Extracción

de ADN genómico con STE

1. 1.- Utilizar aprox. 20 mg. de tejido, macerar y depositar el tejido en un tubo
Eppendorf estéril
2. 2.- Adicionar 600 μl de buffer STE (Sodium Acetate-Tris-EDTA), 75 μl de SDS al
20% y 20 μl de proteinasa K (20 mg/ml).
3. Incubar en baño María a una temperatura de 55 oC, resuspendiendo el tejido
con la ayuda de un vortex por períodos de 20 min. hasta alcanzar al menos 3 h
o hasta que el tejido esté completemente lisado.
4. Adicionar 200 μl de solución precipitadora de proteína (acetato de sodio 3 M).
5. Agitar con el vortex durante 20 seg.
6. Incubar 10 min a 0 oC (en hielo).
7. Centrifugar el tubo a 13,000 rpm por 10 min. (se formará un pellet donde está
contenida la proteína)
8. Recuperar el sobrenadante (donde está contenido el ADN), y depositarlo en
otro tubo Eppendorf estéril de 1.5 ml.
9. Añadir 600 μl de isopropanol, mezclar suavemente invirtiendo el tubo
10. Centrifugar el tubo a 13,000 rpm durante 1 min (se formará un pequeño pellet
donde está contenido el ADN) y decantar el sobrenadante.
11. Agregar etanol al 70%, invertir el tubo varias veces con el fin de lavar el ADN
12. Centrifugar el tubo a 13000 rpm durante 1 min.
13. Decantar el sobrenadante y dejar secar el ADN
14. Adicionar 100 μl de solución búfer de rehidratación (TE) o agua destilada libre
de endonucleasas. Almacenar el ADN a 4 oC.