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INTEGRANTES:
LIMA-PERÚ
INDICE
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1.0 RESUMEN
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2.0 INTRODUCCION
En casi todos los procesos que ocurren en las células están presentes las proteínas.
carboxilo de un aminoácido con el grupo amino del otro aminoácido, lo cual da lugar
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3.0 PRINCIPIOS TEORICOS
PROTEÍNA
Estructuras:
1. Estructura primaria:
Es la secuencia de aminoácidos de la proteína en forma lineal. Esta estructura
están enlazados por medio de enlaces peptídicos.
2. Estructura secundaria:
Es la secuencia de aminoácidos en el espacio. Este tipo de estructura de las
proteínas se adopta gracias a la formación de enlaces de hidrógeno entre los
grupos carbonilo (-CO-) y amino (-NH-) de los carbonos involucrados en los
enlaces peptídicos de aminoácidos cercanos en la cadena.
o La a (alfa)-hélice :Es la estructura que se forma al enrollarse
helicoidalmente sobre sí misma la estructura primaria.
o La conformación beta:En esta disposición los aminoácidos no forman una
hélice sino una cadena en forma de zigzag.
3. Estructura terciaria:
Informa sobre la disposición de la estructura secundaria de un polipéptido al
plegarse sobre sí misma originando una conformación globular. Aparecen varios
tipos de enlaces: el puente disulfuro, los puentes dehidrógeno, los puentes
eléctricos, las interacciones hidrófobas)
4. Estructura cuaternaria:
Esta estructura informa de la unión, mediante enlaces débiles (no covalentes) de
varias cadenas polipeptídicas con estructura terciaria, para formar un complejo
proteico. Cada una de estas cadenas polipeptídicas recibe el nombre de
protómero
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Desnaturalización
Es una pérdida de la estructura tridimensional suficiente que puede causar pérdida
de la función. Se forma un conjunto de cadenas polipeptídicas con distinto grado de
plegamiento. La desnaturalización no significa que siempre se obtenga la cadena
polipéptidica totalmente desplegada. Los productos de desnaturalización en
solución se agregan físicamente y según las condiciones de pH y fuerza iónica,
precipitan.
El objetivo de elegir un paso de purificación desnaturalizante es crear las
condiciones donde la proteína de interés no se desnaturalice mientras que los otros
componentes se desnaturalicen y precipiten.
Agentes desnaturalizantes:
Temperatura
pH
Polaridad del disolvente
Fuerza iónica
Punto isoeléctrico
Aminoácidos
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Reacción de Biuret
Reacción de xantoproteica
Ninhidrina
Es un hidrato del carbono y un poderoso agente reactivo común para observar
las bandas de separación de aminoácidos y determinar a los aminoácidos.
Reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH esta entre 4-8, dando una
coloración que varía de azul a violeta intenso
Reacción de la ninhidrina
Es una prueba tanto para proteínas como para
aminoácidos. En aquellos casos que no da positiva la
prueba de biuret, da positiva la de lninhidrina e indica
que no hay proteínas pero si aminoácidos libres.
Los cationes de metales pesados y los aniones de elevado peso molecular son
muy usados en la separación de proteínas y en la preparación de filtrados libres
de proteínas. A pH neutro por lo general las proteínas tienen carga neta negativa
y se combinan fácilmente con iones de metales pesados que, al neutralizar la
carga producen la precipitación. A pH por debajo del punto isoeléctrico en
cambio, se combinan con aniones porque presentan carga neta positiva.
Soluciones concentradas de sales, de sulfato de amonio.
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4.0 DETALLES EXPERIMENTALES
4.1 Materiales:
• 1 luna de reloj
• 1 balanza
• 1 gradilla
• Cocinilla eléctrica
• 2 vasos de precipitado de 400mL
• 1 vaso de precipitado de 100mL
• algodón
• embudo
4.2 Reactivos:
• Solución de albúmina
• NaOH al 10%
• Ninhidrina
• HNO3 concentrado
• NH4OH
• CH3COOH
• CuSO4 al 5%
• BaCl2 al 5%
• (CH3COO)2Pb al 5%
• Ácido pícrico
• Acido fosfomolibdico
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4.3 PROCEDIMIENTO:
PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE ALBÚMINA
Se extrajo la clara de un huevo y se colocó en una probeta. La misma
cantidad de volumen se agregó de agua y se procedió a colocar en un vaso
de precipitados para batir de forma que quede la solución homogénea y se
observe la espuma. Para evitar que pase la espuma con la ayuda de una
gasa se procedió a filtrar.
1. REACCIÓN DE COLORACIÓN
a) REACCIÓN DE BIURET
En un tubo de ensayo se colocó 2 mL de albúmina y 3 mL de NaOH al 10%
y se agregó gota a gota el CuSO4
b) REACCIÓN XANTOPROTEICA
En un tubo de ensayo se colocó 3mL de albúmina con 1 mL de ác. Nítrico
concentrado. Se sometió a un baño de agua caliente. Al enfriar se añadió
NH4OH.
c) REACCIÓN DE LA NINHIDRINA
Se colocó 5 mL de albúmina con 0,5 mL de ninhidrina al 0.1 % y se llevó a
un baño maría hasta que tome color púrpura. Se agregó 1 gota de ác.
