Estrés oxidativo

El estrés oxidativo ocurre cuando la velocidad de formación de moléculas prooxidantes excede la

velocidad de su eliminación por los mecanismos antioxidantes de defensa de un organismo
(Hippeli y Elstner, 1996; Levine, 1999). Un antioxidante es cualquier compuesto capaz de extinguir
especies reactivas de oxígeno (ROS) sin convertirse en un radical destructivo. Los organismos
aeróbicos utilizan principalmente el dioxígeno (O2) como un aceptor de hidrógeno y electrones
para generar agua (Elstner, 1982; Levine, 1999). El oxígeno también se incorpora en las moléculas
orgánicas a través de varias vías y reacciones bioquímicas, tales como catálisis enzimática (por
ejemplo, RuBP oxigenasa, hidroxilasas, fenoloxidasas), reacciones químicas no enzimáticas
(reducción del oxígeno e in corporación de especies reducidas) y físicas (fotodinámicas) Activación
(Elstner, 1982). Esta complejidad en la incorporación de oxígeno se deriva de la situación del
estado base del dioxígeno, con sus dos electrones no apareados con giros paralelos (triplete) en la
cubierta electrónica externa y la consecuente baja reactividad hacia otras moléculas que
presentan el estado base más común (singlete) con Pares de electrones. Triplete de oxígeno,
debido al principio de restricción de spin que requiere que los electrones que entran en el orbital
deben tener un Spin opuesto, puede reaccionar con moléculas de donante de electrones sólo uno
come una vez, Es decir, reaccionan a especies radicales o e no emparejadas (Leshem, Halevy,
Frenkel y Frimer, 1986). La molécula de O2 puede entonces aceptar cuatro e (así como cuatro H),
Con la producción de dos moléculas de agua (Levine, 1999). La reacción global de O2
Reducción es:

Durante las cuatro reducciones univalentes unidas de dioxígeno, se generan diferentes especies de
oxígeno activo (AOS). La cadena de reacción de cuatro etapas requiere iniciación para la primera
endotérmica, mientras que todas las etapas exotérmicas subsiguientes ocurren espontáneamente,
ya sea catalizadas o no (Elstner, 1982).

Desafortunadamente, la química del oxígeno también está relacionada con la producción AOS, a
saber radicales libres de oxígeno más peróxido de hidrógeno (H2O2). El término radical libre
Cualquier molécula que tenga electrones desemparejados en sus orbitales electrónicos exteriores,
que engendra otro radical cuando reacciona con un no radical, y se utiliza normalmente para
radicales relativamente estables cuya longevidad es suficiente para existir por separado y
reaccionar con otras moléculas. El radical libre más común en la atmósfera es la propia molécula
de oxígeno, que con los dos electrones no apareados en la capa exterior constituye una molécula
birradical. Afortunadamente, su reactividad en el estado fundamental se reduce
considerablemente por el principio de restricción de spin. Esta restricción ya no existe en las
especies de oxígeno reducido, ya que sólo tienen un electrón desparejado en la capa externa de
electrones. El radical superóxido (O2 · -) está cargado negativamente, no puede cruzar
membranas, tiene una vida muy corta y, si no se cataliza enzimáticamente, reacciona sólo con un
número limitado de biomoléculas (Levine, 1999). Sin embargo, si la eliminación rápida e inmediata
de O2 · - en el lugar de su generación No se realiza, puede reaccionar con proteínas, ácidos
nucleicos, carbohidratos y lípidos, en particular ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) (Leshem,
Halevy, Frenkel y Frimer, 1986). El superóxido se convierte rápidamente en H2O2 difundible en
membrana
Por superóxido dismutasa (SOD, EC 1.15.1.1), ascorbato, tioles o dismutación espontánea (Knorzer
et al., 1996, Foyer et al., 1997, Yamasaki et al., 1997). En los tilakoides, el H2O2 es fotoproducido a
través de la desproporción espontánea de O · - pero no directamente a través de la reducción de
dos electrones de O2 (Asada, 1999). La toxicidad del peróxido de hidrógeno en sí es relativamente
débil en comparación con la de otros AOS, pero en presencia de O2 · - puede generar el hidroxilo
reactivo
Radical (OH), una de las moléculas más reactivas conocidas. Este radical se forma muy
rápidamente en presencia de iones metálicos tales como Fe2 + o Cu2 + (reacción de Haber-Weiss
catalizada por metal), y puede reaccionar con casi cualquier biomolécula, desde proteínas a ácidos
nucleicos y lípidos (Scandalios, 1993; Shen Et al., 1997, Asada, 1999).

El peróxido de hidrógeno representa un cruce crucial en el mecanismo del estrés oxidativo, y su

restricción dentro de un rango fisiológico representa una lucha crucial en la vida celular. Por lo
tanto, no es tan extraño que una gran cantidad de mecanismos diferentes sean utilizados por las
células para limpiar el exceso de H2O2. Muchas enzimas diferentes están involucradas en esta
tarea; La enzima peroxidasa (APX, EC 1.11.1.11) y las enzimas relacionadas en los cloroplastos, la
catalasa (CAT, EC 1.11.1.6) en los peroxisomas, los glioxisomas y las mitocondrias y la peroxidasa
aniónica asociada al citoplasma (POX, EC 1.11.1.7) Los principales (Asada, 1992, Zheng y van
Huystee, 1992, Foyer y otros, 1994, Knorzer et al., 1996, Yamasaki et al., 1997, Noctor y Foyer,
1998). Se ha descubierto que el peróxido de hidrógeno, una molécula permeable a la membrana,
actúa como una señal intercelular difusible implicada en muchos factores de estrés diferentes,
tales como el enfriamiento (Prasad et al., 1994), el calor (Dat et al., 1998) y el patógeno Defensa
(Levine, 1999). Induce una serie de genes y proteínas implicados en la defensa contra el estrés,
tales como CAT, POX, glutatión S-transferasa (GST, EC 2.5.1.18), SOD, proteínas relacionadas con la
patogénesis y oxidasa alternativa (Prasad et al., 1994; Foyer et al., 1997, Morita et al., 1999).
Parece probable que la acumulación de H2O2 esté implicada en la regulación citosólica de APX en
algunas, si no en todas, las condiciones de estrés (Morita et al., 1999). Estos y otros resultados
apoyan la hipótesis de que las señales redox comunes están implicadas en la inducción de
respuestas aclimatadoras tanto a las tensiones abióticas como a las bióticas.
El envejecimiento poscosecha como paso final en el síndrome de madurez de la senectud

La senescencia en las plantas está estrictamente relacionada con la especie y el órgano que se está
considerando. En anuales, las flores, los frutos, las hojas, y finalmente las raíces senescen y
mueren, generalmente en este orden. En los árboles de hoja caduca, sólo las flores, los frutos y las
hojas generalmente senescen y se abstienen, y la muerte puede deberse a una infección u otras
causas ambientales más que a una verdadera senescencia (Thimann, 1987). En los frutos, por lo
menos los llamados climatéricos, las primeras etapas de la senescencia están relacionadas con la
maduración, fase que normalmente se asocia con el desarrollo de la calidad óptima de la
alimentación y que representa las etapas finales de la maduración. Los procesos de senescencia
posteriores, o envejecimiento, son normalmente ralentizados durante largos períodos por
tratamientos de almacenamiento a baja temperatura. La última etapa, la descomposición, parece
ser en gran parte una función de las infecciones secundarias (Thimann, 1987; Ludford, 1995).

Involucramiento del Estrés Oxidativo en el Mecanismo de Envejecimiento

La maduración de frutos y la senescencia pueden considerarse como un proceso oxidativo que

implica alteraciones marcadas en el metabolismo de los frutos y en la actividad de muchos
enzimas, incluidas las relacionadas con la regulación de AOS. Las especies de oxígeno activo se
producen continuamente en todos los sistemas biológicos aeróbicos, y su generación se mantiene
generalmente en niveles compatibles con la vida de una célula por la maquinaria antioxidante de
la célula (Figura 9.1). Por lo tanto, el estrés oxidativo leve (SO) es una faceta normal del ciclo de
vida de una célula (Foyer et al., 1994; Noctor y Foyer, 1998). Sólo en condiciones estresantes y / o
en etapas peculiares del desarrollo de células / órganos, como la senescencia de las frutas, se
encuentran los sistemas antioxidantes a menudo abrumados por los AOS generados dentro de la
célula (Sen Gupta et al., 1993; Hipereli y Elstner, 1996; Al., 1997). El efecto de AOS en las células y
tejidos depende de su concentración y longevidad y puede inducir tanto respuestas antioxidantes,
apoptosis (muerte celular programada) como necrosis tisular. Cuando el SO es fuerte y
prolongado, induce la senescencia de los compartimientos estresados, junto con el aflojamiento
parcial de la maquinaria reguladora (Hippeli y Elstner, 1996). La peroxidación lipídica puede
considerarse como uno de los procesos detectables más tempranos, que ocurren durante la
maduración del fruto (Meir et al., 1991). La acumulación de lípidos peroxidados en las membranas
senescentes, debido principalmente a su disminución de la capacidad de blebbing, contribuye a la
pérdida de la función de la membrana (Hudak et al., 1995). Al final del proceso oxidativo,
aldehídos y lipofuscinas son producidos químicamente a partir de lípidos peroxidados y grupos
amino proteicos (Meir et al., 1991; Hippeli y Elstner, 1996). Estas moléculas contribuyen a la
necrosis celular y, además de fenoloxidasas y productos de peroxidasa (es decir, o-quinonas de
O-dihidroxifenoles), son responsables de los efectos de dorado (Hippeli y Elstner, 1996)

¿Los procesos enzimáticos que generan AOS controlan la tasa de envejecimiento? La respuesta a
esta pregunta parece ser afirmativa. En la maduración, la actividad de las enzimas productoras de
AOS tales como xantina oxidasa y glicolato oxidasa aumenta. Los niveles de peróxido de hidrógeno
también se incrementan por la disminución concomitante de la actividad catalasa. Además, se
estimula la actividad de una peroxidasa de pared celular específica, estrictamente relacionada con
la maduración de los frutos (Leshem, Halevy, Frenkel y Frimer, 1986; Levine, 1999). Las especies de
oxígeno activo también se pueden generar en reacciones no enzimáticas. De hecho, muchos
sistemas diferentes son capaces de actuar como donantes de electrones, incluyendo componentes
de e- Sistemas de transporte (en cloroplastos, mitocondrias, microsomas), metal reducido
Iones y solvatados producidos por radiación (Elstner, 1982).

