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El estudio de los hongos comienza antes que el de las bacterias. En 1677, Hooke
construye unas lentes y estudia las manchas amarillas de las hojas de una rosa, donde
observa que estaban constituidas por organismos filamentosos, los cuales describe en
detalle e ilustra con dibujos. En 1729, Micheli describe el género Aspergillus entre otros
hongos. En la primera mitad del siglo XIX se realizan progresos en el estudio de los
hongos y no es hasta entonces que aquellos parásitos para el hombre comienzan a atraer
la atención. En la actualidad existen aproximadamente de 50 000 a 100 000 especies
“aceptadas” de hongos. De las mismas, alrededor de 200 son patógenas a los animales
y al hombre bajo ciertas circunstancias; de estas, una pequeña porción puede causar
enfermedad en el humano. Los hongos son microorganismos eucarióticos, aerobios, no
fotosintéticos, inmóviles; tienen una pared celular que constituye el 90 % del peso seco
del hongo, la cual está constituida de polisacáridos como: quitina, celulosa, glucanas y
mananas, entre otros; esto constituye entre el 70 al 80 % y el 10 al 20 % lo forman
proteínas y glicoproteínas las cuales son antigénicas y quizá expliquen la reacción
mediada por células que se produce frente a los antígenos de Candida (candidina) y
dermatófitos (tricofitina). Esta pared le imparte al hongo rigidez, actúa como barrera
osmótica, determina la forma del microorganismo, es importante en la taxonomía y
propiedades antigénicas. Además, los hongos sintetizan lisina, por biosíntesis del ácido
L-aminolipídico; tienen microtúbulos compuestos de la proteína tubulina, ergosterol en sus
membranas celulares (sitio donde actúan algunos fungistáticos como los polienos e
imidazoles bloqueando su formación), centríolo, mitocondria, ribosoma 80 S, núcleo
rodeado de membrana, retículo endoplásmico y mitocondrias. Son heterotróficos y la
mayoría obtiene sustancias orgánicas preformadas del medio ambiente. Los hongos
vierten enzimas hidrolíticas en sus alrededores, las cuales degradan el sustrato en
pequeñas subunidades y de esta forma es que ellos lo absorben. Los patógenos humanos
poseen las enzimas necesarias para obtener nutrientes directamente del hospedero. El
material alimenticio de reserva es el glucógeno. Solamente algunos hongos poseen
cápsula, por ejemplo, el Cryptococcus neoformans, compuesta de polisacárido, es
antigénica y antifagocítica. Por lo general, los hongos patógenos no producen toxinas,
provocan enfermedades crónicas con lesiones de tipo granulomatosas y son resistentes a
los tratamientos. Las micosis superficiales y cutáneas pueden ser crónicas, pero rara vez
afectan la salud general, mientras que las profundas sí la afectan y a veces son mortales.
Los hongos son reconocidos en el laboratorio por su morfología macroscópica y
microscópica, y de acuerdo con ello se dividen en dos grupos:
1. Hongos filamentosos: la hifa o filamento es el elemento primario de estos hongos;
son estructuras cilíndricas parecidas a tubos; pueden tener tabiques o septos en número
variable o no tenerlos y ser aseptadas o cenocíticas; poseen poros pequeños. Según la
forma que adopten pueden ser: vesiculosas, nodulares, pectinadas, en raqueta, en
candelabro fávico y otras. Al conjunto de hifas unidas y entrelazadas se les denomina
micelio, el cual puede ser aéreo o reproductivo, es el que crece en la superficie del medio
de cultivo y donde podemos encontrar las conidias o esporas; el micelio vegetativo o
nutritivo es aquel que se introduce en el medio de cultivo para absorber los nutrientes. En
el micelio aéreo se desarrolla la colonia del hongo, que de acuerdo con el género o
especie a que pertenezcan van a tener diferentes formas y colores. Así pueden ser:
algodonosas, pulverulentas, cerebriformes, crateriformes, etc.; y los pigmentos pueden
ser: rojo, carmelita, violeta, verde, amarillo y otros.
2. Hongos levaduriformes: forman colonias suaves, cremosas, con pigmentos variados
según el género y la especie; pueden ser: blancas, crema, color café, negras; van a estar
constituidas por células redondas, ovales o gemantes denominadas blastosporas o
blastoconidias; en algunas levaduras estas células quedan unidas y se alargan formando
una especie de filamento denominado pseudomicelio. La reproducción es asexual por
gemación.
