UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA

UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA y PARASITOLOGÍA

NÚMERO DE PRÁCTICA: IA.4.05-04- A

NOMBRE DE LA PRÁCTICA: Tinción de Gram.

1. DATOS INFORMATIVOS:
CARRERA: Ingeniería en alimentos.
SEMESTRE: Cuarto A
ALUMNO: Génesis López Córdova
DOCENTE RESPONSABLE: Dr. Segundo García Ledesma
ESTUDIANTE RESPONSABLE: Danny Ordoñez Niebla
FECHA: 06 – 02 – 2019

2. FUNDAMENTACIÓN
Tinción de Gram
La tinción de Gram es una técnica de laboratorio que permite identificar distintos tipos de
bacterias según se coloree su superficie, aportando información muy útil para orientar el
tratamiento antibiótico.
- En qué consiste
La tinción de Gram se utiliza en microbiología desde
finales del siglo XIX. Es una técnica muy sencilla que se
basa en el uso de un colorante (tinción) y que tiene una
gran utilidad en medicina.

La tinción de Gram es un tipo de tinción que se realiza

sobre las bacterias para observarlas mejor bajo el
microscopio. Según la distribución del peptidoglicano de
la pared celular que las envuelve, se tiñen de una forma u
otra. Así, las bacterias que no se tiñen mediante esta
técnica se denominan Gram negativas. Están formadas por
una pared más fina formada por menos capas de
peptidoglicano y una segunda membrana rica en lípidos (que repele la tinción Gram), al
microscopio aparecen incoloras.

Las Gram positivas tienen una pared celular mucho más gruesa, formada por un gran número de
capas de peptidoglicanos entre las que se inserta la tinción Gram, dando un color violeta intenso al
microscopio y se clasifican como Gram +.

La gran aportación práctica de la tinción de Gram es que permite determinar el tipo

de antibiótico así como su eficacia. El antibiótico de elección ha de ser capaz de atravesar la pared
bacteriana, en función de si la bacteriana es gram positiva o negativa se seleccionará el antibiótico
más eficaz.
Cómo hacer una tinción de Gram
El proceso es muy sencillo, y los pasos a seguir serían:

 Recoger la muestra de bacterias a estudio mediante un isopo (bastón estéril de algodón).

 Extender dicha muestra sobre un portaobjetos y dejarla secar.
 Fijar la muestra mediante un alcohol (metanol).
 Aplicar el tinte de violeta de genciana sobre el portaobjetos y esperar un minuto.
 Enjuagar la muestra con agua y aplicar un fijador del violeta de genciana (lugol). El lugol y
el violeta de genciana forman un complejo insoluble en agua capaz de penetrar en la pared
de las células bacterianas.
 Lavar de nuevo el portaobjetos con una mezcla de alcohol y acetona durante unos
segundos.
 Opcionalmente se puede añadir una tinción de safranina o fucsina para distinguir las gram
negativas que aparecerán bajo el microscopio (en lugar de incoloras) con un tono rosado o
rojo. Lavar con agua.
 Ya se puede observar la muestra al microscopio donde se visualizarán de color violeta las
gram positivas y de color rosa-rojizo las gram negativas.

En el caso de las bacterias gram positivas los complejos insolubles se quedan atrapados entre las
capas de peptidoglicano de la pared bacteriana, sin disolver y dando la coloración morada
característica al observarlas al microscopio. En cambio, en las bacterias gram negativas estos
compuestos sí que se disuelven y pierden su color. Al microscopio se verán incoloras o de color
rosa-rojo, en función de si se ha añadido la fucsina al final de la técnica de tinción de Gram.

3. OBJETIVO:
Distinguir las bacterias en una preparación coloreada para apreciar la forma y tamaño de las
bacterias coloreadas, usando la tinción de Gram.

4. MATERIALES E INSUMOS
 Muestra de alimento contaminado.
 Reactivos de Gram.
 Porta objetos.
 Lápiz graso.
 Lámpara de alcohol.
 Aceite de inmersión.
 Asa de platino

5. PROCEDIMIENTO
# PROCEDIMEINTO OBSERVACIONES
1 Preparar el microscopio y la muestra. Usar bata, guantes y mascarilla.
2 Realizar la tinción de Gram. Usar bata, guantes y mascarilla.
3 Realizar el enfoque. Usar bata, guantes y mascarilla.
4 Observar las tinciones que muestran las Usar bata, guantes y mascarilla.
bacterias.
6. CUADROS DE RESULTADOS
Tinción de Gram
Cristal Violeta 60 segundos
Lugol 30 segundos
Alcohol
Safranina 15 segundos

