DETERMINACIÓN DE CIANUROS POR EL MÉTODO DE AZUL DE PRUSIA:

Introducción:

Las fuentes de exposición esta dada en forma de glucósidos cianogenéticos que se

encuentran en muchas plantas como la almendra amarga , Mandioca , Sorgo , Judia de
Lima... también ampliamente distribuidosen plantas superiores, cuya toxicidad por vía
oral depende de la actividad hidrolítica de las bacterias y pH gastrointestinal para liberar
HCN. La intoxicación aguda se caracteriza por asfixia, piratorias (citocromo P450) . La
intoxicación crónica puede conducir a neuropatías degerativas o a bocio , por la
conversión a tocianato en presencia de la enzima rodanasa.

En los alimentos poco cocinados no se llega a producir la hidrólisis de los glucósidos

cianogenéticos , pero cuando el alimento es cocinado adecuadamente , estos son
evaporados liberando un olor característico.
La dosis letal es de 1-2 mg/kg , su mecanismo es la interrupción de la cadena de
transporte de electrones , a consecuencia de esto se paraliza la respiración celular, se
produce una hipoxia , muerte por asfixia.

Síntomas clínicos --> cardiovasculares

--> respiratorios ---> muerte por parada cardíaca y
--> neurológicos respiratoria.

Diagnóstico clínico--> pupilas dilatadas...

La FAO dice (JECFA) que los glucósidos cianogenéticos son un problema para muchas
gente , por lo que se establece una dosis de referencia aguda de 0,09 mg/kg y también
ingesta diaria tolerable máxima de 0,02 mg/kg de peso. En la Yuca dulce no debe pasar
los 50 mg/kg.

-Fundamento:
La determinación de estos compuestos se puede hacer en alimentos , fluidos biológicos
y tejidos. Consiste en la formación de forrocianuros que después es tratado con una sal
férrica (muy específica).

-Procedimiento para la determminación de cianuros en alimentos:

Colocar 10 gramos de muestra , cuya muestra puede ser un tejido o un alimento, en un
matraz de destilación sobre este añadir agua mas o menos 50 ml y añadiir 10 ml de
acido tartárico al 10% destilar ....

6CN- + Fe+2 --> [Fe (CN)6]-4 Fe(CN)6 FeK + FeCl3--> [Fe(CN6)]3 Fe4
---> Azul de Prusia

Fe+2+2OH--->Fe(OH)2 Precipitado Verde

2Fe(OH)2+ 1/2O2 + H2O--> 2Fe(OH)3 Pardo

Diluciones realizadas:
10xV = 5x8 --> 4 ml y 1 ml correspondientes al agua.
10xV = 5x3 --> 3,5 ml y 1,5 ml correspondientes al agua.
10xV = 5x1 --> 0,5 ml y 4,5 ml correspondientes al agua.
10xV = 5x0,1 --> 0,05 ml y 4,95 ml correspondientes al agua.

MÉTODO CUANTITATIVO . Método de Denigés.

Ag+ + 2CN- <---> Ag (CN)2

CN- + Ag NO3 ---> AgCN + NO3-
AgCN + CN- -->[Ag (CN)2]- Complejo soluble
[Ag (CN)2]- + Ag+ --> Ag (CN)2Ag este , se forma del final
Este proceso se corregirá con NH3
Ag(CN)2- + NH3 --> Ag (NNH3)2+ + 2Ag (CN-)2
Ag+ (exceso) +I- --> AgI menos amarillo

Procedimiento:
1-Coger 10 ml de destilado
2- Agregar 10 ml de amoníaco concentrado y 1 ml de KI al 10%
3-Valorar con nitrato de plata 0,01N hasta la aparición de un color blanco-amarillo.

DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE METALES PESADOS DETERMINACIÓN DE

PLOMO EN MUESTRAS DE AGUA.

Introducción:

El plomo ha sido objeto de amplios estudios tanto en animales de experimentación

como en humanos , los cuales han permitido el conocimiento de la toxicología . El
plomo inorgánico abbsorbido es transportado en la sangre unido al estroa dek eritrocito ;
su cncentración esta en quilibrio con los tejidos blandos , no así con el hueso donde se
acumula preferentemente (vida media mayor a 20 años). El plomo es un tóxico
multisistema ,es decir afecta a todo ,produce anemia hemolítica;no se forman los
hematíes , interrupción de la formación grupo-hemo, altera el sistema cardiovascular
(hipertensión) ,problemas renales, efectos sobre la reproducción, genotoxicidad y cancer
.

En el sistema hematopoyético se observan efectos a concentraciones de plomo en

sangre inferiores que en otros sistemas , estos efectos por orden de sensibilidad son los
siguientes: inhibiciñon de la ALA-D eritrocitaria elevacion de la protoporfirina ix
eritrocitaria , aumento de la excreción urinaria ..

Los efectos sobre el sistema nervioso central se denominan encefalopatía saturnina con
síntomas similares en adultos y en niños . El plomo presenta también efectos tóxicos
sobre el sistema nervioso periférico , con signos neurológicos como aminoramiento de la
velocidad de conducción motriz de las fibras más lenttas de los nervios cubitales ,
degeneraciñon de la células de Schwann y posible degeneración axonal walleriana.

Los efectos renales del plomo son de dos tipos generales: uno tubular; es reversible y
se produce con exposición relativamente breve . El segundo tipo , caracterizado
anatómicamente por esclerosis y fibrosis intersticial , funcionalmente reduce la
capacidad de filtración. Estas alteraciones , de naturaleza progresiva , pueden culminar
en insuficiencia renal.

