UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA

INFORME DE LABORATORIO

TEMA: Tiempo Generacional

Docente: Ing. Pablo Araujo

Grupo: 3

Paralelo: 2

Integrantes:

Cepeda Andres

Erazo Carlos

Guevara Kelly

Sarango Alexis

Shigla Fernanda

2018- 2018
 UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

RESUMEN

Aplicación de técnicas de siembra y dilución seriada en medios de cultivo sólidos,

determinación del tiempo generacional y curva de concentración de microorganismo en
función del tiempo. Para la realización de la práctica se preparó una determinada cantidad de
diluciones, se inoculó la primera con cierto volumen de la muestra, se aplicó dilución seriada
con un respectivo factor de dilución, se usó la técnica de extensión para sembrar, se incubó
por un cierto tiempo y se realizó el recuento de UFC. Con un tiempo generacional y un total
de microorganismos en cada una de las muestras, se obtuvo una curva de concentración. Se
concluye que el tiempo generacional es un parámetro determinante en el crecimiento de los
microorganismos el cuál es la base en la reproducción celular.

PALABRAS CLAVE:

TIEMPO_GENERACIONAL/ CURVA DE CONCENTRACIÓN/

TÉCNICA_DE_EXTENSIÓN /REPRODUCCIÓN_CELULAR/ DILUCIÓN_SERIADA/
 UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

PRACTICA 7

TIEMPO GENERACIONAL

1. OBJETIVOS
 Aplicar técnicas de siembra y dilución seriada.
 Determinar el tiempo generacional
 Determinar la curva concentración de microorganismos vs tiempo.
2. TEORÍA
2.1.Tiempo generacional
“Tasa promedio de tiempo en el que se da lugar el nacimiento de un individuo y el
nacimiento de su descendencia. En microbiología, corresponde al tiempo que una célula,
después de nacer, le toma reproducirse” (Rittmann & Mccarty, 2001)
2.2.Curva de crecimiento microbiano
“Representación gráfica del número de células viables en el ambiente inoculado a través
del tiempo transcurrido desde la siembra. La forma de la curva es exponencial y después
de ser linealizada muestra cuatro fases: latencia, crecimiento exponencial, estacionaria y
declinación” (Rittmann & Mccarty, 2001)
Fig 1. Curva de crecimiento microbiano

FUENTE: Ritmtman & McCarty. (2001). Biotecnología del Medio Ambiente: Principios y
Aplicaciones. Rittmann, B., & Mccarty, P. (2001). Biotecnología del Medio Ambiente:
Principios y Aplicaciones. México D.F. McGraw Hill/Interamericana.
2.3.Reproducción de bacterias
“Las bacterias en general tienen una estructura menos compleja que las células eucariotas,
tienen un cromosoma únicamente y carecen de membrana nuclear. Por esto, las bacterias
solo se pueden reproducir de dos formas: Sexual y asexualmente” (Rittmann & Mccarty,
2001)
2.3.1. Reproducción sexual
“Las bacterias tienen tres mecanismos de reproducción sexual: transformación,
transducción y conjugación.” (Rittmann & Mccarty, 2001)
2.3.1.1.Transformación
“Intercambio genético producido cuando una bacteria es capaz de captar
fragmentos de ADN de otra bacteria, cuando estos fragmentos de ADN se
 UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

encuentran dispersos en el medio ambiente donde vive.” (Rittmann & Mccarty,

2001)
2.3.1.2.Transducción:
“Se produce un intercambio de ADN entre una bacteria y otra a través de un
virus. El virus actúa como un vector intermediario entre las dos bacterias.”
(Rittmann & Mccarty, 2001)
2.3.1.3.Conjugación
“Cuando una bacteria transmite un fragmento de ADN a otra bacteria a través
de unos pelos que vendrían a ser algo así como un órgano sexual.” (Rittmann
& Mccarty, 2001)
2.3.2. Reproducción asexual
División por bipartición, se caracteriza por la duplicación del ADN,
proceso que se lleva a cabo por acción de la ADN-polimerasa que
se encuentra en los mesosomas. Luego la pared celular crece hasta
formar un tabique transversal separador que finalmente da lugar a
la separación de los cromosomas y a dos nuevas células. Este
mecanismo es la base de reproducciones múltiples como la
gemación, que en lugar de dar dos nuevas células produce más de
dos células nuevas. (Rittmann & Mccarty, 2001)
3. PARTE EXPERIMENTAL
3.1. Material y Equipos
 Cajas Petri.
 Lámpara de alcohol
 Asa de Digralski
 Incubadora
 Tubos de ensayo

3.2. Sustancias y reactivos

 Medios de Cultivo.
 Microorganismo activado.
 Agua peptonada

3.3. Procedimiento
3.3.1. Prepara un medio de cultivo adecuado para el microorganismo a utilizar.
3.3.2. Activar el microorganismo a utilizar para medir el tiempo generacional.
3.3.3. Preparar 7 tubos de ensayos con 9ml de agua peptonada.
3.3.4. Inocular el primer tubo con 1 ml de muestra.
3.3.5. Aplicar dilución seriada con factor de dilución 1/10
3.3.6. Usar la técnica de extensión con asa de Digralski para sembrar en las placas.
3.3.7. Incubar por 20 minutos una muestra y así sucesivamente.
3.3.8. Realizar el recuento de UFC
 UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

4.1 Datos Experimentales.

Tabla 4.1-1
Dilución seriada
Variable Valor
Microorganismo Escherichia coli
8
Concentración inicial 10 UFC/ml
Volumen de agua peptonada 9 mL
Volumen de inóculo 1 mL
Factor de dilución 1/10
Fuente: Centro de Biología “UCE”,2018.

