Manual de Procedimientos Determi Susceptibilidad Patogenos Impacto Hospitalario PDF

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA LA
DETERMINACiÓN DE SUSCEPTIBILIDAD
ANTIBIÓTICA EN PATOGENOS DE IMPORTANCIA
HOSPITALARIA.
CODIGO: MNL-R01.5030.012
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INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

REDES EN SALUD PÚBLICA
Autores: Ángela Muñoz Delgado. Profesional M.Sc. Grupo de Microbiología.

Carolina Duarte Valderrama. Profesional M.Sc. Grupo de Microbiología
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Manual de procedimientos para la
determinación de susceptibilidad
Antibiótica en patógenos de impacto
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CONTENIDO
1. INTRODUCCiÓN 3
2. OBJETIVOS 3
3. ALCANCE DEL MANUAL 4
4. RESPONSABILIDAD 4
5. DEFINICIONES Y ABREViATURAS 4
6. CONDICIONES GENERALES 7
7. FUNDAMENTO 7
8. BUENAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO 7
9. MATERIALES Y REACTIVOS 7
10. EQUiPOS 7
11. DESCRIPCION 8
11.1 MICROORGANISMOS A CONSIDERAR 8
11.2 DETERMINACiÓN DE LA SUSCEPTIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS 8
11. 2. 1 Enterobacterias aisladas de infección hospitalaria (diferentes de Salmonella y Shigella) 12
11.2.2 Pseudomonas aeruginosa 18
11.2.3 Acinetobacter spp 19
11.2.4 Burkholderia cepacia 20
11.2.5 Stenotrophomonas maltophilia 21
11.2.6 Staphylococcus spp 21
11.2.7 Enterococcus spp 25
12. DOCUMENTOS DE REFERENCiA 29
13. CONTROL DE REVISIONES 29
14. ANEXOS 29
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1. INTRODUCCiÓN
Desde la década de los 90, la Resistencia Bacteriana (RB) ha sido considerada por la Organización
Mundial de la Salud (OMS) como un problema global que requiere de atención por parte de los sistemas
de salud pública y que requiere del desarrollo de actividades que permitan su contención. Las acciones
recomendadas por la OMS a nivel internacional, incluyen la vigilancia y control de la RB y de las
infecciones intrahospitalarias, especialmente por gérmenes multirresistentes (1).
La emergencia de la resistencia a los antimicrobianos es un fenómeno natural que resulta de procesos

evolutivos dados por la interacción de factores biológicos y epidemiológicos (2). Entre los factores
biológicos se encuentran: la resistencia innata, mutaciones espontáneas, reservorio de genes de
resistencia y la capacidad de los microorganismos de compartir mecanismos de resistencia a través de
información genética (3).
En los últimos años se ha observado en muchos microorganismos, considerados como totalmente

sensibles a los antibióticos, una marcada y amplia tendencia a la resistencia, de igual forma, se ha
reportado el rápido desarrollo de resistencia a nuevos antibióticos casi tan pronto como estos aparecen
en el mercado (4).
Bajo este contexto, la realización, comprensión y buena lectura de las técnicas de susceptibilidad
antibimicrobiana (antibiograma) cobra vital importancia, tanto por el interés del paciente infectado como
en una perspectiva de responsabilidad pública. El antibiograma debe mirarse como la unión de múltiples
conceptos que se integran en una sugerencia acerca de la actividad de un antimicrobiano sobre un
determinado patógeno, presente en un determinado sitio anatómico. Teniendo una adecuada
comprensión de ésta técnica, se podrán obtener conocimientos, tanto sobre los mecanismos de
resistencia bacteriana involucrados, así como del comportamiento biológico de algunos agentes
antimicrobianos (5).
En este manual se presentan las técnicas y procedimientos necesarios para llevar a cabo un
antibiograma adecuado para los diferentes patógenos más comúnmente involucrados en infecciones
hospitalarias, así como la manera de realizar una correcta interpretación para definir la susceptibilidad
antibiótica de cada microorganismo y los posibles mecanismos de resistencia implicados.
2. OBJETIVOS
A corto plazo:
• Estandarizar los procedimientos de laboratorio usados en la determinación de la susceptibilidad

antimicrobiana que garanticen la calidad de los resultados.
• Capacitar en la detección de mecanismos inusuales de resistencia bacteriana en patógenos
Gram negativos de interés hospitalario.
• Capacitar para la detección y reporte de aparición temprana de nuevos mecanismos de
resistencia o el aumento significativo de los ya existentes.
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A mediano plazo:
• Establecer un Sistema Nacional de Redes de Laboratorio para la vigilancia de la resistencia a los

antimicrobianos y la evaluación externa de la calidad utilizando metodologías estandarizadas por
el laboratorio.
• Fortalecer los laboratorios de salud pública departamentales en la determinación de perfiles de
susceptibilidad antibiótica.
A largo plazo:
• Implementar un sistema de vigilancia nacional de la resistencia a los antimicrobianos oportuno,

sostenible y de calidad en los laboratorios de bacteriología a nivel nacional y establecer un flujo
de información y capacitación multidireccional que garantice el diagnóstico de la resistencia
antimicrobiana en Colombia.
3. ALCANCE DEL MANUAL
Este documento aplica para la determinación de susceptibilidad antimicrobiana y la detección de

posibles mecanismos de resistencia bacteriana en patógenos de importancia a nivel hospitalario.
4. RESPONSABILIDAD
• Laboratorios clínicos de IPS la red pública y privada del país: Serán los encargados de la
detección temprana de los aislamientos, su informe al clínico y el envío de los aislamientos para
su confirmación, así mismo deberán participar del programa de control de calidad en la detección
de susceptibilidad antimicrobiana del INS.
• Laboratorios Municipales, Distritales y Departamentales de Salud Pública: Estarán a cargo de la
recepción de aislamientos para confirmación, aquellos que tengan capacidad técnica deberán
hacer la confirmación fenotípica de los aislamientos y en caso contrario deberán remitir los
aislamientos al Grupo de Microbiología del INS en tanto se fortalecen, al igual que las IPS, los
LSP deberán ingresar al programa de control de calidad en determinación de susceptibilidad
antimicrobiana delINS.
• Laboratorios de referencia: Deberán adoptar estas recqmendaciones descritas en este manual
para el caso de confirmaciones fenotípicas de aislamientos bacterianos involucrados en
resistencia bacteriana.
• Grupo de Microbiología RNL. Instituto Nacional de Salud: Será el ente encargado de la vigilancia
de la resistencia bacteriana por medio de la recepción de todos los aislamientos enviados, a
través de LSP para realizar la confirmación y emitir un resultado.
5. DEFINICIONES Y ABREVIATURAS
• Antibiograma: técnica utilizada en el laboratorio para evaluar la actividad de los antimicrobianos