El plomo innorgánico es más tóxico que el plomo orgánico , los aliementos aportan el
50% de plomo en nuestro cuerpo.
La JECFA dijo que la ingesta diaria tolerable era de 50 microgramos/kg , esta ha sido
bajada a 25 microgramos/kg y se ha fijado la dosis final teniendo en cuenta los efectos
cardiovasculares en 1,50 microgramos/kg .
El daño renal se produce a 0,63 microgramos/kg , para paliar los efectos , administrar
quelantes.

FUNDAMENTO:

Se priduce reacción de yoduro de plomo , las sales de lomo reaccionan con el yudouro
potásico y se priduce un precipitado amarillo de I2Pb ,el cual es poco soluble en agua
fría pero soluble en agua caliente.

Se produce reacción del cromato de plomo , las sales de plomo reaccionan con CrO3Pb
y se produce un precipitado amarillo de comato de plomo (neutrra o alcalina), añadir
CNK y gotas de ditizonas (0,05% en Cl4C). El color verde del reactivo cambia al rojo si
existe plomo.
La ditizona , de color verde , reacciona con el catión Pb2+ formando un quelato rojo en
soluciones neutras o alcalinas. Para evitar la interferencia de otros cationes como Ag + ,
Cu2+,Hg2+,Cd2+ y Zn2+ se adicciona previamente cianuro de potasio, resultando entonces
una reacción específica y sensible para el plomo.

(CH3-COO)2Pb + 2IK--> I2Pb (CH3-COO)2Pb +CrO3K2--> CrO3Pb

1) Diluciones realizadas:

5xV = 3x6 --> 3,6 y 2,4 correspondiente al agua.

5xV = 2x6 -->2,4 y 3,6 correspondiente al agua.
5xV = 0,5x6 -->0,6 y 5,4 correspondiente al agua.
5xV = 0,1x6 -->0,12 y 5,88 correspondiente al agua.

Resultados obtenidos :
1) se obtine un color amarillo
2) se obtiene un color pardo-rojo
3)se ontiene un color pardo-rojo
4)se obtiene un color pardo-rojo (+ amonio)

2) Es más eficaz el yoduro.

3)
El agua de la pecera sí tiene plomo , se produce un color amarillento.
En el agua de grifo no se obtiene color , obtenemos un resultado transparente lo que
quiere decir que NO lleva plomo.

ANÁLISIS CUALITATIVO DE NITRATOS EN HOJAS DE ESPINACA:

Introducción:
Los nitratos son compuestos presentes en el medio ambiente de forma natural como
consecuencia del ciclo del nitrógeno, pero puede ser alterado por diversas actividades
agrícolas e industriales

Los nitratos están ampliamente distribuidos en los alimentos, siendo la principal fuente
de exposición humana a nitratos el consumo de verduras y hortalizas, y en menor
medida, el agua de bebida y otros alimentos. Algunas especies de vegetales acumulan
los nitratos en sus partes verdes. Por tanto, los cultivos de hoja como las lechugas y
espinacas generalmente presentan mayores concentraciones de nitratos. Los nitratos
también son usados en agricultura como fertilizantes y en el procesado de alimentos
como aditivo alimentario autorizado.

El nitrato en sí es relativamente poco tóxico. Su toxicidad viene determinada por su

conversión a nitrito. El nitrato puede transformarse en nitrito por reducción bacteriana
tanto en los alimentos (durante el almacenamiento), como en el propio organismo. Los
nitritos en sangre oxidan el hierro de la hemoglobina produciendo metahemoglobinemia,
incapaz de transportar el oxígeno, muy frecuente en bebés expuestos a altas
concentraciones de nitratos en los alimentos (“Síndrome del bebé azul”), los niños
menores de 3 años son más sensibles ya que la Hb es facilmente oxidada a metHb
. Por otro lado, los nitratos reaccionan con los aminoácidos de los alimentos en el
estómago, produciendo nitrosaminas y nitrosamidas, sustancias que han demostrado
tener efectos cancerígenos.

Niveles -->2000-4000 ppm

IDA: NO-3 -->3,65 Microgramos/kg
NO-2 --> 0,07 Microgramos/kg

Las plantas de invernadero acumulan nitratos y nitritos , los suelos ácidos favorecen la
absorción de nitratos y en las zonas oscuras hay mas nitratatos que en las zonas con
más luz.

Objetivo:
determinar los nitratos presentes en la lechuga. De esta forma sabremos la cantidad de
dicho alimento que se podría consumir para no superar la IDA , en el caso de que este
fuera la unica fuente de nitratos.

Fundamento:
el ión nitrato es el precursor del ión nitrito ,sustancia que tras exposiciñon aguda da
lugar a metahemoglobina y tras exposicion crónica puede dar lugar a un compuesto N-
nitroso , que son reconocidos carcinógenos.
El ión notrato reacciona con la brucina para dar lugar a un producto de reacción de color
rojo , que pasa al anaranjado y se estabiliza en el amarillo . El método sulfúrico
concentrado no interfieren los nitratos. Dan reacción análoga a oxidantes enérgicos
como IO-3 ,ClO-3 , CrO2-4 ,sustancia que no se encuentra normalmente en los alimentos.

Procedimiento:
1- 1ml de agua y añadir con cuidado 1ml de ac. sulfúrico y enfriar.
2- Añadir 1 ml de sulfato de hierro (II)
Si exites presencia de nitratos aparecera color pardo oscuro o pardo rojizo , si existe la
presencia de nitritos se puede hacer la prueba de Brucina:
1- Añadir poco a poco 1 ml de agua,
2- Añadir 3 cm3 de ac. sulfúrico y enfriar
4- Añadir cristales de Brucina
En presencia de nitratos aparece una coloraciñon roja que vira a amarillo.

