Validacion

GESTORES EN ASEGURAMIENTO
Y CONTROL QUIMICO
VALIDACION DE METODOS DE
ENSAYO BAJO LA NORMA
ISO/IEC 17025:2005 Y LAS
DIRECTRICES DE INACAL
OBJETIVOS
 Entender la importancia de una
validación
 Conocer los requisitos de INACAL
 Conocer los procedimientos de validación

de métodos de ensayo.
 Analizar los resultados obtenidos de los

procesos de validación .
PROGRAMA
1. INTRODUCCION
2. REQUISITOS DE LA NORMA ISO
17025 Y REQUISITOS DE INACAL
3. VALIDACION DE METODOS
DE ENSAYO
4. PLAN DE VALIDACION
5. PARAMETROS DE DESEMPEÑO
1. INTRODUCCION
1.1 Principios del Sistema de Aseguramiento de calidad.
 Las directrices de un sistema de

aseguramiento de calidad consisten
básicamente en seguir las buenas
prácticas de laboratorio, práctica
basada en seis principios
generales.
1. INTRODUCCION
1.1.1 Las mediciones analíticas deben para satisfacer

un objetivo definido, implica Validación de métodos.
1.1.2 Las mediciones analíticas deben hacerse

utilizando métodos y equipos adecuados.
1.1.3 Competencia Técnica del personal.

1. INTRODUCCION
1.1.4 Evaluación rutinaria del desempeño del

laboratorio, implica Auditorias.
1.1.5 Las mediciones realizadas en un lugar deben ser

consistentes, implica Materiales de Referencias e
Interlaboratorios.
1.1.6 Procedimientos de control y aseguramiento de

calidad, implica uso de Técnicas Estadísticas.
1. INTRODUCCION
1.2 Factores que influyen en la calidad de los resultados.

FACTOR REQUISITOS
Humano Personal calificado que “domine” los métodos de
ensayo
Equipamiento Calificado, calibrado, robusto
Método de Caracterizado claramente, adecuado (para los fines)
ensayo
Materiales De calidad conocida
Entorno Conocimiento de las condiciones ambientales

(“entorno analítico”) y de sus posibles influencias
Gestión Provee los recursos necesarios.

1. INTRODUCCION
1.3 Selección del Método Adecuado.

PROGRAMA
1. INTRODUCCION
DE ENSAYO
2. REQUISITOS DE LA NORMA
ISO 17025
La norma ISO/IEC 17025:2005 es una normativa
internacional para demostrar la competencia de los
laboratorios de ensayo y/o calibración.
La competencia se demuestra a través de la

acreditación por parte de un organismo acreditador.
ISO 17025
2.1 Requisitos de 17025 – Sección 5.4.4.
• Cuando sea necesario utilizar métodos no

normalizados, éstos deben :
– ser acordados con el cliente y
– deben incluir una especificación clara de los
requisitos del cliente y del objetivo del ensayo
o de la calibración.
• El método desarrollado debe haber sido validado

adecuadamente antes del uso.
ISO 17025
• 5.4.5.1
La validación es la confirmación, que través del
examen y el aporte de evidencias objetivas, de que
se cumplen los requisitos particulares para un uso
específico previsto.
ISO 17025
• 5.4.5.2
El laboratorio debe validar
– los métodos no normalizados,
– los métodos que diseña o desarrolla,
– los métodos normalizados empleados fuera del
alcance previsto,
– así como las ampliaciones y modificaciones de los
métodos normalizados, para confirmar que los
métodos son aptos para el fin previsto..
ISO 17025
• 5.4.5.2
La validación debe ser tan amplia como sea necesario
para satisfacer las necesidades del tipo de aplicación.
El laboratorio debe registrar

– los resultados obtenidos,
– el procedimiento utilizado para la validación
– y una declaración sobre la aptitud del método para
el uso previsto
ISO 17025
• 5.4.5.3 Nota 1
La validación incluye:
– la especificación de los requisitos,
– la determinación de las características de los
métodos,
– una verificación de que los requisitos pueden
satisfacerse utilizando el método,
– y una declaración sobre la validez.
ISO 17025
• 5.4.5.3 Nota 2
• A medida que se desarrolla el método, es conveniente

realizar revisiones periódicas para verificar que se
siguen satisfaciendo las necesidades del cliente.
• Es conveniente que todo cambio en los requisitos

que requiera modificaciones en el plan de desarrollo
sea aprobado y autorizado.
ISO 17025
2.2 Requisitos de INACAL
“Guía para efectuar validación de métodos de

ensayo”
PROGRAMA
1. INTRODUCCION
DE ENSAYO
DE ENSAYO
3.1 Concepto de Validación de Métodos de Ensayo
• Es la confirmación, a través del examen y el

aporte de evidencias objetivas, de que se cumplen
requisitos particulares en un método de ensayo
para un uso específico previsto.
DE ENSAYO
3.1 Concepto de Validación de Métodos de Ensayo
Método de Uso
Interesados Requisitos
Ensayo Específico
• Cliente • Normalizados • Límite de • Tipo de
Externo • No Detección Muestra
• Organización Normalizados • Veracidad • Rango de
• Normas • Propios • Precisión Trabajo
• Normas • Selectividad
Legales
3. VALIDACION DE METODOS DE ENSAYO
3.2 Tipos de Validación