frente a los microorganismos responsables de las infecciones. Existen diferentes metodologías para
lograr esta evaluación entre ellas: Difusión en agar (Disco o E-Test), dilución en agar y microdilución
en caldo.
• Antibiótico: sustancia química producida por un ser vivo o derivada sintética de ella que a bajas
concentraciones mata o impide el crecimiento de ciertas clases de microorganismos sensibles,
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generalmente bacterias, Los antibióticos se utilizan en medicina humana, animal u horticultura para
tratar infecciones provocadas por gérmenes,
• Bacteria: organismo unicelular, capaz de reproducirse a sí mismo. Existen distintos tipos de
bacterias, clasificadas según sus propiedades de crecimiento (aeróbicas o anaeróbicas, etc.), su
capacidad de teñirse con colorantes especiales (Gram positivas, Gram Negativas), según su forma
(bacilos, cocos, espiroquetas, etc.), Algunas producen infecciones en el ser humano que pueden ser
graves,
• Betalactamasa: proteínas fijadoras de penicilina que catalizan la hidrólisis del anillo Betalactámico,
separando el enlace amida, impidiéndole al antibiótico inhibir la síntesis de la pared celular. En las
bacterias Gram negativas se encuentran en el espacio periplásmico entre la pared celular y la
membrana externa y en las Gram positivas que carecen de pared son excretadas, aunque todas las
Betalactamasas catalizan la misma reacción, se han aislado y caracterizado numerosos tipos de
enzimas que se clasifican en forma diversa de acuerdo, por ejemplo, a su secuencia de
aminoácidos, peso molecular o especificidad del substrato. La localización del gen que codifica la
Betalactamasas es variable, pudiendo localizarse en el cromosoma o estar codificada por plásmidos.
Las cromosómicas son universales en una bacteria específica mientras que la presencia de ellas
codificadas por plásmidos es variable y transferible entre las diversas especies bacterianas.
Existen además organismos productores de Betalactamasas de espectro extendido (BLEE), las
cuales han aparecido en clínicas y hospitales en los últimos años constituyendo un problema de
salud pública grave. Las BLEE se derivan de las Betalactamasas clásicas por sustitución de uno o
más arninoácidos. Los organismos productores de BLEE tienen resistencia a antibióticos que
incluyen cefalosporinas de 3a generación, penicilinas de espectro extendido y monobactárnicos.
• Bombas de eflujo: mecanismos de expulsión de sustancias ubicadas en la membrana
citoplasmática de las bacterias, los cuales están compuestas por proteínas transportadoras y tienen
la habilidad de excretar drogas, Algunas de estas bombas, exhiben una amplia especificidad y
cubren prácticamente todos los antibióticos, agentes quimioterápicos, detergentes, colorantes y otros
inhibidores. Estas bombas de eflujo trabajan con excepcional eficacia en bacterias Gram negativas
por su acción sinérgica con la barrera de la membrana externa, Algunas bombas de eflujo de
bacterias multirresistentes, características en Gram negativas, tienen una estructura más compleja y
atraviesan tanto la membrana citoplamática como la externa, utilizando tres componentes proteicos.
Esta unidad compleja puede mandar drogas hacia afuera evitando la barrera de la membrana
externa,
• Carbapenemasa: son 13-lactamasas capaces de hidrolizar antibióticos de tipos carbapenems.
Pertenecen a tres clases diferentes, según la clasificación de Ambler y cols. La clase A incluye 13-
lactamasas que poseen serina en su sitio activo y son inhibidas por el ácido clavulánico, en este
grupo destacan las BLEE SME-1 a -2, NMC-A, IMI- 1 a -2, KPC-1 a -3 y GES-2 a -4, La clase B
incluyen 13-lactamasas dependientes de Zinc, se denominan metalo-I3-lactamasas (MBLs), son
resistentes a los inhibidores clásicos de 13-lactamasas, pero son sensibles al EDTA
La mayoría de las carbapenemasas, se encuentran asociadas a Integrones clase 1, que fungen como
estructuras genéticas que capturan y almacenan genes de resistencia, los integrones por si solos no
son móviles, pero frecuentemente se encuentran asociados a plásmidos o transposones, por lo tanto
la transferencia y diseminación está asegurada en el ambiente hospitalario si no se toman las
medidas de control adecuadas, De la misma manera esta propagación puede generar un grave
problema de salud, ya que son muy pocas las opciones terapéuticas restantes,
• Cepas AlCC: son microorganismos certificados por la American Type Culture Collection. Rockville,
EU, quienes suministran un cultivo puro del microorganismo y del cual garantizan que se cuentan
con unas características específicas que han sido comprobadas por pruebas morfológicas,
bioquímicas y rnoleculares.
• CLSI: de sus siglas en inglés: Clinical and Laboratory Standards Institute. CLSI es una organización
global sin fines de lucro, que desarrolla y promueve el uso voluntario de normas de consenso y
directrices dentro de la comunidad de la salud, Emiten documentos que proporcionan valiosas
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herramientas que le permiten a los laboratorios cumplir con sus responsabilidades de cuidado de la
salud con eficiencia, eficacia, y la aceptación mundial. Dentro de sus documentos, cuentan con una
emisión anual del denominado: M-100 "Estándares de desempeño para pruebas de susceptibilidad
antimicrobiana" en donde se brindan recomendaciones acerca de los puntos de corte que deben ser
usados para cada antibiótico frente a cada grupo de microorganismos.
• Concentración Mínima Inhibitoria (CIM): la concentración más baja de un antimicrobiano que
inhibe el crecimiento visible de un microorganismo después de su incubación. La CIM es importante
en diagnósticos de laboratorio para confirmar la resistencia de microorganismos a un agente
antimicrobiano y además para monitorizar la actividad de los nuevos agentes antimicrobianos. La
CIM pueden ser determinada mediante algunos de los métodos de antibiograma, siguiendo las
directrices de centros de referencia tales como el CLSI (Clinical Laboratory Institute Standards),
BSAC (British Society for Antimicrobial Chemotherapy) o EUCAST (European Committee on
Antimicrobial Susceptibility Testing). Las CIM puede ser útil también para definir el tipo de
antimicrobianos a utilizar, lo que a su vez reduce la oportunidad de resistencia microbiana a agentes
antimicrobianos específicos.
• EDT A: ácido etilendiamino tetraacético. Agente quelante de zinc, capaz de inhibir enzimas tipo
Metalo-Beta- Lactamasas, que al utilizarlo en la técnica de doble disco permite detectar la presencia
de estas enzimas en cepas bacterianas.
• Enzima: moléculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones químicas, actúan sobre unas
moléculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en moléculas diferentes denominadas
productos. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina reacciones enzimáticas.
• E-Test: tiras de plástico inerte que incorporan un gradiente de concentración de antibiótico que
permite realizar antibiogramas cuantitativos, es decir permiten determinar la Concentración Mínima
Inhibitoria por la técnica de difusión en agar.
• Medio de transporte Cary 8lair: medio de transporte para agentes anaerobios y Gram negativos,
utilizado para la recolección y envió de muestras clínicas (materia fecal). El bajo contenido de
nutrientes en el medio y la utilización del fosfato como tampón en lugar del glicerofosfato evita el
sobrecrecimiento de microorganismos como también minimiza la destrucción bacteriana. El
tioglicolato de Sodio provee un bajo potencial Redox.
• Porinas: llamadas también proteínas de matriz o proteínas principales de membrana, se encuentran
en bacterias Gram negativas formando canales de gran tamaño que permiten la difusión pasiva de
iones y moléculas hidrofílicas. Permiten el paso de materiales de desecho tanto al interior como al
exterior de la célula así como la expulsión determinadas sustancias dañinas para las bacterias como
los antibióticos.
• Resistencia bacteriana: fenómeno creciente caracterizado por una refractariedad parcial o total de
los microorganismos al efecto del antibiótico generado principalmente por el uso indiscriminado e
irracional de éstos y por la presión evolutiva que se ejerce en el uso terapéutico. La emergencia de
la resistencia a los antimicrobianos es un fenómeno natural que resulta de procesos evolutivos
dados por la interacción de factores biológicos y epidemiológicos. Entre los factores biológicos se
encuentran: la resistencia innata, mutaciones espontáneas, reservorio de genes de resistencia y la
capacidad de los microorganismos de compartir mecanismos de resistencia a través de información
genética. Desde el punto de vista molecular y bioquímico existen básicamente tres mecanismos por
medio de los cuales una bacteria puede hacerse resistente al efecto del antibiótico, a saber:
Inactivación del antibiótico, alteración del sitio blanco del antibiótico y cambios en sus barreras de
permeabilidad. Cabe resaltar que los tres mecanismos pueden ocurrir simultáneamente.
• Sensidiscos: círculos de papel filtro de reducido diámetro impregnados con antibiótico, biostático u
otro agente para ser probado en microorganismos y determinar su sensibilidad o resistencia de
forma in vitro.
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• WHONET: software gratuito desarrollado por el Centro Colaborador de la Organización Mundial de

la Salud (OMS) para la Vigilancia de la Resistencia a los antimicrobianos a partir de las bases de
datos generadas por el Laboratorio de Microbiología de las instituciones de salud.
6. CONDICIONES GENERALES
No aplica (N/A) Remitirse al numeral 8.
7. FUNDAMENTO
No aplica (N/A) Remitirse al numeral 8.
8. BUENAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO

Remitirse al manual de bioseguridad del INS. Ref. MNL- A05.001.0000-001
9. MATERIALES Y REACTIVOS
• Formulario de registro para el envío de aislamientos para la confirmación de susceptibilidad

antimicrobiana. REG-R01.5030-029
• Cajas de petri
• Mechero
• Agares para aislamiento primario.
• Agar Mueller Hinton. (Anexo 1)
• Asas de cultivo
• Colorantes de Gram Ref. INT - R01.5030-001
• Insumos de equipos automatizados en caso de tenerlos.
• Cepas ATCC para control de calidad.
• Leche descremada al 20%
• Escobillones estériles.
• Tubos de Khan de 12 x 75 mm estériles
• Solución salina estéril.
• Antibióticos en sensidiscos, en tiras de E-test y en polvo
• Sensidiscos blancos (sin antibiótico).
• EDTA
• Ácido Phenil Boronico
• Pipetas y puntas
• Regleta calibrada para lectura de halos de antibiograma. (Caliper ó Pie de rey)
10. EQUIPOS
• Incubadoras (graduar a 35 +/- 2°C)

• Microscopio
• Cabina de bioseguridad
• Congelador a -70°C
• Cuarto frio - 4°C
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• Espectrofotómetro
• Pipetas automáticas.
• Equipos automatizados de identificación bacteriana y determinación de susceptibilidad antibiótica:
Microscan, Vitek, Phoenix. (Equipos de utilización opcional y de libre escogencia según
necesidades del laboratorio)
11. DESCRIPCION
11.1 Microorganismos a considerar.
En este manual se incluirán microorganismos de importancia en infección intrahospitalaria:

