SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE- SENA

CENTRO INDUSTRIAL Y DEL DESARROLLO TECNOLOGICO- BARRANCABERMEJA

QUÍMICA APLICADA A LA INDUSTRÍA

1620411
Código: 1620411 Grupo: LSD Fecha : 20/05/19 Versión 01
Nombre de la practica: DETERMINACIÓN DE AZUCARES REDUCTORES POR
ESPECTROFOTOMETRÍA UV-VIS (DNS)

1. RESUMEN

Se desarrolló un procedimiento para determinar la concentración los

azucares que poseen extremos carbonilos fácilmente oxidables (azúcares
reductores) por el método del ácido 3,5 dinitrosalicílico (DNS); la
determinación de estos azúcares se realizó con el objetivo de obtener una
curva de calibración, con este reactivo (DNS) que tiene capacidad de oxidar
a los azúcares reductores dando resultados colorimétricos que se pueden
medir con una longitud de onda de 540nm en el espectrofotómetro.

Palabras clave: Reactivo 3,5 dinitrosalicílico (DNS), curva, calibración,

azucares reductores, espectrofotómetro.

2. INTRODUCCIÓN

Hoy en día la industria licorera y alimenticia utiliza varios tipos de métodos

analíticos para la determinación azúcar y alcohol en los licores y/o bebidas
a utilizar como medio de venta. Uno de los métodos más acordes y con mejor
resultados en la determinación de los azucares con carácter reductor, es el
método (DNS), método que ha sufrido varias modificaciones a través de los
años para adecuarse al análisis de diferentes materiales y su principal
ventaja radica en su alta sensibilidad y productividad debido a que es un
método espectrofotométrico; el procedimiento se basa en una reacción redox
que ocurre entre el DNS y los azúcares reductores presentes en la muestra,
sin embargo a nivel industrial no es recomendable utilizarlo cuando dicha
trata sustancias tales como mieles y caldos de fermentación que lo
contengan, esto debido a según estudios realizados en la materia, a los altos
niveles de dispersión.
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El presente informe desarrollará el procedimiento respectivo para la

determinación de azucares reductores a partir de una solución patrón de
glucosa de concentración 5g/L, que permitirá realizar y ajustar una curva de
calibración, y una solución desconocida; por el método del ácido 3,5 dinitro
salicílico (DNS).

3. OBJETIVOS

 Establecer la longitud de onda de la máxima absorción para las diferentes

soluciones coloreadas.

 Conocer y aplicar los principios de la curva patrón aplicada a la cuantificación

de azucares reductores con el reactivo ácido-3,5-dinitrosalicílico (DNS).

 Cuantificar los azucares reductores (glucosa) presentes en el alimento.

4. MARCO TEÓRICO

El método DNS (técnica de Miller) es una técnica colorimétrica que emplea

ácido 3,5 dinitrosalicílico para la hidrólisis de polisacáridos presentes en una
muestra. Determina las absorbancias por medio de un espectrofotómetro a
540nm.

Esta técnica sirve para cuantificar los azucares reductores producidos

durante una fermentación o para cuantificar los productos de una reacción
enzimática. La curva de calibración es la representación gráfica en un eje de
coordenadas, de la Absorbancia (eje de ordenadas: Y) frente a la
Concentración (eje de abscisas: X). Se ensayan varias soluciones de
concentración conocida y se determinan sus absorbancias, construyéndose
la curva de calibrado, que es una recta.
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La concentración de una solución problema (desconocida), se averigua por

interpolación de la Abs de la solución en la curva de calibración, o a través
de la Ecuación de la recta (y = mx + b) donde: Absorbancia (y) = constante
(m) x concentración + absorbancia del blanco.

El DNS reacciona únicamente con los azúcares reductores. La sacarosa es

un disacárido no reductor, pero tras su hidrólisis en medio ácido se liberan
glucosa y fructosa que sí son reductores y reaccionan con el DNS generando
un producto coloreado. La intensidad del color, que se puede medir por
métodos espectrofotométricos es proporcional a la concentración de
sacarosa.

5. MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales

 Espectrofotómetro UV-VIS Thermo Scientific Genesys 10s

 Cubetas de Cuarzo
 Tubos de ensayo
 Pipetas
 Plancha de calentamiento
 Vasos de precipitado
 Balones aforados de 250, 100 y 50mL

Reactivos

 Tartrato de Sodio y Potasio

 Hidróxido de Sodio
 Glucosa anhidra R.A
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 Reactivo DNS
 Muestra de suero Pedialyte®

6. PROCEDIMIENTO
Preparación de una curva de calibración.

 Se preparó un estándar de 5 g/L de glucosa anhidra (R.A) y se realizaron las

diluciones para obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 2,0; 2,5 g/L.

