Caracterización de Materiales y Defectos

Técnicas de Separación Cromatográfica

TÉCNICAS DE SEPARACIÓN. CROMATOGRAFÍA

1.- Introducción

• Cromatografía y métodos de separación clásicos. Separación de

componentes de una muestra. No son técnicas de caracterización
propiamente dicha

• Las propiedades de los materiales dependen de los componentes y de la

proporción existente entre ellos

• No dan información de la naturaleza de los componentes, necesitan otros

métodos de análisis.

1.1.- Cromatografía y ciencia de materiales

• Separación de compuestos relacionados con la síntesis de materiales

• Evaluación de la actividad de materiales catalizadores y soportes sólidos
en síntesis orgánica.
• Desarrollo de nuevos materiales empleados en cromatografía
• Seguimiento de una síntesis

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2.- Lugar que ocupa la cromatografía en la caracterización de materiales

Muestra

NO SI
¿Hay que solubilizarla?

NO
¿Es soluble? Digestión
NO ¿Descompone NO ¿Forma NO Otros
¿Es volátil?
térmicamente? plasma? métodos SI
SI
SI SI SI
SI
GAS DISOLUCIÓN

¿Hay que separar SI SI ¿Hay que separar

componentes?
Cromatografía componentes?

NO NO

Técnicas y Métodos de análisis

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3.- La cromatografía. Conceptos y definiciones

• Cromatografía: método físico de separación

• Proceso cromatográfico
• Fase estacionaria (sólido, gel o líquido). Lecho cromatográfico o sorbente
•Fase ligada
•Fase inmovilizada
• Fase móvil (gas portador, eluyente)
•Cromatografía líquida
•Cormatografía de gases
•Cromatografía con fluido supercrítico
• Eluir
• Efluente
• Muestra
• Componentes
• Zona o banda
• Cromatograma
• Cromatógrafo

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3.1.- Mecanismos de separación

a) Separación por adsorción (cromatografía de adsorción)

Diferente afinidad de los componentes de la muestra sobre la superficie

de un sólido activo (componentes con polaridad baja o media)

b) Separación por reparto (cromatografía de reparto)

Diferente solublidad en fases estacionaria y móvil (Componentes con

polaridad media o alta)

[A] Fase móvil

Coeficiente de Reparto = K d =
[A] Fase Estacionaria

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3.1.- Mecanismos de separación

c) Separación por tamaño molecular (Cromatografía de permeación de gel,

de tamiz molecular o de exclusión por tamaños).
Parámetros de columna
- Intervalo de trabajo: intervalo de M que pueden ser separados
- Límite de exclusión: M mínimo a partir del cual las macromoléculas no
experimentan retención.
Moléculas pequeñas

Moléculas grandes Las moléculas pequeñas penetran en los poros

de las partículas de gel, por lo que necesitan
más tiempo para salir al final de la columna. Las
moléculas grandes, en cambio, al no penetrar
Flujo del disolvente

Partícula polimérica (gel)

con poros en las partículas de gel se mueven con el
disolvente a una velocidad mayor de elución y
Pared de columna salen antes de la columna. Por tanto, a mayor
cromatográfica
masa molecular menor tiempo de elución. Este
método permite separar por tamaños
moleculares siendo posible obtener incluso
Disolvente
distribuciones de masas moleculares a distintos
tiempos de elución.

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3.1.- Mecanismos de separación

d) Separación por Intercambio iónico

La separación se basa principalmente en la diferente afinidad para el
intercambio de iones de los componentes de la muestra.
+ + + - Especies positivas
- +
- + + Especies negativas
- Las especies cargadas negativamente se unen a la
+

+ - matriz sólida cargada positivamente y son

Partículas sólidas (matriz)
retenidas, mientras que las especies positivas son
Flujo del disolvente

cargada positivamente
- - rechazadas. De esta manera en función de la
+ carga las especies se eluyen a distintos tiempos
+ + - Pared de columna dando lugar a la correspondiente separación.
- - - cromatográfica

- + + La elución de las especies retenidas se consigue

+

cambiando el pH del disolvente hasta igualarlo a su

- Disolvente punto isoeléctrico o hasta invertir su carga neta.
- - +
+
+ -
+ -
-
- + +

“Una separación puede estar basada en la conjunción de diversos

mecanismos”
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3.2.- Métodos de análisis cromatográfico

a) Análisis por desarrollo (cromatografía en papel o capa fina)

b) Análisis por elución (cromatografía de gases, cromatografía líquida)

c) Análisis frontal

d) Análisis por desplazamiento

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ANÁLISIS POR DESARROLLO

Cromatografía en columna
Cromatografía plana

Fase móvil
Fase Móvil

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Análisis por elución

Muestra Fase Móvil

Cromatograma
Sorbente

Volumen de fase móvil

Placa Porosa

Efluente
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Análisis frontal
Fase Móvil
Con la muestra A+B+C

Cromatograma

A+B+C
A
A+B +
A A B
+ +
A B C

Volumen de fase móvil

Placa Porosa

Efluente

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3.3.- Clasificación de acuerdo con la forma del lecho cromatográfico

a) Cromatografía en columna

- Columna empaquetada
- Columna tubular abierta

b) Cromatografía plana (o de lecho abierto)

- Cromatografía en papel
- Cromatografía en capa fina (TLC)

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3.4.- Clasificación de acuerdo con el estado físico de la fase móvil

a) Técnicas cromatográficas
- GLC
- GSC
- LLC
- LSC

b) Cromatografía de gases (siempre en columna)

c) Cromatografía Líquida (en columna o sobre plano)

- Cromatografía Líquida de Alta Eficacia o de Alta Presión, HPLC

d) Cromatografía con fluido supercrítico

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3.5.- Técnicas especiales

a) Cromatografía con fase invertida

b) Cromatografía con fase normal

c) Análisis isocrático (composición F. móvil constante)

d) Elución con gradiente (Composición F. móvil cambia de forma

continua)

e) Elución en etapas o escalonada (Composición F. móvil cambia de

forma escalonada)

f) Cromatografía bidimensional (etapas adicionales de separación)

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3.6.- Parámetros básicos en cromatografía

a) Retención = capacidad real de la fase estacionaria para retardar la

salida de un componente.

- si caudal constante ⇒ v ∝ t
- tM = tiempo muerto
- tR = tiempo de retención
- t’R = tiempo de retención corregido = tR - tM
Figura tomada de:
-ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA,
T. y SERRATOSA, J.M.: "Introducción a la
ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

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3.6.- Parámetros básicos en cromatografía

b) Factor de capacidad (retención de un compuesto con independencia del

caudal)
Figura tomada de:

t'R t R − t M
-ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA,
T. y SERRATOSA, J.M.: "Introducción a la

K'= =
ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

tM tM
c) Dispersión de bandas

Parámetros característicos
de un pico gaussiano

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3.6.- Parámetros básicos en cromatografía Figura tomada de:

-ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA,
T. y SERRATOSA, J.M.: "Introducción a la
ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.
d) Eficacia

- Número de platos teóricos

2
 tR 
n= 
σ 
2
 tR 
n = 16  
 Wb 
2
 tR 
n = 5.545  
W h  Debe evitarse el ensanchamiento de
bandas. Dependen de características de
-Altura equivalente de un plato teórico = L/n columna, velocidad de fase móvil, etc.
(Para comparar columnas de diferente
longitud)
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3.6.- Parámetros básicos en cromatografía

e) Separación y resolución
t 'R 2
- Retención relativa α= Sistema cromatográfico
t 'R1
2∆t
- Resolución Rs = Eficacia de columna
Wb1 + Wb 2

Figura tomada de:

-ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA,
T. y SERRATOSA, J.M.: "Introducción a la
ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

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4.- Técnicas cromatográficas no instrumentales

4.1.- Cromatografía en columna

El gradiente de presión necesario para el

desplazamiento de la fase móvil a través
de la fase estacionaria se origina por
gravedad.

Figura tomada de:

-ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA,
T. y SERRATOSA, J.M.: "Introducción a la
ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

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4.2.- Cromatografía en capa fina

La elución se consigue por el movimiento capilar ascendente de la fase móvil

a) aplicaciones analíticas
y y
Rf = Rx =
x x
Aplicación Aplicación

y
y x x

Sustancia patrón

Frente del disolvente Frente del disolvente

b) aplicaciones preparativas

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5.- Métodos instrumentales en cromatografía

5.1.- Cromatografía de gases (Gas-Líquido)

Distribución de un componente entre una fase móvil

gaseosa y una líquida inmovilizada sobre la superficie
de un sólido inerte.

Componentes básicos

- Gas portador según detector (He, Ar, N2, CO2, H2)

- Sistema de inyección de muestra
- Columnas

Control de caudal

Figura tomada de:

-ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA,
T. y SERRATOSA, J.M.: "Introducción a la
ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.
Medidor de caudal
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5.- Técnicas instrumentales en cromatografía

5.1.- Cromatografía de gases (Gas-Líquido)

Mejora de un cromatograma por

programación de temperatura en
columna

Figura tomada de:

-ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA,
T. y SERRATOSA, J.M.: "Introducción a la
ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

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5.1.- Cromatografía de gases (Gas-Líquido)

Detectores

CARACTERÍSTICAS DEL DETECTOR IDEAL

•Adecuada sensibilidad
•Buena estabilidad y reproducibilidad
•Una respuesta lineal para los componentes que se extienda a
varios órdenes de magnitud
•Intervalo térmico de trabajo (25 – 400)ºC
•Un tiempo de respuesta corto que lo haga independiente del
caudal
•Alta fiabilidad y manejo sencillo
•Respuesta semejante para todos los componentes
•No destructivo

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5.1.- Cromatografía de gases (Gas-

Líquido)

Detectores
DETECTOR DE IONIZACIÓN DE LLAMA
+
- Componente + H2/aire + encendido
eléctrico ⇒ iones + e-
Diferencia de potencial entre extremo de
-
quemador y electrodo colector (se mide la
corriente que pasa a su través)
Efluente de
- Iones producidos ∝ nº átomos de carbono la columna Aire
⇒ sensible a masa

- C-OH; -C=O; -X; -NH2 ⇒ generan H2

pocos iones

- Insensible a: H2O; CO2; SO2 y NOx

-Detector de los más utilizados para el

análisis de compuestos orgánicos

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5.1.- Cromatografía de gases (Gas-Líquido)

Detectores

DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD TÉRMICA

- Cambios de conductividad térmica del gas portador por la presencia de analito.

- Sensor = hilo de Pt, Au ó W calentado (a potencia eléctrica cte) cuya T depende
del gas circundante (su R cambia)

- Características:

* Simple
* Amplio rango dinámico lineal (~ 105)
* Respuesta universal (especies orgánicas e
inorgánicas)
* Carácter no destructivo
* Sensibilidad relativamente baja (~ 10-8 g de soluto/ml
de gas portador)

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5.1.- Cromatografía de gases (Gas-Líquido)

Detectores

DETECTOR TERMOIÓNICO

- Detector selectivo de compuestos orgánicos con P y N.

- Efluente + H2 + llama ⇒ gas caliente + bola de silicato de rubidio caliente

(a 180V respecto colector)

Iones ⇐ Plasma (600 – 800ºC)

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5.1.- Cromatografía de gases (Gas-Líquido)

Detectores

DETECTOR DE CAPTURA DE ELECTRONES

- Detector selectivo de halógenos, peróxidos, quinonas y grupos nitro.

- Efluente + emisor β ⇒ iones (gas portador) + ráfaga de electrones

Corriente constante que varía en presencia de moléculas capturadoras de e-

DETECTOR DE EMISIÓN ATÓMICA

plasma de He que atomiza y excita el efluente ⇒ espectros de

emisión

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5.1.- Cromatografía de gases (Gas-Líquido)

Métodos acoplados

- GC/Espectrometría de masas

- GC/espectroscopía IR

5.2.- Cromatografía de gases (Gas-Sólido)

H2S; CS2; NOx; CO; CO2; gases nobles

(no se retienen en columnas Gas/Líquido)

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5.- Técnicas instrumentales en cromatografía

5.3.- Cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC)

- Alta sensibilidad

- Adaptación a determinaciones cuantitativas

- Separación de especies no volátiles

- Separación de especies termolábiles

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5.3.- Cromatografía de líquidos de alta resolución

Instrumentación para la cromatografía de líquidos

- Recipientes para la fase móvil y sistemas para el tratamiento de disolventes

(eliminación de O2 y N2)

- Filtración de disolventes

- Sistemas de bombeo

- Sistemas de inyección de muestra

- Columnas

- Precolumnas

-Termostatos

- Detectores: i) responden a propiedad de fase móvil; ii) responden a

propiedad del soluto.

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5.3.- Cromatografía de líquidos de alta resolución

Instrumentación para la cromatografía de líquidos

Figura tomada de:

-ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA,
T. y SERRATOSA, J.M.: "Introducción a la
ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

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6.- Bibliografía

• D.A. Skoog, J.J. Leary, “Análisis Instrumental”, McGraw-Hill, Madrid (1996)

• H.H. Willard, L.L. Merritt Jr.,J.A. Dean, F.A. Settle Jr., “Métodos Instrumentales de análisis”,
Grupo Editorial Iberoamericana S.A. de C.V., México (1991).
• TECHNIQUES in liquid chromatography Simpson, Colin F. John Wiley & Sons (1984).
• Liquid chromatography column theory Scott, Raymond P.W. John Wiley & Sons (1992).
• Chromatography of polymers : characterization by SEC and FFF American Chemical Society
(1993).
• Handbook of size exclusion chromatography Marcel Dekker (1995).
• Cromatografía de exclusión por tamaños [Vídeo] Pérez Dorado, Angel, CEMAV, Universidad
Nacional de Educación a Distancia (1997).
• Manual de cromatografía Loro Ferrer, Juan Francisco Gobierno de Canarias, Dirección
General de Universidades e Investigación (2001).

7.- Direcciones URL útiles

• http://www.uib.es/depart/dqu/dquo/pau/Cromatograf%92a/chrom10/chrom/GC/concept/
main.htm
• http://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/Gas.htm

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