Enterobacterias (a excepción de los enteropatógenos), Gram negativos no fermentadores,
Staphylococcus aureus y Enterococcus sp., aislados y considerados clínicamente significativos como
causantes de un proceso infeccioso. No se incluirán gérmenes de colonización o contaminación.
11.2 Determinación de la susceptibilidad a los antimicrobianos.
Para la interpretación de susceptibilidad e informe de resultados se tendrán en cuenta las normas y

recomendaciones del Instituto de Estándares de Laboratorios Clínicos y (CLSI) vigentes y éstas se
aplicarán para cualquiera de los siguientes métodos:
• Difusión en agar (Kirby - Bauer): Para esta técnica se deberá usar agar Mueller Hinton, este
medio de cultivo muestra buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad,
contiene bajo nivel de inhibidores, es adecuado para el desarrollo de la mayoría de las bacterias
patógenas y existen suficientes datos recopilados que avalan la experiencia de las pruebas de
sensibilidad realizadas en este medio. Aunque el agar M. Hinton es generalmente confiable para
las pruebas de sensibilidad, se deben comprobar sus características y se le debe aplicar control
de calidad a cada lote producido o adquirido comercialmente (anexo 1).
Para la técnica se usarán discos que contienen una concentración conocida de antibióticos, estos
discos deben ser almacenados en refrigeración a 8 °C o en congelador a -14°C o menos para
mantener la droga en condiciones óptimas, los que contienen antibióticos betalactámicos deben
mantenerse únicamente en congelación para mantener su potencia. Los discos deben ser
sacados del refrigerador o congelador al menos 1 hora antes de su uso a fin de lograr un
equilibrio en la temperatura y así evitar la condensación que podría ocurrir cuando la humedad
ambiente alcanza los recipientes fríos. Es importante tener en cuenta siempre la fecha de
vencimiento emitida por los fabricantes.
El procedimiento para realizar esta técnica es:
o A partir de un cultivo de 18 a 24 horas del patógeno a estudiar, seleccione 3 ó 4 colonias bien
aisladas de igual morfología y prepare una suspensión en 4 ó 5 mi de solución salina estéril. Esta
suspensión debe alcanzar una turbidez comparable con la escala 0,5 de Mc Farland que
corresponde a aproximadamente 1 a 2 x 108 UFC/ml, para verificar la turbidez adecuada se
puede utilizar una escala comercial o preferiblemente verificarla usando un espectrofotómetro, la
absorbancia a 625 nm debería ser 0,08 - 0,10. En caso de no alcanzar la turbidez necesaria se
deben adicionar más colonias y en caso contrario se puede adicionar cuidadosamente más
solución salina estéril hasta lograr la turbidez ideal.
o Dentro de máximo 15 minutos después de ajustado el inóculo siembre las placas de M. Hinton
con un hisopo estéril. Para ello introduzca el hisopo en el tubo donde se preparó la suspensión
bacteriana, humedézcalo bien y luego presione el hisopo contra las paredes del tubo a fin de
escurrir el exceso, inmediatamente inocule la superficie seca del M. Hinton por hisopado en tres
direcciones para asegurar una completa distribución.
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o Luego de inoculada la caja de agar se debe esperar de 3 a 5 minutos, pero no más de 15 minutos
para aplicar los discos de los antibióticos seleccionados. Colocar los discos sobre la superficie del
agar inoculada con pinza estéril aplicando una ligera presión a una distancia no menor a 24 mm
desde un centro al otro. Debido a que algunas drogas difunden casi instantáneamente, un disco
no debe ser removido una vez que tomó contacto con la superficie del agar. No deben colocarse
más de 12 discos por placa de 150 mm y no más de 5 discos por placa de 100 mm.
o Llevar a incubación a 35°C por 16 a 18 horas y posterior a esto examinar cada placa, midiendo
con una regla calibrada los diámetros de las zonas de inhibición. Si las placas fueron
satisfactoriamente hisopadas y el inóculo fue el correcto, las zonas de inhibición serán
uniformemente circulares y habrá desarrollo confluente. Si el microorganismo estudiado es un
Staphylococcus spp. o Enterococcus spp., incube 24 horas para realizar las lecturas
especialmente de vancomicina y oxacilina.
• E-test: Este método utiliza los mismos principios de la difusión por disco pero usando una tira de
plástico que contiene concentraciones crecientes de un determinado antibiótico lo cual permite
obtener un valor de Concentración Inhibitoria Mínima (CIM). El procedimiento de esta técnica
consiste en colocar la tira sobre una placa de agar M. Hinton que ha sido inoculada con el
organismo en estudio, siguiendo las mismas indicaciones que se deben tener en cuenta para
Kirby - Bauer. Después de incubar la placa por 16 a 18 horas, se forma un área de inhibición de
forma elíptica, en la cual la concentración inhibitoria mínima puede ser leída directamente (Fig.
1).
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Figura 1. Representación esquemática del método del E-test. (Tomada de:

http://escuela.med.puc.cllpubllboletin/laboratorio/lnterpretacion.html)
• Microdilución en caldo: Esta técnica se emplea para medir en forma cuantitativa la actividad in
vitro de un agente antimicrobiano contra una bacteria. Para realizar la determinación, se preparan
unas microplacas con un medio de cultivo líquido, al cual se le agregan varias concentraciones
del agente antimicrobiano a probar. Las placas se inoculan con una suspensión estandarizada de
bacterias (0,5 Mc Farland) y después de una incubación de 24h a 35°C, se determina la
Concentración Inhibitoria Mimina (CIM) del antimicrobiano. El resultado final es altamente
dependiente de la metodología, la cual debe controlarse perfectamente para poder lograr
resultados adecuados y reproducibles.
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Este método se trabaja con volúmenes pequeños de caldo y placas estériles de 96 pozos, de
fondo plano o redondo, las cuales se pueden llenar con micropipetas de 8 canales, facilitando así
la realización de varias determinaciones en serie y en una misma placa. Por placa pueden ser
estudiados seis aislamientos y la cepa control.
El procedimiento para realizar esta técnica es:
o Preparación del medio de cultivo: El medio recomendado por la CLSI es el caldo
Mueller-Hinton ajustado con cationes y para su preparación se deben seguir las
instrucciones del fabricante y posteriormente realizar pruebas de esterilidad y de
crecimiento.
o Preparación de la solución madre y de la solución de trabajo del antimicrobiano:
Los antibióticos se pueden obtener directamente del laboratorio productor o de otras
fuentes comerciales. No se recomienda la utilización de las preparaciones para
aplicación parenteral. Para las pruebas de sensibilidad se debe conocer el lote, la
potencia (generalmente expresada en !-Ig ó Ul/mg de polvo) y la fecha de vencimiento
de los antimicrobianos de referencia. El almacenamiento de la droga debe hacerse
según las recomendaciones del laboratorio productor, o a una temperatura igual o
menor a -20°C. Conociendo la potencia de cada frasco de antimicrobiano que va a ser
utilizado para realizar pruebas de sensibilidad, se hacen los cálculos para la
preparación de las soluciones a utilizar. Para determinar la cantidad de polvo
antimicrobiano (ATB) y solvente necesarios para preparar una solución estándar (SE)
se puede utilizar la siguiente fórmula:
Volumen (mi) x concentración (Ilg/ml)

Peso (mg) =
Potencia del antibiótico (Ilg/mg)
• Tenga en cuenta que se deben preparar soluciones madres en un volumen no menor de

10ml y con concentraciones de por lo menos 1000 !-Ig/ml (por ej.: 1280 !-Ig/ml) ó de una
concentración 10 veces mayor que la más alta del rango establecido (por ej.: para un rango
establecido de 2 a 512 !-Ig/ml se podría preparar una solución madre de 5120 !-Ig/ml). Para
pesar los antibióticos se debe usar una balanza analítica bien calibrada, con una precisión
igualo superior al décimo de miligramo, y se debe evitar pesar cantidades muy pequeñas de
droga ya que estas ocasionan alto error (si es posible se recomienda pesar por encima de los
100 mg). Para la preparación de las soluciones tenga en cuenta las recomendaciones del
fabricante en cuento a solvente, forma de preparación, recomendaciones de seguridad y
almacenamiento de la solución. Por lo general, las soluciones madres se pueden alicuotar de
a 1mi y conservar en congelación a -70°C. Luego de tener la solución madre se debe
preparar una solución de trabajo haciendo una dilución 1:1O, para lo cual se mezclan 9ml de
agua destilada estéril y 1mi de la solución madre del antibiótico. Esta solución de trabajo se
puede alicuotar de a 1 mi y conservar a -70°C y a partir de esta solución se deben hacer las
diluciones necesarias para sensibilizar las placas.
o Sensibilización de las microplacas: A partir de la solución de trabajo del antibiótico
se prepararan las diluciones a probar por cada antibiótico utilizando la fórmula C1 x
V1 =C2 x V2, así determina la cantidad de solución de trabajo y de diluyente a utilizar:
Donde C1= Concentración solución de trabajo (ej. 1000ug/ml), V1= Volumen a utilizar
de solución de trabajo (siempre será 1mi, ya que esta fue la alícuota que se realizó),
C2= Concentración final de antibiótico (eje:64 Ilg/ml) V2= Volumen final de la
solución (?)
1000!-lg Iml x 1mi

V2 = ----------------------------------- = 15,62 mi
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Por lo tanto, en tubo se debe agregar 1 mi de la solución de antibiótico de 1.000 IJg/ml y