Dimorfos: son aquellos que crecen tanto en la forma filamentosa como en la
levaduriforme, dependiendo esto, entre otros factores, de la temperatura a que sean
sometidos (25 o 37ºC) y de los nutrientes. Los hongos se reproducen sexual y
asexualmente. Desde el punto de vista médico la reproducción asexual es la más
importante, pues la mayoría de los hongos patógenos para el hombre sólo se reproducen
de esta forma. A pesar de que ya se ha encontrado en algunos la reproducción sexual,
esta no es fácil de obtenerla en los laboratorios, resultando muy útil y económico
identificarlos por su reproducción asexual. Las esporas asexuales se denominan conidias,
estas pueden formarse sobre conidióforos especializados, a partir de una hifa o sobre los
lados o extremos de estas. Dentro de una misma colonia pueden formarse más de una
clase de conidias.
TIPOS DE CONIDIAS O ESPORAS ASEXUALES
1. Microconidias pequeñas unicelulares: pueden ser redondas o piriformes.
2. Macroconidias grandes fusiformes o en forma de clava, de tabaco o lápiz: por regla
general septadas o multiseptadas.
3. Blastosporas o blastoconidias: célula redonda u oval que se reproduce por gemación
con separación posterior del brote o yema de la célula progenitora.
4. Clamidosporas: las células en la hifa se agrandan y forman paredes gruesas, son
resistentes a condiciones ambientales desfavorables y germinan cuando estas
condiciones mejoren.
5. Artrosporas: una hifa septada que se fragmenta en células individuales.
ESPORAS ASEXUALES
Se producen por meiosis y de acuerdo con su origen pueden ser:
1. Zigosporas: fusión de la punta de dos hifas cercanas y se desarrollan esporas grandes
de paredes gruesas.
2. Ascosporas: dentro de una célula especializada llamada asca se forman de cuatro a
ocho esporas.
3. Basidiosporas: en la superficie de una célula especializada llamada basidio se forman
cuatro esporas.
Existen diferentes clasificaciones de los hongos, está la de Whittaker en 1969, pero para
facilitar su ubicación vamos a clasificarlas en cuatro clases, atendiendo al tipo de
reproducción.
A) HONGOS PERFECTOS (poseen reproducción sexual y asexual).
Clase:
Zygomycetes o Phycomycetes: Esporas asexuales, esporangiosporas; y sexuales,
zigosporas, micelio no tabicado. Ejemplo: Mucor, Rhizopus.
Basidiomycetes. Esporas sexuales, basidiosporas; y asexuales, conidias.
Ejemplo: Setas.
Ascomycetes. Esporas sexuales, ascosporas; y asexuales, conidias. Ejemplo:
Nannizzia, Arthroderma, Emmonsiella.
B) HONGOS IMPERFECTOS (poseen solamente reproducción asexual hasta el
momento).
Clase:
Deuteromycetes: Esporas asexuales o conidias. Ejemplo: Candida, Malassezia
furfur, Trichophyton, etcétera. La mayoría de los hongos patógenos para el hombre
se encuentran en esta clase.
CULTIPO DE HONGOS
La mayor parte existen en la naturaleza y proliferan con facilidad en presencia de
fuentes simples de nitrógeno y carbohidratos. Los cultivos para hongos se hacen
comúnmente en juegos de pares, uno incubado entre 25-30°C y el otro entre 35-37°C . Un
medio común es el agar Sabouraud, incubado en el primer par de incubación
mencionado.
Antibióticos en los medios de cultivo para hongos:
La era actual de la quimioterapia antimicrobiana empezó en 1935 con el
descubrimiento de las sulfonamidas. En 1940 se demostró que la penicilina, descubierta
en 1929, es una sustancia terapéutica efectiva. Durante los siguientes 25 años, la
investigación sobre las sustancias quimioterapéuticas se centró en gran parte en los
elementos de origen microbiano llamados antibióticos. Después de aislar, concentrar,
purificar y producir en masa la penicilina, se crearon la estreptomicina, las tetraciclinas, el
cloranfenicol y muchos otros fármacos. Estas sustancias se aislaron originalmente a partir
de medios filtrados en los que se habían cultivado los mohos respectivos. Una de las
características más sobresalientes de los antimicrobianos modernos es la modificación
sintética de los fármacos conocidos. En este capítulo se describen los antimicrobianos
más utilizados en el tratamiento de las infecciones bacterianas.
MECANISMOS DE ACCIÓN DE LOS ANTIMICROBIANOS
Los antimicrobianos actúan de diversas formas: por toxicidad selectiva, inhibiendo
la síntesis y función de la membrana celular, inhibiendo la síntesis de proteínas o
inhibiendo la síntesis de ácidos nucleicos.