Peroxidación y Permeabilidad de las Membranas

Cualquier condición en la cual la homeostasis redox celular se interrumpe puede ser como el
estrés oxidativo (Alscher et al., 1997). Los procesos de maduración y senescencia pueden estar
relacionados con fenómenos oxidativos (Brennan y Frenkel, 1977; Masia, 1998). Varias líneas de
evidencia indican que la peroxidación de los lípidos de la membrana está profundamente

implicada en la maduración y la senescencia de los tejidos vegetales (Hudak et al., 1995,

Shewfelt y Purvis, 1995). Los niveles de H2O2 e hidroperóxidos lipídicos también
aumentan en los frutos de maduración (Meir et al., 1991, Hudak et al., 1995). La
capacidad de las membranas para eliminar catabolitos celulares indeseados por el
proceso de burbujas disminuye con la progresión de la senescencia; Esta disminución
puede deberse en parte a la disminución de la fluidez de la membrana a granel que es
característica de la senescencia (Hudak et al., 1995). La senescencia y el envejecimiento
se reflejan en un aumento progresivo de la permeabilidad de la membrana celular y una
pérdida concomitante en la función de la membrana (Izzo et al., 1995). Diferentes factores
de estrés ambientales como el enfriamiento, el estrés hídrico, las lesiones mecánicas y los
contaminantes atmosféricos también son capaces de inducir, a nivel celular, resultados
similares (Hippeli y Elstner, 1996; Levine, 1999). La desestabilización de la membrana se
ha imputado a la peroxidación lipídica, debido a una sobreproducción de AOS (Du y
Bramlage, 1995).

¿Hay algún papel desempeñado por el etileno en la vía de peroxidación lipídica

controlada con lipoxigenasa? Parece existir una correlación estricta entre la enzima y la
hormona, especialmente durante condiciones estresantes (Figura 9.1). Los productos
iniciales de la acción de la lipoxigenasa (LOX, EC 1.13.11.12) son los hidroperóxidos de
ácidos grasos. La descomposición de estos productos da lugar a aldehídos tales como
malonildialdehído (MDA) e hidrocarburos de bajo peso molecular tales como etano,
hexenales, pentano y etileno (C2H4) (Leshem, Halevy y Frenkel, 1986). Además, la
síntesis mejorada de etileno en tejidos tensionados in vivo requiere tanto la síntesis
promovida de ACC (ácido 1-aminociclopropano-1-carboxílico) como la conversión química
más fácil de ACC a etileno derivado de un aumento de lipoperoxidos mediado por LOX
(Kacperska y Kubacka-Zebalska, 1989), aunque este papel para la fuente in vivo de
etileno mediada por LOX ha sido posteriormente refutado (Siedow, 1991). La peroxidación
lipídica puede ser el resultado de dos rutas oxidativas diferentes. La interacción de AOS,
como superóxido, y H2O2 con especies de hierro (Fe2 +, Fe3 +) en membranas conduce
a la formación de radicales libres de lípidos (Shewfelt y Purvis, 1995). Los lípidos de
membrana son probablemente peroxidados por el radical hidroxilo generado en la
membrana en proximidad cercana a un PUFA. El radical peroxılido lipıdico resultante
(LOO ·) se convierte rápidamente en un hidroperóxido lipıdico (LOOH) por interacción con
otros ácidos grasos, alfa-tocoferol y / u otros donantes de hidrógeno. Los hidroperóxidos
de lípidos también se producen directamente mediante la oxidación mediada por
lipoxigenasa de ácidos grasos libres derivados de la acción concomitante de enzimas
hidrolíticas sobre lípidos de membrana. Bajo condiciones normales en la célula, la
peroxidación mínima de los lípidos de la membrana y de las proteínas ocurre debido a la
eficacia de los mecanismos de defensa. Bajo condiciones de estrés oxidativo, la
maquinaria enzimática antioxidante celular es incapaz de controlar el aumento de AOS y
de hidroperóxidos lipídicos, resultando un ataque peroxidativo (Figura 9.1).
Recientemente, se ha propuesto una nueva vía, activada bajo estrés inducido por el
exceso de H2O2, con la inducción de glutatión S-transferasa y glutatión peroxidasas
(Eshdat et al., 1997).

En los últimos años se ha esbozado un modelo completo para la peroxidación

lipídica (Shewfelt y Purvis, 1995): AOS se producen continuamente como
subproductos de procesos metabólicos naturales en la célula (actividad LOX
incluida), en particular superóxido y H2O2, y Pueden interaccionar con
membranas en presencia de hierro (por ejemplo, Fe2 +, Fe3 +) u otros iones de
metales de transición (Shen et al., 1997), dando lugar a la formación de radicales
libres de lípidos. Los hidroperóxidos lipídicos también se forman en las
membranas por la acción de LOX sobre ácidos grasos libres. Para cada una de
estas fuentes de peroxidación de lípidos en la membrana celular, un mecanismo
de defensa diferente está en el trabajo. Las especies de oxígeno activo son
degradadas por enzimas antioxidantes tales como SOD, CAT, APX y similares, y
compuestos antioxidantes tales como alfa-tocoferol, betacaroteno y ácido
ascórbico (AA), mientras que la actividad LOX es controlada por
compartimentación y la concomitante Presencia de PUFAs en la forma esterificada
(ataque enzimático impedido). Los sistemas de defensa de la membrana son
generalmente capaces de proteger los lípidos de la membrana del daño del OS
causado por la producción continua de AOS, y cualquier lípido y proteínas
peroxidados son reparados rápidamente. Bajo condiciones de estrés, los niveles
de AOS aumentan, estimulando a menudo la síntesis de moléculas de defensa y
enzimas antioxidantes tales como SOD, CAT, APX y GPX (Elstner, 1982, Noctor y
Foyer, 1998; Levine, 1999). Si el sistema operativo es suficientemente grave y / o
de duración prolongada, sin embargo, el nivel de prooxidantes puede superar la
capacidad de defensa de la célula, resultando en daños principalmente a nivel de
membrana con la peroxidación de PUFAs, que es la reacción más favorecida
cinéticamente Shewfelt y Purvis, 1995). La peroxidación de ácidos grasos
poliinsaturados puede, hasta cierto punto, actuar para proteger contra el ataque
directo de proteínas y ácidos nucleicos por AOS. A medida que los radicales libres
de lípidos se convierten en hidroperóxidos de lípidos, la concentración de tocoferol
disminuye, particularmente como consecuencia del agotamiento de AA, glutatión
(GSH) y otros reductores de células. Cuando los niveles de tocoferol en la
membrana alcanzan una concentración que es demasiado baja para proteger los
lípidos, las reacciones de propagación de la cadena de radicales libres se
producen a un ritmo mucho más rápido que los mecanismos de reparación, dando
como resultado la modificación de las propiedades físicas de la membrana. La
posterior peroxidación directa de proteínas, derivada principalmente de la acción
de los radicales libres de lípidos, conduce a una disminución de la actividad
enzimática, desequilibrios metabólicos, disfunción celular y trastornos de tejidos
(Shewfelt y Purvis, 1995).
También conocido como vitamina E, el α-tocoferol es una molécula lipofílica con una alta
capacidad reductora, y es el antioxidante más importante en los medios lipófilos como las
membranas, que son un blanco preferencial para el ataque de los radicales libres (Fryer,
1992). También es un eliminador de radicales eficaz tanto para el oxígeno singlete como
para el peroxilo orgánico. El papel principal del α-tocoferol en todas las membranas
biológicas es actuar como un terminador de reacción en cadena altamente eficiente y
reciclable para la eliminación de las especies de radicales PUFA generadas durante la
peroxidación lipídica. El radical de vitamina E oxidado se vuelve a reciclar a tocoferol por
interacción con ascorbato o GSH. También contribuye a la estabilización de la membrana
mediante la incorporación en membranas con la cadena fítil, y parece influir
significativamente en la fluidez de la membrana (Fryer, 1992; Shewfelt y Purvis, 1995).
Similar al α-tocoferol, el ácido ascórbico puede eliminar radicales hidroxilo, oxígeno singlete y
superóxido. El ascorbato también actúa como un reductor en la regeneración de α-tocoferol y en
el ciclo de zeaxantina (Foyer, 1993). El ascorbato preserva las actividades de las enzimas que
contienen iones protésicos de metales de transición. El ascorbato está presente a altas
concentraciones en muchos compartimentos de la célula, por ejemplo, en los cloroplastos es de
aproximadamente 25 mM. Es la molécula antioxidante más importante en las plantas, con un
papel primordial en la eliminación de H2O2 a través del ciclo de glutatión-ascorbato (Foyer et al.,
1994; Noctor y Foyer, 1998). El glutatión es un tripéptido con un grupo tiol y tiene un papel
fundamental en la defensa antioxidante. Actúa como un reductor de disulfuro, protegiendo los
tioles de las enzimas; Regenera el ascorbato del deshidroascorbato (DHA) a través de la enzima
deshidroascorbato reductasa (DHAR; EC 1.8.5.1); Y reacciona con el oxıgeno singlete y los radicales
hidroxilo. En condiciones normales se encuentra principalmente en la forma reducida del
tripéptido, mientras que, como consecuencia del estrés severo, GSH explica su actividad
antioxidante y forma la molécula de disulfuro de glutatión oxidado (GSSG) que se reduce de nuevo
a GSH por la glutatión reductasa 1.6.4.2). Un exceso de GSSG en la célula puede inactivar las
enzimas mediante la formación de disulfuros mixtos (Foyer et al., 1997)