adicione 14,62 mi de Caldo Mueller Hinton para obtener una solución de antibiótico de 32
IJg/ml. Las concentraciones a ensayar para un determinado antibiótico, en general, deberían
determinarse de acuerdo a los puntos de corte que se mencionan en las normas CLSI, sin
embargo, el número de concentraciones puede ser elegido por quien realiza la prueba
teniendo en cuenta el comportamiento conocido de las cepas y el rango de concentraciones
de CIM de al menos una cepa patrón de control de calidad. En algunos casos especiales
puede ser necesario ensayar concentraciones inusuales (por ej. para evaluar el efecto
sinérgico entre aminoglucósidos y penicilinas o glicopéptidos frente a enterococos puede ser
necesario ensayar altas concentraciones de gentamicina y estreptomicina). Una vez se defina
el rango de concentraciones a probar, se colocan tubos marcados con las diferentes
diluciones, en cada tubo se adicionan 5 mi de Caldo Mueller- Hinton y 5 mi de la solución
anterior. La concentración más alta será la preparada desde de la solución de trabajo y a
partir de esta se harán las siguientes.
Recuerde que debe cambiar la pipeta entre cada dilución para evitar arrastrar el antibiótico.
Para sensibilizar la placa, se deben dispensar 50 IJL de cada una de las diluciones del
antibiótico, en el pozo respectivo, (pozos 1 al 11), el pozo 12 no se debe usar para ninguna
dilución, aquí solamente se colocaran 50IJI del caldo de cultivo y se empleará como control
de crecimiento.
Una vez que se sensibilicen las microplacas con la solución del antibiótico, (si no se van a
utilizar de inmediato), deben taparse y guardarse en bolsas de plástico e inmediatamente ser
colocadas en congelación, de preferencia a -70°C. A pesar de que el antimicrobiano así
congelado se mantiene estable por 6 meses. Las placas no deben guardarse en
congeladores que tengan sistema de eliminación de hielo automático ya que éstos cambios
de temperatura y de condensación de agua, modifican la potencia del antimicrobiano y deben
descongelar 20 a 30 minutos antes de la inoculación.
o Preparación del inóculo: Siga las mismas indicaciones descritas para Kirby -
Bauer.
o Inoculación de las microplacas: En cada placa se pueden colocar 7 aislamientos
(filas A-G) y la cepa control ATCC (fila H). Se deben adicionar 50 ul, del inoculo
bacteriano a probar a cada uno de los 12 pozos. El último pozo de la fila contendrá
solamente la bacteria y el diluyente y servirá como control de crecimiento. El
volumen final en cada pozo de la microdilución es de 100 ul., Al adicionar 50 ul, de la
suspensión de la bacteria en cada pozo, la dilución del antibiótico es diluida a la
mitad, por lo tanto el rango de concentración del antibiótico será ahora de la mitad.
La placa debe ser inoculada dentro de los primeros 15 minutos de la estandarización del
inoculo.
Incube las placas a 35°C durante 18 -20 h en aerobiosis, y no coloque más de cuatro placas,
una sobre otra, para poder mantener la misma temperatura en todas ellas.
o Lectura e interpretación: Después del período de incubación, se determina la
mínima concentración del antimicrobiano que permitió el desarrollo de la bacteria. La
concentración siguiente, en la cual ya no se observa desarrollo de la bacteria, se
toma como la CIM la cual se interpreta con ayuda de las tablas CLSI. Los resultados
de esta lectura deben ser consignados en el formulario designado por cada
Institución para tal fin.
Los rangos de aceptabilidad para diferentes antimicrobianos para las cepas control se
encuentran en el CLS/.
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• Sistemas automatizados: Para la determinación de susceptibilidad antibiótica a partir de

equipos automatizados, tenga en cuenta los siguientes requerimientos mínimos:
o El laboratorio debe disponer de un manual de procedimientos para el uso del (los)
equipo (s), que sea actualizado periódicamente y que sea conocido. manejado y
utilizado por el personal que trabaja en microbiología, dicho manual debe ser
suministrado por la compañía distribuidora del equipo y debe encontrarse en español.
o Debe existir un programa de capacitación continua del personal involucrado en las
actividades rutinarias del área de microbiología y el manejo del equipo.
o El personal de microbiología debe cumplir estrictamente con todos los procesos para
el montaje diario de aislamientos, así como los procesos de control de calidad y
limpieza de los equipos tal cual lo indique la compañía distribuidora del equipo y
llevar registro de estos procesos, con el fin de asegurar la calidad de los
procedimientos, previniendo los errores o en su defecto detectando los errores
producidos.
o El laboratorio debe contar con un programa de mantenimiento preventivo una vez al
mes (establecer un acuerdo con el proveedor) y correctivo del equipo, cada vez que
sea necesario.
o El laboratorio debe contar con un set anual nuevo de cepas ATCC para el control
interno del equipo según las especificaciones del fabricante.
o El laboratorio debe acordar con el proveedor del equipo la adquisición de un set de
McFarland para determinación de turbidez y un nefelómetro, así como los
calibradores del mismo y un manual de calibración.
o El personal del laboratorio de microbiología debe leer cuidadosamente todos los
instructivos de cada dispositivo, ya que allí se halla la información referente a las
limitaciones del procedimiento, así como recomendaciones de cepas y
combinaciones de antibióticos que debe ser evaluados utilizando métodos
alternativos. Validar internamente todo procedimiento que no se refiera en las
indicaciones del fabricante (por ejemplo: utilizar un medio de cultivo que no esté
incluido en el instructivo del fabricante; usar cepas que tengan más de 24 hs de
incubación, etc.).
o El laboratorio de microbiología debe participar de programas de control de la calidad
tanto externos como internos.
Así mismo se recomienda que en caso de usar algún equipo automatizado para el cual los paneles de
susceptibilidad no cuenten con las diluciones necesarias para lograr la interpretación según los puntos de
corte CLSI vigentes, se revise en conjunto con el comité de infecciones institucional cuales de estos
antibióticos son necesarios en el informe final al clínico y para aquellos que sean indispensables,
complementar el antibiograma con pruebas manuales como difusión en disco (Kirby-Bauer),
Concentración Mínima Inhibitoria (CIM) manual ó E-test, teniendo en cuenta que el montaje de estas
pruebas debe realizarse el mismo día, empleando la misma suspensión bacteriana (equivalente a 0.5
McFarland) con la que realizo el montaje del automatizado.
Por otra parte, el uso de equipos no excluye al laboratorio de la realización de pruebas confirmatorias
adicionales en casos donde sea necesario.
11.2.1 Enterobacterias aisladas de infección hospitalaria (diferentes de Salmonella y

Shigella)
Para estos microorganismos se recomienda usar como mínimo los antibióticos descritos en las tablas 1 y
2 según corresponda para cualquiera de las técnicas de antibiograma disponibles en Colombia (Kirby-
Bauer, Microdilución en caldo manual, Sistemas automatizados, E-Test). Como control de calidad se
recomienda usar las cepas Escherichia coli ATCC® 25922, Escherichia coli ATCC® 35218 (Para control
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de ¡3-láctamico/ inhibidor de ¡3-lactamasa), K/ebsiella pneumoniae ATCC® BAA 1705 (Para control de
carbapenemasa tipo KPC) y Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853 (para el control de carbapenemasa
tipo metalo¡3lactamasa), en caso de usar sistemas automatizados es indispensable usar las cepas ATCC
recomendadas para cada equipo y cada panel o tarjeta.
Tabla 1. Antibióticos a testear en antibiograma por cualquier técnica para Enterobacterias

aisladas de infección hospitalaria.
Antibiótico Observaciones
Ampicilina Representativo de clase para Amoxicilina y Ampicilina
Los criterios de interpretación para este Antibiótico pueden ser usados solo para
Cefalotina y/o cefazolina
predecir resultados de cefalosporinas orales.
Gentamicina ----
Amikacina ----
Amoxicilina - Acido
Representativo del grupo de ~Iactámicos combinados con inhibidores de ~Iactamasas.
Clavulánico (AMC)
Ampicilina / sulbactam (SAM) -------
Representativo de cefalosporinas de tercera generación, indispensable usarla siempre

Cefotaxima (CTX)
en estos microorganismos.
Representativo de cefalosporinas de tercera generación, indispensable usarla siempre

Ceftazidima (CAZ)
en estos microorganismos.
No informar. Útil para el control de calidad de la estimación del mecanismo de

Cefoxitina (FOX) resistencia a ~Iactámicos. La resistencia enzimática a FOX casi siempre es debida a
~Iactamasas de tipo AmpC, KPC o metaloplactamasas y no por BLEA o BLEE.
Cefepime -----
Útil para diferenciar mecanismos de resistencia como BLEE y metaloñlactamasas
(MBL). La presencia de BLEE siempre puede ser confirmada por resistencia a
Aztreonam aztreonam mientras que la presencia de una MBL que no esté acompañada de otro
mecanismo mostrará sensibilidad a este antibiótico.
o
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Piperacilina - Tazobactam -----
Trimetoprin - Sulfametoxasol -----
Meropenem La resistencia a carbapenems en enterobacterias es muy importante de vigilar, si se

detectase, se debe aplicar el test de Hodge y de ser posible las técnicas de inhibición
Imipenem con EDTA y APB para detectar carbapenemasas.
Detecta mejor los bajos niveles de resistencia a carbapenems aunque con baja
especificidad en cuanto al mecanismo de resistencia implicado. En infecciones
Ertapenem adquiridas en la comunidad solo se puede informar para: Infecciones de piel y partes
blandas, urinarias complicadas, intra - abdominales, genitales y en neumonia.
Aztreonam ------
Ciprofloxacina (CIP) Informe dependiente de comportamiento de Acido Nalidixico.
No se debe informar la sensibilidad a este antibiótico y en caso de encontrar

enterobacterias resistentes o intermedias se debe informar sensibilidad disminuida a
CIP. En caso de encontrar sensibilidad a este antibiótico montar CIP y levofloxacina
Acido Nalidíxico (LEV) por disco Y si se encuentra una disociación LEV-CIP ;:::5mm puede tratarse de
un nuevo mecanismo plasmidico de resistencia a las quinolonas y debe informarse
también sensibilidad disminuida a CIP.
1
Tabla 2. Antibióticos a testear mlnlmo'' en infecciones urinarias no complicadas.
Ampicilina Representativo de clase para Amoxicilina y Ampicilina
Cefalotina ó Los criterios de interpretación para este Antibiótico pueden ser usados solo para predecir resultados
cefazolina de cefalosporinas orales
Cefalosporina de 2da generación que puede ser una alternativa de tratamiento en caso de resistencia
Cefuroxime
a cefalosporinas de 1ra o a las combinaciones de ~Iactamicos con inhibidores de ~Iactamasas
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Cefalosporinade 3ra generaciónoral que puede ser una alternativade tratamiento.En caso de
encontraren una infecciónurinariano complicadaunacepaproductorade BLEE3,las cefalosporinas
Cefixime de 2da y 3ra debeninformarsesegúnel resultadodel antibiogramay si se observasensibilidada estas
drogas agregar una nota al pié del informe:"Aislamientoproductorde BLEE, probableéxito de
tratamientoen infecciónurinariabajanocomplicadade la comunidad".
Ampicilina I
sulbactam
-----
Trimetoprin -
SuIfametoxasol
-----
Ciprofloxacina (CIP) Informedependientede comportamientode AcidoNalidíxico.
Proteus spp, M. morganii, Providencia spp. y Serratia spp presentanresistencianatural a los

