MANUAL DE PRODUCCION DE PAPA CON SEMILLA SEXUAL 2. Produccién de Semilla SexualZ Fasciculo Practicas de producci6n de semilla sexual de papa R Feledn Objetivo de las Practicas Cesarrollar los pasos para |a produccién de semilla sexual de papa |. Siembra de parentales . Recoleccién, extraccién y almacenamiento de flores . Prueba de viabilidad de palen |. Emasculacion y polinizacién de flores de papa . Extraccion de semilla sexual de papa . Evaluacién de Ia calidad de la semilla sexual aoaens1. Siembra de Parentales oPase.2.4-966 Objetivo Cultivar ios clones identificados como progenitores, bajo condiciones controla- das en invernadero y en campo. Materiales 4. Inverradere 0 estacién con aquipo de luz controlada 2. Cones identificades como machos y herbras 3. Sustrato arena:musgo, 2:1 4. Fertilizantes: nitrégeno, fésforo y potasio 5. Macetas de 4 y 10 pulgadas de diémetra 6. Estocas de madera 7. Pabilo 8. Sistema de riego Pracedimiento En condiciones de invernadero, siembre los clones elegidos como machos y hembras en macetas de 4 pulgadas: ccloque las macetas en dress separadas. Coloque fos tubércules brotados en la mezcla de suelo, fertilizada de manera adecuada Fertilizacion de sustrato pare la siembra en macetas (para 100 kg de suelo): 100 g do Super fostato simple do calcio 54 a de Nitrato de amorio 60 g de Sulfato de potasio Alos 15 dias de la siembra cambie las plantulas a macetas de 10 pulgadas y liévelas al campo 0 a Ia estacién de produccién. Coléquelas sobre orifcios pre: parados previamente de manera que las macetas queden al ras del suelo, a una distancia de 30 cm entre macetas y a razon de 13 macetas por surco. En e| ‘campo, debidamente estaqueado, coloque el pabilo alrededor de las plantas en el surco para que éstas crezcan erguidas; de esta manera se evita que poste- riormente tengan contacto con el suelo y pueden contaminarse. En condiciones de campo, la siembra de parentales se realiza en parcelas 0 surcos de tamano variable. En un terreno bien preparado, abra los surcos donde se van @ sembrar tos progenitores feroninos distanciéndolos 1.50 m para facilitar las labores pos: teriores de polinizacién.identifque, mediante estaces y tarjetas, cada linea o parcela de cada prageni- or femenino y comience @ sembrar, Realice todas las labores y cuidados culturales det cultivo de papa. Pera favorecer el crecimiento evecto de las plantas madres, guielas usando ‘cutores® 0 estacas colocadas en los extremos de (os surcos unidos mediante cerdoles © pabilo, al que se sujetan las plantas, Pera Ia siembre de fos progenitores masculinos siembre surcos apareados con alta densidad de plentas, para favorecer una optima produccién de floras y po- len, dejando un surco sin sembrar para permitir los desplazamientos y la reco- leccion de flores. 2. Recoleccion de Flores, Extraccin y Almacenamiento del Polen Objetivo Recolectar las flores de los clanes identificadas como pragenitares masculinos: que estén praduciendo polen y extraerles el polen pars su uso inmediato o para su alimacenamiento bajo refrigeracion. Materiales |. Bolsas de papel . Lapiz Papel toalia Pinzas Capsulas de gelatine Vibrador a plas Frascos negros hermeticos Silica gel Refrigeradora a -5°C y a-12°C waorouaene Procedimienta Le recoleccian de las flores de los clones machos se realiza més 0 menos una semana despues de que empieza la florecidn; de esta manera se obtiene una Gentidad considerable de flores y por ende de poten. Las flores que se ven a recolectar deben tener mas de dos anteras abiertas. Las anteras abiertas se diferencian de las cerradas porque tienen el pore apical de color marrén claro,Recolecte fas flores una por una y separe los diferentes clones en boisas de papel. Tenge en cuenta las caracteristicas indicadas. Ei segundo paso de esta practica consiste en extreer el poten para su uso inmediato en el campo, o para su elmacenamiento en refrigeracién haste la proxima polinizaciOn, Proceda de la siguiente manera: Lieve las flores de los clones machos a la mesa de trabzjo en ol laboratorio. Voltee por completo los pétalos de cada flor y extraiga el pistilo con una pinze. Coloque el resto de las flore sobre papel toalla por 24 horas para que se se- quen; luego coloque la capsula de gelatina en un orficio hecho en un pedazo de espuma plastica para que se mantenge fija y el polen puede caer en ella al momento que s¢ golpeen las anteras de la flor con el vibredor: Dos golpes son suficientes para una flo Finalmente, para conservar ja viebilidad del polen recolectado que sera usado de inmediato, este debe ser almacenado de manera adecuada para realizar los cruzamiencos posteriores. Proceda ast Coloque las cépsulas de gelatine con el polen debidamente identificado en tos frascos que contienen slica gel y tapelos. Refrigere los frascos a -5°C por 3 horas y luego ~12°C. Sidese usar polen almacenaco trasiade el frasco de ~12%a ~8°C por 4 horas; luego dejelo dos nores a la temperatura del iaboretaria y, finalmente, al campo. 