ANÁLISIS CUANTITATIVO DE NITRITOS CARNES Y AGUA DE BEBIDA:

Introducción:

Según el código alimentario Español los nitritos no pueden superar el valor de 150 ppm
en la carne . La utilización de nitrito/nitrato en la elaboración de los derivados caŕnicos
resulta importante para mantener su calidad sanitaria y organoléptica.

Cuando se incorpora nitrito a un alimento cárnico se suceden una serie compleja de

reacciones cuya naturaleza depende de las características fisicoquímicas del sistema.
El nitrito adicionado a la carne se convierte en una mezcla en equilibrio de NO3-, NO2-
y NO, dependiendo del pH. El nitrito desaparece como resultado de sus reacciones
químicas con los componentes de la carne o de la actividad metabólica de los
microorganismos. Parte del nitrito se convierte en nitrato mediante diversas reacciones
química y la velocidad a que desaparece el nitrito depende del pH y de la temperatura
.La concentración óptima oscila entre 15 y 150 ppm de nitrito, dependiendo del
producto.

Objetivo:
Se desea conocer la cantidad de nitrito de sodio que contiene las salchichas y el agua
de bebida.

Fundamento:
La cantidad de nitritos de determina por la formación de un colorante AZO púrpura rojizo
, tras la extración de los nitritos presentes en la muestra con agua alcalina caliente,
daremos lugar a la transformación en tres pasos:
1- En medio ácido se produce la reacción de una amina primaria , la sulfaanilamida , con
anitrito de la muestra , formandode una sal de diazonio.
2- Después se acopla una amina aromática , N-(1,naftil)-etilendiamina, para así da lugar
al compuesto AZO de color púrpura rojizo.
3- Por último leemos la absorbancia a 540 nm.

Obtención de la recta patrón de nitrito sodico: (solución 0,25 por mil de nitrito sodico)
procedimiento:
1- Pesar 0,25 g de nitrito sódico y disolver en 1 litro de agua destilada.
2- Preparar las concentraciones llevados a un volumen de 10 ml:
0,25 x 10 = 10 x V --> 0,4 y 9,6 ml correspondiente al agua.
0,25 x 10 = 2,5 x V --> 0,1 y 9,9 ml correspondiente al agua.
0,25 x 10 = 5 x V --> 0,2 y 9,8 ml correspondiente al agua.
0,25 x 10 = 1,25 x V --> 0,050 y 9,950 ml correspondientes al agua.
3- Añadir a cada concentración obtenida 1 ml de sulfanilamida y agitar.
4- Añadir 1 ml de N-(1naftil)-etilendiamina y agitar , dejar reposar y leer absorbancia a
540 nm.

Gráfica:

Preparación de las muestras sólidas (salchichas) :

Procedimiento:
1- Cogemos 2 g de muestra y homogenizamos en 3 ml de agua caliente de pH de 8-9.
2- Vaciamos la bolsa en un matraz y la limpiamos con 9 ml de agua , calentamos el
contenido del matraz a ebullición y enfriar.
3- En el interior del matraz echamos 1 ml de ferrocianuro potásico al 15% y 1 ml de
acetato de Zn al 30% (agente clarificante).
4- Filtramos con papel de filtro.
5- Del filtrado cogemos 1 ml de añadimos sobre este 1ml de sulfanilamida y 1 ml de
N(1,naftiletilendiamina) , agitamos y leemos absorbancia a 540 nm.

Absorbancia de la solución de muestra de salchicha --> 0,150 nm

-DETERMINACIÓN DE NITRITOS EN EL AGUA DE BEBIDA: (agua del grifo)

Procedimiento:
1- Cogemos 1 o 2 ml de agua del grifo.
2- Añadimos 1 ml de sulfanilamida y 1 ml de N-(1-naftil-etilendiamina)
3- Leemos absorbancia a 540 nm.
Absorbancia obtenida en la muestra de agua --> 0,127 nm
La legislación dice que los niveles de nitratos en el agua de bebida no deben pasar los
50 mg/L --> 50ppm , y los nieveles nitritos no deben pasar los 0,5 mg/L --> 0,5 ppm.

Calculo de la cantidad de nitritos en el agua de bebida--> 0,40 mg x 2 ml /3,4 g =0,23

mg /L--> 0,23 ppm.

Cálculos:
1-
Primero hemos sacado las diluciones que nos pedían en la práctica a partir de una
solución estándar de nitrito sodico de (0,25 mg/ml) , con la fórmula "N x V = N x V".
0,25 x 10 = 10 x V ; V -->0,4 Y 9,6 ml H2O
0,25 x 10 = 5 x V ; V --> 0,2 y 9,8 ml H2O
0,25 X 10 = 2,5 x V ; V --> 0,1 Y 9,9 ml H2O
0,25 x 10 =1,25 x V ; V --> 0,050 Y 9,950 ml H2O
-Niveles de nitritos en salchicas:
-Niveles de nitritos en agua de bebida: 0,30 mg /L lo que quiere decir que esta dentro
de los niveles permitidos.
2-
1 kg ------ 3,65 mg
70 kg ------ x X=225,5 mg de NO-3

400 mg --- 1 kg
255,5 mg ---- x X=63,87 g/día.

3-
1ppm NO-2
IDA: 0,07 mg/kg
70 kg--- 2 L
IDA= NOAEL /100
NOAEL = 0,07 x 100= 7 mg /kg /día.

Exposición= 1ppm x 2L / 70 kg =0,0285

MOS =NOAEL /Ex. --> 7 mg /kg /0,0285 =245
si el MOS es > 100 no niveles tóxicos y si es < 100 niveles tóxicos , por lo tanto no son
niveles tóxicos perjudiciales.

