PRÁCTICAS DE

MICROBIOLOGÍA CLÍNICA
(CURSO 2012–2013)
Prácticas de Microbiología Clínica (Curso 2012-2013) Miércoles

PRÁCTICAS A REALIZAR

Observación de halos de hemólisis

X-1
en las placas de Agar Sangre nº 1 y nº 2

Tinción de Gram
X-2 de presuntos cocos Gram + crecidos en:
ANÁLISIS placa de Agar Sangre nº 2
CUALITATIVO
MUCOSA
Observación de la placa de Agar
FARÍNGEA X-3 Salino Manitol
y tinción de Gram de colonias aisladas

Siembra en Agar Sangre

X-4 de cocos Gram + en sectores
(placa nº 3)
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ANÁLISIS CUALITATIVO DE FARINGE

IDENTIFICACIÓN DE COCOS GRAM POSITIVOS
SOBRE LA PLACA DE AGAR SANGRE Nº 2

METODOLOGÍA

Se parte de la placa de agar sangre nº 2 (se puede utilizar también la de Agar

Salino Manitol). Después de 48 horas de incubación, debe haber colonias aisladas
con un crecimiento adecuado.

a) Colocando la placa frontalmente a la luz, se observará la existencia de

halos de hemólisis (α y β).

b) Podrán existir colonias de cocos Gram positivos que no sean hemolíticas.

c) Se considerará la relación tamaño de la colonia / tamaño del halo de

hemólisis.

d) Se realizará una tinción de Gram a cada tipo diferente de colonias

aisladas.
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OBSERVACIÓN DE HALOS DE HEMÓLISIS

FUNDAMENTO

Los microorganismos hemolíticos liberan enzimas (hemolisinas) al medio que

destruyen los glóbulos rojos apareciendo halos de hemólisis.

METODOLOGÍA

Se trabajará con colonias aisladas y bien crecidas a las 48 horas.

Observación de la hemólisis

α-hemólisis

β-hemólisis

γ-hemólisis: no hay hemólisis

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CARACTERÍSTICAS DE BETA Y ALFA HEMÓLISIS

Beta Lisis completa de los glóbulos rojos

hemólisis Halo transparente alrededor de la colonia

Lisis parcial de los glóbulos rojos

Se abren poros en la membrana
Alfa Salida de hemoglobina al medio
hemólisis Oxidación del grupo hemo
Formación de biliverdina (color verdoso)
Halo verdoso alrededor de la colonia
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β
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β α

γ
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IDENTIFICACIÓN PRESUNTIVA DE
COLONIAS EN AGAR SANGRE

COCOS GRAM POSITIVOS

Colonia grande/Halo hemólisis pequeño Æ Staphylococcus
Colonia pequeña/Halo hemólisis grande Æ Streptococcus
AGRUPACIÓN
BACTERIA CATALASA HEMÓLISIS
MICROSCÓPICA
S. aureus + β Racimos
S. epidermidis + NO Racimos
S. saprophyticus + NO Racimos
Streptococcus
- β Cadenas
pyogenes
Aisladas
S. pneumoniae - α Parejas
Cadenitas
S. agalactiae - β Cadenas
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OBSERVACIÓN DE MICROBIOTA DE FARINGE

Colonia Morfología celular Podría ser

Grande Células esféricas
Amarillenta- incolora Racimos irregulares Staphylococcus aureus
Beta-hemolítica
Pequeña Células esféricas
Blanca-grisácea Racimos irregulares Staphylococcus epidermidis
No hemolítica
Grande Células esféricas
Blanca-amarillenta Racimos irregulares Staphylococcus saprophyticus
Anaranjada
No hemolítica
Pequeña Células esféricas
Grisácea-traslúcida Células ovoides Streptococcus pyogenes
Beta-hemolítica Aisladas-parejas
Cadenas
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OBSERVACIÓN DE MICROBIOTA DE FARINGE

Colonia Morfología celular Podría ser

Pequeña Células esféricas
Grisácea-traslúcida Células ovoides Streptococcus pneumoniae
Alfa-hemolítica Aisladas-parejas
Cadenas
Pequeña Células esféricas Grupo Viridans
Gris Células ovoides Streptococcus mutans
Alfa-hemolítica Aisladas-parejas S. Salivarius
No hemolítica Cadenas S. Bovis
S. mitis
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ANÁLISIS CUALITATIVO DE LA
MUCOSA FARÍNGEA
Observación de la placa de Agar Salino Manitol
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Microorganismos Fermentación Colonia

manitol
Staphylococcus aureus SI Halo amarillo
S. epidermidis NO Incolora
S. urealyticus SI Halo amarillo
S. xylosus SI Halo amarillo
S. lentus SI Halo amarillo
S. simulans SI Halo amarillo
S. saprophyticus Variable Halo amarillo o
incoloro
Enterococcus faecalis SI Halo amarillo
E. faecium Variable Halo amarillo o
incoloro
E. avium SI Halo amarillo
E. durans Variable Halo amarillo o
incoloro
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TINCIÓN DE GRAM DE COLONIAS AISLADAS

(BÚSQUEDA DE COCOS GRAM POSITIVOS)

Se realizará tinción de Gram de:

1. Colonias aisladas de la placa de Agar

Sangre nº 2 (preferentemente)

2. Colonias aisladas de la placa de AgarSalino

Manitol
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Tinción de Gram

1. Extensión.
2. Desecación.
3. Fijación.
4. Colorante: Cristal violeta, 2 minutos.
5. Lavar con agua.
6. Mordiente: Lugol, 2 minutos.
7. Lavar abundantemente con agua.
8. Decoloración: Alcohol etílico 96%, 20 segundos.
9. Lavar abundantemente con agua.
10. Colorante de contraste: Safranina, 3-4 minutos.
11. Lavar abundantemente con agua.
12. Dejar secar a temperatura ambiente.
13. Observar al microscopio con objetivo de inmersión (100X).
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Gram positiva Gram negativa

Extender y fijar
la preparación

Cristal violeta

Lugol

Etanol

Safranina
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Staphylococcus

Levaduras
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Enterococcus faecalis

Corynebacterium
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Neisseria

Fusobacterium

Streptococcus
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ANÁLISIS CUALITATIVO DE FARINGE

SIEMBRA POR SECTORES DE LA PLACA
DE AGAR SANGRE Nº 3
METODOLOGÍA

a) Se sembrarán aquellas colonias identificadas como cocos Gram positivos.

La siembra se hará por sectores en una placa de agar sangre que
llamaremos nº 3.

b) Cada alumno deberá sembrar, al menos, dos sectores de cocos Gram

positivos.