Validación Interna:
El proceso de validación se
limita al trabajo de un único
laboratorio, se desarrolla en
base a sus actividades internas.
Validación Externa:
El proceso de validación
involucra el trabajo de varios
laboratorios, se realizan los
estudios mediante pruebas de
intercomparación.
3.3 Grados de Validación
Método Método estand Método propio

estandarizado modificado de laboratorio
Verificación Validación Validación

completa completa
3.4 Cuando se debe validar un método de ensayo
• Cuando sea necesario verificar que

los parámetros de desempeño son
adecuados para el uso en un problema
analítico en particular.
- - Un nuevo método
- - El método cambia con el tiempo
- - Cambio de analistas o
instrumentación
3.5 Aseguramiento de la Calidad
• El laboratorio debe tener procedimientos QC

• Plan de Aseguramiento de la Calidad:
- - Materiales de referencia certificados
- - Pruebas Interlaboratorios
- - Criterios de aceptación
• Acciones correctivas y preventivas.
3.6 Como validar un método de ensayo
• Validar el proceso analítico en su conjunto

• Validar el método en todo el intervalo de
concentraciones en el que se va a aplicar
• Validar el método en cada una de las matrices en
las que se va a aplicar
PROGRAMA
1. INTRODUCCION
DE ENSAYO
4.1 Objetivo y campo de aplicación

4.2 Responsabilidades
4.3 Definiciones
4.4 Selección del método analítico
4.5 Planificación del proceso
4.6 Documentación del Procedimiento de Validación
4.7 Caracterización analítica del método
4.8 Realización de los experimentos o pruebas de
laboratorio : Expediente de validación
4.9 Requisitos intralaboratorio
4.10 Informe de participación en pruebas
interlaboratorios
4.8 Expediente de Validación

4.11 Verificación de cumplimiento de objetivos iniciales

4.12 Establecimiento de controles periódicos
mediante programa: Plan o Programa de Aseguramiento
de la Calidad
4.13 Informe del Proceso de Validación
4.14 Conservación y control de documentación y
registros relacionados
4.15 Bibliografía
PROGRAMA
1. INTRODUCCION
DE ENSAYO
1 Veracidad
2 Precisión
3 Selectividad/Especificidad
4 Rango/Intervalo de Trabajo
5 Linealidad/Función Respuesta
6 Límite de Detección
7 Límite de Cuantificación
8 Sensibilidad
9 Robustez
10 Incertidumbre
* Recuperación
5.1 Limite de Detección (LD)

Definición
El límite de detección es la mínima concentración

de analito que puede ser identificado, medido y
reportado con un intervalo de confianza de 99% tal
que la concentración del analito es mayor que cero.
EPA Method 200.7
5.2 Limite de Cuantificación (LC)

Definición
El límite de cuantificación es la menor concentración

de un analito que puede ser determinada con una
precisión aceptable y exactitud bajo las condiciones
establecidas de la prueba.
LDM y LCM
Ejemplo:
Determinar el LOD y el LOC de un método para la determinación de
Au, con los siguientes datos obtenidos de los ensayos de 3 analistas:
Determinación en CRM [Au] = 0.013 g/tm

Lectura bks de Au en mg/L
Analista 1 Analista 2 Analista 3
A1 A2 A3
0.0175 0.0138 0.0123
0.02118 0.02341 0.02151
0.0150 0.0127 0.0141
0.02356 0.02092 0.01761
0.0115 0.0123 0.0119
0.01852 0.01109 0.02125
0.0154 0.0136 0.0140
0.02436 0.02045 0.01904
0.0153 0.0114 0.0147
0.01824 0.02041 0.01720
0.0133 0.0123 0.0120
0.01792 0.02413 0.02209
0.0128 0.0154 0.0132
0.02144 0.02576 0.01653
0.0095 0.0126 0.0109
0.0178 0.0143 0.0102
0.0151 0.0096 0.0123
5.3 Selectividad o Especificidad