TOXICIDAD SELECTIVA
El antimicrobiano ideal exhibe toxicidad selectiva, lo que significa que el fármaco
es nocivo para el microorganismo patógeno sin dañar al hospedador. La toxicidad
selectiva a menudo es relativa y no absoluta. Esto implica que un fármaco a la
concentración que tolera el hospedador es nocivo para el microorganismo infeccioso. La
toxicidad selectiva es una función de un receptor específico necesario para la fijación del
fármaco o bien depende de la inhibición de algún acontecimiento bioquímico
indispensable para el microorganismo patógeno pero no para el hospedador. Los
mecanismos de acción de los antimicrobianos se pueden describir bajo cuatro
encabezados:
1. Inhibición de la síntesis de la pared celular.
2. Inhibición de la función de la membrana celular.
Enzimas
La invasión bacteriana de los tejidos es facilitada con frecuencia por la liberación de
enzimas. Entre ellas se encuentran las hialuronidasas, colagenasas, coagulasas y
fibrinolisinas. Además, los hongos pueden elaborar enzimas; ejemplo: los dermatófitos
producen queratinasa, la cual les proporciona la habilidad de invadir los tejidos
queratinizados, tales como el pelo, la piel y las uñas. Otras dos enzimas adicionales que
parecen ser importantes en la patogenicidad de los hongos son: la fenoloxidasa y la
proteinasa. La producción de fenoloxidasa, la tolerancia de temperatura y la
encapsulación son mecanismos importantes de patogenicidad para Cryptococcus
neoformans. La fenoloxidasa es la enzima responsable de la habilidad de C. neoformans
para producir melanina sobre medios que contengan compuestos fenólicos. La manera en
la cual la fenoloxidasa promueve la virulencia no se conoce, pero cepas deficien- tes de
esta enzima son avirulentas para el ratón. Las proteinasas son designadas como factores
de virulencia para Sporothrix schenckii, Aspergillus, Candida y Coccidioides immitis.
Aunque la función precisa de esas enzimas varía en cada organismo, en general están
involucradas en la iniciación, extensión y diseminación de la infección fúngica.
3. Inhibición de la síntesis de proteínas (es decir, inhibición de la traducción y
transcripción de material genético.
4. Inhibición de la síntesis de ácidos nucleicos.
Su absorción digestiva, como los otros derivados, es amplia, difunde por sangre y se une
en con las proteínas plasmáticas. Se elimina por la orina sin modificaciones metabólicas a
través de filtración glomerular. En ciertas ocasiones alcanza la circulación fetal a través de
la placenta y el líquido pleural y cefalorraquídeo. Su vida media es prolongada (6-10
horas), se concentra en el nivel hepático y también se excreta por la bilis, por lo que se
detecta en las heces.
Indicaciones
Dosificación
La dosis media por vía oral es de 1 a 2 gramos por día, habitualmente 500mg cada 6
horas. En niños mayores de 8 años se pueden administrar dosis de 25 a 50mg/kg/día. Se
aconseja administrarla 1 hora antes o 2 horas después de las comidas.
En pacientes con insuficiencia renal la dosis se reduce o se incrementan los
intervalos entre tomas. Los alimentos y en especial los lácteos interfieren su
absorción digestiva.
Para el tratamiento de la brucelosis, 500mg de oxitetraciclina cuatro veces por día,
durante tres semanas, que se acompañan con estreptomicina, 1g intramuscular
dos veces por día durante la primera semana y una vez por día en la segunda
semana.
Reacciones adversas
Efectos laterales
Precauciones y advertencias
Se usan membranas filtrantes con poros de un tamaño determinado (0.2 um o 0.45 um).
El tamaño del poro dependerá del uso al que se va a someter la muestra. Los filtros que
se utilizan no retienen virus ni micoplasmas, estos últimos están en el límite de separación
según el diámetro de poro que se utilice.
La filtración se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolábiles. Su uso para
esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftálmicas, soluciones
intravenosas, drogas diagnósticas, radiofármacos, medios para cultivos celulares, y
soluciones de antibióticos y vitaminas.
RECUENTO EN PLACA
La preparación del medio para recuento de hongos y levaduras se adjunta en
“CUADRO No 1”
• Debido a que es difícil saber si una sola bacteria dio origen a una colonia, se
expresa usualmente el número de células viables como unidades formadoras de
colonias (UFC). Como se trata de mohos y levaduras el laboratorio entre 15 – 150
o 20 – 200 UFC
METODOLOGÍA
Instrumentos:
Equipos:
Incubadora.