4-
Un niño de 35 kg , se come 2,61 gramos /día
IDA: 3,65 mg/kg
Contenido medio de Nitratos 1390 mg/kg
- 3,65 mg ------ 1 kg
X ------ 35 kg X= 127 , 75 mg de acelgas que puede ingerir todos los días.

-127,75 mg ---- 100%

3,61 mg ---- X X=2,83% IDA.

5-
50 mg/kg ------- 250 g
3,65 mg ------ X X= 18,25

50 mg/kg ----- 3,65 mg/kg

100 ----- X X= 7,3 % IDA en 250 g

-ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN:

Artículo 6. Condiciones generales de alojamiento y cuidado de los animales:

1- Los cuidadores , suministradores y ususarios deberán cumplir los siguientes

requisitos en relación con el cuidado general y alojamiento de los animales.
A) Se les proporcionará el alojamiento , entorno, alimentos , agua y cuidados que sean
adecuados a si especie , condiciones fisiológicas y estado sanitarioo y que garanticen
su adecuado estado general.
B) Se reducurá en lo posible cualquier restriccción que impida o limite las posibilidades
de los animales de satisfacer sus necesidades fisiológicas y etológicas.
C) Se verificarán a diario las condiciones ambientales en l as que se críen , mantengan
o utilicen los animales.
D) Se dispondrá de medios que garanticen la eliminacion en el plazomás breve posible
de cualquier deficiencia que pueda provocar sufrimiento , dolor , angustia o daño
duradero evitables que se descubra .
E) Las normas de trabajo e instrucciones de uso de todos los elementos constarán por
escrito.
F) Se pondrá por escrito un plan de actuación en ccaso de emergencia o catástrofe , que
contemplará medidas en relación con los animales lojados , que podrá estar integrado
cn los otros planes del establecimiento y que reflejará la adecuada coordinación con el
resto de planes de emergencia del centro de trabajo.

2-Los establecimientos deben cumplir lo establecido en el anexo II , a más tardar en las

flechas indicadas en el mismo.
3-Los órganos competetentes podrán conceder excepciones a lo dispuesto en el
apartado 1 a) , y en el apartado 2, por razones cinetíficas , de bienestar o de sanidad de
los animales.

Artículo 7 .Métodos de eutanasia.

1 - La eutanasia de los animales se realizará:

a) Con menos dolor , sufrimiento y angustia.

b) Por una persona capacitada.
c) En un establecimiento de un criador , suministrador o usuario , salvo que se trate de
un estudio de campo o que sea aplicable lo previsto en el apartado 1 b) del anexo III

2- En relación los con los animaes a que refiere el anexo III se utilizará el método de
eutanasia adecuado tal como figura en dicho anexo.
3- El órgano competente podrá concede excepciones al requisito establecido en el
apartado 2:

a) Para permitir el uso de otros métoodos siempre que a partir de pruebas científicas se
considere que el método posee al menos , la misma ausencia de crueldad ; o bien
b) si se justifica científicamente que la finalidad del procedimiento no puede conseguirse
utilizando ninguno de los métodos de eutanasia contemplados en el anexo III.

4- Las letras b) y c) del apartado 1 y el apartado 2 nose aplicarán cuando sea necesario
dar muerte a un animal en situacion de emergencia por motivos de bienestar animal,
sanidad animal , sanidad pública , orden público , o medioambientales.

Ártículo 8. Puesta en común de órganos y tejidos.

La adminnistración General del Estado y los órganos competentes fomentarán , a través

del cómite regulado en el artículo 44 , el establecimiento , entre usuarios y demás
operadores de programas para compartir órganos y tejidos. Estos programas podrán
contemplar la creación de bases de datos compartidas y otras medidas de colaboración
y difución de información.

Árticulo 9 .Transporte de los animales.

1- El transporte de los animales se realizará con forme a la normativa vigente , en

materia de comercio , sanidad y bienestar animal.
2- Los contenedores de transporte garantizarán la cotención de los animales ,
permitiendoles movimmiento en función de sus necesidades , los vvehiculos dispondrán
de sistemas de anclaje para evitar movimientos bruscos .
3- Si en el marco de un proyecto es necesario proceder al traslado de un animal , éste
se acompañará de un documento de traslado emitido por el veterinario , cuyo periodo
de validez no podrá ser superir¡or al del documento sanitario de movimiento
correspondiente.

Artículo 10. Identificación de los animales.

Todos los animales pertenecen a especies con sistemas de identificación ya regulados
deberán estar identificados conforme la normativa vigente en esta materia.

Artículo 11. Identificación de los sistemas de confinamiento.

Los criadores de confinamiento de los animales deberán estar confinados de un sistema

que permite la identificación de los animales aue se alojan allí. A menos que no se
posible por las circunstancias de los animales.

Artículo 12. Registros de los animales

Los criadores , suministradores deberán registrar los datos que se fojan en el anexo VI.
Estos deberán conservarse durante cinco años y estar a disposición del órgano
competente , cuando éste lo necesite.

Artículo 13. Requisitos adicionales para perros , gatos y primates.

1- Los perros , gatos y primates deberán disponer de una marca identificativa , individual
y permannente , realizada de forma que se les cause el menos dolor posible.
2- Cuando un perro , gato o primate sea transladado desde un criador , suministrador o
usuario a otros antes de su destete y no sea posible marcado previo , el receptor de
unn animal conservará , hasta que se proceda al marcado, un registro en el que consten
al menos los datos de la madre.
3- El criador , que reciba un perro , gato o primate destetado que no esté marcado ,
deberá dotar al mismo , tan pronto como sea posible , de una marca identificativa ,
individual y permanente , realizada de forma que se le cause el menor dolor posible.
4- El criador , suministrardor o usuario justificará , en su caso y cuando lo solicite el
órgano competetnte , las razones por las que éstos animales no disponen de marca
identificativa,
5- Los criadores deben conservar , sobre cada perro , gato y primate , los datos
siguientes:
a) identidad
b) Lugar y fecha de nacimiento , cuando se conozcan
c) Si ha sido criado para utilizarlo en procedimientos.
d) En el caso de los primates , si son descendientes de primates criados en cautividad.
6- Cada perro , gato o primate tendrá una historia que acompañará al animal cuando
éste se mantenga a los efectos del presente real decreto. El historial se creará cuando
nazca el animal o ttan pronto como sea posible y contendrá toda la informaciónsobre
ciertos aspectos.
7- La información a que se refiere el presente artículo se conservará por lo menos
durante tres años la muerte o el realojamiento de animal y se pondrá a disposición del
órgano competente , previa solicitud del mismo.

