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Pagogenosnorm - Salmonella 17364 PDF
Pagogenosnorm - Salmonella 17364 PDF
OBJETIVOS
GENERALIDADES
Las frutas y verduras han ganado notoriedad en años recientes como fuentes de
salmonelosis humana. Esto se presenta como una consecuencia de diversos factores
como: la fertilización de sembradíos con lodos sin tratamiento o efluentes de drenajes
potencialmente contaminados con Salmonella spp. resistente a antibióticos, la irrigación
de los campos y el lavado de frutas y verduras con aguas contaminadas, la
manipulación excesiva por los trabajadores, la exposición a la contaminación ambiental
de especies y condimentos durante el secado y la resistencia del microorganismo a
valores de pH bajos.
FUNDAMENTO
NOTA
BIOLÓGICOS
MATERIAL Y EQUIPO
Balanza granataria a.
1 caja de Petri de vidrio estéril a.
1 bolsa de stomacher o un vaso de licuadora estéril a.
Utensilios necesarios para la manipulación de muestras: cucharas, cuchillos,
tenedores, estériles a.
Stomacher o motor para licuadora a.
Pipetas de vidrio de 1 mL, estériles con filtro de algodón b.
Pipetas Pasteur estériles a, b, c, d, e, f
Asa microbiológica c, d, e.
Mecheros de Bunsen a, b, c, d, e.
Portaobjetos d.
Pipetas Pasteur estériles con filtro de algodón d, e.
Microscopio óptico d, e.
Incubadora a 35°C con termostato calibrado que evite variaciones mayores a 0.1°C
a, b, c, d, e
.
Incubadora a 42°C con termostato calibrado que evite variaciones mayores a 0.1°C
b
.
NOTAS
a
Material necesario al inicio de la práctica.
b
Material necesario a las 24 h. de iniciada la práctica.
c
Material necesario a las 48 h. de iniciada la práctica.
d
Material necesario a las 72 h. de iniciada la práctica.
e
Material necesario a las 96 h. de iniciada la práctica.
f
Material necesario a las 120 h. de iniciada la práctica.
DETERMINACIÓN DE Salmonella spp. EN ALIMENTOS
Incubar 18- 24
h a 37°C
Incubar 18- 24
h a 37°C
Incubar 18- 24
h a 37°C
1. Preenriquecimiento.
NOTA IMPORTANTE
2. Enriquecimiento selectivo.
3. Aislamiento diferencial.
NOTA
La metodología descrita en esta sección deberá realizarse para cada uno de los
caldos de enriquecimiento descritos en el inciso 2, es decir para los cultivos
desarrollados en caldo selenito-cistina, caldo tetrationato y/o caldo Vassiliadis-
Rappaport.
NOTA
Se recomienda identificar seis cultivos por cada unidad analítica (25.0 g).
Seleccionar colonias procedentes de ambos medios de enriquecimiento.
1. Registrar las características del medio TSI o KIA antes de la inoculación (color
del medio).
2. Por duplicado tomar suavemente una porción del centro de la colonia con asa
bacteriológica recta y estéril e inocular por picadura y estría en un tubo con
agar triple azúcar hierro (TSI) o agar de Kligler (KIA) inclinado.
3. Incubar el medio TSI o KIA a 35 2 C durante 24 h.
4. Consultar el Cuadro 2 para la interpretación de los resultados.
1. Hacer la misma operación que se hizo para KIA o TSI (inciso 4.1.), tomando la
asada de la misma colonia con la que se sembró en estos medios, pero
sembrando ahora en el agar lisina hierro (LIA).
2. La interpretación de resultados puede ser consultada en el Cuadro 2.
3. Retener todos los cultivos que muestren las reacciones características de
Salmonella en los medios TSI (o KIA) y LIA para realizar las pruebas
bioquímicas complementarias.
4. Los cultivos desarrollados en TSI o KIA que no parecen de Salmonella pero
que presentan reacciones en LIA típicos deben trabajarse como cultivos
presuntivos positivos, ya que en estos casos, el medio LIA permitirá detectar S.
arizonae y cepas atípicas de Salmonella que utilicen lactosa o sacarosa.
Descartar solamente los cultivos que muestre reacciones atípicas en ambos
medios.
1. Con asa bacteriológica recta estéril, tomar del crecimiento del tubo TSI/KIA o
LIA e inocular en el tubo con caldo urea o caldo Surraco.