Nitrofurantoina
nitrofuranos.
Si se encuentranenterobacteriasresistenteso intermedias,con CIP sensiblese debe informarla

Acido Nalidíxico sensibilidada esta última pero se incluyenota al pié del informe:" Sensibilidaddisminuidaa CIP,
probableéxitode tratamientoen infecciónurinariabajano complicadade la comunidad"
Gentamicina Útilcomomarcadorepidemiológicode resistencia.
"Aíslarníentos con sensibilidad intermedia a algún antibiótico, informarlo tal cual y agregar una nota al
~ié del informe:"Probable éxito de tratamiento en infección urinaria baja no complicada"
Para los aislamientos que presenten resistencia a las drogas testeadas en el antibiograma mínimo
recomendado aquí, debe completarse con los antibióticos del antibiograma mínimo designado para
infecciones hospitalarias por Enterobacterias. (Ver arriba)
11.2.1.1 Pruebas adicionales para Enterobacterias
Adicional a las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana, el laboratorio debe realizar pruebas

complementarias para la búsqueda de enzimas responsables de mecanismos de resistencia.
• Prueba para la detección de Betalactamasas de Espectro Extendido (BLEE): Esta prueba

debe realizarse para cualquier Enterobacteria para detectar la presencia de estas enzimas. Se
puede usar la técnica convencional recomendada por el CLSI la cual consiste en usar
ceftazidime y cefotaxime solos y en combinación con ácido clavulánico, ya sea en difusión por
disco o en microdilución en caldo (incluyendo sistemas automatizados), para la interpretación de
los resultados en el caso de la técnica de difusión por disco se tendrá en cuenta como resultado
positivo un aumento mayor o igual a 5mm en el halo de la cefalosporina en combinación con
ácido clavulánico respecto de la cefalosporina sola y para el caso de microdilución en caldo se
tendrá en cuenta como resultado positivo una disminución mayor o igual a 3 diluciones seriadas
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de la cefalosporina combinada con ácido clavulánico versus la cefalosporina sola (ej: MIC
ceftazidime= 8ug/ml; MIC Ceftazidime/clavulanato= 1ug/ml). Para el informe de los antibióticos
beta-Iactamicos tenga en cuenta el resultado de la prueba, si resulta positiva, informe BLEE
positiva e informe resistente las penicilinas, cefalosporinas y aztreonam, para
Amoxicilina/clavulanato, Piperacilina/tazobactam y carbapenems no se debe modificar el
informe. Si las pruebas resultan negativas no se debe modificar el informe de estos antibióticos.
• Test de Hodge modificado: Esta técnica deberá realizarse en caso de detectar alguna cepa que
exprese resistencia o susceptibilidad intermedia a alguno de los antibióticos de tipo
carbapenems, de acuerdo a los puntos de corte CLSI vigentes y resistencia a una o más
cefalosporinas de tercera generación.
Procedimiento:
o Hisopar una placa de agar Mueller - Hinton con una suspensión ajustada a 0,5 de la
escala de Mc Farland de la cepa ATCC E. coli 25922
o Incubar la placa durante 10 minutos a temperatura ambiente.
o Colocar un disco de Ertapenem de 10 ug ó Meropenem 10 ug en el centro de la caja
o Sembrar la cepa sospechosa, tomando de 3 a 5 colonias de un cultivo fresco y
realizando una estría desde el borde de la caja hasta el disco. Se pueden probar
varias cepas en la misma caja y se debe utilizar como control positivo la cepa K.
pneumoniae ATCC BAA 1705
o Incubar por 10 minutos a temperatura ambiente y luego incube a 35° C por 18 a 24
horas.
Interpretación de resultados: Si observa una invaginación del halo de inhibición alrededor de la

cepa probada, la cepa sospechosa será productora de carbapenemasa (Fig. 1) Y en este caso se
debe reportar el resultado de la prueba. Si se encuentra un halo completo la prueba puede ser
considerada negativa y en ese caso los antibióticos de tipo carbapenems se deben informar de
acuerdo a los puntos de corte vigentes.
Figura 1. Test de Hodge.
• Prueba con EDT A para la detección de carbapenemasas tipo Metalo-I3-lactamasas (MBL):

Si se detecta alguna cepa que exprese resistencia o susceptibilidad intermedia a cualquiera de
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los antibióticos de tipo carbapenems teniendo en cuenta los puntos de corte CLSI vigentes y
resistencia a una o más cefalosporinas de tercera generación, adicional al test de Hodge se
pueden realizar otras pruebas que permitan identificar mejor el tipo de carbapenemesa presente
en la cepa, para encontrar las carbapenemasas tipo MBL se deberá realizar una prueba en placa
ubicando un disco de EDTA a 1,5 cm entre los discos de IMI y MER, si llegase a existir sinergia o
deformación del halo de los antibióticos hacia el EDTA, se puede considerar como una prueba
positiva y en ese caso se deben informar la presencia de una carbapenemasas tipo MBL.(Fig. 2)
SE)
,.,~) v., '.-r~-'''''';
15mm
(B)
Figura 2. Prueba de Inhibición con EDTA para la detección de MBL.

(A. Colocación de los discos en la placa. B. Prueba positiva)
• Prueba con Acido Phenil Borónico (APB) para la detección de serin- carbapenemasas tipo
2f (KPC): Al igual que en el caso anterior esta prueba se usa en caso de detectar alguna cepa
que exprese resistencia o susceptibilidad intermedia a cualquiera de los antibióticos de tipo
carbapenem teniendo en cuenta los puntos de corte CLSI vigentes y resistencia a una o más
cefalosporinas de tercera generación. Las carbapenemasas tipo serin son inhinibles por ácido
borónico, por lo tanto para la detección de este tipo de carbapenemasas se puede usar una
prueba en placa en donde se ubica un disco de APB a 1,5 cm entre IMP y CAZ, si llegase a
existir sinergia o deformación de los halos de alguno de antibióticos hacia el APB, se puede
considerar como una prueba positiva y en ese caso se debe informar presencia de enzima tipo
KPC. (Fig. 3)
Figura 3. Prueba de Inhibición con APB para la detección de KPC.

(A. Colocación de los discos en la placa. B. Prueba positiva)
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11.2.2 Pseudomonas aeruginosa.
Para este microorganismo se recomienda usar como mínimo los antibióticos descritos en la tabla 3 para
cualquiera de las técnicas de antibiograma disponibles en Colombia (Kirby- Bauer, Microdilución en caldo
manual, Sistemas automatizados, E-Test). Como control de calidad se recomienda usar las cepas
Escherichia coli ATCC® 25922, Escherichia coli ATCC® 35218 (Para control de ¡3-láctamicol inhibidor de
¡3-lactamasa), Klebsiella pneumoniae ATCC® BAA 1705 (Para control de carbapenemasa tipo KPC) y
Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853 (para el control de carbapenemasa tipo metalo¡3lactamasa), en
caso de usar sistemas automatizados es indispensable usar las cepas A TCC recomendadas para cada
equipo y cada panel o tarjeta.
Tabla 3. Antibióticos a teslear para P. aeruginosa.
Gentamicina ----
Amikacina ----
En montajes manuales se puede ubicar CAZ junto a Imipenem a 2 cm y a