Tabla 4.1-2
Tiempo Generacional
Variable Valor
8
Número de bacterias a t=0 10 UFC/ml
Número de bacterias a tiempo=t 2x 105 UFC/ml
Tiempo de crecimiento 20 min
Fuente: Centro de Biología “UCE”,2018.

4.2. Cálculos.
4.2.1. Factor de dilución.
𝑪𝒂𝒙 = 𝑪𝒂𝟎 ∗ 𝒇
1
𝐶𝑎1 = 108 × ( )
10

𝐶𝑎1 = 107

𝒙 = 𝒏ú𝒎𝒆𝒓𝒐 𝒅𝒆 𝒅𝒊𝒍𝒖𝒄𝒊𝒐𝒏.
𝑪𝒂 = 𝑪𝒐𝒏𝒄𝒆𝒏𝒕𝒓𝒂𝒄𝒊𝒐𝒏 𝒅𝒆 𝒍𝒂 𝒆𝒔𝒑𝒆𝒄𝒊𝒆 𝒂
𝒇 = 𝒇𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 𝒅𝒆 𝒅𝒊𝒍𝒖𝒄𝒊𝒐𝒏.

4.2.1. Cálculo de conteo de colonias

Tabal 4.1-3
Colonias observadas
Variable Valor
Colonias observadas 46
Volumen de muestra utilizado 1 uL
Fuente: Centro de Biología “UCE”,2018.

𝒇
#𝑼𝑭𝑪 = 𝑪𝑶 ∗
𝒗
 UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

𝟎, 𝟏
#𝑼𝑭𝑪 = 𝟒𝟔 𝑼𝑭𝑪 ∗
𝟏𝑿𝟏𝟎−𝟑 𝒎𝑳

#𝑼𝑭𝑪 = 𝟒𝟔𝟎𝟎 𝑼𝑭𝑪/𝒎𝑳

𝑪𝒐 = 𝒄𝒐𝒍𝒐𝒏𝒊𝒂𝒔 𝒐𝒃𝒔𝒆𝒓𝒗𝒂𝒅𝒂𝒔
𝒇 = 𝒇𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 𝒅𝒆 𝒅𝒊𝒍𝒖𝒄𝒊𝒐𝒏.
𝑽 = 𝒗𝒐𝒍𝒖𝒎𝒆𝒏 𝒅𝒆 𝒎𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂.

4.2.2. Tiempo Generacional.

𝒚
𝒏 = 𝟑, 𝟑 𝒍𝒐𝒈 𝒙 Ec 4.2.2-1
8
10
𝑛 = 3,3 𝑙𝑔
2,05x106

𝑛 = 5,5

 Deducir la ecuación 4.2.2-1

𝑦 =𝑛2𝑥

𝑙𝑔 𝑦 = 𝑛 𝑙𝑔 2 + 𝑙𝑔 𝑥

𝑙𝑔 𝑦 − 𝑙𝑔 𝑥
𝑛=
𝑙𝑔2

𝑦
𝑙𝑔 𝑥
𝑛=
𝑙𝑔2

𝑦
𝑛 = 3,3 𝑙𝑔
𝑥

𝑵 = 𝒏ú𝒎𝒆𝒓𝒐 𝒅𝒆 𝒈𝒆𝒏𝒆𝒓𝒂𝒄𝒊𝒐𝒏𝒆𝒔
𝑿 = 𝒃𝒂𝒄𝒕𝒆𝒓𝒊𝒂𝒔 𝒆𝒏 𝒕 = 𝟎
𝒀 = 𝒃𝒂𝒄𝒕𝒆𝒓𝒊𝒂𝒔 𝒆𝒏 𝒕𝒊𝒆𝒎𝒑𝒐 = 𝒕

𝒕
𝑮=𝒏 Ec. 4.2.2-2

𝟐𝟎
𝑮= = 𝟑, 𝟔𝟑
𝟓, 𝟓
 UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

𝒕 = 𝒕𝒊𝒆𝒎𝒑𝒐
𝑵 = 𝒏ú𝒎𝒆𝒓𝒐 𝒅𝒆 𝒈𝒆𝒏𝒆𝒓𝒂𝒄𝒊𝒐𝒏𝒆𝒔

4. RESULTADOS.
Tabla 4.1-1
Dilucion seriada.
Dilución Vol. agua Ca0 Ca
1 10 mL 108 107
2 20 mL 108 106
3 30 mL 108 105
4 40 mL 108 104
5 50 mL 108 103
6 60 mL 108 102
7 70 mL 108 10
Fuente: Centro de Biología “UCE”,2018.

