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Capitulo 27 PDF
Capitulo 27 PDF
El control de insectos plaga en la agricultura y ron plantas transgénicas que producen toxinas
de vectores de enfermedades humanas se ha Cry1A (específicas contra larvas de lepidópteros)
realizado principalmente con la aplicación de que le confieren la característica de resistencia
insecticidas químicos. Estos insecticidas han al ataque de insectos plaga. Si embargo, esta
generado problemas de contaminación am- tecnología corre el riesgo de que aparezcan po-
biental, de toxicidad a insectos no blancos y, de blaciones de insectos resistentes a las toxinas
manera más importante, a los agricultores que Cry. De hecho, se han aislado en el laboratorio
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los aplican. Se estima que cada 40 segundos poblaciones de insectos lepidópteros resisten-
muere un humano por problemas generados tes a estas toxinas. En las siguientes líneas ha-
por contaminación con plaguicidas. Por otra blaremos sobre estas proteínas, cómo matan a
parte, los insecticidas químicos han perdido su su insecto blanco y cuáles son sus aplicaciones
eficacia en el control de insectos, ya que su apli- más importantes.
cación ha generado la aparición de poblaciones
de insectos resistentes. La pregunta es: ¿existe
un insecticida ideal, que sea tóxico sólo para su Bacillus thuringiensis (Bt)
insecto blanco, que no sea recalcitrante, que no Es una bacteria Gram-positiva, aerobia estric-
contamine el ambiente y que no genere la apa- ta, que durante su ciclo de vida presenta dos
rición de insectos resistentes? fases principales: crecimiento vegetativo, donde
Bacillus thuringiensis (Bt) es el insecticida las bacterias se duplican por bipartición, y es-
biológico más utilizado comercialmente, y porulación, un programa de diferenciación de
tradicionalmente se ha ocupado para el con- bacteria a espora. Bt es considerada una bacte-
trol de insectos plaga en la agricultura y de ria ubicua, ya que se ha aislado de todas partes
mosquitos vectores de enfermedades como del mundo y de muy diversos sistemas, como
la malaria y el dengue. Una característica im- suelo, agua, hojas de plantas, insectos muer-
portante de las proteínas Cry producidas por tos, telarañas, etc. A Bt se le caracteriza por
Bt es que son altamente específicas e inocuas producir un cuerpo paraesporal conocido como
para vertebrados y otros insectos no blanco. cristal durante su fase de esporulación, el cual
Es por estas características que se desarrolla- es de naturaleza proteínica y tiene propieda-
Figura 1.
Microfotografía de Bacillus thuringiensis en microscopio
electrónico de transmisión. Se muestra el cristal proteíni-
co romboide compuesto de toxinas Cry y una espora en
proceso.
nos casos menores al 25 %), muestran una es- contenido de colesterol y glucolípidos. La interac-
tructura similar compuesta por tres dominios ción del pre-poro de la toxina Cry con la APN faci-
(figuras 2 y 3). El dominio I está constituido por lita la inserción del oligómero en las balsas lipídi-
siete hélices a antiparalelas y anfipáticas. Seis cas membranales, lo que resulta en la formación
de éstas forman un ramillete que rodea a la hé- del poro (Bravo et al., 2004). La figura 4 muestra
lice a 5. Éste es el dominio que forma el poro nuestra propuesta de modo de acción.