El glutatión es un tripéptido con un grupo tiol y tiene un papel fundamental en la defensa

antioxidante. Actúa como reductor de disulfuro, protegiendo los tioles de las enzimas; Regenera el
ascorbato del deshidroascorbato (DHA) a través de la enzima deshidroascorbato reductasa (DHAR;
EC 1.8.5.1); Y reacciona con el oxıgeno singlete y los radicales hidroxilo. En condiciones normales
se encuentra principalmente en la forma reducida del tripéptido, mientras que, como
consecuencia del estrés severo, GSH explica su actividad antioxidante y forma la molécula de
disulfuro de glutatión oxidado (GSSG) que se reduce de nuevo a GSH por la glutatión reductasa
1.6.4.2). Un exceso de GSSG en la célula puede inactivar las enzimas mediante la formación de
disulfuros mixtos (Foyer et al., 1997).

Mecanismo de Senescencia y Envejecimiento

En la fruta de aguacate, la peroxidación lipídica, que implica la formación de radicales libres,

precede a la maduración (Meir et al., 1991). El proceso de senescencia durante la maduración se
inicia por deterioro oxidativo de las membranas celulares y precede a los otros procesos
bioquímicos y enzimáticos característicos. De hecho, la acumulación de productos de peroxidación
lipídica comienza antes de la aparición del etileno y la respiración climatérica y la disminución de la
firmeza de la fruta. Al inicio de la maduración, los cambios rápidos en la membrana aumentan la
permeabilidad de la membrana, induciendo una decomparación resultante de los componentes
celulares, un aumento en los procesos catabólicos, iniciando así la senescencia de la fruta. En el
fruto del melocotón, los mayores cambios en la composición de los lípidos se producen al final de
la fase de crecimiento del SIII, correspondiente al inicio del climaterio (Izzo et al., 1995). Durante la
maduración, la senescencia y las tensiones abióticas, un aumento en la relación molar esterol /
fosfolípido libre se ha relacionado con una disminución en la fluidez de la membrana. En la
maduración de la fruta de melocotón, se encontró un aumento significativo en el índice de doble
enlace en todas las clases de lípidos, lo que indica un aumento progresivo en la actividad de las
desaturasas. Las desaturasas microsómicas se activan durante la senescencia, con la consiguiente
formación de especies moleculares poliinsaturadas propensas a la hidrólisis lipolítica,
desorganización de las membranas, aumento de los procesos catabólicos y posterior
envejecimiento de la fruta y senescencia. El desarrollo de la senescencia en los tejidos de las
plantas es generalmente paralelo a un enorme aumento del AOS tóxico, un resultado probable de
actividades enzimáticas rápidamente modificadas que están determinadas y controladas
genéticamente (Leshem, Halevy, Frenkel y Frimer, 1986). Los procesos oxidativos pueden tener un
impacto profundo en los niveles y actividades hormonales, y esto es particularmente cierto para el
etileno. Además, los procesos oxidativos pueden tener un efecto general sobre la transición desde
el estado reducido de las células no senescentes al estado altamente oxidado de las células de
envejecimiento. Por lo tanto, la maduración puede verse como una prolongada forma de
senescencia durante la cual el SO aumenta progresivamente, principalmente como consecuencia
de una actividad decreciente de enzimas clave responsables de la maquinaria celular antioxidante.
En el climaterio de la fruta de saskatoon, la maduración es paralela a un aumento progresivo en
OS que afecta dramáticamente el aumento en los lípidos polares (Rogiers et al., 1998). Una mayor
producción de LOOH, derivada de la actividad de LOX más alta, junto con una disminución en las
actividades de SOD y CAT y un aumento concomitante en la respiración, contribuyen a un
aumento del estado oxidativo celular. El aumento en LOOH y en AOS eventualmente induce
mayores actividades de POX, GR y GST durante las últimas etapas de maduración. La maduración y
maduración de las frutas, junto con una disminución constante de la respiración, son fenómenos
de senescencia y están estrechamente relacionados con la fisiología del etileno (Ludford, 1995). En
la fruta climatérica, un aumento pronunciado en la producción de C2H4 precede al aumento de la
respiración, mientras que la inhibición de la síntesis y / o la percepción del etileno inhiben la
maduración. Aplicaciones exógenas de C2H4 promover la maduración en diferentes cultivos como
manzana, plátano, mora, cereza, uva, pimienta y tomate. Además, la inhibición de la producción
de C2H4, ya sea limitando la formación de las enzimas de síntesis de etileno o estimulando la
degradación de ACC, es eficaz para inhibir la maduración.

FISIOLOGIA DE ETHILENO EN POST-COSECHA

Síntesis de etileno

Es comúnmente aceptado que en las plantas con flores el camino más frecuente de biosíntesis de
etileno procede de metionina, a través de S-adenosilmetionina (SAM, AdoMet) y ácido 1-
aminociclopropano-1-carboxílico a etileno (Figura 9.2), y que los dos Las enzimas implicadas son
ACC sintasa (ACS) y ACC oxidasa (ACO), anteriormente conocida como enzima formadora de
etileno (EFE) (Yang y Hoffman, 1984). Se ha planteado la hipótesis de que dos sistemas diferentes
que regulan la producción de etileno están funcionando en plantas superiores. El sistema I, que
opera en tejidos vegetativos y en frutas climatéricas y no clınicas, parece ser responsable de la
producción de etileno basal e inducido por la herida, mientras que el sistema II es potencialmente
responsable del rápido aumento de la producción de etileno durante la maduración de frutos
climatéricos. En los frutos climatéricos maduros, la producción de C2H4 se autoestimula y los
inhibidores de la acción del etileno bloquean completamente la producción de C2H4 y la
maduración de los frutos (Lelievre, Latche et al., 1997). La producción autocatalítica de C2H4
requiere la regulación por el etileno de ACS y ACO, las enzimas implicadas en las reacciones
limitantes de velocidad en la biosíntesis de etileno.
ACC Sintasa (S-Adenosil-L-Metionina Metiltioadenosina Liasa,ACS; CE 4.4.1.14)
ACS, que cataliza la formación de ácido 1-aminociclopropano-1-carboxílico a partir de S-adenosil-L-
metionina, es la enzima limitante de la velocidad en la biosíntesis de etileno. Se inactiva
rápidamente por la interacción con su sustrato, presentando así una alta rotación tanto in vitro
como in vivo. Está codificado por una familia multigénica cuyos genes miembros se expresan en
respuesta a diferentes factores internos o ambientales; Al menos dos miembros de la familia de
genes se expresan durante el proceso de maduración del fruto (Kubo et al., 1995; Mathooko et al.,
1999). La enzima requiere fosfato de piridoxal para la actividad y es inducida en tejidos vegetales
por aplicación de ácido indol-3-acético (IAA), herida y en la maduración de frutos climatéricos
(Abeles et al., 1992a, McKeon et al., 1995). La herida del tejido del mesocarpo de la fruta de la
calabaza de invierno induce un aumento dramático en la producción de C2H4 y un aumento
concomitante en la actividad de ACS. El mismo efecto sobre la actividad de ACS puede obtenerse
mediante tratamientos exógenos con 2,5-norbornadieno y diazociclopentadieno (DACP), ambos
inhibidores de la acción del etileno (Kubo et al., 1995). Estos y otros hallazgos sugieren que la
expresión génica de ACS inducida por heridas está regulada por un sistema de retroalimentación
negativa, produciéndose C2H4 como respuesta a la herida y actuando como un inhibidor de la
síntesis enzimática de ACS.

