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Optimizacion PRODUCCIO Bthuringiensis PDF
Optimizacion PRODUCCIO Bthuringiensis PDF
Diciembre de 1992
Un bioinsecticida es considerado como el product0 bacteriano o actividad bacteriana que da como resultado la
muerte de un insecto. Una de las formulaciones comerciales mds usadas actualmente esta basada en la bacteria B.
thuringiensis. Esta bacteria sintetiza durante su fase de esporulaci6n una proteina (delta-endotoxina), que muestra
una actividad insecticida unica. A1 ser ingerido la delta-endotoxina por larvas susceptibles, afecta el intestino de 10s
insectos causandoles la muerte. Existen endotoxinas especificas contra lepid6pteros7 dipteros, cole6pteros y
recientemente nuevas proteinas han sido aisladas contra nemdtodos y protozoarios.
En el presente trabajo se describe la optimizaci6n del medio de cultivo y las condiciones de fermentaci6n para
la producci6n de un bioinsecticida a partir de Bacillus thuringiensis var. aisawai .
Usando un diseiio experimental 2 3 ,-se encontr6 que las condiciones 6ptimas para producir delta-endotoxina de
B. thuringienesis Var. Aisawai en un fermentador de 14 L son 10s siguientes: 800 RPM, 1 w m , y control de pH igual
o mayor a 7.0. La concentraci6n final de esporas despuCs de 24 horas de fermentaci6n fu8 5 . 5 ~ 190 esplml. 10% *
SUMMARY
A bioinsecticide is defined as the bacterial product or bacterial activity which causes the death of an insect.
I
One of the most common commercial products is obtained from the bacteria Bacillus thuringiensis. This bacteria
synthesizes during its sporulation stage a protein (delta-endotoxin), which once it has been ingested by susceptible
larvae it affects the midgut cells causing eventually death. There are specific endotoxins against lepidopters, dipters,
I
I coleopters and recently new proteins have been isolated against nematodes and protozoa.
The main objetive ofthis work was the optimization of the growth medium and the fermentation conditions in
order to obtain a bioinsecticide based on Bacillus thuringiensis var. aisawai.
Using an experimentel design ;2 it was found that the optimal conditions for the delta-endotoxin production
of BaciNus thuringiensis Var. Aisawai in a 14 L. fermentor were the following: 800 RPM, 1 WM, and pH control
at o r higher of 7.0. The final concentration of spores after 24 hours was 5 . 5 ~ 190 sporelml. h 10%
Tabla 1 Tabla 3
----- ~ ---~ --
Exp. Agitaci6n Aireac. pH CIS cont. Exper. RPM pH Veloc. de Crec. Esporas (Esp.11~1)
1 400 1.2 C/C P (h-l). a las 24 Hr. de
2 400 0.8 SIC fermentaci6n.
3 400 0.8 CIC 1 700 7 0.17 4.6x109
4 400 1.2 SIC
5 600 0.8 SIC
6 600 1.2 SIC
7 600 0.8 C/C
8 600 1.2 C/C
*Respuesta: esporaslrnl a las 24 hrs. de fermentaci6n. Se observa que cuando se trabaja a pH 7 se obtie-
En esta tabla se puede ver que se tienen mejoresresultados cuando
se trabaja a 600 rpm. nen velocidades de crecimiento mayores que a pH 8.
Tambien se nota que a 800 RPM, 1 VVM y pH 7, se
tienen concentraciones mayores de esporas alas 24 horas
de fermentaci6n (6x10') respecto a la agitaci6n de 700
RPM (Figura 2).
Tabla 2
ANALISIS DE RESULTADOS
Efectos Interacci6n de Interacci6n de
promedio 2 factores. 3 factores.
El = Velocidad de agitaci6n.
E;?= Velocidad de aireacidn.
E3= pH contrl sin control.
Figura. 2. Crecimiento de Bacillus thuringiensis en
Efectos promedio: Efecto que se tiene sobre la variable fermentador de 1 4 L. a 800 RPM, 1 V V M y pH
de lo que se este midiendo. 7.0.,con una concentraci6n de 6 x 1 0 9 ESPImL.
Interacci6n de Es la combinacidn que existe
2 factores: entre dos variables. En la figura 2 se puede ver el comportamiento de
Interacci6n de Es la combinacidn entre las 10s diversos padmetros cinkticos para la producci6n de
3 factores: variables. Bacillus thuringiensis. En la cual se ve que la Densidad
Se llevaron a cab0 fermentaciones a 700 y 800 6ptica tiene una fase exponencial de aproximadamente 8
RPM seg6n 10s resultados del disefio experimental. Se horas, la glucosa se consume en 10 horas, el comporta-
tom6 1 W M como punto intermedio entre 0.8 y 1.2 miento del pH se mantiene en 7 durante 5 horas aproxi-
VVM. Los resultados se muestran en la Tabla 3. madamente y posteriormente tiende a subir, con respecto
a1 Oxigeno disuelto, se observa que la saturaci6n no llega
Con base en estos resultados, se decidi6 ajustar las a ser menor del70%. En cuanto a 10s bacilos y esporas,
condiciones de agitaci6n y de pH inicial, Tabla 3. se ve que el comportamiento en el primer0 es aumentar
y posteriormente disminuir su concentraci611, y en las
esporas suben gradualmente. Este comportamiento es
similar para las fermentaciones que se llevaron a cab0 en
este trabajo.