iónico. El dominio menos conservado en se-
cuencia y estructura terciaria entre las toxinas
Cry es el dominio II. Este dominio está formado Bti, una bacteria inteligente
por tres láminas plegadas b y por tres asas. En Un caso excepcional es el control de mosqui-
las asas de estas láminas b se observa la ma- tos por una cepa de Bt conocida como Bacillus
yor diferencia estructural. El dominio II juega thuringiensis subespecie israeliensis (Bti). Esta
un papel fundamental en la especificidad de bacteria produce tres toxinas Cry (Cry4A, Cry4B
la toxina, donde las asas interaccionan con el y Cry11A) y dos toxinas Cyt (Cyt1A y Cyt2A)
receptor localizado en las microvellosidades con alta actividad insecticida contra larvas de
de las células epiteliales del intestino medio. El diferentes especies de mosquitos y otros díp-
dominio III está formado por dos láminas ple- teros. Bti se ha ocupado por más de 30 años en
gadas b antiparalelas formando un sándwich. el control de mosquitos y moscas transmisores
El dominio III también está involucrado en la de enfermedades como el dengue, la malaria y
interacción con receptores (figura 3). la oncocercosis sin que a la fecha se haya re-
Las proteínas que se han propuesto como portado la aparición de resistencia. Distintos
posibles receptores de las toxinas Cry1A en in- estudios en diferentes laboratorios demostra-
sectos lepidópteros son la aminopeptidasa N ron que la no aparición de insectos resistentes
(APN) y una proteína de la familia de las cade- a Bti se debe a la presencia de la toxina Cyt1Aa.
rinas (BtR). La APN es una proteína con masa Se han podido aislar poblaciones de moscos re-
aparente de 120 kDa que se encuentra anclada sistentes a las toxinas Cry4A, Cry4B y Cry11A,
a la membrana a través de un grupo glicosil- o a las tres toxinas, sin embargo no se han po-
fosfatidil-inositol (GPI), mientras BtR tiene una dido aislar poblaciones resistentes a la toxina
masa de entre 175 a 210 kDa dependiendo del Cyt1Aa. Es más, las poblaciones de mosquitos
insecto lepidóptero. Por otra parte, en mosqui- resistentes a las toxinas Cry recuperan la sen-
tos identificamos una proteína anclada a tra- sibilidad a estas toxinas en presencia de canti-
vés de un grupo GPI con actividad de fosfatasa dades subletales de Cyt1Aa. Por otra parte, se
alcalina de 65 kDa que interacciona con la toxi- ha demostrado que la toxina Cyt1A sinergiza la
na Cry11Aa (Fernández et al., 2006). actividad insecticida de las otras toxinas Cry, es
Nuestro grupo demostró que la interacción decir, la actividad tóxica de la mezcla de toxinas
de la toxina con el receptor caderina promueve Cry con Cyt es mucho mayor que la suma de
un corte adicional del extremo amino terminal, sus actividades individuales.
facilitando la formación de un oligómero o pre- Las toxinas Cry y Cyt son toxinas formado-
poro formado por cuatro monómeros que es el ras de poro. Esto significa que para matar a su
responsable de la inserción a la membrana y la insecto blanco, las toxinas Cry y Cyt se insertan
formación del poro. Para que el pre-poro se inser- en la membrana de las células apicales del in-
te a la membrana, se requiere que interaccione testino formando un poro que permite el paso
con el receptor APN. Las proteínas ancladas a la de iones y agua, provocando un desbalance os-
membrana por GPI se distribuyen de manera mótico y finalmente la lisis celular. Sin embar-
preferencial en regiones específicas de la mem- go, las toxinas Cry y Cyt tienen mecanismos di-
brana, conocidas como balsas lipídicas, que tie- ferentes para interactuar con la membrana. Es
nen características particulares debido a su alto importante mencionar que el mecanismo más
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Figura 2.
Filograma de identidades entre las secuencias Cry. Las lí-
neas verticales denotan los cuatro niveles de la nomencla-
tura. Tomado y adaptado de http://www.biols.susx.ac.uk/
home/Neil_Crickmore/Bt/.
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Figura 3.
Estructura tridimensional de la proteína insecticida
Cry1Aa producida por Bacillus thuringiensis.