Ceftazidima (CAZ)
2,7 cm de CAZ/CLAV para detectar BLEEs.
Cefepime -------

La resistencia a carbapenems en no fermentadores es cada vez más
Meropenem común y en general los aislamientos que la presentan, suelen ser
multirresistentes. Es importante resaltar la importancia de evaluar la
actividad de los dos carbapenems (IMI y MER) en todos los aislamientos,
ya que no siempre la resistencia es cruzada, si solo se evalúa la actividad
Imipenem de uno, no se puede extrapolar al otro. Al detectar resistencia, es útil
aplicar las técnicas con EDTA y APB para detectar el tipo de
carbapenemasa presente.
Ciprofloxacina (CIP) --
Aztreonam (ATM) --
En infecciones por cepas multirresistentes o cepas que muestren
resistencia o susceptibilidad intermedia por disco, y que el médico quiera
Colistina
usarla como tratamiento, se debe evaluar la actividad de estos antibióticos
por MIC. No informar si no se hace MIC
11.2.2.1 Pruebas adicionales para Pseudomonas aeruginosa
Adicional a probar estos antibióticos, se pueden hacer pruebas para la búsqueda de enzimas
responsables de mecanismos de resistencia, tales como: prueba para la detección de
Betalactamasas de Espectro Extendido (BLEE), prueba con EDTA para la detección de
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carbapenemasas tipo Metalo-¡3-lactamasas (MBL) y prueba con Acido Phenil Borónico (APB) para la
detección de serin- carbapenemasas tipo 2f (KPC) todas descritas previamente para Enterobacterias.
Para el caso de la prueba de BLEE, es importante tener en cuenta que aunque el CLSI no menciona
que se deba realizar a P. aeruginosa, si es importante realizar la búsqueda de este tipo de enzimas
en estos microorganismos; así mismo para la prueba de búsqueda de KPC es importante resaltar que
si bien KPC se caracteriza por la inhibición con ácido fenil borónico (APB), los altos niveles basa les
de cefalosporinasa cromosómica (enzima tipo AmpC) en P. aeruginosa condicionan los resultados de
las pruebas de sinergia entre carbapenemes y discos de APB. Tanto la cloxacilina como la oxacilina
son inhibidores específicos de AmpC y no de KPC, lo que permite superar la baja especificidad del
ácido borónico para detectar KPCs en cepas con altos niveles de AmpC. Por lo cual para el caso de
P. aeruginosa se recomienda usar adicional al disco de APB un disco de cloxacilina u oxacilina.
Aquellas cepas donde el mecanismo implicado en la resistencia a carbapenemes fuera enzimas
AmpC, cursarán con una doble inhibición (APB y CLOXAlOXA). Aquellas cepas donde el mecanismo
implicado en la resistencia a carbapenemes fuera enzimas tipo KPCs, inclusive cuando esté presente
en una especie bacteriana con hiperproducción de AmpC, mostrarán sólo inhibición por APB y no por
CLOXAlOXA.
11.2.3 Acinetobacter spp.
Para este microorganismo se recomienda usar como mínimo los antibióticos descritos en las tabla 4 para
Escherichia coli ATCC® 25922, Escherichia coli ATCC® 35218 (Para control de ¡3-láctamico/ inhibidor de
¡3-lactamasa) y Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853 (para el control de carbapenemasa tipo
metalo¡3lactamasa), en caso de usar sistemas automatizados es indispensable usar las cepas ATCC
recomendadas para cada equipo y cada panel o tarjeta.
Tabla 4. Antibióticos a testear en antibiograma para Acinetobacter.
Ampicilina I Sulbactam El sulbactam tiene actividad per se sobre Acinetobacter
Gentamicina -----
Amikacina -----
Ceftazidima (CAZ) -----
Cefepime -----

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La resistencia a carbapenems en no fermentadores es cada vez más

Meropenem común y en general, los aislamientos que la presentan, suelen ser
multirresistentes. Es importante resaltar la importancia de evaluar la
actividad de dos carbapenems (IMI y MER) en todos los aislamientos, ya
que no siempre la resistencia es cruzada, si solo se evalúa la actividad de
Imipenem uno, no se puede extrapolar al otro. Al detectar resistencia, es útil aplicar
las técnicas con EOTA para detectar el tipo de carbapenemasa presente.
Ciprofloxacina (CIP) -----
Trimetoprin I sulfa
(SXT)
-----
Doxiciclina
-----
(DOX)
En infecciones por cepas multirresistentes o cepas que muestren

resistencia o susceptibilidad intermedia por disco, y que el médico quiera
Colistina
usarla como tratamiento, se debe evaluar la actividad de estos antibióticos
por MIC. No informar si no se hace MIC.
11.2.3.1 Pruebas adicionales para Acinetobacter
Adicional a probar estos antibióticos se deben hacer pruebas para la búsqueda de enzimas
responsables de mecanismos de resistencia, tales como: prueba para la detección de
Betalactamasas de Espectro Extendido (BLEE) y prueba con EDTA para la detección de
carbapenemasas tipo Metalo-¡3-lactamasas (MBL) descritas previamente para Enterobacterias.
Para el caso de la prueba de BLEE, es importante tener en cuenta que aunque el CLSI no menciona
que se deba realizar a Acinetobacter, si es importante realizar la búsqueda de este tipo de enzimas
en estos microorganismos; así mismo es importante resaltar que en cepas de Acinetobacter es
común encontrar enzimas carbapenemasas de tipo OXA, sin embargo estas enzimas no es posible
identificarlas por técnicas fenotípicas ya que no existen inhibidores que permitan diferenciarlas.
11.2.4 Burkholderia cepacia.
Para este microorganismo se recomienda usar como mínimo los antibióticos descritos en las tabla 5 para
Escherichia coli ATCC® 25922 y Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853, en caso de usar sistemas
automatizados es indispensable usar las cepas ATCC recomendadas para cada equipo y cada panel o
tarjeta.
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Tabla 5. Antibióticos a testear en antibiograma para B. cepacia.
Antibiótico
Ceftazidima (CAZ)
Meropenem (MER)
Trimetoprin I sulfa (SXT)
Minociclina
Levofloxacina (LVX)
11.2.5 Stenotrophomonas maltophilia.
Para este microorganismo se recomienda usar como mínimo los antibióticos descritos en la tabla 6 para
Escherichia coli ATCC® 25922 y Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853, en caso de usar sistemas
tarjeta.
Tabla 6. Antibióticos a testear en antibiograma para S. maltophilia.
Antibiótico
Ceftazidima (CAZ)
Trimetoprin I sulfa (SXT)
Minociclina
Levofloxacina (LVX)
11.2.6 Staphylococcus spp.
Para este microorganismo se recomienda usar como mínimo los antibióticos descritos en la tabla 7 y 8
según corresponda, para cualquiera de las técnicas de antibiograma disponibles en Colombia (Kirby-
Bauer, Microdilución en caldo manual, Sistemas automatizados, E-Test). Como control de calidad se
recomienda usar las cepas Staphylococcus aureus ATCC® 29213, Staphylococcus aureus ATCC®
43300 (para control de la prueba de meticilino resistencia) y Staphylococcus aureus ATCC® BAA 977
o

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(para control de la prueba D), en caso de usar sistemas automatizados es indispensable usar las cepas
ATCC recomendadas para cada equipo y cada panel o tarjeta.
Tabla 7. Antibióticos a testear en antibiograma para Staphylococcus spp.
No interpretar en Staphylococcus coagulasa negativa (SCN) e informar la sensibilidad a este

Oxacilina (OXA)
antibiótico en base a FOX.
Usar para la detección de resistencia a meticilino resistencia, importante tener en cuenta que
existen diferencias en los puntos de corte para S. aureus y S. lugdunensis, versus los demás
Staphylococcus y en caso de presentarse disociaciones entre el resultados de OXA y FOX,
Cefoxitin (FOX) se debe proceder según la especie: 1. Para S. aureus informar directamente según el
antibiótico que resultara más resistente. 2. En SCN informar según FOX.
En caso de tener aislamientos meticilino sensibles provenientes de meningitis estafilococcicas
se debe adicionalmente realizar CIM de Cefotaxime y Ceftriazone.
Es importante tener en cuenta que los puntos de corte para este antibiótico difieren para S.
aureus y para los Staphylococcus coagulasa negativa. En el mundo se han descrito pocos
aislamientos de S. aureus con resistencia neta a vancomicina y se ha reportado más
frecuentemente asilamientos que presentan susceptibilidad disminuida a esta droga, de los
cuales se han descripto tres fenotipos en S. aureus: 1) VISA: CIM VAN 4-8 ~g/ml (intermedio),
2) h-VISA: CIM VAN < 2 ~g/ml (sensible) pero capaces de seleccionar subpoblaciones VISA y
3) VRSA: CIM VAN> 16 ~g/ml (resistente) por adquisición del gen vanA. No es posible
detectar estos fenotipos por la técnica de difusión con disco, razón por la cual es
indispensable testear este antibiótico por alguna técnica que permita la determinación de CIM.
Vancomicina
En algunos aislamientos con estos fenotipos se observan características atípicas, tales como:
crecimiento lento, características morfológicas heterogéneas y coagulasa débil. En caso de
encontrar un aislamiento con un valor de CIM > ó = 2ug/ml, se debe confirmar e informar una
nota al pie así: "El aislamiento presenta sensibilidad a vancomicina de acuerdo con los puntos
de corte CLSI, sin embargo esta sensibilidad es "borderline" y por lo tanto deberá
monitorearse estrechamente el progreso del tratamiento porque se han documentado fallas
en el tratamiento con este valor de CIM" En caso de encontrar aislamientos con valores de
CIM intermedios o resistentes, se debe confirmar e informar de inmediato al laboratorio de
referencia.
Para el informe de este antibiótico es indispensable tener en cuenta la prueba confirmatoria

Eritromicina
"O" que se describe abajo.
Para el informe de este antibiótico es indispensable tener en cuenta la prueba confirmatoria

Clindamicina
"O" que se describe abajo.
Trimetoprin I
sulfametoxazol
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Gentamicina -------
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Ciprofloxacina -------
Rifampicina -------
Este antibiótico es una nueva glicilciclina muy activa frente a cocos Gram positivos, se debe
informar solo en aislamientos provenientes de infecciones intraabdminales, de piel y de partes
Tigeciclina blandas, o en el caso de aislamientos multirresistentes para los cuales no existan otras
alternativas de tratamiento. Para este antibiótico no existen puntos de corte CLSI, sin
embargo se pueden usar los puntos FOA (R <19mm).
Aún es muy inusual la resistencia a linezolid en Staphylococcus spp, sin embargo cualquier
Linezolid aislamiento que se encuentre por encima del punto de corte de sensibilidad debe ser
confirmado y enviado al laboratorio de referencia.
Minociclina -------
Tabla 8. Antibióticos a testear en antibiograma para Staphylococcus spp. en infección urinaria
No interpretar en Staphylococcus coagulasa negativa (SCN) e informar la sensibilidad a este

