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Azucares
Azucares
INTRODUCCIÓN
Log Io = abc
I
En donde:
En donde:
a = coeficiente de absorbancia (absortividad) – las unidades dependen de las
unidades utilizadas para la determinaciòn de la concentraciòn.
b = longitud de la celda usualmente en centìmetros.
c = concentraciòn de la muestra en las unidades apropiadas.
I
En esta práctica se empleará la técnica colorimétrica de Nelson y Ting para
determinar glucosa, fructosa y sacarosa.
OBJETIVOS
El estudiante explicará por escrito el fundamento del método empleado para
la determinación de azúcares en las muestras de frutas que se le asignarán.
El estudiante relacionará los contenidos de azúcares determinados en las
muestras de diversos frutos.
El estudiante se concientizarà del concepto y los instrumentos de mediciòn
utilizados en la espectrofotometrìa, y de la aplicaciòn de curvas estàndar utilizando
el mètodo de Nelson y Ting.
MATERIAL
6 matraces volumétricos de 100 ml con tapón.
2 matraces volumétricos de 500 ml con tapón.
2 matraces volumétricos de 250 ml con tapón.
1 embudo de vidrio.
2 matraces Erlenmeyer de 125 ml.
6 pipetas de 10 ml.
2 pipetas de 1 ml.
2 pipetas de 5 ml.
2 vasos de precipitados de 250 ml.
1 baño María simple.
5 celdas de espectrofotómetro.
1 gradilla.
2 círculos de 10 cm de diámetro de papel filtro Whatman # 1.
Papel sanitario blanco (proporcionado por el estudiante).
Algodón o gasa .
1 cuchillo de cocina (proporcionado por el estudiante).
1 tabla para cortar la fruta (proporcionada por el estudiante).
Fruta: 3 ejemplares por especie por equipo. En el caso del melón con 1
ejemplar basta (proporcionados por el estudiante).
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EQUIPO:
1 extractor de jugos.
1 licuadora o mortero.
1 potenciómetro.
1 baño María con control de temperatura y agitación.
1 espectrofotómetro Spectronic 20'® a 515 nm.
REACTIVOS
Solución alcalina de Ferricianuro.
Solución de Arsenomolibdato (25 g).
H2SO4 2N.
NaOH 10N, 1N y 0.1N.
HCl 1:1 (Vol/Vol).
Na2CO3 anhidro. (12.5 g) ó
Na2CO3 monohidratado. (14.3 g).
Tartrato de potasio (12.3 g).
NaHCO3 (10 g).
Na2SO4 anhidro disuelto en 35º ml de agua destilada.
CuSO4 · 5H2O disuelto en 50 ml. de H2O.
Glucosa (300 µg/ml).
MÉTODO
PREPARACIÓN DE REACTIVOS
1.- Transfiera 1 ml. del jugo diluido a un matraz volumétrico aforado de 100ml. y
añada 5 ml. de reactivo de ferricianuro.
2.- Colóque los matraces en un baño de agua hirviendo por 10 minutos.
3.- Enfríe los matraces inmediatamente bajo el chorro de agua fría.
4.- Neutralice el contenido de los matraces con 10 ml. de solución de ácido
sulfúrico 2N.
5.- Mezcle los contenidos de los matraces suavemente hasta que no emanen más
gases.
6.- Añada 4 ml. de arsenomolibdato.
7.- Mezcle una vez más el contenido de los matraces.
8.- Afore a 100 ml. con agua destilada.
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9.- Tome una celda del espectrofotómetro y transfiera ahí el contenido de cada
matraz (uno por celda).
10.- Efectúe la lectura en el espectrofotómetro a 520 nm. El blanco constará de
todos los reactivos antes mencionados, excepto la muestra de jugo de fruta bajo
estudio. No olvide ajustar el espectrofotómetro con agua destilada al principio.
CÁLCULOS:
A partir de la curva estándar se calcula el valor k para la determinación de
azúcares reductores totales mediante la siguiente fórmula:
k = c/a
En donde:
k = El factor por unidad de absorbancia o pendiente de la curva.
c = Concentración de azúcares reductores en gramos/100 ml.
a = Absorbancia de la solución a esa concentración.
S = K.A.D.
En donde:
DETERMINACIÓN DE FRUCTOSA
NOTA: Esta determinación no se realizará en esta sesión de laboratorio).
G+F=S
G/Q + F = L
En donde:
G = Porcentaje de glucosa en la muestra.
F = Porcentaje de fructosa en la muestra.
S = Porcentaje de azúcares reductores totales (Suma de G y F).
L = Porcentaje aparente de fructosa.
Q = Proporción entre Kg y Kf (Kg/Kf)
G = (S - L) X Q
Q-1
El cociente q/(Q-1), se utiliza como una constante en los cálculos del valor
real de la glucosa. El valor real de la fructosa se obtiene por diferencia.
1.- Se colocan 50ml. del jugo diluido en un vaso de precipitados de 150 ml. y se
añaden 10 ml. de ácido clorhídrico (1:1).
2.- Se deja reposar esta mezcla durante 18 horas a temperatura ambiental.
3.- Se añaden 5 ml. de solución de hidróxido de sodio 10N y los contenidos se
ajustan a un pH de entre 5 y 7 con una solución de hidróxido de sodio 1N
mediante el uso de un potenciómetro.
4.- Los contenidos se transfieren a un matraz volumétrico aforado de 100ml y se
afora con agua destilada.
5.- Se toma una alícuota de 1 ml de esta solución y se pipetea en un matraz
volumétrico de 100 ml. y se sigue el procedimiento descrito para la determinación
de azúcares reductores totales.
6.- Se calcula la cantidad de sacarosa de la diferencia entre el contenido de
azúcares reductores antes y después de la inversión, multiplicada por el factor de
0.95.
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CUESTIONARIO:
BIBLIOGRAFIA: