Extracción de Metil Esteres ácidos grasos (MEAG) a partir de transesterificación

directa (TD)

-Protocolo de extracción de Ácidos Grasos.

1. En balanza analítica pesar 0,05 g de liofilizado celular y depositarlo en tubo de

centrifugación (capacidad 50 mL).
2. Luego incorpore los siguientes reactivos según sea la proporción a usar (por cada
0,05 g de liofilizado). Agregar con pipeta de aforo o micro pipeta.
Reactivo 1
a. 2.5 mL de Metanol CH3OH
b. 0,25 mL de Ácido Clorhídrico HCL
c. 0,25 mL de Cloroformo CHCL3
*Proporción 10:1:1
Una vez realizada la solución se incorporan 3 mL a cada muestra.
3. Agitar vigorosamente el tubo con la solución en Vortex por 15 segundos.
4. Colocar el tubo o los tubos según corresponda la cantidad de muestras a extraer, en
el baño termorregulador a una temperatura de 90°C por un periodo de 2 horas o 120
minutos.
*Observar los tubos cada 15 minutos para corroborar que no haya escape de R1.

5. Una vez transcurrido el tiempo de la muestra en el baño, sacar y dejar enfriar (15
minutos app).
6. Cuando haya bajado la temperatura, incorpore 1 mL de agua (desionizada o grado
reactivo) y agite en Vortex por 15 segundos.
7. El volumen total de la muestra en este paso será de 4 mL aproximadamente.
8. En este paso, cuando ya ha transcurrido el proceso de esterificación, se procede a
la extracción por medio de solventes orgánicos y se preparará un reactivo
(Hexano/Cloroformo).
Reactivo 2
a. 4,8 mL de Hexano
b. 1,2 mL de Cloroformo
*Proporción 4:1
9. Incorporar a la muestra 2 mL del Reactivo 2, agitar en Vortex por 15 segundos y
centrifugar a 4.500 rpm durante 5 minutos.
10. Retirar la muestra de la centrifuga, fíjese que se observa un sobrenadante,
extraiga con micropipeta solo el sobrenadante de la superficie e incorpórelo en otro
tubo de centrifugación.
11. Luego repita el paso n° 9 al menos 3 veces.
12. Terminando el proceso guarde el sobrenadante extraído del último proceso de
centrifugación, ya que ahora se realizaran mediciones en equipo de Cromatografía
gaseosa.