 Se tomó 1ml de cada patrón y se llevó a un tubo de prueba, luego se adicionó

1ml de solución DNS, se agitó y se llevó a calentamiento por 5 min.

PATRÓN BLANCO 1 2 3 4
Concentración (g/L) 0 0,5 1,0 2,0 2,5
Volumen agregado de DNS
0 1 1 1 1
(ml)
Tabla N° 1. Diluciones de cada patrón

 Se enfrió rápidamente y se agregaron 10 ml (o 5 ml.) de agua destilada con

previa agitación.

 Se estableció la absorbancia en el espectrofotómetro a 540 nm y se

construyó la curva patrón, para ello, se graficaron los datos de la curva patrón
colocando en el eje de las abscisas la concentración de azucares reductores
en g/L.
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Barrido en una muestra de suero.

 Se diluyó una muestra de suero en proporción 2:20 de muestra tal que la

dilución final tenga aproximadamente entre 0,2 y 1 mg de azucares
reductores por ml.

 De la muestra diluida, se extrajo 1 ml en un tubo de ensayo y se le adicionó

1 ml de la solución DNS, se agitó y se llevó a calentamiento 5 min.

 Luego se enfrió rápidamente y se agregaron 10 ml de agua destilada con

previa agitación.

 Finalmente, se leyeron las absorbancias en el espectrofotómetro a 540 nm.

Con ese dato encontrado se insertó en la curva de calibración previamente
construida en Excel y el resultado se debe expresar como concentración de
cada muestra por triplicado.

7. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Resultados de la Curva de calibración

Con la curva obtenida se realiza una gráfica de tendencia lineal que se ajusta
a los datos, el R2 obtenido para la ecuación de la recta es de 0,9935.
Teniendo en cuenta que el R2 es mayor a 0,95 los datos no tienen mucha
dispersión y por lo tanto son aceptables.
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CURVA DE CALIBRACIÓN DNS

0.6

0.5 y = 0,2097x - 0,0235

R² = 0,9935
0.4
ABSORBANCIA

0.3

0.2

0.1

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3
CONCENTRACIÓN

Tabla N°2. Gráfico de las absorbancias vs concentración

Resultados del barrido de las muestras.

Se reportaron las absorbancias obtenidas de las muestras utilizando las

formulas del promedio, desviación estándar, coeficiente de variación y el
coeficiente de correlación. Se muestran las absorbancias medidas a una
longitud de onda de 540nm, así como el promedio de la muestra por
triplicado.

ABSORBANCIA
CONCENTRACION
MEDIDA
X = 0,6005 0,084
MUESTRA 1
X = 0,6810 0,102
SUERO
X = 0,6005 0,084
Tabla N°3. Absorbancias brindadas por el equipo (UV-VIS) de la muestra por triplicado.
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PROMEDIO = 0,6273
VARIANZA = 0,072939897 MUESTRA 1
DESVIACION = 0,295851104 SUERO
COEFICIENTE DE
= 47%
VARIACION

Tabla N°4. Variables estadísticas de la muestra.

Cálculos para la cantidad de Glucosa en la muestra de suero

𝒈 𝟐𝟎𝒎𝑳 𝟎, 𝟏𝑳 𝒈
𝟎, 𝟔𝟐𝟕𝟑 × × = 𝟎, 𝟎𝟎𝟔𝟐𝟕𝟑 𝒅𝒆 𝒈𝒍𝒖𝒄𝒐𝒔𝒂
𝑳 𝟐𝒎𝑳 𝟏𝟎𝟎𝒎𝑳 𝟏𝟎𝟎𝒎𝑳

8. CONCLUSIONES

 Con esta práctica pudimos determinar de manera cuantitativa la

concentración de azúcar (glucosa) en una determinada muestra para
poder obtener dos curvas patrón de la absorbancia en la muestra y
nuestras concentraciones y diluciones como ya observados en la gráfica
de la curva de calibración.

 Según la etiqueta del suero Pedialyte® la concentración de glucosa es de

1,18 g/100mL de glucosa monohidratada, lo que nos da un rango de error
debido a la posible degradación del reactivo DNS y/o al estado del
reactivo Glucosa anhidro.
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9. BIBLIOGRAFÍA

 https://es.slideshare.net/vegabner/determinacin-de-azcares-reductores-por-
espectrofotometra-mtodo-dns

 https://www.academia.edu/4403544/DETERMINACION_DE_AZUCARES_REDUCTORES
_METODO_DNS