ACC Oxidasa (1-Aminociclopropano-1-Carboxilato Oxidasa, ACO, Anteriormente EFE)

ACO, una enzima oxidativa y miembro de la familia de la dioxigenasa dependiente de Fe (II),
convierte el ACC en etileno. Como su actividad era difícil de demostrar in vitro, los primeros
ensayos se realizaron in vivo (McKeon et al., 1995). La validación de la actividad de ACO auténtica
se basa en la estereospecificidad del sustrato, su dependencia de O2, la inhibición por Co2 + en el
intervalo de 10 a 100 miuM y la inhibición competitiva por alfa-aminoisobutirato. Todas las
preparaciones enzimáticas posteriores para la actividad in vitro requerían Fe2 + y ascorbato en los
medios de extracción para la actividad. Después de la purificación enzimática, se reconoció ACO
como un monómero con una masa molecular de 35 kDa, que catalizó la siguiente reacción:

Dado que la ACO es una enzima exclusivamente citosólica no asociada con las membranas, sus
productos de reacción se liberan en el citoplasma (Grossmann, 1996; John, 1997). Inicialmente, se
consideró que la enzima era constitutiva (Yang y Hoffman, 1984), pero ahora es claro que puede
ser inducida por el estrés (Morgan y Drew, 1997) y durante ciertas etapas de desarrollo como
maduración de los frutos (Yang y Hoffman, 1984). En el tejido mesocarpiano de la fruta de la
calabaza de invierno, la actividad de la ACO se induce muy rápidamente por herida y es paralela al
aumento de la tasa de producción de etileno (Hyodo et al., 1993). La síntesis de ACO se controla
mediante un sistema de retroalimentación positiva, estimulado por etileno (Kubo et al., 1995,
Atta-Aly et al., 2000). La regulación de ACO y ACS puede representar el sistema de control
principal de la tasa de producción de etileno en frutas. Sin embargo, otros pasos en la ruta de
biosíntesis de etileno juegan un papel. En la manzana, los enormes porcentajes de ACC
sintetizados en la piel de frutos inmaduros pueden almacenarse en las vacuolas como malonil ACC
inactivo (MACC) (Lelievre, Latche et al., 1997). Recientemente, se ha descrito otra derivación en la
vía del ACC en extractos crudos de tomate, con conjugación ACC a un derivado 1 (-L-
glutamilamino) (GACC) en presencia de glutatión. En presencia de cofactores particulares, otras
enzimas además de ACO pueden oxidar ACC a etileno. Estas enzimas incluyen IAA oxidasa,
peroxidasas, lipoxigenasa, y oxidasas generadoras de H2O2 (Yang y Hoffman, 1984).

Efectos del etileno

El etileno es una hormona vegetal que regula muchos aspectos fisiológicos del crecimiento,
desarrollo, maduración y senescencia de las plantas (Yang y Hoffman, 1984, Abelès et al., 1992a,
Ponnampalam et al., 1993, Oetiker y Yang, 1995, Picton et al 1995, Beaulieu et al., 1998,
Mathooko et al., 1998). El etileno controla la maduración de los frutos climatéricos coordinando la
activación de muchos genes que causan cambios en el color, la textura, el aroma y el sabor
(Oetiker y Yang, 1995). Recientemente se ha obtenido una imagen más clara de su papel en la
maduración de los frutos mediante la caracterización de los genes que codifican las principales
enzimas biosintéticas de etileno ACS y ACO y el aislamiento de los genes implicados en la vía de
transducción del etileno, como los que codifican los receptores de etileno (Lelievre, Latche , Et al.,
1997). El uso de plantas transgénicas, con niveles alterados en la producción de C2H4 o
sensibilidad, destacó que la producción autocatalítica de etileno requiere una regulación por C2H4
de ACS y ACO, y que la expresión génica de ACO está controlada por el desarrollo y precede a la
expresión de ACS. Muchos datos experimentales diferentes sugieren un modelo para la expresión
del gen ACS y ACO durante la transición a la producción autocatalítica de etileno en la fruta
climatérica.

La tasa de evolución de C2H4 se utiliza normalmente como una medida del grado fisiológico de
maduración en frutas climatéricas y / o como indicador de niveles de estrés en las plantas
(Beaulieu et al., 1998). De hecho, las frutas preclimácticas producen bajos niveles de etileno; En el
inicio del climaterio hay un aumento en la producción de C2H4 y su regulación se convierte en
autocatalítica (Oetiker y Yang, 1995). El tratamiento exógeno del etileno induce solamente la
síntesis del ACO en frutas preclimacteric como el tomate, el cantalupo, el aguacate, y la manzana.
El aumento de ACO ocurre antes del aumento climático de la producción de etileno. Los efectos de
los tratamientos de etileno están estrictamente relacionados con la etapa de maduración del
fruto; De hecho, en los frutos climatéricos inmaduros, los tratamientos exógenos de C2H4 inducen
una regulación de retroalimentación negativa sobre la producción de etileno, mientras que en
climaterios maduros se obtiene una autoestimulación (Lelievre, Latche et al., 1997). Un estudio
reciente (Atta-Aly et al., 2000) aclara el papel de los tratamientos exógenos de C2H4 en frutas de
tomate (climatérico) y de fresa (no clí- matérica) en diferentes etapas de maduración. La
aplicación de etileno a los tejidos de fresa, extirpados de las frutas verdes a medias, induce un
aumento a corto plazo en la producción de C2H4; Esto es seguido rápidamente por una reducción
aguda en el nivel de control y paralelamente por una reducción marcada en la concentración de
ACC. El mismo tratamiento en frutos de tomate inmaduros induce un mecanismo de
retroalimentación negativa de C2H4, con una marcada disminución en la concentración de ACC y
la producción de C2H4. Se observó una tendencia opuesta al trabajar con frutas en la fase rosada
(mecanismo positivo de retroalimentación C2H4). En todos los tejidos tratados, el C2H4 exógeno
indujo significativamente la actividad de ACO. La hipótesis propuesta sugiere que un mecanismo
de retroalimentación negativa de C2H4 puede ser responsable del comportamiento no climáctico
de la fruta de fresa y del tomate inmaduro, mientras que el comportamiento climatérico del
tomate durante la maduración tiene que ser imputado a un cambio de retroalimentación negativa
de C2H4 a una retroalimentación C2H4 positiva mecanismo. Además, la formación de ACC puede
ser el paso limitante para ambos mecanismos de retroalimentación C2H4, ya que el tratamiento
exógeno C2H4 induce la actividad ACO independientemente de las especies de fruta y la fase
fisiológica de maduración.

El término estrés etileno fue acuñado para biosíntesis mejorada de este gas en asociación
con las tensiones ambientales o biológicas experimentadas por las plantas (Morgan y Drew,
1997; Beaulieu et al., 1998). Muchas etapas diferentes en la biosíntesis y la acción del
etileno pueden ser alteradas por la imposición del estrés (Morgan y Drew, 1997). Por
ejemplo, la herida en el tejido mesocarpio de la fruta de la calabaza de invierno induce un
rápido aumento en la velocidad de producción de etileno con una inducción rápida paralela
de la actividad ACO (Hyodo et al., 1993). La conversión de SAM en ACC es la reacción
clave que controla la producción de estrés etileno (Yang y Hoffman, 1984). De hecho, la
aplicación de aminoetoxivinilglicina (AVG), un inhibidor de ACS, elimina efectivamente el
aumento en la formación de ACC y la producción de estrés de etileno. Durante la
maduración del fruto climatérico, se pueden identificar dos etapas diferentes para la
producción y los efectos del etileno (Oetiker y Yang, 1995). En la etapa 1, el etileno se
produce a niveles bajos (etileno del sistema 1), su función principal es inducir la expresión
de la transcripción de ACO y acelerar la etapa 1. El tejido no es competente para expresar
los genes del sistema 2 de ACS necesarios para la producción de etileno del sistema 2 ni
madurar en respuesta A tratamientos exógenos de etileno. En la etapa 2, la producción de
etileno autocatalítica (sistema 2 de etileno) es desencadenada por la expresión de genes de
ACS, que conduce a la maduración. En el fruto no clınico, aunque el proceso de
maduración no está tan estrictamente relacionado con el etileno, en una determinada etapa
del desarrollo del fruto el etileno endógeno puede estar implicado en la regulación de
algunos parámetros de maduración. En los cítricos, los antagonistas del etileno son capaces
de bloquear el desgranecimiento del flavedo, lo que indica un papel del etileno en el
proceso (Goldschmidt et al., 1993). En la misma especie, los tratamientos exógenos de
etileno estimulan tanto la degradación de la clorofila como la biosíntesis de carotenoides.
Otros pigmentos que aumentan durante la maduración, como las antocianinas, pueden ser
estimulados por el etileno exógeno, dependiendo de las especies involucradas (Lelievre,
Latche et al., 1997). Los frutos no clınicos, con excepción de las cerezas, muestran un
aumento de la respiración en respuesta a un tratamiento exógeno con C2H4, aunque esta
respiración estimulada por el etileno cesa con la eliminación de la hormona exógena. El
etileno es también un factor importante para la inducción de respuestas de defensa frente a
tensiones bióticas como el ataque de patógenos (Ohtsubo et al., 1999). Activa muchas
actividades enzimáticas, como la quitinasa, la peroxidasa, la fenilalanina amoniacasa y la
polifenol oxidasa, y estimula la producción de moléculas relacionadas con la defensa, como
fenólicos, ligninas y suberinas. La producción de etileno durante la reacción de
hipersensibilidad está restringida al nivel de actividad de ACO. Un efecto secundario
importante está presente en la ruta biosintética de C2H4: la oxidación de ACC a etileno,
catalizada por ACO, conduce al ácido cianoformico, que se convierte en CO2 y HCN
(Grossmann, 1996). Esta vía parece ser la principal fuente de cianuro endógeno en muchas
especies; El cianuro derivado de la biosíntesis de C2H4 parece estar implicado en el
desarrollo de necrosis tisular tras la respuesta hipersensible en plantas. HCN es un agente
fitotóxico fuerte y puede inhibir varias clases diferentes de metaloenzimas.
Muchas de las enzimas sensibles al cianuro están implicadas en la protección contra el estrés
oxidativo, incluyendo CAT, SOD y POX. La capacidad del HCN para imitar la acción del etileno en la
inducción de la respiración climatérica en los frutos (Solomos y Laties, 1974) condujo a la hipótesis
de que el cianuro es un regulador positivo de la síntesis de etileno, particularmente en los tejidos
climatéricos (Pirrung y Brauman, 1987). En el climaterio de la respiración, el exceso de cianuro
producido en concomitancia con el etileno puede ser eliminado por la respiración insensible al
cianuro, que puede actuar como mecanismo protector (Lelievre, Latche et al., 1997). La
desintoxicación de HCN en plantas superiores está bajo el control de -cyanoalanina sintasa (β-CAS,
EC 4.4.1.9), una enzima localizada principalmente en las mitocondrias. La eliminación del HCN
fuera de estos organelos es probablemente menos eficiente, y las enzimas altamente sensibles al
cianuro como Cu / Zn / SOD, CAT y rubisco pueden ser inactivadas (Grossmann, 1996)