Oxacilina (OXA)
antibiótico en base a FOX.
Usar para la detección de resistencia a meticilino resistencia, importante tener en cuenta que
existen diferencias en los puntos de corte para S. aureus y S. lugdunensis, versus los demás
Cefoxitin (FOX) Staphylococcus y en caso de presentarse disociaciones entre el resultados de OXA y FOX,
se debe proceder según la especie: 1. Para S. aureus informar directamente según el
antibiótico que resultara más resistente. 2. En SCN informar según FOX.
Vancomicina Probar en casos de aislamientos meticilino resistentes.
Trimetoprin I
sulfametoxazol
-------
Ciprofloxacina -...._-_ ..
Gentamicina Importante probarlas en aislamientos de S. aureus de orina, teniendo en cuenta la posibilidad
de una bacteremia asociada.
Rifampicina
Nitrofurantoina -------
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11.2.6.1 Pruebas confirmatorias para Staphylococcus spp.
• Prueba fenotípica confirmatoria de Staphylococcus meticilino resistente: Un alto porcentaje

de aislamientos de Staphylococcus son resistentes a meticilina, esta resistencia esta mediada
por una modificación en el sitio blanco del antibiótico, las proteínas ligadoras de penicilina (PBP).
La resistencia es de tipo cromosómico y está codificada en el gen mecA contenido en un casette
cromosomal, encargado de elaborar una PBP de baja afinidad para los antibióticos ¡3lactámicos,
por lo que las cepas de resistentes a meticilina son resistentes a todo el grupo de antibióticos
¡3lactámicos. Aunque existen en el mercado varias pruebas confirmatorias de este fenotipo de
resistencia, como son agares cromogénicos y pruebas de latex entre otras, CLSI recomienda
usar cefoxitin (FOX) ya sea por difusión con disco o por dilución en caldo para informar como
sensible ó resistente a oxacilina basado en el resultado de cefoxitin, tal como se describe en la
tabla 7.
• Prueba "O": Un grupo importante de antimicrobianos empleados para el tratamiento de las
infecciones por Staphylococcus es el denominado complejo MLSB que incluye macrólidos
(eritromicina), lincosamidas (clindamicina) y estreptograminas B. La elevada capacidad del
germen de generar resistencia a los antimicrobianos se ve reflejada en la resistencia a este
grupo, la cual presenta dos variables, la resistencia constitutiva (MLSBc) y la inducible (MLSBi):
ambas relacionas con la expresión de los genes erm (erythromycin ribosome methylation). La
variable constitutiva presenta elevado nivel de resistencia a cualquier antimicrobiano del grupo
MLSB, a diferencia de la resistencia inducida que presenta únicamente resistencia a los
macrólidos de 14 átomos (eritromicina) y 15 átomos (azitromicina) y sensibilidad in vitro a
macrólidos de 16 átomos, lincosamidas (clindamicina) y estreptograminas B. En las cepas
MLSBi la expresión del gen erm es inducida por algunos compuestos, como la eritromicina, un
potente inductor, mientras que la clindamicina es un inductor débil que actúa lentamente, como
consecuencia de estas características, las cepas con resistencia MLSBi aparentan
susceptibilidad in vitro a clindamicina, pero al ser usado clínicamente, ocurre in vivo la inducción
de la resistencia con el consiguiente fracaso terapéutico. El método más común de identificación
de este tipo de resistencia se basa en la expresión fenotípica (Prueba O); esta prueba identifica
la resistencia inducible mediante la ubicación en una placa de agar inoculada con el
microorganismo en estudio de un disco de eritromicina a 20 mm de uno de clindamicina, se
interpreta como positiva la prueba cuando a las 18 - 24 horas de incubación se observa un
achatamiento de la zona de inhibición producida por el disco de clindamicina en las
proximidades del disco de eritromicina (Fig. 3). Si se observa una prueba positiva se debe
informar resistencia a clindamicina.
Figura 3. Prueba "O" positiva.

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11.2.7 Enterococcus spp.
Para este microorganismo se recomienda usar como mínimo los antibióticos descritos en la tabla 9 - 12
según corresponda, para cualquiera de las técnicas de antibiograma disponibles en Colombia (Kirby-
Bauer, Microdilución en caldo manual, dilución en agar, Sistemas automatizados, E-Test). Como control de
calidad se recomienda usar las cepas Staphylococcus aureus ATCC® 29213 (para los métodos de difusión
en disco) y Enterococcus faecalis ATCC® 29212 (para los métodos de dilución), en caso de usar sistemas
tarjeta.
Tabla 9. Antibióticos a testear en antibiograma para Enterococcus spp procedentes de infección

severa
Puede ser usado como predictor de susceptibilidad a amoxicilina-ácido clavulanico,

piperacilin y piperacilin - tazobactam entre Enterococcus no productores de ~-Iactamasa. La
Ampicilina susceptibilidad a Ampicilina puede ser usada como predictor de susceptibilidad a imipenem.
La resistencia a penicilina y ampicilina debido a la producción de ~-Iactamasa es inusual, por
lo tanto no se busca de manera rutinaria, sin embargo se detecta utilizando la prueba de ~-
lactamasa basado en nitrocefin.
Teicoplanina
------
La presencia de inhibición de crecimiento parcial o presencia de algún crecimiento dentro de

la zona de inhibición indica resistencia.
A los microorganismos con zonas de inhibición interpretadas como intermedio, se les debe
Vancomicina determinar las concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) de acuerdo a las recomendaciones
del CLSI.
Ver tabla 12.
Gentamicina alta carga Ver tabla 12
Espectinomicina alta carga Ver tabla 12
Ampicilina -Sulbactam .------

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Tabla 10. Antibióticos a testear en antibiograma para Enterococcus resistentes a vancomicina
Linezolid .......
Minocic\ina ---_ ...
Tigeciclina .......
Tabla 11. Antibióticos a testear en antibiograma para Enterococcus spp recuperados de infecciones
urinarias no complicadas
Puede ser usado como predictor de susceptibilidad a amoxicilina-ácido clavulanico,

piperacilin y piperacilin - tazobactam entre Enterococcus no productores de ~-Iactamasa,
La susceptibilidad a Ampicilina puede ser usada como predictor de susceptibilidad a
Ampic\ina imipenem.
La resistencia a penicilina y ampicilina debido a la producción de ~-Iactamasa es inusual,
por lo tanto no se busca de manera rutinaria, sin embargo se detecta utilizando la prueba
de ~-Iactamasa basado en nitrocefin.
Teicoplanina
La presencia de inhibición de crecimiento parcial o presencia de algún crecimiento dentro

de la zona de inhibición indica resistencia,
A los microrganismos con zonas de inhibición interpretadas como intermedio, se les debe
Vancomicina determinar las concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) de acuerdo a las
recomendaciones del CLSI.
Ver tabla 12,
Ciprofloxacina
Nitrofuranos
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Tabla 12. Pruebas para la detección de alta resisitencia a aminoglucocidos y vancomicina en Enterococcus spp.
Agar Mueller Agar BHI

Hinton
120 IJg disco de Gentamicina Gentamicina 300 IJg disco de Estreptomicina Estreptomicina Vancomicina
entamicina 500 IJ ImL 500 ImL estreptomicina 1000 uo ImL 2000 uc ImL 6 uc ImL
Recomendaciones Recomendaciones 101J1 del tubo Recomendaciones Recomendaciones 101J1 del tubo 101J1 del tubo 0.5 de
estándar estándar 0.5 de estándar estándar 0.5 de McFarland
McFarland McFarland
35.:t2°C; aerobiosis I 35.:t2°C; aerobiosis I 35.:t2°C; 35+2°C'
- , 35.:t2°C; 35.:t2°C; 35.:t2°C; aerobiosis
aerobiosis aerobiosis aerobiosis aerobiosis
16 -18 horas I 24 horas I 24 horas 16 -18 horas 24 - 48 horas(si 24 - 48 I 24 horas
es susceptible a horas(si es
las 24 horas, susceptible a
reincube) las 24 horas,
reincube
6mm= resistente Algún crecimiento= >1 colonia= 6mm= resistente Algún >1 colonia= >1 colonia= Resistencia a
Resistente Resistente. crecimiento= Resistente. la vancomicina
7-9mm= poco 7-9mm= poco I Resistente presuntiva.
concluyente concluyente
10 mm= ;::: 10 mm=

susceptible susceptible
Correlación CIM = r
R= ;:::500IJg/mL "
\..:
s= s 500IJg/mL 'F..:u
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•.•. ..,---~----I?)'tjfl¡fI,'iAWlttaa:rree;s~isSttaian1cc:Jiia¡;aa·1
..; Prueba détam~je' %Alta ~~~i~t~ricia
a Gentamicina Alta resisten,~i~aestreptomicina . vancomicina
F: -::·<:x:'(·'·'·;·'·· 'o'. "'
Determinar la CIM para