común de la resistencia a las toxinas Cry son baja. También existen evidencias de muta-
mutaciones que afectan a los receptores pro- ciones que afectan la expresión de los recep-
teínicos, lo que evita así la unión de la toxina tores tipo caderina, que resultan en insectos
a su membrana blanco. En cambio, las toxinas resistentes a las toxinas Cry1A, y tienen un
Cyt, formadas por un solo dominio estructural, costo en el desempeño de los insectos en la
no interaccionan con proteínas de membrana, naturaleza, evitando que las mutaciones que
si no que interaccionan directamente con lípi- afectan a esta proteína se fijen en la pobla-
dos específicos de la membrana de mosquitos- ción de insectos. En el caso de Bti, como ya
formando el poro. se mencionó, la falta de resistencia se debe
Nuestro grupo reportó recientemente el a la presencia de la toxina Cyt1A. Paradóji-
mecanismo molecular del sinergismo entre las camente, las ventajas de Bt se convierten en
toxinas Cry y Cyt. Los datos mostraron que la importantes desventajas para su uso comer-
toxina Cyt1Aa se inserta a la membrana y fun- cial. El estrecho rango de huésped ocasiona
ciona como un receptor proteínico de las toxi- que no se cuente con toxinas para cada plaga
nas Cry (figura 5). Este mecanismo explica la que afecta la actividad humana. También, la
falta de aparición de insectos resistentes a Bti reducida permanencia en el ambiente hace
en la naturaleza. Este es el primer ejemplo de necesario un profundo conocimiento de la
una bacteria patógena cuya virulencia se basa biología y comportamiento de la plaga que se
en toxinas formadoras de poro y que produce quiere controlar, ya que una toxina puede ser
una proteína que funciona como receptor de activa para los estadios larvarios, pero dismi-
las otras toxinas. Sin duda Bti se puede consi- nuir o incluso no ser tóxica para los adultos.
derar una bacteria inteligente, ya que desarro- Por lo tanto, los tiempos y formas de aplica-
lló un mecanismo que le permite aumentar su ción deben seleccionarse cuidadosamente.
actividad tóxica y además evitar la aparición de Otra limitante ha sido la utilización de Bt
insectos resistentes a sus toxinas (Pérez et al., para el control de insectos barrenadores y
2005). chupadores, ya que su aplicación se ha dado
tradicionalmente como producto asperjado, y
el hábito alimenticio de estos insectos impi-
Ventajas y limitaciones den la ingestión de la toxina Cry. Este proble-
del uso de Bacillus thuringiensis ma se ha resuelto con la creación de plantas
Varios factores han hecho posible su éxito transgénicas que producen sistémicamente
en la agricultura y en el control de mosquitos la toxina Cry haciéndola accesible a insectos
transmisores de enfermedades. El más im- barrenadores. Por último, existe el riesgo de
portante es su alta especificidad hacia el in- desarrollo de resistencias por el incremento
secto blanco y su inocuidad para mamíferos, en el uso de Bt como aspersiones de crista-
otros vertebrados, plantas e inclusive otros les y sobre todo en plantas transgénicas que
insectos benéficos. Las toxinas de Bt se han expresen constitutivamente una o varias
utilizado como bioinsecticidas en agricultura toxinas Cry. El objetivo es que la planta, una
durante los últimos 40 años, principalmente vez transformada con el gen de la toxina, ex-
en cultivos de hortalizas y cereales. Como se prese suficiente cantidad de ésta como para
mencionó antes, también Bti se ha ocupado aniquilar a las plagas susceptibles que las
con éxito durante 30 años para el control de consumen. Desde 1987 aparecieron los pri-
mosquitos. Sólo existe un ejemplo de gene- meros reportes sobre plantas de tabaco y to-
ración de resistencia a Bt en campo. Esto se mate que presentaban suficiente expresión
debe a que los tiempos de permanencia de de la toxina de Bt como para conferir niveles
las proteínas Cry en el ambiente son muy cor- altos de resistencia. En la actualidad, univer-
tos, por lo que la presión de selección es muy sidades, centros de investigación y compa-
ñías privadas llevan a cabo proyectos sobre razón es necesario continuar con proyectos de
el desarrollo de plantas transgénicas con ca- búsqueda de nuevas proteínas cry que tengan
pacidad insecticida, una gran variedad de im- actividad contra estos insectos. Otra alterna-
portancia económica. La adopción de plantas tiva es evolucionar la actividad de toxinas Cry
transgénicas en la agricultura está ocurrien- ya caracterizadas para que tengan actividad
do a velocidad vertiginosa. Sólo en Estados contra otros insectos por técnicas de evolu-
Unidos, el 50% de la superficie sembrada con ción molecular. Para cumplir este propósito es
soya consiste de plantas transgénicas resis- necesario entender las bases moleculares de
tentes a herbicidas. En México, por ejemplo, la especificidad de estas toxinas, en particular
el 60% del algodón que se cultiva es Bt. En la identificar las moléculas receptoras en diferen-
actualidad existen ocho cultivos importantes tes especies de insectos y definir los sitios de
con cultivares transgénicos registrados: soya, interacción entre las toxinas y sus receptores.