Regulación de la biosíntesis de etileno

La regulación de la biosíntesis de C2H4 está muy influenciada por muchos factores
ambientales diferentes a los que las frutas y hortalizas están sujetas durante la producción.
Además, se añaden otros factores de estrés durante la cosecha y el transporte (Ludford,
1995) y por las condiciones ambientales impuestas durante el almacenamiento y
maduración poscosecha (Ludford, 1995; Lelievre, Latche et al., 1997; Morgan y Drew,
1997) . Los efectos de cada factor ambiental en la evolución del etileno están relacionados
principalmente con la especie y / o el órgano (Yang y Hoffman, 1984; Kubo et al., 1990;
Lelievre, Tichit, et al., 1997) Larrigaudiere et al., 1997, Masia, 1998). Por ejemplo, los
estímulos táctiles durante la cosecha y el transporte pueden inducir la producción de etileno
de ACC en varias especies de plantas (Tatsuki y Mori, 1999). La manipulación de los frutos
de tomate determina un marcado aumento en los niveles de dos isogenes para ACS (LE-
ACS6 y LE-ACS1A mRNA transcripciones), con una expresión transitoria. Los mismos
resultados aparecen después de la herida de la fruta. En los últimos años, la utilización de
plantas transgénicas con reducción de la producción de etileno, nuevos antagonistas de
etileno y la identificación del Nr tomate mutante como mutante del receptor de etileno han
permitido un análisis más preciso de las relaciones entre el metabolismo de C2H4 y la
maduración de los frutos (Gray et al. ., 1994). Trabajando en tomate con fruta ACO-
antisentido y con no maduración ni mutantes, fue posible demostrar un control de
desarrollo de la síntesis de ACC (Lelievre, Latche et al., 1997). Otros experimentos con
tomates antisentido ACS y con tomos de gen de la desaminasa de sobreexpresión-ACC han
indicado que la expresión génica de ACO está controlada por el desarrollo y que precede a
la expresión de ACS.

Especies activas de oxígeno

Muchas moléculas influyen profundamente en la producción de C2H4. Entre ellos se
encuentran un desacoplador de fosforilación oxidativa (2,4-dinitrofenol), eliminadores de
radicales libres (ácido ascórbico, galato de n-propilo, Na-benzoato), agentes quelantes
(azida sódica, EDTA, dietilditiocarbamato, ácido cítrico) y sulfhidrilo - reactivos
protectores (cisteína, ditioeritritol, glutatión, CoCl2). Los agentes multifuncionales son
aparentemente los más eficaces para inhibir la producción de C2H4. La conversión de ACC
exógeno a etileno se inhibe en diferentes tejidos mediante la aplicación de diversos
eliminadores de radicales, lo que sugiere que la reacción está mediada por una reacción de
radicales libres (Kacperska y Kubacka Zebalska, 1989 , Ponnampalam et al., 1993). En el
tejido de fruta de tomate, el compuesto más eficaz es el galato de n-propilo, probablemente
debido a su ser un agente polifuncional. Además de su función como limpiador de radicales
libres y un inhibidor de actividad LOX, puede reaccionar con iones Fe2 + para formar
compuestos oscuros que disminuyen la disponibilidad de Fe2 + para actuar como un
cofactor de ACO. Los agentes quelantes también son capaces de inhibir la conversión de
ACC en C2H4, siendo la azida de sodio la más eficaz, probablemente debido a su
capacidad para inhibir enzimas que contienen metal, así como ser un agente caotrópico y un
eliminador de radicales libres. Otro compuesto inhibidor es el glutatión; Su efecto se debe
principalmente a la interacción con los grupos SH presentes en ACO, además de su acción
como limpiador de radicales libres (Ponnampalam et al., 1993). Los metales pesados
estimulan la producción de etileno en las células tratadas y también afectan las actividades
de varias enzimas tales como POX, CAT, SOD y LOX (Vangronsveld et al., 1993). Los
iones metálicos tales como Cu, Fe y Hg, que en la solución realizan una reacción de
oxidorreducción de electrones, inducen directamente la formación de radicales libres
(Abeles et al., 1992b), mientras que los metales activos noredox, como Zn, producen ROS
por mediación De la actividad lipoxigenasa. El efecto final es una oxidación mediada por
LOX de PUFAs (Vangronsveld et al., 1993). Las especies de oxígeno activo y los
hidroperóxidos, generados por la acción de LOX, estimulan la conversión de ACC en
etileno (Kacperska y Kubacka-Zebalska, 1989; Vangronsveld et al., 1993; Weckx et al.,
1993). En tejidos mecánicamente heridos, C2H4 puede ser el resultado final de la
peroxidación de ácidos grasos (Yang y Hoffman, 1984). Aunque el etileno parece tener un
efecto consolidante sobre las respuestas celulares al estrés de los metales pesados, no es el
factor desencadenante (Vangronsveld et al., 1993).