INTRODUCCIÓN GENERAL DE LA PARTE B

-Caracterización de las sustancias de ensayo :

Debe conocerse la composición de la sustancia de ensayo , sus porpiedades físicas y

estabilidad.
Las propiedades fisicoquímicas de la sustancia de ensayo proporcionan datos
importantes para la selección de la vía de administracion.
Debe desarrollarse un método analítico para la determinación cualitativa y cuantitativa
de la sustancia de ensayo.
Debe incluirsela información a la identificación , pripiedades fisicoquímicas , pureza y
comportamiento de la sustancia estudiada.
-Cuidados de los animales :

En los estudios de toxicidad es fundamental controlar de forma escrita las condiciones

ambientales y aplicar técnicas adecuadas de los animales.

1) condiciones de alojamiento (cursiva)

Las condiciones ambientales de los locales destinados a los animales deben ser
adecuados para cada especid , la temperatura debe ser de 22 a 3 Cº ,con una humedad
relativa del 30 al 70 % , para los conejos la temperatura debe ser de 20 a 3 Cº con una
humedad relativa del 30 al 70 % .

Algunas técnicas experimentales son particularmente sensibles a los efectos de la

temperatura; en todas las investigaciones de efectos tóxicos deben controlarse la
temperatura y la humedad y deben consignarse en el informe final.

La iluminación debe ser artificial , con una alternancia de 12 horas de luz y 12 horas de
oscuridad , los datos deberan consignarse en el informe.

Los animales de alojarán individualmente o en una jaula grupos del mismo sexo, no
habra más de 5 animales en cada jaula.

En los informes es importante indicar el tipo de jaula indicada así como el número e
animales durante la exposición y durante el posterior a la exposición.

2) Condiciones de alimentación (cursiva)

La dieta debe cubrir las necesidades nutricionales de la especie , el valor nutritivo puede
verse alterado por las interacciónes entre sustancia y algún componente de la dieta.
Pueden darse dietas convencionales de laboratorio junto con un aporte ilimitado de
agua potable. Ningún componente de la dieta co influencia sobre la toxicidad debe estar
en cantidades que pueden interferir.

-Ensayos alternativos:

Contribuye a la elaboración y validación de técnicas utulizando menos animales y dando

los mismo resultados , y así provocar menos sufrimiento de los animales.
Tales métodos , deben tenerse en cuenta siempre para la caracterización de riesgos y la
correspondiente clasificación y etiquetado de los riesgos intrínsecos.

-Evolución e interpretación:

A la hora de evaluar los ensayos deben tener en cuenta las limitaciones de la

extrapolación directa al hombre de los resultados in vitro con animales , deben utilizarse
pruebas de la aparición de efectos adversos en personas , siempre que sea posible.

TOXICIDAD ORAL AGUDA. MÉTODO DE DOSIS FIJAS

Introducción:

Es un principio del método de estudio que se empleen dosis moderadamente tóxicas y

que se evite la administración de dosis letales. No es necesario administrar dosis de las
que se sepa que producen dolor y sufrimiento, los animales que muestren signos
acusados de dolor serán sacrificados y en la interpretación de los resultados serán
considerados de la misma manera que los que hayan muerto en el ensayo.

El laboratorio que realice los ensayos deberá tener en cuenta toda la información sobre
la sustancia estudiada antes. Tal información deberá incluir la identidad y la estructura
química de la sustancia , sus propiedades, resultados en otros ensayos in vitro o invivo ,
datos toxicológicos de otras sustancias estudiadas que esten relacionadas....Estos
datos son importantes para que los resultados sean seguros en la salud humana .

Definiciones:

Toxicidad oral aguda --> efectos nocivos que se manifiesten tras la administracióm oral
de una dosis única o dosis múltiples dadas dentro de un periodo de 24 h.

Muerte retardada --> significa que el animal no muere en el plazo de 48 h , sino que
muere más tarde durante el periodo de observación de 14 días.

Dosis --> cantidad de sustancia de ensayo administrada .

Toxicidad manifiesta --> término general que describe signos claros de toxicidad tras la
administración de una sustancia.

SAM --> Sistema Armonizado Mundial de clasificación y etiquetado mundial.

Muertte inmitente --> fase en la que se prové que el animal muera o entre en agonía
antes del siguiente momento de observación previsto.
DL50 (dosis letal mediana) --> dosis única de una sustancia capaz de provocar la
muerte del 50% de los animales .

Dosis límite --> dosis del límite máximo del ensayo (2000 o 5000 mg/kg)

Agonía --> situación en la que el animal se esta muriendo.

Muerte previsible -->presencia de signos clínicos que indican la muerte en un momento

conocido antes de terminar el tratamiento.