7. CONCLUSIONES
La tinción Gram es una prueba potente y rápida que nos permite diferenciar dos clases de
bacterias estas son: Bacterias Gram positivas y las gramnegativos. Las Gram positivas se
tiñen de morado ya que el colorante se queda atrapado en la capa gruesa de
petidoglucano que rodea a la célula. Las gramnegativos tienen una capa de petidoglucano
mucho más delgada es por ello que no retiene el violeta cristal y por esto las células se
tiñen con safranina y las observamos rojas. Se concluye también que las gram positivas
retienen la tinción azul y conservan el complejo yodo colorante. Las gram negativas
quedan decoloradas y pierden el complejo yodo colorante y pueden ser anaeróbicos y
aerobicos. Las bacterias son causantes de infecciones y enfermedades. Algunas son
beneficiosas para la agricultura, industria, salud y la investigación.
8. RECOMENDACIONES
Utilizar correctamente el uso de los colorantes para su respectiva tinción.
9. BIBLIOGRAFÍA: FORBES. Diagnóstico microbiológico. 2009.
 UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA
UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA y PARASITOLOGÍA

NÚMERO DE PRÁCTICA: IA.4.05-10-A

NOMBRE DE LA PRÁCTICA: Análisis microbiológico de una muestra de agua: Evaluación del Índice
higiénico.

1. DATOS INFORMATIVOS:
CARRERA: Ingeniería en alimentos.
SEMESTRE: Cuarto A
ALUMNO: Génesis López Córdova
DOCENTE RESPONSABLE: Dr. Segundo García Ledesma
ESTDUIANTE REPONSABLE: Danny Ordoñez Niebla
FECHA: 29 – 01 – 2019

2. FUNDAMENTACIÓN
Mediante la siembra bacteriana que se realiza en los medios de cultivo mediante un inóculo,
logramos reproducir unidades formadoras de colonias de esos gérmenes sembrados para
establecer la cantidad e identificación de los mismos, datos útiles para los demás procesos
analíticos, como el caso de los Índices Higiénico.
Cuando hablamos del cultivo de bacterias, nos referimos a uno de los sistemas más importantes
para la identificación de microorganismos observando su crecimiento en sustancias alimenticias
artificiales preparadas en el laboratorio químico.
Si hablamos de cómo se cultivan las bacterias, tenemos que hacerlos inevitablemente del medio
de cultivo, material alimenticio en el que crecen los microorganismos generando un cultivo.
En el cultivo de bacterias, la mayoría de las patógenas requieren nutrientes complejos similares en
composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano, es por eso por lo que la base de muchos
medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros
ingredientes.
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio
de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado
más de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión
de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de
cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar
exento de todo microorganismo contaminante.
La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en
composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos
medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán
otros ingredientes.

3. OBJETIVO:
Evaluar la muestra, mediante la utilización de medios de cultivo, para el protocolo.
4. MATERIALES E INSUMOS
Muestra. Equipos Materiales

Medios preparados Estufa Cajas Petri

Asa de platino

Lápiz graso

Tubos de ensayo de 20 ml. con tapón cardado,

Tubos de durhan

lámpara de alcohol

Tubos de ensayo estériles de 20 ml.

5. PROCEDIMIENTO
# PROCEDIMIENTO OBSERVACIONES

1 Esterilizar los medios de cultivo y materiales a 121°C por Usar bata, guantes y mascarilla.
15 minutos.

2 Preparar en condiciones asépticas las siembras en los Usar bata, guantes, mascarilla y cofia.
medios de cultivo estériles.

3 Incubar a 37 °C por 24 - 48 horas continuas. Usar bata y guantes.

4 Observar si hubo o no desarrollo de crecimiento del Usar bata, guantes y mascarilla.

material inoculado.

5 Identificar mediante técnicas microscópicas el cultivo Usar bata, guantes y mascarilla.

desarrollado.

6 Elaborar el protocolo de resultados.

6. CUADRO DE RESULTADOS
Cuenta Colonias Calculo de gérmenes

151 + 161 + 187 = 499 16633/mL

499/3 = 166,33

166,33 x 100 = 16633/mL

7. CONCLUSIONES
S e concluye que el cálculo de gérmenes es de 16633/mL Esto se evaluó mediante el conteo de las colonias
de la placa y los medios de cultivo fueron Agar Nutritivo y Macconkey. En el higiene sanitario se determinó
que corresponde a la calidad higiénica impura, y el índice sanitario que la muestra no es apta para consumo
humano ni animal.

1. BIBLIOGRAFÍA: Bailey _Scott. Diagnóstico microbiológico, editorial médica panamericana, séptima

edición, México. 1991.
https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practicoIII.pdf

IA.4.05-10-A
INDICE HIGIENICO
Recuento total de gérmenes 166,33 x 100
Recuento total de gérmenes 16633/mL
Identificación de la muestra

Muestra: Agua Cruda Superficial

Solicitada: Danny Ordoñez Niebla

Fecha 06 – 02 – 2019

Recontado por: Dr. Segundo García Ledesma

Observaciones: a muestra al criterio microbiológico corresponde a la calidad

higiénica impura.

Génesis López REPORTE DEL ANALISIS:

Analista Dr. Segundo García

UTM Analista
 PROTOCOLO DE NPRACTICA SANITARIO
MUESTRA:
INDICE SANITARIO

Presencia de los microorganismos entéricos en el alimento no es dado para el consumo

humano ni animal.
En los 11 tubos de ensayo en la parte superior es el límite de conciencia de 36 y en el
inferior es de 3.