Definición
Habilidad de un método para determinar

exactamente y específicamente el analito de interés
en la presencia de otro componentes en la matriz
bajo condiciones establecidas de la prueba.
Se considera que la especificidad es el 100% de

la selectividad.
5.3 Selectividad
Selectividad Cualitativa: Hasta que punto otras sustancias
interfieren en la determinación
de una sustancia de acuerdo a un
procedimiento dado.
Selectividad Cuantitativa:
Un término usado en conjunción
con otros sustantivos (constante,
coeficiente, índice, factor) para
la caracterización cuantitativa de
interferencias
5.3 Selectividad o Especificidad
Las pruebas para asegurar la selectividad

dependen de:
Matriz de muestra
Técnica utilizada
Información Bibliográfica
5.4 Intervalo de Trabajo

Definición
Es el intervalo entre la más baja y la más alta

concentración del analito en la muestra, para el cual
se ha demostrado que el método analítico tiene un
nivel apropiado de exactitud y linealidad.
5.4 Intervalo de Trabajo
Rango de aplicación
Concentración
del método
mínima
(LDO-LQO)
Concentración
máxima
Datos de
precisión y
exactitud
5.5 Intervalo Lineal
Dentro del intervalo de trabajo puede existir un intervalo

donde la señal de respuesta tendrá una relación lineal con
la concentración del analito.
Verificación
– Mediante inspección visual, además de su confirmación

mediante revisiones de linealidad empleando al menos 10
diferentes concentraciones.
5.6 Sensibilidad
Definición
Es el cambio en la respuesta de un instrumento de

medición dividido por el correspondiente cambio del
estímulo.
Dos conceptos:
– Sensibilidad de calibrado
– Sensibilidad analítica
5.6 Sensibilidad Y = mC+b

Sensibilidad de calibrado
Es la capacidad para
discriminar entre pequeñas
diferencias de concentración
del analito.
Sensibilidad analítica
Se define como aquella
sensibilidad equivalente a la
de calibrado dividida por la
desviación tipo de las Y=m
respuestas. Sy
5.7 Precisión
Es la proximidad de concordancia entre los resultados

de pruebas independientes obtenidas bajo condiciones
estipuladas.
Es evaluada a diferentes condiciones:
Repetibilidad Precisión Reproducibilidad

intermedia
5.7 Precisión
Repetibilidad Precisión Reproducibilidad

intermedia
Grado de concordancia Se expresa con la Grado de concordancia

entre resultados de variación de los entre resultados de las
sucesivas mediciones laboratorios, diferentes mediciones efectuadas
efectuadas con días, diferentes bajo diferentes
aplicación de la analistas, diferente condiciones de
totalidad de las mismas equipo, etc. medición.
condiciones de
medición.
5.8 Veracidad
Definición
• Es la proximidad de concordancia entre el valor

promedio obtenido de una serie de resultados de prueba
y un valor de referencia aceptado.
• La medida de la veracidad se expresa por lo general

en términos de sesgo.
5.8 Veracidad
Sesgo del método: Errores sistemáticos inherentes al

método
Sesgo de laboratorio:
Errores sistemáticos característicos
del laboratorio y de la
interpretación del método.
5.8 Determinación de la veracidad

Dos procedimientos:
• Revisión y verificación empleando el método analítico
con respecto a valores de referencia de un material
certificado (MRC), trazable a estándares internacionales.
• Revisión y verificación empleando un método

alternativo caracterizado
– Comparar los resultados de los dos métodos empleados.
– Las muestras pueden ser materiales de referencia
certificados o muestras típicas.
5.9 Robustez
Definición
La robustez de un procedimiento analítico es una

medida de su capacidad de permanecer inalterado por
variaciones pequeñas pero deliberadas en los
parámetros del método y proporciona una indicación
de su confiabilidad durante su uso normal.
• Es una medida de la efectividad del método analítico.

5.9 Robustez
Prueba de robustez
Estudio intra-laboratorio para estudiar el

comportamiento de un proceso analítico cuando se
efectúan pequeños cambios en el ambiente y/o en las
condiciones de operación, similares aquellas que
pudieran surgir en los diferentes ambientes de prueba.
5.10 Incertidumbre
Definición
La incertumbre es un parámetro que caracteriza la

dispersión de los valores que pueden ser atribuidos
razonablemente a la característica que se mide.
La estimación de este parámetro de debe basar en un

conocimiento del método y el alcance de la medición
5.10 Incertidumbre
Estimación de la
Incertidumbre
Procedimiento ISO
- Definir el mensurando
- Identificar las magnitudes de influencia
- Establecer el modelo matemático
- Determinar las magnitudes de influencia
- Determinar las fuentes de incertidumbre
- Determinar si hay correlación entre las magnitudes, y
cuantificarla
5.10 Incertidumbre
Estimación de la
Incertidumbre
Procedimiento ISO
- Cuantificar la variabilidad asociada a cada magnitud