Hormonas y otros metabolitos

Muchas hormonas diferentes están implicadas más y menos directamente en la regulación
de la producción de etileno (Yang y Hoffman, 1984, Abeles et al., 1992b, Ludford, 1995,
McKeon et al., 1995). Las tasas de producción de etileno están influenciadas por el propio
etileno y otras hormonas vegetales (Figura 9.2). Dependiendo del tejido, esta hormona
puede promover la producción de etileno (autocatálisis) o inhibirla (autoinhibición).
Durante la fase autocatalítica en la maduración de los frutos, C2H4 en primer lugar afecta
la producción de etileno mediante la promoción de la conversión de ACC a etileno; El
aumento masivo en la síntesis de ACC se produce posteriormente (Liu et al., 1985,
McKeon et al., 1995). En hojas de cítricos y frutos de tomate, el ácido abscísico (ABA)
parece promover la producción de etileno principalmente mediante la estimulación de la
síntesis de ACC. Este efecto se puede aumentar por diferentes formas de heridas (Riov et
al., 1990). En muchas frutas (p. Ej., Pera, aguacate, cítrico, uva y cereza) el nivel de ABA
libre es constante durante la maduración, pero aumenta al comienzo de la maduración
(Ludford, 1995). La auxina promueve la producción de etileno induciendo la síntesis de
ACS, dando lugar a niveles más altos de ACC (Yang y Hoffman, 1984). El aumento en la
producción de etileno es paralelo al aumento en ACC, y los tratamientos con AVG
bloquean el aumento de etileno inducido por IAA. Los altos niveles de citoquininas
endógenas retrasan la maduración de los frutos, y los niveles pueden disminuir a medida
que avanza la maduración (Ludford, 1995). Por otro lado, las citoquininas estimulan la
producción de etileno sólo en conjunción con otros tratamientos que aumentan la síntesis de
etileno (McKeon et al., 1995). Las citoquininas por sí solas no pueden afectar los niveles de
ACC, y su efecto sobre la SCA debe ser a través de algún otro factor que afecte el nivel de
inducción. La senescencia en muchos órganos de las plantas, tanto in situ como después de
su extirpación de la planta, se correlaciona con una disminución del título de poliamina
(PA) (Galston y Kaur-Sawhney, 1995). Las poliaminas son agentes antisenescentes
endógenos, y los niveles de PA libres disminuyen durante el desarrollo de los frutos en
aguacate, pera y to- mato (Ludford, 1995). Se ha demostrado que el almacenamiento de la
atmósfera controlada de las manzanas reduce la tasa de suavizado poscosecha y también
mantiene un mayor nivel de AP. Un posible modelo de trabajo implica la unión de PA a
membranas, con la prevención de la peroxidación de lípidos, y una acción de extinción
sobre radicales libres. Además, los niveles de PA están asociados con el flujo de Ca2 + de
las membranas, un efecto que puede implicar el bloqueo de la secuencia de senescencia
(Leshem, Halevy y Frenkel, 1986). Además de su acción como eliminadores de radicales
libres, las poliaminas parecen reaccionar a nivel de ACS y ACC (Ponnampalam et al.,
1993, Ludford, 1995, Masia et al., 1998). Existe una clara relación metabólica entre las vías
de biosíntesis de etileno y poliaminas (Picton et al., 1995). El etileno y las AP comparten
parte de la vía biosintética a nivel de AdoMet (Figura 9.2), de modo que bajo ciertas
condiciones su biosíntesis puede ser restringida por la competencia para AdoMet,
resultando en una inhibición mutua (McKeon et al., 1995). El etileno y las AP tienen
efectos opuestos sobre la senescencia, particularmente con partes de plantas extirpadas
(Galston y Kaur-Sawhney, 1995). La aparente relación inversa entre PAs y senescencia ha
sido probada en frutos maduros; Algunas variedades de tomate, caracterizadas por una
senescencia retardada y una vida útil prolongada, contienen niveles muy elevados de
putrescina endógena, que aumentan en lugar de mostrar la disminución habitual durante la
maduración. Se ha postulado que las PA pueden constituir parte del sistema inhibidor de la
maduración asociado a la fruta y que una síntesis incrementada de etileno puede ser parte
de un mecanismo para reducir el nivel de PA al inicio de la maduración (Picton et al.,
1995). Sin embargo, las AP pueden tener su propia acción independiente en el proceso de
maduración; De hecho, la inhibición tanto de la maduración como de la producción de
etileno se obtiene sólo a altas concentraciones, mientras que las AP en las inferiores sólo
pueden afectar a la maduración, sin efecto sobre la formación de etileno (Galston y Kaur-
Sawhney, 1995).
Existe una correlación estricta entre jasmonatos, etileno y actividad LOX (Figura 9.1); De
hecho, los hidroperóxidos de PUFA pueden ser los sustratos para LOX con la formación de
radicales libres adicionales (Leshem, Halevy y Frenkel, 1986). Los peróxidos lipídicos
pueden subsiguientemente descomponerse en aldehídos tales como MDA e hidrocarburos
volátiles tales como etano, pentano y etileno. Otro catabolito LOX que se ha encontrado es
el ácido jasmónico (JA). Un aumento en la actividad ACO en las manzanas preclimacteric
es inducida por metiljasmonate (JA-Me) tratamientos, que también estimulan la producción
de C2H4 y aumentar el contenido de ACC (Saniewski, 1995). Sin embargo, la hormona
tiene un efecto opuesto sobre los niveles de ACC y la producción de etileno en las
manzanas climatéricas y postclimátricas. Se obtuvieron resultados muy similares en la
manzana con n-propildihidrojasmonato (Masia et al., 1998). Además, el efecto sobre la
actividad de ACO está estrechamente relacionado con el cultivar en tratamiento y con sus
diferentes niveles en compuestos fenólicos endógenos (Ludford, 1995).

Almacenamiento postcosecha

 Baja temperatura.
Por lo general, se aplican temperaturas bajas a las frutas y hortalizas para aumentar su
capacidad de almacenamiento, aunque con frecuencia en algunas especies el
tratamiento puede dar como resultado una mayor tasa de biosíntesis de etileno
(Larrigaudiere et al., 1997; Lelievre, Latche et al. Las peras de invierno necesitan un
tratamiento en frío después de la cosecha para la inducción de la producción y
maduración autocatalíticas de etileno (Ludford, 1995; Lelievre, Latche et al., 1997). En la
cultivar Passe Crassane, la exposición a condiciones de enfriamiento induce una
acumulación de transcritos de ACO y ACS y de proteína ACO, todos los cuales son
requeridos para la explosión y maduración autocatalítica de etileno (Lelievre, Latche et
al., 1997). Sin exposición refrigerante, el etileno exógeno es incapaz de inducir la
expresión del gen de la ACS (Lelievre, Tichit et al., 1997). Los diferentes mecanismos
están representados por frutas sin necesidad de refrigeración, como las manzanas y el
kiwi. Las bajas temperaturas en este caso pueden promover una maduración más
sincrónica y homogénea y acelerar la competencia para la síntesis de etileno
autocatalítica (Ludford, 1995; Lelievre, Latche et al., 1997) Muchas frutas y hortalizas de
origen tropical y subtropical son particularmente propensas a los daños por
 refrigeración causados por el almacenamiento sin congelación a baja temperatura (Ben-
Amor et al., 1999). La rápida disminución de la temperatura muy de diez resultados en
una refrigeración inducida OS con un aumento de los niveles de H2O2 celular y la
posterior estimulación de la actividad de las enzimas antioxidantes (Prasad et al., 1994;
Morita et al., 1999). El enfriamiento induce un estrés oxidativo en los tejidos vegetales
sometidos a bajas temperaturas (Prasad et al., 1994, Alscher et al., 1997, Levine, 1999),
con modificaciones en la fluidez de la membrana (Murata y Los, 1997), fugas de
electrones (Prasad, 1996), y la inducción de actividades de POX y IAA oxidasa (Omran,
1980). El estrés a temperatura fría también induce la acumulación de ARNm LOX (Porta
et al., 1999). El modelo emergente para la lesión por enfriamiento comienza a partir de
una modificación de la permeabilidad de la membrana debido al estrés oxidativo con
posterior peroxidación lipídica de la membrana, seguida de una cascada de reacciones
bioquímicas que conducen a la muerte celular y al deterioro tisular (Ben-Amor et al. En
los melones cantaloupe transgénicos, la inhibición de la biosíntesis de etileno mediante
la acción de un gen ACO antisentido puede prevenir esta lesión por enfriamiento
principalmente a través de un deterioro reducido y dependiente del enfriamiento de la
membrana (Ben-Amor et al., 1999). Otros factores que están asociados con la tolerancia
al enfriamiento de frutas son una mayor actividad en las enzimas antioxidantes, como
CAT, SOD y POX, y una disminución de la producción de metabolitos de estrés como el
etanol y el acetaldehído (AcA). Por el contrario, en los frutos silvestres C2H4 es
responsable, en asociación con bajas temperaturas, de disfunción metabólica con la
acumulación de etanol y AcA en los tejidos, un aumento en el deterioro de la membrana
y una reducción de la capacidad de los tejidos para eliminar ROS causada por una
Disminución en la actividad de POX, CAT y SOD. La tolerancia al enfriamiento parece
atribuirse principalmente a la actividad de CAT: de hecho, la sobreexpresión de CAT en
frutos da como resultado una mayor resistencia al enfriamiento (Ben-Amor et al., 1999).
En el melón cantalupo que expresa un gen ACO antisentido, la actividad de CAT
aumenta continuamente durante el almacenamiento a baja temperatura mientras que
disminuye de manera constante en frutas de tipo salvaje sensibles al enfriamiento. El
estrés de metales pesados también puede inducir un aumento en la actividad de CAT en
respuesta a una producción de AOS mejorada (Weckx et al., 1993).

Alta temperatura.
El choque térmico (HS) puede producir OS en las células vegetales (Bowler et al., 1992), y la
acumulación de H2O2 durante el tratamiento se informó recientemente (Foyer et al., 1997). Un
rápido aumento de temperatura de tan sólo 10 ° C provoca un cambio dramático en la síntesis de
proteínas de una célula. Esta síntesis de proteína de choque térmico (HSP) es común a todos los
organismos vivos y muchas clases diferentes de HSP son inducidas por el tratamiento (Guy, 1999).
Entre ellos un papel central en la detección de la rápida subida de la temperatura es desempeñado
por HSP70s. La respuesta fisiológica de las células y los órganos al tratamiento a alta temperatura
se relaciona principalmente con pequeñas HSP, -cristalina, que representan la principal familia de
HSP inducida por el estrés por calor en las plantas. Se han utilizado tratamientos de temperatura
relativamente alta en frutas y hortalizas después de la cosecha y antes del almacenamiento
en frío para, por ejemplo, reducir la sensibilidad, retardar la maduración y controlar los
niveles patogénicos (Sabelat et al., 1997) 1998). La técnica se basa en la modificación
fisiológica y metabólica inducida en los cultivos por tratamiento a alta temperatura. Se ha
demostrado que la conversión de ACC a etileno se inhibe cuando la temperatura alcanza
35ºC o más (Yu et al., 1980). En fruta de tomate, los transcritos de ACO HSP y los niveles
de proteína se reducen después de tres días a 38ºC (Lurie et al., 1996). Los tratamientos con
HS disminuyen la producción de etileno y reducen la lesión por enfriamiento en el posterior
almacenamiento a baja temperatura en pepino (Ben-Amor et al., 1999). Los tomates verdes
maduros mantenidos a 38 ° C se pueden transferir a 2 ° C durante varias semanas sin
desarrollar síntomas de lesión por enfriamiento, y el tratamiento a alta temperatura induce
la síntesis de HSPs pequeñas en tomates (Kadyrzhanova et al., 1998; Sabehat Et al., 1998).
Parece existir una estrecha correlación entre la expresión de la HSP y la tolerancia al
enfriamiento, apoyando un papel para las HSPs en la protección contra la lesión por
enfriamiento (Sabehat et al., 1998). Este vínculo entre el tratamiento HS y las HSP, que
resulta en una tolerancia inducida por enfriamiento, es presentado por cultivos hortícolas
tales como aguacate, pepino, pimiento y tomate, lo que sugiere que esta tolerancia cruzada
puede ser representativa de una respuesta general.