maíz, algodón, canola, papa, tomate, tabaco Con este conocimiento y con metodologías que
y remolacha, y muchas otras plantas están permitan el tamizado de bibliotecas de mutan-
próximas a registrarse. La introducción de tes de toxinas en los sitios de reconocimiento
plantas transgénicas a nuestro país ha sido de los receptores, se podrán identificar pro-
estrictamente regulada, y el caso de la intro- teínas Cry que reconozcan y tengan actividad
ducción de maíz transgénico reviste singular tóxica contra diferentes insectos.
importancia, dado que Mesoamérica es sitio Otro problema importante en el uso de las
fundamental en la evolución del maíz, donde proteínas Cry para el control de insectos es la
aún existen sus posibles ancestros. Es nece- generación de insectos resistentes a las toxi-
sario evaluar el impacto del maíz transgéni- nas. En este aspecto también es importante
co sobre las poblaciones de sus ancestros, la continuar con la búsqueda de nuevas toxinas
posibilidad de que los transgenes eventual- que reconozcan diferentes receptores proteí-
mente pudieran introducirse en las plantas nicos en los insectos blanco, de manera que
silvestres. Un uso racional de esta tecnología la resistencia a una toxina Cry por mutaciones
redundará sin duda en mayor producción al en un receptor específico se pueda evitar con
resolver el grave problema agrícola del ata- la aplicación de otra toxina Cry que reconozca
que de insectos, así como evitar la contami- otros receptores en ese insecto. De igual forma,
nación del medio ambiente con pesticidas la evolución molecular de las toxinas Cry puede
químicos y la exposición de los agricultores a generar toxinas con estas características. Final-
esto agentes químicos. mente, una posibilidad interesante es buscar o
generar toxinas Cyt que sinergicen la actividad
de toxinas Cry que sean tóxicas a insectos lepi-
Perspectivas del uso de las toxinas Cry dópteros, evitando así la resistencia, como es el
Sin duda las toxinas Cry producidas por Bt se caso de Bti.
acercan al ideal de un insecticida específico Un aspecto fundamental para la aplicación
contra su insecto blanco, que no contamina el de las toxinas Cry y para evitar la aparición de
ambiente y que no genera poblaciones de in- insectos resistentes es determinar el modo de
sectos resistentes. Sin embargo, todavía exis- acción de estas toxinas en diferentes órdenes
ten problemas para su aplicación en el control de insectos. Las características celulares y fi-
de insectos plaga y transmisores de enferme- siológicas de cada orden de insectos son muy
dades con vistas a reemplazar el uso de insec- diferentes, por ejemplo el pH del intestino, los
ticidas químicos. Uno de los principales es que, tipos celulares, la composición proteínica de las
como ya se mencionó, existen insectos plaga microvellosidaes del intestino en el estado lar-
que no son controlados eficientemente por las vario, la dieta de los insectos etc. Todos estos
toxinas Cry descubiertas a la fecha. Por esta factores sin duda deben influenciar el modo de
AZ3'dC AZ3&$-+dC
* AZ3'&&dC
+ , -
Figura 4.
Esquema de los diferentes eventos en el modo de acción
de las proteínas Cry. (1) Solubilización, (2) procesamiento,
(3) unión a receptor caderina, (4) formación de pre-poro,
(5) unión a receptor aminopeptidasa, (6) inserción a mem-
brana.
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Figura 5.
Mecanismo del sinergismo entre las toxinas Cry11Aa y
Cyt1Aa de Bacillus thuringiensis subs. israeliensis. La toxina
Cyt1A funciona como receptor de la toxina Cry11Aa.