Tabla 4.1-2
Tiempo Generacional
Variable Valor
Tiempo generacional 3,63 min
Fuente: Centro de Biología “UCE”,2018.

5. DISCUSIÓN
El método cuantitativo utilizado en la práctica es el correcto ya que por medio de los datos
obtenidos se determinó el tiempo de generacional a partir de cálculos, y además se
determinó la curva concentración de microorganismos vs tiempo con estos datos obtenidos.
En la práctica existieron errores aleatorios y sistemáticos, entre los errores aleatorios se
verifico en el tiempo de incubación, el tiempo aproximado era de 20 minutos, debido a que
se tenía dos pipetas, para 3 grupos, el tiempo de ocupación de estas tomaba más de 20
minutos, esto perjudico a nuestros resultados levemente, otro de los errores que se puede
mencionar es al momento de la dilución, el contenido de un 1ml en la pipeta no era el
correcto, la calibración del aparato no fue la adecuada. Se recomienda usar más pipetas
calibradas correctamente, esto ayudara a establecer el tiempo correcto para la incubación,
esto ayudara a mejorar el tiempo estimado para la incubación y así obtener un mejor
resultado.
6. CONCLUSIONES
6.1. Se determinó el crecimiento exponencial de la especie Staphilococus Aureus al realizar
una curva de concentración en función del tiempo, la cual no permitió además observar
las diferentes fases de crecimiento de especie. Hecho que representa que se tuvo
condiciones en el tiempo generacional detallado en la tabla 4-1 para el crecimiento.(Alexis
Sarango)
 UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

6.2.Se utilizó el método directo en el cual, mediante el recuento en placa se pudo determinar
el tiempo generacional que fue de 3,63 [min], por lo que podemos decir que esta bacteria
la Escherichia coli tiene un tiempo de generación bastante corto, con un crecimiento alto
de la misma, teniendo en la tabla 4.1-3 un total de 46 colonias observadas. (Guevara Kelly)
6.3.El tiempo generacional de Staphilococus Aureus es de 20 minutos, es tiempo para la
duplicación y este directamente proporcional a la velocidad de crecimiento, esto se puede
diferenciar en la tabla 4-1, otro factor para que la velocidad sea máxima es la temperatura
optima, esto ayuda al crecimiento, lo que esto nos proporciona una fase
exponencial.(Andrés Cepeda).
6.4.Los cultivos de E. coli poseen un color blanquecino y se reunieron entre ellas formando
grandes figuras redondeadas y bastante simétricas, la mayoría de los cultivos tuvieron
incontables cantidades de bacterias en ellas, por lo cual se debe realizar siembras más
diluidas, para que estas puedan ser contabilizadas. Todos los cultivos preparados tuvieron
un solo tipo de bacteria en ellos, por lo cual todos fueron monocultivos, es decir que no se
infectó ningún cultivo. Los resultados encontrados en la experimentación, tabla 4.1-1,
muestran el crecimiento exponencial de las bacterias. La gráfica de concentración de
bacterias en función del tiempo del anexo 2, muestran como todos los cultivos se
encuentran en la fase de crecimiento, ya que los cultivos tuvieron cada vez menos colonias
debido a la mayor disolución. (Fernanda Shigla).

7. BIBLIOGRAFÍA

7.1.Rittmann, B., & Mccarty, P. (2001). Biotecnología del Medio Ambiente: Principios y
Aplicaciones. México D.F.: McGraw Hill/Interamericana de Editores S.A de C.V.

8. ANEXOS
8.1.Diagrama del equipo.
8.2.Curva de cantidad de bacterias vs tiempo.
 UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

8. ANEXOS
8.1.Diagrama del equipo.

Fig.1. Diagrama del Equipo

Fuente: Laboratorio de Biotecnología, Centro de Biología, UCE, Grupo N 3

Nombre: Fecha: Universidad Central del Ecuador

Dib: Grupo N° 3 21/06/2018 Facultad de Ingeniería Química
Deleg Jessica Escuela de Ingeniería Química
Rev: 28/06/2018

Esc. TIEMPO GENERACIONAL

1
 UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

8.2. Curva de cantidad de bacterias vs tiempo

Fig. 6.2-1
Diagrama Cantidad de bacterias vs Tiempo

Cantidad de bacterias vs Tiempo

25000000

20000000

15000000
UFC/mL

10000000

5000000

0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Tiempo (h)

Fig.2. Curva de cantidad de bacterias vs tiempo

Fuente: Laboratorio de Biotecnología, Centro de Biología, UCE, Grupo N 3

Nombre: Fecha: Universidad Central del Ecuador

Dib: Grupo N° 3 21/06/2018 Facultad de Ingeniería Química
Rev: Deleg Jessica 28/06/2018 Escuela de Ingeniería Química

Esc. TIEMPO GENERACIONAL

2