-Principio del método de ensayo:

Se administra gradualmente de a grupos de animalesde un solo sexo dosis fija de 5 , 50

, 300 y 2000 mg/kg . La dosis inicial se determina basándose en un estudio preliminar y
consiste en que se prevé que produzca ciertos signos de toxicidad sin causar efectos
graves de toxicidad ni mortalidad , pueden darse dosis más altas o más bajas según los
efectos que empiecen a tener . Estos procedimientos continuarán hasta que se llegue a
la dosis que porduce mortalidad , o dosis mínima que lo produce , o dosis máxima sin
efectos.

-Descripción del método :

Selección de la especie animal:

La especie preferente es la rata , aunque pueden utilizarse otras especies ,
normalmente hembras , se hace así porque hay poca diferencia entre los sexos , pero
las hembras son un poco más sensibles , sin embargo en las sustancias que indiquen
que los machos son más sensibles deberá utilizarse estos.

Hay que utilizar animales adultos jóvenes y sanos de una cepa de laboratorio corriente .
Las hembras dben ser multíparas y no grávidas . El animal , al inicio de la administración
debe tener entre 8 y 12 semanas de adad y su peso del 20% de los animales s los que
previamente se les ha suministrado la sustancia.

Alojamiento y alimentación:

Ha de estar a una temperatura de 22 Cº , la humedad debe ser del 30% y no superar el

70 % , la iluminación sera artificial en 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad .
Alimentación corriente con agua potable , estos pueden agruparse en jaulas según la
dosis , el numero no debe obstaculizar las observaciones de cada animal.

Preparación de los animales:

Se selecciona al azar los animales ,se marcan para su identificación y se matienen en

sus jaulas almenos 5 días antes de la administración de la sustancia . a fín de que se
adapten al ambiente.

Preparación de la dosis:

En general la sustancia estudiada deben administrarse en un volumen constante ,

variando la concentración , puede resultar más adecuado no diluir la sustancia, a una
concetración constante , en cualquiera de los casos no debbe superar el volumen de
dosis máxima . El volumen máximo que puede administrarse de una sola vez depende
del peso del animal , en cuanto a la formulación del preparado que se administre , se
recomienda el uso de una solución/suspensión/emulsión oleosa y luego posiblemente
por la solución en otros vehículos. Si se utilizan vehículos distintos del agua deben
conocerse sus características tóxicas , deben prepararse antes de la administración a
menos que se conozca su establidad.

-Procedimiento

Administración de las dosis

La sustancia estudiada se administra en una dosis única por limentación forzada

mediante sonda gástrica o célula de intubación, cuando no se pueda administrar dosis
única se podrá dividir esta en partes más pequeñas durante el periodo que no sobrepase
las 24 horas.

Los animales se mantendrán en ayuno antes de la administración de la dosis , tras el

preriodo de ayuno , los animales se pesarán antes de la administración de la sustancia
estudiada . Una vez administrada esta podrá continnuarse el ayuno durante unas 3 o 4
horas en las ratas y 1 o 2 horas en ratones. Cuando una dosis se administra en fracción
a lo largo de un periodo , podrá ser necesario proporcionar a los animales alimento y
agua en función de la duración del periodo.

-Estudio prelilminar
La finalidad del estudio preliminar es determinar la dosis inicial para el estudio principal.
La sustancia estudiada se admimnistra de manera secuencial. El estudio preliminar se
considera terminado cuando puede tomarse una decisión sobre la dosis para el estudio
principal.

La dosis inicial se determina por la dosis fija de 5 , 50 , 300 y 2000 mg/kg y consiste en
una dosis que se prevé que porduzca toxicidad manifiesta , basándose en datos
obtenidos in vivo e in vitro referentes a la misma sustancia química y a otras sustancias
estructuralmente relacionadas. A falta de esta información , la dosis inicial será de 300
mg/kg.

Se dejará transcurrir un plazo mínimo de 24 horas entre las administraciones a cada

animal, el periodo de observación debe ser de 14 días.

Puede considerarse el uso de otra dosis fija superior a 5000 mg/kg siempre legalmente ,
por el bienestar animal se desaconseja el ensayo de sustancias cuyas dosis son 2000 y
5000 mg/kg con animales , el ensayo solo debe planearse solo cuando sea muy
probable que sus resultados sirvan para la protección de la salud humana o animal o del
medio ambiente.

En los casos en loa que se ensaye con una dosis fija mínima (5 mg/kg) en el estudio
preliminar y que el animal muera , el procedimiento normal es poner fin al estudio y
asignarla sustancia a la categoría 1 del SAM. Si se quiere confirmar la clasificación ,
puede seguir un procedimiento opcional complementario que se indica a continuación
1- Se administra a otro animal una dosis de 5 mg/kg , si este muere queda confirmada
la categoría 1 del SAM y se pone fín al estudio inmediatamente , si el segundo animal
sobrevive se administra una dosis de 5 mg/kg a otros animales. El intervalo entre la
adminstración de la dosis a cada animal debe ser suficiente para que quede claro que el
animal anterior tiene probabilidades de sobrevivir, si se produce una nueva muerte se
pondrá fin a la administración de la dosis y no se dará a ningún otro animal. Dado que el
hecho de que se produzca una segunda muerte corresponde al resultado A , se sefurá
la norma de clasificación del anexo 2 a la dosis fija 5 mg/kg .

-Estudio principal :

Número de animales y dosis

Deberá optarse por una de las tres actuaciones siguientes : terminar el ensayo y asignar
a la sustancia la categoría del peligro adecuada, ensayar a una dosis fija superior o
ensayar a una dosis fija inferior. Sin embargo para proteger a los animales nunca se le
administratá a alguna dosis que ha provocado anteriormente muerte en estado
preliminar . Si se ha podido clasificar la sustancia ya no es necesario realizar mas
ensayos.

Para cada dosis estudiada se necesitan cinco animales del mismo sexo , uno de ellos
de estudio preliminar al que se haya administrado la sustancia a nivel de dosis
seleccionado más otros cuatro.