2. Incubar a 35 2 C durante 24 2 h.
3. Interpretar resultados (Consultar Cuadro 2).
4. Descartar todos los cultivos que den ureasa positiva. Conservar los cultivos
que den la prueba negativa.
1. Con asa bacteriológica estéril, tomar dos asadas de crecimiento del cultivo
presumiblemente positivo de cada tubo de medio TSI/KIA o LIA e inocular
tubos de caldo urea (rápida).
2. Incubar a 37 0.5 C durante 2 h en baño de agua.
3. Interpretar resultados (Consultar Cuadro 2).
4. Descartar todos los cultivos que den ureasa positiva. Conservar los cultivos
que den la prueba negativa.
1. Con asa bacteriológica recta estéril tomar crecimiento del tubo de TSI/KIA o
LIA e inocular por estría en el tubo con agar citrato de Simmons.
2. Incubar a 35 2 C durante 96 2 h.
3. Interpretar los resultados (Consultar Cuadro 2).
1. Con asa bacteriológica recta estéril tomar crecimiento del tubo TSI/KIA o LIA e
inocular por punción vertical en el tubo con medio de SIM.
2. Incubar a 35 2 C durante 24 h.
3. Para verificar la producción de indol, adicionar al tubo con medio SIM que
presente crecimiento de 0.2 a 0.3 mL de reactivo de Kovac’s.
4. Interpretar resultados (Consultar Cuadro 2).
1. Con asa bacteriológica recta estéril tomar crecimiento del tubo TSI/KIA o LIA e
inocular el tubo con caldo RM-VP.
1. Con asa bacteriológica recta estéril, tomar crecimiento del medio TSI/KIA o LIA
e inocularlo en el tubo que contiene caldo malonato.
2. Incubar a 35 2 C durante 40 2 h.
3. Interpretar los resultados después de incubar (Consultar Cuadro 2).
1. Con asa bacteriológica recta estéril, tomar crecimiento del tubo TSI/KIA o LIA e
inocular en el tubo que contiene caldo manitol.
2. Incubar a 35 2 C durante 24 2 h.
3. Interpretar resultados (Consultar Cuadro 2).
NOTA
6. Identificación serológica.
1. Colocar con una asa bacteriológica, dos gotas separadas de solución salina
estéril (NaCl 0.85%) sobre un portaobjetos o en dos secciones de una placa
para aglutinación.
2. Suspender en cada una de las gotas, una porción del cultivo desarrollado en
TSI/KIA o LIA.
3. Agregar a una de ellas una gota del suero anti Salmonella “O” polivalente y
mezclar con el canto del asa o empleando aplicadores de madera.
4. Agitar inclinando la lámina, hacer girar las gotas durante aproximadamente un
minuto.
5. Observar bajo una buena iluminación y sobre un fondo oscuro la reacción.
6. Considerar cualquier grado de aglutinación como positiva.
7. Consultar el Cuadro 3 para la interpretación de los resultados.
NOTAS
RESULTADOS
1. Interpretación de resultados.
2. Informe de resultados.
COMPLEMENTO
1.6. Queso
1.7. Caseína
1.8. Coco
Levadura seca
1.12. Especias
1.12.1. Pimienta negra, pimienta blanca, semilla de apio, comino, perejil seco,
romero, tomillo, chile en polvo, páprika o pimentón, ajonjolí, hojuelas de
vegetales (vegetales secos)
1.13. Gelatina
1. Pesar asépticamente 25.0 g de muestra en un recipiente de boca ancha y
tapón de rosca de 500 mL.
2. Adicionar 225.0 mL de caldo lactosado estéril con 5.0 mL de solución acuosa
de gelatinasa al 5.0% y mezclar bien.
3. Dejar reposar 60 min.
4. Continuar como en el procedimiento general (inciso 1.1.)
BIBLIOGRAFÍA
D’Aoust J., Maurer J. & Bailey J.S. (2001). Salmonella Species. In: Food
Microbiology. Fundamentals and Frontiers. Doyle M., Beuchat L.R. & Montville
T.J. (Eds.) 2d. ed. ASM Press USA: 141-157.
Andrews W.H., Flowers R.S., Silliker J., & Bailey S. (2001) “Salmonella”. In:
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 4 th ed.
Downs F.P. & Ito K. (Eds.) APHA. Washington: 357-380.
http://www.cfsan.fda.gov/~ebam/bam-1.htmL