El microscopio óptico

Evolución, limitaciones y nuevas técnicas
 El microscopio de van Leeuwenhoek
Siglo XVII

Propiedades: 
‐Ampliación importante (x70 a x250)
‐1 sólo elemento y buena calidad óptica
‐Difícil de manejar y fabricar (secreto 
hasta el siglo 20)
‐Iluminación irregular

http://www.funsci.com/fun3_en/usph/usph.htm Réplica (wikipedia)
Planos para construir uno y algo de historia
Desarrollo de la ciencia gracias a 
la tecnología
Primero en observar: 
‐ Organismos 
unicelulares (padre 
microbiología)
‐ fibras musculares
‐ Espermatozoides
‐ protozoarios, 
‐ flujo sanguíneo en 
capilares 
‐ glóbulos rojos

van Leeuwenhoek: Padre de la microbiología

http://mmbr.asm.org/content/71/4/653/F2.expansion.html
Ramón y Cajal: entendiendo el cerebro
Evolución
Limitaciones de la microscopía en 
el siglo XX
a) Contraste (tinciones) –especificidad (tecnología 
en química) 
b) Barrera de difracción de Abbe –resolución  (límite 
físico)

c) Trabajo con seres vivos –desarrollo 
(herramientas)
a) Contraste a través de 
fluorescencia (Nobel 2008)
a) Contraste a través de 
fluorescencia (Nobel 2008)

Neuronas C. elegans
b) La luz visible es demasiado
“grande” para ver la escala nano

Longitud de onda de la luz visible: ~ 400 a 700nm 
 Consecuencias de la barrera de difracción
0.1mm

Cellular
10µm

1µm

Sub‐cellular
Barrera difracción: ~ 250 nm lateral
100nm
~ 600 nm axial    

10nm Molecular

1nm
1 μm
Atomic

1Å
http://www.3dchem.com; http://cs.stedwards.edu; http://cvcweb.ices.utexas.edu; Fotin et al., Nature 2004; http://hrsbstaff.ednet.ns.ca; http://www.ebi.ac.uk
b) Súper resolución (nobel 2014)
Normal
Super resolución
Super resolución 3D
Jorge 
Madrid (ing
biomédica)
y
John Mario 
González 
(Medicina)
Maier Avendaño: egresado biofísica Uniandes, Ph.D. de Harvard
 c) Trabajando con seres vivos :
Microscopía de hoja de luz

Huisken J , Stainier D Y R Development 2009;136:1963-

1975
Primera versión en 1903! Redescubierto en 2004
 Animales vivos, largo plazo
Desarrollo de vasos sanguíneos

J. Huisken and D. Y. R. Stainier, “Selective plane illumination microscopy techniques in 
developmental biology,” Development, vol. 136, no. 12, pp. 1963–1975, Jun. 2009. 
 Velocidad: Corazón de pez cebra
2004
Potencial para imágenes de alta velocidad en 3d?
2008
J. Huisken and D. Y. R. Stainier, “Selective 
plane illumination microscopy 
techniques in developmental biology,” 
Development, vol. 136, no. 12, pp. 1963–
1975, Jun. 2009. 
M. Mickoleit et al., «High‐resolution reconstruction of the beating zebrafish 
heart», Nat Meth, vol. advance online publication, jul. 2014.
 Desarrollo de neuronas 24h
Profundidad

Nathalie Agudelo
(Joven Investigadora, 
becada para un doctorado 
en el IST Austria)

Veronica Akle (Prof. 
Medicina, Laboratorio de 
Neurociencias y Ritmos 
Circadianos)

Manu Forero
Laboratorio de Biofísica
Ahrens, Orger, Robson, Li, Keller (2013). Whole brain functional imaging at cellular resolution using light‐
sheet microscopy. Nature methods
Proliferación de glioblastoma
humano en pez cebra
 Microscopios de bajo costo para 
educación en ciencias

Manu Prakash. Foldscope Imágenes Uniandes/Sena/Ondas‐Colciencias
Telemedicina de bajo costo

Cellscope