Refrigeradora
Baño María
Licuadora.
Equipo de filtración.
Membrana de filtrado 25mm 0,45μm.
Embudo esterilizado
Equipo de bomba de filtrado (bomba de vacío)
Rampa en acero inoxidable
Soporte de filtro de membrana (multifiltración) o Rampa en acero inoxidable
2 Frascos para vacío (kitasato) (1 litro y 500ml (esterilizado))
Junta de goma (tapón) Guko para matraces Kitasatos
50 cm de tubo flexible o manguera (2)
A) Tipo de Esterilización por otros tratamientos físicos: Filtración
1 moho blanco
pequeño.
10-4 No hubo crecimiento Un moho 1 < (20 – 200
pequeño de hifas COLONIAS)
blancas
CONTEO = <10
UFC/gr.
1. Los fines de preparación de medios y micología, son extensos tema del curso, por
lo que se no se ha profundizado las cualidades en teoría para estos
microorganismos.
2. Las posibilidades de contaminación por cualquier factor, son muy altas, lo que
dificulta el trabajo con organismos y muestras delicadas, al tratarse del recuento
en placa.
3. Desinfección constante de las pinzas, influirá si se realiza de manera correcta en la
verificación de resultados.
4. Si se usa una pipeta serológica, recomendable empezar a separar alícuotas desde
las concentraciones más altas (10-5) hasta llegar a las más bajas (10-1)
5. Para no desnaturalizar el antibiótico, se le adiciona esterilizado por filtración,
cuando el medio se vierte a la placa Petri sobre las alícuotas, siempre en
proporción 0.1gr/lt de medio.
6. La muestra de avena en diluciones 10-1 y 10-2, ya en agua de dilución no se
pudieron homogenizar en su totalidad, pues se tornó casi sólido, lo cual impidió el
cometido.
21x10 UFC/gr de los resultados obtenido, no llegan al rango de peligro de
sobrecarga de mohos, que rectifica la calidad e inocuidad de la avena a granel.
CONCLUSIONES
RECOMENDACIONES
6) Las pipetas deben ser estériles y se debe tener cuidado de no confundir una con
otra al momento de las diluciones.
7) Al colocar el agar en las placas Petri se debe realizar movimientos de vaivén para
que se homogenice la muestra y no se solidifique muy rápido
BIBLIOGRAFÍA
Anexos
AGAR OGY
NOMBRE:
(Agar-Oxitetraciclina-glucosa-extracto de levadura)
Agar selectivo según Mossel y col.(1970) para la demostración y numeración de
mohos y levaduras en todo tipo de material de investigación (alimentos, material
clínico, etc.).
Descripción y El agar-oxitetraciclina-glucosa-extracto de levadura ha sido recomendado como
Uso: medio de rutina para la investigación de mantequilla.
En la investigación de muestras de heces procedentes de pacientes tratados con
Tetraciclina, las Enterobacteriáceas sólo son inhibidas de manera insuficiente. En
tales casos, es preferible el empleo de Gentamicina en vez de la Oxitetraciclina.
Disolver 30 g/litro, esterilizar en autoclave
(15 min. A 121ºC), dejar enfriar hasta unos
Extracto de 5,0
50ºC, incorporar 0,1 g/litro de Oxitetraciclina
levadura 10,0
en forma de solución acuosa o 0,05 g/litro de
Composición: D(+)glucosa 15,0
Preparación Gentamicina (1 mL/litro de Gentamicina en
(g/L) Agar-agar
solución) y verter en placas.
pH: 6.5 + 0,2
Aditivo: Las placas con medio de cultivo son claras e
Oxitetraciclina 0,1 o incoloras.
Gentamicina 0,05.
El material objeto de investigación se homogeniza, eventualmente, con solución
Ringer (Tabletas de RINGER), se diluye y se extiende sobre las placas mediante
Empleo e espátula.
interpretación Incubación: hasta 5 días a temperatura ambiente (aprox. 22ºC).
Contar el número de colonias de hongos por placa y mediante el factor de dilución,
calcular el número de gérmenes del material objeto de investigación.
NORMATIVA DIGESA:
PLANES DE MUESTREO
“m”: Límite microbiológico que separa la calidad aceptable de la rechazable y los valores
superiores a “m” indican lotes aceptables o inaceptables.
DISPOSICIONES ESPECÍFICAS
GRAFICOS (Representativos)