Abarca, C.C., Martinez. ].A. Caro, Caro B.M.. Quintero, R.R Optimizaci6n del proceso de fermentaci6n para producir Bacillus t.
El analisis de resultados de estos experimentos 5.-Razo, F.E. (1990). Escalamiento de un proceso por lote de nivel de
indica lo siguiente (tabla 4): laboratorio aplanta piloto para laproducci6n deBacillus thuringien-
sis. Tesis de Maestrh. Instituto de Investigaciones Bibmedicas.
a) Seg6n el efecto promedio; se observa que es Departamento de Biotecnologfa. Mkxico.
importante usar una agitaci6n alta para la producci6n de 6.-De Urquijo, G. (1987). Producci6n de Bacillus rhuringiensis para
B. thuringiensis. Tambibn se nota que el control de pH a el control de ciertas plagas de importancia agricola. Tesis de
7 favorece la producci6n de espora. Maestrh. CINVESTAV-IPN. Mkxico. pdg. 22-127.
7.Smith R.A. (1982). Effect of strain and medium variation on
b) Cuando se analiza la interacci6n de 2 factores;
mosquito toxin production by Bacillus ~huringiensb
se ve que la interacci6n entre el pH yla velocidad de Var. israelensis. Can. J. Microbiol. 28. 1089-1092.
agitaci6n no es significativa.
8.-Egorov N.S; Loriya 2h.K. y Yodina T.G. (1984). Influence of
De acuerdo con lo que el diseiio experimental nos arninoacids of the synthesis of exoproteasa by
muestra como condiciones bptimas, se repitieron 10 Bacillus thuringiensis. Appl. Riochem. Microbiol. 19, 481.
fennentaciones las cuales nos dan una producci6n de 9.-Du1mageT.H. (1981). Production ofbacteria for biological control
esporas 5.5 x 109 esplml. *lo% y una biomasa de 24 g/ of insects. En: Biological control of crop production, Papavizas
G.C. ed; Reltsville Symposia in Agricultural. Research, M a n -
L (peso seco). hed, Osmun and Co; Totowa N.J; 5, 129.
Estos resultados se resumen en la tabla 4. 10.-Zamola B; Valles P; Meli G; Miccoli P. y Kajfez F. (1981). Use
of thecentrifugal separation technique in manufacturing a bioinsec-
Tabla 4 ticide based on Bacillus thuringiensis. Riotechnol. Rioeng. 23,
1079-1086.
Efectos Promedio Interacci6n de 2 factores 11.-Luthy P. y ~ b e r s o l dH.R. (1981). The entomocidal toxins of
E l = 0 . 7 5 ~ 190 Bacillus thuringiensis. Pharmacol. Ther. 13, 257.
12.-Arcas J; Yantorno 0. y Ertola R. (1987). Effect of high concen-
tration of nutrients on Bacillus thuringiensis. Cultures. Biotech-
nol. Lett. 9, 105-110.
13.-Pavelic, V; and Saxena, U. (1969). Statistical Experiment Design.
Los resultados del aniilisis del diseiio experimen- Chemical Engineering. October 6. 175-180.
tal, demostraron que las condiciones 6ptimas para la 14.-Vecht-Lifshitz, S.E. y Braun, S. 1989. Fermentation Broth 0 f B . t .
producci6n de B. thuringiensis a nivel fermentador de 14 As a Source of Precursors for Production of Nikkomycins. Letter
in Applied Microbiology 9, 79-81. Department of Biological
L son: 800 rpm de velocidad de agitacidn, 1 VVM de
Chemistry, Institute of Life Sciences, The Hebrew University of
aireaci6n y control de pH igual o mayor a 7, con un Jerusalem, Jerusalem 91904, Israel.
aumento en la producci6n de e s p o d m l de 5x105 a
*
5 . 5 ~ 1 0 ~lo%, biomasa de 1.4 a 24 g/L (peso seco), en
15.-Ertola, R. Production of Bacillus thuringiensis Insecticides. Cen-
tro de Investigaci6n y Desarrollo en Fermentaciones Industriales,
tiempos de fermentaci6n de 48 y 24 horas de ferrnenta- Facultad de Ciencias Exactas UNLP, 47 y 115, 1900 La Plata
ci6n respectivamente. Lo cual en algunos casos rebasa a Argentina.
lo reportado en la literatura y en menor tiempo de 16.-Aloysius, K. and Herbert G. Miltenburger. Bioinsecticides: I.
fermentaci6n. Bacillus thuringiensis. Advances in Biotechnological. Pag. 273-
290. 1984.