Atmósfera controlada, oxígeno y dióxido de carbono.

Las variaciones en la composición del gas presente en el almacenamiento en frío de la atmósfera
modificada y controlada (CA) producen efectos dramáticos en la vida posterior a la cosecha del
cultivo que se deben principalmente a una marcada modificación de la biosíntesis y el
metabolismo del etileno (Beaudry, 1999). Los efectos están relacionados principalmente con los
cambios de O2 y CO2 (Lelievre, Latche et al., 1997, Beaudry, 1999), pero también pueden
depender de la presencia de oligoelementos en el aire como C2H4, C3H6, otros hidrocarburos,
Acilnitratos (PAN), óxidos nítricos, etc. (Fergusson, 1985, Rao et al., 1995, Hippeli y Elstner, 1996).
Otras fuentes perturbadoras de origen interno son volátiles de baja masa molecular tales como
acetaldehído y etanol (Beaulieu et al., 1998, Pesis et al., 1998), metanotiol y amoníaco (Toivonen,
1997), a3f-farneseno y metabolitos de oxidación relacionados ( Wang y Dilley, 2000a, b). Las
respuestas a la atmósfera modificada a menudo dependen de las especies vegetales, el tipo de
órgano y / o la etapa de desarrollo, y pueden ser beneficiosas o indeseables (Kubo et al., 1990;
Beaudry, 1999). La lesión por enfriamiento causada por el almacenamiento a baja temperatura
resulta en aumentos significativos en los niveles de putrescina en muchas especies diferentes de
frutas y hortalizas (Galston y Kaur-Sawhney, 1995). La reducción de las lesiones por frío en la
calabaza, la col china y las manzanas por el almacenamiento de CA se combina con un aumento de
los títulos de PA. Las poliaminas pueden ayudar a preservar la integridad de la membrana,
resultando en una mayor viabilidad durante el enfriamiento. También se obtiene un efecto
marcado del almacenamiento de CA a nivel de maquinaria celular antioxidante. Se obtuvieron
patrones de senescencia muy diferentes en hojas separadas de espinaca almacenadas durante 35
días a 10 ° C en aire ambiente, aire más 10 ppm de etileno o CA (Hodges y Forney, 2000). De todas
las enzimas antioxidantes y las moléculas ensayadas, se observaron descensos significativos sólo
en los niveles de APX, CAT y AA en los tejidos almacenados en aire y CA con un fuerte incremento
en la peroxidación lipídica al día 35 sólo para los tratados con aire. Por otro lado, todos los
antioxidantes, con la excepción de SOD, disminuyeron rápida y continuamente en el aire ambiente
más hojas tratadas con etileno. Es común a todos los tratamientos la disminución de las
actividades de AA y APX y CAT, lo que sugiere un papel principal del H2O2 en el patrón y la
intensidad de la senescencia posterior a la cosecha en espinaca. Es bien sabido que las atmósferas
de O2 son capaces de inhibir la producción de C2H4 en muchas frutas climatéricas diferentes, tales
como manzanas, plátanos y peras (Abeles et al., 1992b). El mismo resultado se notifica para las
fresas no clınticas y para la lechuga. Las hojas de espinaca almacenadas en 0,2 por ciento de O2
muestran una tasa de respiración más baja, junto con una mejor calidad en comparación con los
almacenados en el aire (Hodges y Forney, 2000). Los niveles de O2 entre 1 y 3 por ciento pueden
Reducir la producción de etileno en un 50 por ciento en las manzanas almacenadas (Lelievre,
Latche, et al., 1997). La disminución de la producción de etileno se debe imputar a una actividad
de ACO reducida debido al hecho de que O2, junto con CO2, es un cosubstrato para la enzima. Se
cree que los bajos niveles de O2 en las manzanas almacenadas bloquean la vía de transducción de
la señal implicada en la respuesta a la percepción de C2H4 en el sitio del receptor y, por lo tanto,
evitan la inducción de la producción autocatalítica de C2H4 (Gorny y Kader, 1996). El efecto de los
bajos niveles de O2 en la producción de C2H4 se relaciona principalmente con un mecanismo de
evitación que impide el aumento del etileno interno a un nivel suficiente para desencadenar su
producción autocatalítica. En las manzanas, este resultado es dependiente de los cultivares y en
'Cox' se debe aplicar un pretratamiento con CO2 al 5 por ciento a los frutos antes del
almacenamiento bajo de O2 para mantener la producción de frutos C2H4 bajo el valor crítico de
desencadenamiento (Stow et al. El almacenamiento a baja temperatura, combinado con niveles
bajos de O2, inhibe tanto las actividades ACS como ACO y aumenta los niveles de sus
correspondientes mRNAs, con el consiguiente retraso en el inicio de la producción autocatalítica
de etileno (Gorny y Kader, 1996, 1997). Sin embargo, no todos los efectos están relacionados con
C2H4; De hecho, se ha demostrado que los bajos niveles de O2 reducen la expresión de genes
relacionados con la maduración de los frutos independientes del etileno (Kanellis et al., 1991). En
la fruta de aguacate, las concentraciones de O2 en el rango de 2,5 a 5,5 por ciento redujeron la
acumulación de proteínas de celulasa y poligalacturonasa y la expresión de sus isoenzimas. Los
mismos valores de O2 indujeron el efecto opuesto sobre la deshidrogenasa del alcohol. Los niveles
muy bajos de O2 (1-2 kPa O2 correspondientes a la zona de crisis y 2-4 kPa a la zona de estrés
elástico) modifican radicalmente las vías metabólicas primarias como la glicólisis, la fermentación
y La respiración aeróbica (Beaudry, 1999). El umbral de O2 para la inducción de la respiración
anaerobia es dependiente de especies y cultivares; Por ejemplo, en manzana, 'Red
Delicious' muestra un umbral de 0,7 kPa de presión parcial O2, 'Red Rome' 0,8 kPa,
mientras que 'McIntosh' un valor de 1,9 kPa (Toivonen, 1997). Además del metabolismo
del etileno y de la vía respiratoria, también se ven afectados otros procesos metabólicos
secundarios asociados con la calidad del producto tratado, con pigmentos, compuestos
fenólicos y volátiles. Obviamente, los bajos niveles de O2 tienen un efecto directo en la
limitación de la producción de OS y AOS, con la consiguiente disminución y / o retraso en
la evolución de la senescencia. Los efectos de los niveles de O2 superatmosféricos fueron
revisados recientemente por Kader y Ben-Yehoshua (2000). Se utilizaron niveles muy altos
de O2 en muchos tipos diferentes de productos, principalmente para evaluar los efectos
sobre la fisiología poscosecha y la calidad de las frutas y hortalizas. Dependiendo del
producto y su estado de madurez y madurez, la exposición a concentraciones muy altas de
O2 puede estimular, no tener efecto, o reducir las tasas de respiración y producción de
etileno. Estos efectos también dependen de la concentración de O2, el período de
almacenamiento, la temperatura y los niveles de CO2 y C2H4. El aumento de los niveles de
CO2 afecta al metabolismo bioquímico primario (procesos de glicolisis, fermentación y
respiración aeróbica), así como a muchas respuestas al metabolismo secundario (etileno,
pigmento, fenólico, pared celular y metabolismo de los compuestos volátiles). Las
respuestas dependen de la especie, el órgano y la etapa de desarrollo de éste (Beaudry,
1999). El almacenamiento en frío de las manzanas preclimácticas en atmósferas
enriquecidas de CO2 (5 por ciento y 20 por ciento) impide directamente la biosíntesis de
C2H4 al reducir la actividad de ACO y, indirectamente, bloqueando la regulación de los
genes que codifican ACS y ACO (Gorny y Kader, 1996). El efecto principal parece
relacionado con la actividad y la expresión de ACS (Gorny y Kader, 1997). La respuesta es
bastante diferente cuando el tratamiento se realiza a temperatura ambiente (25 ° C), con la
exposición de muchos tipos de frutas y verduras a 60 por ciento de CO2. Este tratamiento
inhibió la producción de etileno en melocotón, brócoli y manzanas, pero lo promovió en
banano, lechuga, pepino, tomate y berenjena (Kubo et al., 1990). Más recientemente, se ha
estudiado la base molecular para la inhibición de la biosíntesis de etileno inducida por la
herida por concentraciones elevadas de CO2 en la fruta de la calabaza de invierno (Kubo et
al., 1995). La fruta intacta puede producir sólo trazas de etileno, pero los cubos de tejido
mesocarpico producen una cantidad enorme de C2H4. El dióxido de carbono suprime la
producción de etileno inducida por la herida y la actividad de ACO a todas las
concentraciones utilizadas, comenzando desde el 5 por ciento y alcanzando el 80 por
ciento. Esta inhibición se debe a la supresión de la expresión de ACS y ACO en el nivel de
mRNA. En el almacenamiento de CA de manzana fría, la actividad de ACO in vitro se
incrementa con CO2, con una concentración óptima al 2 por ciento (John, 1997)