Acético y 1 mL de cloroformo se agitó y se anotó las observaciones.
2. REACCIÓNES DE PRECIPITACIÓN
REACCIÓNES DE PRECIPITACIÓN
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SALES METALICAS:
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5 REACCIONES QUIMICAS
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2.0 REACCIÓN DE PRECIPITACIÓN
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B) precipitación con sales neutras: se observa un precipitado amarillo y con el filtrado un
coagulo blanco
Solución amarillo
fosforescente fuerte
Solución amarillo
opaco
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6 DISCUSIÓN DE RESULTADOS
a. Reacción de Biuret
Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos ya que
se debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse los
aminoácidos. El reactivo de Biuret lleva sulfato de Cobre (II) e hidróxido de sodio. La
reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación
de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no
compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos.
b. Reacción de xantoproteica
La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de
grupos bencénicos, tirosina, fenilalanina y triptófano, obteniéndose nitrocompuestos de
color amarillo, que se vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalino (formación del
ácido pirámico o trinitrofenol). En esta prueba se produce la nitración del anillo bencénico
presente en dichos aminoácidos. Las manchas amarillas en la piel se causan por el ácido
nítrico son el resultado de una reacción xantoproteica.
c. Reacción de la Ninhidrina
El grupo alfa-amino de los aminoácidos forma complejos coloreados con la Ninhidrina:
violeta azuloso en la mayoría de los aminoácidos cuyo grupo amino es primario, amarillo
para la prolina e hidroxiprolina y café para la asparagina que tiene un grupo amido en la
cadena lateral. Esta reacción también identifica los grupos alfa-amino libres presentes en
péptidos y proteínas.
REACCIÓN DE PRECIPITACIÓN
a. Reacción de precipitación con sales metálicas
A pH 7 y por encima de él, las proteínas están cargadas negativamente, así que la adición
de metales cargados positivamente neutraliza la carga y la proteína precipita. La
precipitación por metales pesados es, por lo tanto más efectiva a valores de pH neutro o
ligeramente alcalino, pero la solución no puede ser muy alcalina por que se corre el riesgo
de que se precipiten hidróxidos de los metales.
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7 CONCLUSIONES
Cuando las proteínas se tratan por ácido nítrico concentrados dan una coloración
amarilla que pasa a naranja por adicción de amoniaco. Se debe a los núcleos
aromáticos que se nitran formando ácidos pícrico y después de amonio por el
amoniaco.
8 RECOMENDACIONES
http://tecniciencia.net/desnaturalizacion-de-las-proteinas-y-agentes-
desnaturalizante/
http://gmein.uib.es/moleculas/fuerzas_proteinas/fuerzaproteinasjmol.html
Gonzáles Rodriguez, Lucia . Manual de Laboratorio Bioquímica I. Facultad
de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional de Colombia.
Bogotá 1997.
http://www.diciva.ugto.mx/directorio/josebar/documentos/Practicas%20de%2
0Bioqu%C3%ADmica%202009.pdf
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ANEXOS:
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mientras que los aminoácidos que sean polares, ya sean con carga o sin carga, serán
retenidos por la fase estacionaria. Ello es así, porque la fase móvil está formada por solventes
que son más apolares que el agua, que es el solvente de la fase estacionaria gua adsorbida
por el material sólido de la capa fina, en este caso celulosa
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5. ¿Cómo se prepara el reactivo de Millon?
Disolver 10 g de mercurio en 20 ml de ácido nítrico frío. Cuando la disolución se
completa y haya cesado el desprendimiento de humos pardos, adicione 60 ml de
agua. Después de varias horas, decantar el líquido sobrenadante y guardar en un
frasco obscuro. Preparación alternativa: Prepare una solución v/v de sulfato
mercúrico al 15% en ácido sulfúrico al 15%.
Prueba de Millón:
A 2 ml de la muestra añada 5 gotas de reactivo de Millón, mezcle bien y caliente
cuidadosamente durante 30 segundos sobre una pequeña flama. El reactivo
produce un precipitado blanco que por la acción del calor se torna un color rosado
o rojo ladrillo. Un exceso de reactivo produce un color amarillo que no es una
prueba positiva.
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Cualquier factor que modifique la interacción de la proteína con el
disolvente disminuirá su estabilidad en disolución y provocará la
precipitación. Así, la desaparición total o parcial de la envoltura acuosa, la
neutralización de las cargas eléctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los
puentes de hidrógeno facilitarán la agregación intermolecular y provocará la
precipitación. La precipitación suele ser consecuencia del fenómeno llamado
desnaturalización y se dice entonces que la proteína se encuentra
desnaturalizada.
la polaridad del
disolvente la
fuerza iónica el
pH la
temperatura Ejemplos:
La leche cortada como consecuencia de la desnaturalización de la caseína, la
precipitación de la clara de huevo al desnaturalizarse la ovoalbúmina por
efecto del calor o la fijación de un peinado del cabello por efecto de calor
sobre las queratinas del pelo.
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