El intervalo de tiempo entre la administración de dosis a cada nivel se determina según

la aparición , duración y gravedad de los signos tóxicos. El tratamiennto no se realizará
hasta que haya seguridad sobre la supervivencia de los animales previamente tratados
., se recomienda que pasen 3 o 4 días para administrar cualquier nivel de dosis distinta
para así poder observar la toxicidad retardada .

- Ensayo límite

El ensayo límite se utiliza cuando el experimentador tiene información de que la

sustancia es pobable que no sea tóxica , solo lo es por encima de las dosis límite
reglamentaria. Pueden obtenerse información acerca de la toxicidad por los
conocimientos sobre los compuestos , mezclas o productos ensayados semejantes ,
teniendo en cuenta las sustancias que son tóxicas y en los porcentajes que esten.

Utilizando el procedimiento normal , una dosis inicial en el estudio preliminar de 2000

mg/kg seguida por la adminnistración de este niel de dosis a cuatro animales sirve de
ensayo límitte para las presentes directrices.

-Observaciones

Tras la administración de la dosis , se observan los animales una vez durante los
primeros 30 minutos y periodicamente durante las primeras 24 horas , y luego durante
las 4 horas siguientes y a continuación diariamente durante 14 días excepto cuando
tengan que sacrificarse por motivos de sufrimiento del aimal , la duración debe regirse
según los efectos tóxicos . Son importantes los momentos en los que aparezcan y
desaparezcan los efectos tóxicos , principalmente si hay una tendencia a una aparición
retardada de los signos tóxicos.
Será necesario proceder a observaciones adicionales si los animales siguen
presentando signos de toxicidad. Deben incluirse los cambios de piel y pelado , ojos y
membranas mucosas , y también el sistema respiratorio , circulatorio y nervioso , así
como la actividad locomotriz y las pautas de comportamiento. Debe prestarse especial
atención a temblores , convulsiones ,salivación , diarrea , letargo , sueño y coma .

Peso corporal
Cada animal se pesará antes y después de la administración de la dosis , una vez por
semana , al final se calculará la diferencia de peso y los animales sobrevivientes se
sacrificarán de forma compasiva.

Patología

Todos los animales sometidos a estudio , incluidos los que han sobrevivido ,los que han
muerto durante su realización y los que se han eliminado del estudio , se someterán a
necropsia macroscópica. También podrá considerarse también la realización del examen
microscópico de los órganos que presentan huellas de patología macroscópica en los
animales que sobreviven un mínimo de 24 horas después de la administración de la
dosis inicial , ya que este examen puede proporcionar información útil.

Resultados:

Los resultados de cada animal deben darse por separado. Se reunnirán todos los
resultados de cada ensayo , el número de animales , el número de animales que
presentan signos de toxicidad , números de animales muertos durante el ensayo o
sacrificado por razones compasivas , el momento de la muerte , la descripción y la
evolución temporal de los efectos tóxicos y la reversibilidad y los resultados de la
necropsia.

Método clásico:

Yn = YI x Rn-1 (primera dosis alta que no era mortal)

Método de REED-MUENCH:

50 mg/kg -----> 50 x 21 = 50
50 x 22 = 100
50 x 23 = 200
50 x 24 = 400

Dosis mg/kg valores reales valores acumulativos total (m+v) % letalidad

50 0 10 0 9+10= 19 0+19 =19 0
100 2 8 0+2=2 1+8 = 9 2+9 = 11 18,18
200 1 1 9+2=11 0+1 = 1 11+1= 12 91,66
400 10 0 11+10= 21 0 21+0= 21 100

-Distancia proporcional contínuos al 50%

50-18,8 / 91,66-18,8 = 31,82 /73,48 =0,4330

-Incremento de dosis contínuas al 50%

200/100 = 2 log 2= 0,3010
0,433 x 0,3010 = 0,1303
log 100 = 2,0000
2,000 + 0,1303 = 3,1303 Antilog 2,1303 =134,98 mg/ kg DOSIS LETAL50

Error estandar:

Dosis en P3,5=190 mg/kg

Dosis en P6 ,5= 88 mg/kg
ES =190 -88 =102 mg/kg
Por lo tanto el error estandard será
ES = 190-88 / raíz de (2 x20) = 110 / raíz de 40 =16,14

Dosis P3,5 = 240 mg/kg

Dosis P6,5 = 70 mg/kg N = 20

(Gráfica grande)

REGLAMENTACIÓN DE SUSTANCIAS QUÍMICAS QUE PRESENTAN

PELIGROSIDAD . NUEVO SISTEMA DE CLASIFICACIÓN Y ETIQUETADO.

Introducción:

La ley de prevención en su Artículo 18 obliga a adoptar las medidad adecuadass para

que los trabajadores reciban toda la información necesaria sobre los riesgos para la
seguridad y salud que su actividad impica. Además en el Artículo 41 , capítulo 6 indica la
importancia de envasar y etiquetar las distintas sustancias químicas.

Recpecto a la información de la peligrosidad del producto esta reflejada en su etiqueta ,

y se amplia mediante la ficha de datos de seguridad (FDS) , su contenido esta regulado
por la legislación sobre comercialización de productos químicos peligrosos que obligan a
que todo producto químico este debidamente etiquetado tanto si destino al público
general como al usuario profesional.

La etiqueta es , en general , la primera información que recibe el usuario y es la que

permite identificar el producto en el momento de su utilización . Todo recipiente que
contenga un producto químico peligroso debe llevar una etiqueta bien viable en su
envase .