Sin embargo, a niveles más altos, el CO _ {2} actúa como un inhibidor competitivo de la acción del
etileno, desplazando la hormona al nivel del sitio de unión al receptor, e impide la fase
autocatalítica (Gorny y Kader, 1996; Lelievre, Latche et al. De hecho, a niveles de CO2 de 5 por
ciento o más de inducción de ACS y ACO actividades se reduce. Los efectos de diferentes niveles
de CO2 se evaluaron mediante ensayos de actividad de ACO in vivo que trabajaban con discos de
kiwis suministrados con ACC (Rothan y Nicolas, 1994). A partir de los datos experimentales se
observó que cuando la concentración de ACC era superior a 55 M, altos niveles de CO2
estimularían la síntesis de C2H4, mientras que en ACC por debajo de este valor, altos niveles de
CO2 inhibirían la síntesis de C2H4. Por lo tanto, el efecto del CO2 en la estimulación o inhibición de
la síntesis de C2H4 está estrictamente relacionado con el contenido de tejido ACC interno (John,
1997). Los niveles elevados de CO2 (combinados o no con niveles reducidos de O2) impiden la
biosíntesis de etileno de una manera dual, directamente mediante la reducción de la capacidad
catalítica de ACO para convertir ACC a C2H4 e indirectamente bloqueando la regulación de los
genes que codifican ACS y ACO (Gorny y Kader , 1996). Sin embargo, el principal efecto de las
atmósferas de O2 y / o CO2 elevadas en la biosíntesis de C2H4 impedida es retrasar y suprimir la
expresión de ACS a nivel transcripcional y reducir la abundancia de proteína ACO activa. Los
niveles extremadamente altos de CO2 (80 por ciento), combinados con 20 por ciento de O2
Y altas temperaturas (de habitación), tienen un efecto oxidativo en el pepino, que se considera el
estrés por CO2 (Mathooko et al., 1998, 1999). El dióxido de carbono estimula la producción de
etileno a través de la mejora de las actividades ACS y ACO. La utilización de diferentes inhibidores
como la cordicepina, un inhibidor a nivel de transcripción; Cicloheximida, a nivel de traducción;
Dibucaína y 6-dimetilaminopurina, ambos inhibidores de proteínas quinasas; Y la cantharidina, un
inhibidor de las fosfatasas, demuestra que aunque la inducción de ACS y ACO requiere síntesis de
proteínas de novo, no requiere nueva síntesis de ARNm (Mathooko et al., 1998). Además, los
experimentos han demostrado que la fosforilación de proteínas y la desfosforilación están
implicadas en la cascada de señalización de dióxido de carbono que conduce a la inducción de ACS
y no de ACO (Mathooko et al., 1998). Esta fosforilación reversible de la proteína, aunque
regulando la biosíntesis de etileno inducida por el estrés de CO2 en la mayoría de los casos, parece
tener, en condiciones de estrés fuertes, poco o ningún papel en la mediación del estrés de CO2
que conduce a la acumulación de transcripciones de ACS (Mathooko et al., 1999) . De hecho, la
transcripción de genes ACS puede no ser el único factor que regula la producción de ACC, y
mecanismos de regulación a nivel posttranscripcional pueden ser igualmente importantes. Esta
condición ocurre cuando la acumulación de transcripciones de ACS no está correlacionada con la
producción de etileno y / o actividad de ACS. El aumento de la actividad de ACS y acumulación de
ACC en fruta de pepino bajo estrés de CO2, que conduce al aumento de la producción de etileno,

Sin embargo, a niveles más altos, el CO _ {2} actúa como un inhibidor competitivo de la
acción del etileno, desplazando la hormona al nivel del sitio de unión al receptor, e impide
la fase autocatalítica (Gorny y Kader, 1996; Lelievre, Latche et al. De hecho, a niveles de
CO2 de 5 por ciento o más de inducción de ACS y ACO actividades se reduce. Los efectos
de diferentes niveles de CO2 se evaluaron mediante ensayos de actividad de ACO in vivo
que trabajaban con discos de kiwis suministrados con ACC (Rothan y Nicolas, 1994). A
partir de los datos experimentales se observó que cuando la concentración de ACC era
superior a 55 M, altos niveles de CO2 estimularían la síntesis de C2H4, mientras que en
ACC por debajo de este valor, altos niveles de CO2 inhibirían la síntesis de C2H4. Por lo
tanto, el efecto del CO2 en la estimulación o inhibición de la síntesis de C2H4 está
estrictamente relacionado con el contenido de tejido ACC interno (John, 1997). Los niveles
elevados de CO2 (combinados o no con niveles reducidos de O2) impiden la biosíntesis de
etileno de una manera dual, directamente mediante la reducción de la capacidad catalítica
de ACO para convertir ACC a C2H4 e indirectamente bloqueando la regulación de los
genes que codifican ACS y ACO (Gorny y Kader , 1996). Sin embargo, el principal efecto
de las atmósferas de O2 y / o CO2 elevadas en la biosíntesis de C2H4 impedida es retrasar
y suprimir la expresión de ACS a nivel transcripcional y reducir la abundancia de proteína
ACO activa. Los niveles extremadamente altos de CO2 (80 por ciento), combinados con 20
por ciento de O2 son principalmente el resultado de una acumulación de las transcripciones
para el gen CS-ACS1, un gen de respuesta primaria que es insensible a la inhibición de la
síntesis de proteínas pero sensible a la herida. Los efectos del O2 y del CO2 no sólo están
relacionados con el etileno y las vías respiratorias, sino que también afectan a otros
procesos metabólicos, influyendo en gran medida en la calidad de las frutas y hortalizas.
Entre estos procesos se encuentra el metabolismo de pigmentos, compuestos fenólicos y
compuestos volátiles. La degradación de la clorofila es un proceso deseable para muchas
frutas climatéricas, pero debe evitarse en las verduras (Beaudry, 1999). Parece probable que
el bajo O2 y el CO2 elevado puedan controlar la pérdida de clorofila en muchos tejidos
verdes que actúan al nivel de la percepción de C2H4. La acumulación de pigmentos
marrones en las superficies mecánicamente sometidas a estrés de muchas frutas y verduras
puede ser retardada por la reducción de los niveles de O2. Los pigmentos marrones se
forman principalmente como resultado de la acción de la polifenoloxidasa (PPO) sobre los
compuestos fenólicos de las plantas, con la formación de productos de oxidación que
reaccionan sucesivamente entre sí y con aminoácidos y proteínas para formar estos
pigmentos. La formación de ésteres volátiles que contribuyen a los aromas en muchas
frutas también se reduce fuertemente debido a la baja concentración de O2 que actúa tanto
en la inhibición de la acción de C2H4 como en los procesos oxidativos, incluyendo la
respiración (Beaudry, 1999; Wang y Dilley, 2000a, b). El acetaldehído (AcA) y el etanol
son dos productos de la respiración anaeróbica en las frutas. Se acumulan durante la
maduración y son capaces de retardar la senescencia e inhibir la producción de etileno en
las plantas (Pesis et al., 1998). El acetaldehído inhibe el ablandamiento de los frutos en los
melocotones y la actividad de la poligalacturonasa en el tomate, mientras que en las uvas
puede inhibir la producción de etileno con o sin adición de ACC (Beaulieu et al., 1997,
1998). El tratamiento con vapor de acetaldehído inhibe el ablandamiento del aguacate, al
igual que el bajo tratamiento con O2 o el vapor de etanol (Pesis et al., 1998). Se ha
demostrado que AcA es el agente responsable de la inhibición de la maduración inducida
por etanol en tomates (Beaulieu et al., 1997). Es bien sabido, de hecho, que EtOH actúa a
través de AcA. Usando un inhibidor específico de alcohol deshidrogenasa (ADH), 4-metil-
pirazol, se ha demostrado que AcA es el agente activo que induce el efecto de EtOH. En el
fruto de aguacate, el vapor de AcA inhibe la actividad de ACO tanto in vivo como in vitro,
probablemente por interacción con los residuos de lisina de la enzima. En el tomate y la
manzana, concentraciones bajas en vapor de acetaldehído, en presencia de ascorbato y O2,
pueden estimular la escisión no enzimática del CAC con la producción de C2H4 por
oxidación directa o dependiente de ascorbato de ACC (Beaulieu et al., 1998). Otro producto
de la respiración anaeróbica en el brócoli es el metanotiol, que también puede ser generado
por los tejidos interrumpidos del repollo (Toivonen, 1997). El metanotiol puede inhibir las
actividades de citocromo c oxidasa y CAT tanto en sistemas in vivo como in vitro; La
disminución de la actividad de la CAT resulta en una mayor susceptibilidad de los tejidos al
SO, aunque altos niveles de CO 2 pueden inhibir la producción de esta molécula.