFICAZ CONTRA EBOV-K)
CON EL SEROTIPO EBOV-G

Corroboraron con un ensayo de Anticuerpos Neutralizantes en Placa

Tomado de: http://neuroimmunology.med.ubc.ca/diagnostic-assays/neutralizing-antibodies-to-interferon-beta/

 ANÁLISIS ESTADÍSTICO

1. Prueba exacta de Fisher de una cola para comparar las proporciones de

supervivencia entre los tratamientos y el grupo control

Asumieron un umbral de significancia de 0,05

Tamaño de muestra de 6 primates por grupo
Generando una potencia estadística superior al 80 %.

2. La supervivencia fue comparada usando la prueba de rango logaritmico

GraphPad PRISM 5
Valor P < 0,05

3. La comparación de la efectividad de unión de los anticuerpos

monoclonales contra EBOV-K y EBOV-G se realizó una regresión logística de
cuatro parámetros usando GraphPad PRISM 5

Se consideraron diferencias significativas para la EC50 si los intervalos de

confianza del 95 % excluían al otro.
Seleccionaron las mejores combinaciones de Anticuerpos
monoclonales
Compararon los resultados de Zmapp 1 y Zmapp 2
Evaluaron la efectividad de Zmapp 1 iniciando el tratamiento
postinfección en diferentes momentos
Alineamiento de aminoácidos de la glicoproteína de EBOV-K
(serotipo Kikwit) y de EBOV-G (serotipo Guinea)

Sitio de unión de los Anticuerpos

monoclonales de ZMapp
Evaluación del serotipo Guinea (EBOV-G)
Concentración Media Efectiva (EC50)
Resultados de ELISA

Resultados del ensayo de anticuerpos neutralizantes

ü ELCocktail Zmapp (1) demostró ser 100% exitoso aún
después de iniciar su uso 5 dpi.
ü Enel caso del cocktail Zmapp2 de 6 animales evaluados
hubo un deceso. Al parecer por una viremia MUY alta.
ü Encasos de viremia alta se podría ensayar a futuro dosis
elevadas de ZMapp2.
ü ZMapp1 parece ser un tratamiento de elección para dos
serotipos virales de ébola según los resultados de ELISA y Acs
Neutralizantes.
ü Los
dos norteamericanos que recibieron como tratamiento
ZMapp1 estaban infectados con EBOV-G.
 Ken Brantly y Nancy Writebol
sobrevivieron. 21 de Agosto de 2014.

El español Miguel Pajares de 75 años no

sobrevivió. 21 de Agosto de 2014
Ø Pocos animales en el grupo de control.

Ø No se hicieron ensayos Doble Ciego.

Ø Sedeben hacer pruebas in vivo del tratamiento con varios

serotipos de ébola.