Ejercício 1 :

H 319
H 302 100 /ATEMEZCLA = 28 / 1892 ; ATEMEZCLA = 6,757 mg/ kg
H 315 Como esta en el 28% , se clasifica en la categoría 2 y tendrá un
H319 que indica que causa irritación ocular grave.
H 412

Ejercicio 2 :

DEET ---> H319

100 / ATEMEZCLA = 38 /1892; ATEMEZCLA =4978,9 mg/kg
Pertenece a la categoría 2 H319

ETANOL --> H225

100 / ATEMEZCLA = 38 / 1892 + 50 / 7060 ; ATEMEZCLA = 3707 mg/kg
Categoría 2 inflamable , de peligro físico. No es clasificable como toxicidad aguda oral.

Ejercicio 3 :

Hipoclorito de sodio --> No tiene una categoría de peligrosidad aguda.

H 314 --> pH igual o menor a 2 , irritación o corrosión cutánea , categoría 1 B.
H 400 --> Peligro para medio ambiente acuático.

Ejercicio 4 :

Cloruro de didecildimetilamonio --> categoría 2

H 302 --> Toxicidad aguda , categoría 4 , es nocivo en caso de digestión .
H 314 --> Irritación o corrosión cutánea

100/ ATEMEZCLA = 4/ 238 ; ATEMEZCLA =5950 mg/kg

PRACTICA 8

1) Se han producido múltiples casos de intoxicación por Ocratoxina A en España, ¿Cuáles son los
hongos que la producen, su efecto tóxico, posibles vías de intoxicación y tratamiento? Se
aconseja usar HSDB, INCHEM.
La especie de hongos que la produce es Aspergillus ochraceus, su efecto tóxico es
carcinogénesis nefropatía y tumores en el sistema urinario, las vías de intoxicación son por
inhalación de las micotoxinas, por infección o por vía oral.
No hay tratamiento conocido, no hay antídoto que se haya conocido todavía.

2) En una industria productora de materiales plásticos para el almacenamiento de alimentos se

produjo el derrame de metacrilato de metilo alcanzándose concentraciones de 250 mg/m3,
¿Cual serán las medidas de seguridad a tomar?, ¿Cual es el VLA-ED? ¿Según el VLA-ED, los
trabajadores expuestos sufrirán manifestaciones toxicas? Fichas de seguridad química.

-Evitar las llamas, NO producir chispas y NO fumar.

- Sistema cerrado, ventilación, equipo eléctrico y de alumbrado a prueba de explosión. NO
utilizar aire comprimido para llenar, vaciar o manipular.
- ¡EVITAR TODO CONTACTO!
- Ventilación, extracción localizada o protección respiratoria
- Guantes protectores. Traje de protección.
- Gafas ajustadas de seguridad, o protección ocular combinada con la protección respiratoria
- No comer, ni beber, ni fumar durante el trabajo.
-VLA-ED: 50 ppm como TWA; 100 ppm

3) ¿Cómo están clasificadas por la Agencia Internacional de Investigación del Cáncer (IARC )
las siguientes sustancias que pueden encontrarse en los alimentos?:
Cadmio-( grupo 1, Aflatoxina-(grupo 1, Nitratos y Nitritos-(2, Ciclamato(3

Se recomienda consultar la página IARC

4) De las anteriores sustancias, ¿cuáles han estado implicadas en casos de notificaciones

durante el año 2013 en el Sistema Coordinado de Intercambio Rápido de Información
(SCIRI), según el informe publicado en la Agencia Española de Seguridad Alimentaria
(AESAN)?
Cadmio (calamares
Alfatoxinas(higos secos , condimentos , alimento infantil listo para consumo,

Se recomienda utilizar la página AESAN.

5) En marzo del año 2014 la Comisión ha publicado Reglamento de Ejecución (UE) nº

322/2014 por el que se imponen condiciones especiales a la importación de piensos y
alimentos originarios o procedentes de Japón a raíz del accidente en la central nuclear de
Fukushima. ¿Cuáles son las condiciones especiales a la importación?
Cada envio de producto con excepción del clasificado en los códigos nc0902 , 210120 y
2209010 , originarios de prefecturas distinats de Fukushima , ir acompañada de una
declaración redactada y firmada con el arreglo al articulo 6.

Se recomienda utilizar la página AESAN

6) Se detecto un alto numero de malformaciones genéticas en la comunidad de Madrid, tras

un estudio epidemiológico se determino que todas las madres afectadas habían consumido
una marca especifica de natillas, que fueron analizadas en las cuales se observo que en su
composición había cadmio y ciclamato usado como edulcorante. ¿Cuál de estos dos
sustancias pudo ocasionar estas malformaciones genéticas?

Cadmio porque es mutágeno y es teratogénico provocando malformaciones.

7) ¿Qué niveles de Cadmio no deben ser superados en alimentos de la pesca?

¿Cuál es la Ingesta semanal Tolerable (TWI)?
-0,050 Mg/kg
-7 μg/kg
Se recomienda UE. Contaminantes

8) Indicar los usos del Esteviosido (steviol), la IDA fijada para el mismo, así como los criterios
en los que se han basado para establecer la misma?. Hacer lo mismo para el eugenol.

-IDA: 1157 MG HOMBRES POR KG ,1331 MG MUEJERES POR KG

-IDA ESTA ENTRE 0-2 , SE BASA EN UN FACTOR DE SEGURIDAD , SE HA FIJADO GRACIAS AL
NOAEL.

9)¿Cuales son los LMR del plaguicida clorpirifos en la harina de trigo según UE? y ¿según el
Codex?

-0,05 mg/kg
-0,1 mg/kg
En la unión europea es mas rescrictiva cn los residuos muy exígete.
Consultar Global y Codex

10) Cuál es el valor MRL para Arsénico según ATSDR

Consultar en Evaluación de riesgos MRL LIST

MRL: 0.005 MG/KG/DIA