Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
8 PRACTICA LABORATORIO 1. Microflora de La Carne Molida
8 PRACTICA LABORATORIO 1. Microflora de La Carne Molida
I. INTRODUCCIÓN
En esta práctica de laboratorio se verá la microflora de la carne molida. Después de un brote de E. coli O157:H7
en hamburguesas, el USDA implementó un reglamento obligatorio HACCP para productos crudos de carne. Este
reglamento consiste en el desarrollo de un plan HACCP con análisis en el producto final para Salmonella y E.
coli genérico. El objetivo de esta práctica es familiarizarse con el aislamiento de coliformes y E. coli de la carne
molida.
Materiales:
Agar soya tripticasa (TSA). Este es un agar rico en nutrientes que fomenta el crecimiento de diferentes
microorganismos. Es un medio no selectivo y no diferencial y apropiado para uso en conteo estándar en
placas (CEPs).
Agar Bilis rojo violeta suplementado con 4-metilumbeliferil-b-D-glucuronido (VRBA + MUG). Este medio
es usado para plaquear selectivamente las bacterias coliformes. O,
Agar Eosina Azul de Metileno (EMB), diferencia para E. coli y es selectivo para bacterias G(-). Si E. coli
esta presente, las colonias tendrán un brillo verde metálico. El EMB contiene eosina y azul de metileno
como indicadores. Cuando la lactosa fermenta, se producen ácidos y se produce un cambio de color. Con la
excepción de E. coli, las colonias de color rosado son el resultado de fermentación de lactosa. Si las
bacterias no fermentan lactosa (no son coliformes), no se produce acido y las colonias se presentan
básicamente incoloras, transparentes o de color ambar – como pueden ser Salmonella y Shigella. El azul de
metileno actúa como inhibidor de bacterias G(+).
15
Agua peptonada estéril Placas Petri con TSA
Carne molida Frascos estériles
Incubadora Tubos de ensayo estériles
Pipetas estériles Licuadora con vaso estéril
15
Metodología:
Primero, lavarse las manos, desinfectar el área de trabajo
Preparación de la muestra
1. Usar un utensilio estéril para pesar 25 g de carne molida.
2. Agregar 225 ml de agua peptonada. Esta será la dilución inicial de 1/10 o 10-1. Licuar por 2 min.
4. Preparar diluciones seriadas (Figura 1.1).
Figura 1.1. Esquema de Dilución para EMB y SPC: para EMB diluciones en placa 10 -2 hasta 10 -4, para SPC
diluciones en placa 10 -3 hasta 10 -6.
25 g 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
Dilución
10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
en placa
Use técnicas de aislamiento de cultivos por dilución: por incorporación (SPC) y por dispersión con espátula (EMB).
SPC cultivo por incorporación
1. Rotular una placa petri vacía (grupo, dilución). Se plaqueará por duplicado cada dilución.
2. Pipetear 0.1 ml de las diluciones 10-3 hasta 10-6 (Figura 1.1) en cada placa.
3. Una vez que todas las muestras se encuentran en las placas petri, incorporar 25 ml agar templado (45° a
47°C) por placa.
4. Incorpore el agar mientras agita las placas suavemente. Recuerde hacer un control (blanco) con este agar, e
incubar junto con las muestras.
5. Deje las placas sobre la mesa de laboratorio hasta que solidifiquen.
6. Cuando el agar solidifica, invierta las placas e incube a 32°C x 48 horas.
EMB cultivo por dispersión con espátula
1. Rotular las placas (grupo, dilución). Se plaqueará por duplicado cada dilución.
2. Plaquear diluciones 10-2 hasta 10-5.
3. Use una espátula de Drigalsky para dispersar el líquido.
15
4. Después de que el líquido sea absorbido en todas las placas, agregue suficiente EMB templado para cubrir la
superficie de cada placa con una capa ligera.
5. A medida que el agar superficial endurece, invierta las placas e incube a 32°C x 48 horas.
16