de influencia
- Determinar la incertidumbre combinada
- Calcular la incertidumbre expandida
5.10 Incertidumbre
Estimación de la
Incertidumbre
Procedimientos Alternativos
- Calcular la incertidumbre debido a la precisión y

veracidad
- Calcular otras fuentes globales de incertidumbre,
como por ejemplo la heterogeneidad de la muestra
- Determinar la incertidumbre combinada
- Calcular la incertidumbre expandida
5.11 Recuperación de muestra fortificada
La fracción de analito
adicionada a una muestra de
prueba (fortificada) previa al
análisis, muestras fortificadas
y sin fortificar, el porcentaje
%R = ((CF-CU)/CA)x100
de recuperación (%R) se
calcula de la siguiente
manera:
Donde :
CF : es la concentración de analito medida en la muestra fortificada
CU : es la concentración de analito medida en la muestra sin fortificar
CA : es la concentración de analito adicionada en la muestra fortificada
5.11 Recuperación de muestra fortificada
Factores que pueden afectar la calidad de los resultados:
• la homogeneidad de las muestras

• la naturaleza química de la matriz de las muestras
• la diferencia entre la matriz de las soluciones de
calibración y de las muestras
• Asegurar la eficiencia del método para extraer todo el
analito de la matriz y determinarlo por completo.
GRACIAS
Alvaro Custodio Moreno

División Instrumental - ACQ Gestores
Celular (RPC): 947742632
e-mail: alvaro@acq-gestores.com

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GESTORES EN ASEGURAMIENTO

 Conocer los requisitos de INACAL

 Conocer los procedimientos de validación

 Analizar los resultados obtenidos de los

 Las directrices de un sistema de

1.1 Principios del Sistema de Aseguramiento de calidad.

1.1.1 Las mediciones analíticas deben para satisfacer

1.1.2 Las mediciones analíticas deben hacerse

1.1.3 Competencia Técnica del personal.

1.1 Principios del Sistema de Aseguramiento de calidad.

1.1.4 Evaluación rutinaria del desempeño del

1.1.5 Las mediciones realizadas en un lugar deben ser

1.1.6 Procedimientos de control y aseguramiento de

1.2 Factores que influyen en la calidad de los resultados.

Entorno Conocimiento de las condiciones ambientales

Gestión Provee los recursos necesarios.

1.3 Selección del Método Adecuado.

La competencia se demuestra a través de la

2.1 Requisitos de 17025 – Sección 5.4.4.

• Cuando sea necesario utilizar métodos no

• El método desarrollado debe haber sido validado

2.1 Requisitos de 17025 – Sección 5.4.5.

2.1 Requisitos de 17025 – Sección 5.4.5.

2.1 Requisitos de 17025 – Sección 5.4.5.

El laboratorio debe registrar

2.1 Requisitos de 17025 – Sección 5.4.5.

2.1 Requisitos de 17025 – Sección 5.4.5.

• A medida que se desarrolla el método, es conveniente

• Es conveniente que todo cambio en los requisitos

“Guía para efectuar validación de métodos de

3.1 Concepto de Validación de Métodos de Ensayo

• Es la confirmación, a través del examen y el

3.1 Concepto de Validación de Métodos de Ensayo

3.2 Tipos de Validación

3.3 Grados de Validación

Método Método estand Método propio

Verificación Validación Validación

3.4 Cuando se debe validar un método de ensayo

• Cuando sea necesario verificar que

3.5 Aseguramiento de la Calidad

• El laboratorio debe tener procedimientos QC

3.6 Como validar un método de ensayo

• Validar el proceso analítico en su conjunto

4.1 Objetivo y campo de aplicación

4.8 Expediente de Validación

4.11 Verificación de cumplimiento de objetivos iniciales

5.1 Limite de Detección (LD)

El límite de detección es la mínima concentración

5.2 Limite de Cuantificación (LC)

El límite de cuantificación es la menor concentración

Determinación en CRM [Au] = 0.013 g/tm

5.3 Selectividad o Especificidad

Habilidad de un método para determinar

Se considera que la especificidad es el 100% de

Las pruebas para asegurar la selectividad

5.4 Intervalo de Trabajo

Es el intervalo entre la más baja y la más alta

5.4 Intervalo de Trabajo

5.5 Intervalo Lineal

Dentro del intervalo de trabajo puede existir un intervalo

– Mediante inspección visual, además de su confirmación

Es el cambio en la respuesta de un instrumento de

5.6 Sensibilidad Y = mC+b

Es la proximidad de concordancia entre los resultados