vancomicina y las
Resistente= no presenta sinergia con ampicilina, penicilina y vancomicina. preubas de motilidad y
producción de pigmento
Susceptible= presenta sinergia con ampicilina, penicilina y vancomicina, que son también susceptibles. para diferencias de las
especies con resistencia
Si el resultados de difusión en disco es poco concluyente, realice dilución en agar o microdilución en caldo para confirmar adquirida (VanA y VanB)
de las especies con
resistencia intrínseca con
(VanC) como E.
gallinarum y E.
casseiflavus.
ATCC E. faecalis ATCC E. faecalis E. faecalis ATCC E. faecalis A TCC E. faecalis E. faecalis ATCC
®29212- Susceptble ATCC ®29212 ®29212- ATCC ®29212- Susceptble
E. faecalis ATCC ®29212- 14-20 mm Susceptble ®29212- E. faecalis ATCC ®51299
®51299 - Resistente Susceptble E. faecalis A TCC Susceptble - Resistente
E. faecalis ®51299 - E. faecalis
ATCC ®51299 Resistente ATCC ®51299
- Resistente - Resistente
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12. DOCUMENTOS DE REFERENCIA
1, World Health Organization, World Alfiance for Patient Safety: Forward Programme 2008-2009.
2008, WHO: France. p.80.
2. Tenover, F.C. and J.M. Hughes, The challenges of emerging infectious diseases. Development
and spread of multiply-resistant bacterial pathogens. JAMA, 1996. 275(4): p. 300-4.
3. Struelens, M.J., The epidemiology of antimicrobial resistance in hospital acquired infections:
problems and possible solutions. BMJ, 1998. 317(7159): p. 652-4.
4. Coronado, V.G., et al., Ciprofloxacin Resistance among Nosocomial Pseudomonas aeruginosa
and Staphylococcus aureus in the United States. Infect Control Hosp Epidemiol, 1995. 16(2): p.
71-75.
5. Noriega. L.M ¿En qué ayuda el antibiograma al médico clínico en la atención de sus pacientes?
Rev Chillnfect 2004; 21 (SupI1): S34-S38.
6. Ministerio de salud de Argentina. Manual de procedimientos para la determinación de la
sensibilidad a los antimicrobianos en bacterias aisladas de humanos. 2001.
7. Organización Panamericana de la Salud. Guía para el uso correcto de los equipos automatizados
para identificación bacteriana y su correspondiente prueba de susceptibilidad. 2011.
8. Red Whonet Argentina. Protocolo de trabajo acordado. XIII taller Whonet Argentina. Mar del Plata
9 al 11 de mayo de 2011.
9. Clinical and Laboratory Standar Institute (CLSI). Performance Standars for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Twenty-Second Informational Supplement. M100-S22. Vol. 32 W.3. 2012.
13. CONTROL DE REVISIONES
14. ANEXOS.
ANEXO 1. Medio Mueller - Hinton.
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ELABORO
Angela Muñoz
Bacterióloga Contratísta.
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Kelly ()'(oz~ Ve: ~s
Bacterióloga Contratista.
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J J Maria Elena Realpe
Delgado
Coordinadora Grupo
Microbioloqía.
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ANEXO 1. Medio Mueller - Hinton.
Es un medio utilizado para realizar las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana en microorganismos

aeróbicos por el método de Kirby-Bauer. Este medio también es conocido como Agar M-H.
Ha sido recomendado para llevar a cabo las pruebas de susceptibilidad a antibióticos, utilizando discos
impregnados con una alta concentración de un antimicrobiano. El Agar Mueller Hinton cumple con los
requerimientos de la Organización Mundial de la Salud y está especificado en la FDA. Este medio es el
seleccionado por la CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) para realizar las pruebas de
susceptibilidad, por su alta reproducibilidad, su bajo contenido de substancias inhibidoras y el crecimiento
satisfactorio que presentan la mayoría de los patógenos no fastidiosos. Con este medio se han llevado a
cabo una gran cantidad de estudios sobre susceptibilidad antimicrobiana.
En este medio la infusión de carne y la peptona de caseína proveen la fuente de nitrógeno, vitaminas,
carbón y aminoácidos. El almidón es agregado para absorber cualquier metabolito tóxico y el agar es
adicionado como agente solidificante.
Preparación. Siga las instrucciones del fabricante y almacene a 4°C por no más de una semana.
Control de calidad.
Se debe realizar a cada lote de medio preparado aunque provenga del mismo frasco de medio o para
cada lote de placas adquiridas comercialmente (Independiente de que se cuente con el certificado de
calidad del proveedor). Los parámetros mínimos a controlar son:
1. pH: Debe encontrarse entre 7,2 y 7,4 Y para calcularlo se debe usar un pHmetro de sensibilidad
de más o menos 0,01 unidades de pH. Debe calcularse a temperatura ambiente y luego de que el
medio haya solidificado, para ello puede usar un electrodo de superficie correctamente calibrado
o puede dejar solidificar el agar alrededor del bulbo del electrodo. Las tiras de pH no están
recomendadas para calcular este parámetro.
2. Contenido de es" y Mg++: Se puede determinar mediante un ensayo usando P. aeruginosa
ATCC 27853 frente a discos de aminoglucósidos, especialmente gentamicina y comparando con
los halos recomendados en la tabla 3 del documento M100S15 del CLSI (rango aceptable:16-
21mm)
3. Contenido de z-". Se puede evaluar usando P. aeruginosa ATCC 27853 frente a discos de
imipenem y comparando con los halos recomendados en la tabla 3 del documento M100S15 del
CLSI. (Rango aceptable: 20-28mm)
4. Contenido de Timina lTimidina: Se puede evaluar usando una cepa de Enterococcus faecalis
ATCC 29212 ó 33186 frente a discos de Trimetoprin sulfa, el medio con cantidades adecuadas
de estos compuestos mostrará un halo de inhibición claro y definido de 20 mm o más.
5. Profundidad del agar: El CLSI recomienda una profundidad de 4mm, con una variación permitida
de más o menos 0,5 mm.
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Maria-Elena Realpe
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Coordinadora Grupo
Microbiología.
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Manual de Procedimientos Determi Susceptibilidad Patogenos Impacto Hospitalario PDF

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA LA

INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

Autores: Ángela Muñoz Delgado. Profesional M.Sc. Grupo de Microbiología.

3. ALCANCE DEL MANUAL 4

8. BUENAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO 7

13. CONTROL DE REVISIONES 29

La emergencia de la resistencia a los antimicrobianos es un fenómeno natural que resulta de procesos

En los últimos años se ha observado en muchos microorganismos, considerados como totalmente

• Estandarizar los procedimientos de laboratorio usados en la determinación de la susceptibilidad

• Establecer un Sistema Nacional de Redes de Laboratorio para la vigilancia de la resistencia a los

• Implementar un sistema de vigilancia nacional de la resistencia a los antimicrobianos oportuno,

3. ALCANCE DEL MANUAL

Este documento aplica para la determinación de susceptibilidad antimicrobiana y la detección de

• Antibiograma: técnica utilizada en el laboratorio para evaluar la actividad de los antimicrobianos

Manual de procedimientos para la

• WHONET: software gratuito desarrollado por el Centro Colaborador de la Organización Mundial de

No aplica (N/A) Remitirse al numeral 8.

No aplica (N/A) Remitirse al numeral 8.

8. BUENAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO

• Formulario de registro para el envío de aislamientos para la confirmación de susceptibilidad

• Incubadoras (graduar a 35 +/- 2°C)

En este manual se incluirán microorganismos de importancia en infección intrahospitalaria:

11.2 Determinación de la susceptibilidad a los antimicrobianos.

Para la interpretación de susceptibilidad e informe de resultados se tendrán en cuenta las normas y

Figura 1. Representación esquemática del método del E-test. (Tomada de:

Volumen (mi) x concentración (Ilg/ml)

• Tenga en cuenta que se deben preparar soluciones madres en un volumen no menor de

1000!-lg Iml x 1mi

• Manual de procedimientos para la

Por lo tanto, en tubo se debe agregar 1 mi de la solución de antibiótico de 1.000 IJg/ml y

• Sistemas automatizados: Para la determinación de susceptibilidad antibiótica a partir de

11.2.1 Enterobacterias aisladas de infección hospitalaria (diferentes de Salmonella y

Tabla 1. Antibióticos a testear en antibiograma por cualquier técnica para Enterobacterias

Ampicilina Representativo de clase para Amoxicilina y Ampicilina

Ampicilina / sulbactam (SAM) -------

Representativo de cefalosporinas de tercera generación, indispensable usarla siempre

Representativo de cefalosporinas de tercera generación, indispensable usarla siempre

No informar. Útil para el control de calidad de la estimación del mecanismo de

Piperacilina - Tazobactam -----

Trimetoprin - Sulfametoxasol -----

Meropenem La resistencia a carbapenems en enterobacterias es muy importante de vigilar, si se

Ciprofloxacina (CIP) Informe dependiente de comportamiento de Acido Nalidixico.

No se debe informar la sensibilidad a este antibiótico y en caso de encontrar

Ampicilina Representativo de clase para Amoxicilina y Ampicilina

Ciprofloxacina (CIP) Informedependientede comportamientode AcidoNalidíxico.

Proteus spp, M. morganii, Providencia spp. y Serratia spp presentanresistencianatural a los

Si se encuentranenterobacteriasresistenteso intermedias,con CIP sensiblese debe informarla

Gentamicina Útilcomomarcadorepidemiológicode resistencia.

11.2.1.1 Pruebas adicionales para Enterobacterias

Adicional a las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana, el laboratorio debe realizar pruebas

• Prueba para la detección de Betalactamasas de Espectro Extendido (BLEE): Esta prueba

Interpretación de resultados: Si observa una invaginación del halo de inhibición alrededor de la

Figura 1. Test de Hodge.

• Prueba con EDT A para la detección de carbapenemasas tipo Metalo-I3-lactamasas (MBL):

Figura 2. Prueba de Inhibición con EDTA para la detección de MBL.

Figura 3. Prueba de Inhibición con APB para la detección de KPC.

11.2.2 Pseudomonas aeruginosa.

Tabla 3. Antibióticos a teslear para P. aeruginosa.

En montajes manuales se puede ubicar CAZ junto a Imipenem a 2 cm y a

Piperacilina - Tazobactam -----

11.2.2.1 Pruebas adicionales para Pseudomonas aeruginosa

11.2.3 Acinetobacter spp.

Tabla 4. Antibióticos a testear en antibiograma para Acinetobacter.