3. Prueba de Viabilidad del Polen Objetivo Determiner la viabiidad del poten recolectado en el campo, Esta prueaa es una evaluacién rapida. Si después de la prueba el polen est agto, se puede usar con toda confianza en el campo para realizar los cruza- mientos sabre las hembras escogides. Materiales 41, Potenciémetro 2. Incubador a 20°C 3. Microscopio simple de luz 4, Rotor con velocidad de una revolucién por minuto + Fare.2.4-96%. Acido bérico H,80, . Nitrate de calcio CaNOJ, + 44,0 . Sufate de magnesio MgSO, + 7 H,0 . Nitrato de patasio KNO, 8. Svcrosa 10. Agua destilada Procedimiento Pera evaluar a viabilidad del polen, usamos un medio de germingcién que consta de las siguentes soluciones «stock 4, 200 mg acido bérico H,80,/100 mi agua destiada 2. 600 mg nitrato de calcio CatNO.J, + 4 H,0/00 ml agua destilada 3, 400 mg sulfato de magnesio MgSO, + 7 H,0/700 mi agua destilada 4, 200 mg nitrato de patasio KNO, /100 mi agua destilada Guarde 1a solucién bajo refrigeracién, Preparacion del medio de germinacion de polen de papa En une fiola o en una probeta greduada agregue Io siguiente: a. 5 mi de cads una de las cuatro soluciones «stock» b. 20 g de sucrosa ©. Aproximadamente 60 mi de agua destilada . Tween 80, 0.4% Mezcle bien la solucidn y agregue agua destilada hasta campletar 100 ml Ajuste el pH a 5.5, Procet nto para evaluar la muestra de poten En un frasco de 2.5 ml agregue 0.5 mg de polen y 1 mide! medio de germinacién y mezcle bien. Luego coloque les frascas en el rotor a una velocidad de una revolucién por minuto e incube 3 20°C por dos horas. Transcurrido el tiempo saque los frascos, afiada a la mezcla una gota de azul de anilina y observe al microscopio inmediatamente. Para el efecto, coloque una gota de le muestra en un porta-objeto y tépela con un cubre-objeve evitands que se formen burbujas de aire; observe a un aumento de 200x. Cuente todos los granos de poten del ‘campo, luego tadas los granos de polen con tubo polinico, determine el porcen- taje y obtenga un promedio de 10 repeticiones.Si el porcentaje es mayor de 30%, el polen esta en estado Optimo para ir al campo. Si no se puede realizar la evaluacion al microscopio de inmediato, guarde los frascos bajo refrigeracidn. 4. Emasculacion y Polinizacion de Flores de Papa Objetivo Evitar la autopolinizacion de las flores en los progenitores femeninos. Polinizar tas flores de los progenitores femeninos para obtener bayas. Materiales 1. Estilete con punta curva 2. Polinizadores de acrilico 3. Muestra de polen 4. Espuma plastica Procedimiento La emasculacién consiste en extraer las anteras de la flor de papa para asegu- rarse de que no ocurra una autopolinizacién. Este proceso se realiza con el estilete de punta curva tratando.de no hacer girar las flores para evitar que se lesionen. Para efectuar la polinizaci6n coloque el polén recolectado de los progenitores masculinos en los polinizadores de acrilico, Ilévelos al campo y deposite el polen muy suavemente en el pistilo. Espere aproximadamente nueve semanas para cosechar las bayas. » * Fasc.2.4-96+ |5. Extraccién de Semilla Sexual de Papa * Fasc.2.4-96 8 Objetivo Obtener semilla limpia y en buena condicion. Materiales 1. Moledor de granos 2. Bandejas de plastico 3. Baldes de plastico 4. Coladores de matla fina Procedimiento Separe las bayas maduras del pedinculo y trittirelas en un moledor de granos al que previamente se le han quitada las cuchillas. Luego !avelas con agua corrien- te para separar la semilla del resto del fruto hasta que el agua salga completa- mente limpia. A continuacion desinfecte la semilla con una solucidn de lejia (clo- ra) al 0.5% y agua. Agite continuamente la solucién por 10 minutos. Finalmente lave con agua varias veces hasta que desaparezca el olor a cloro. En el siguiente paso, la semilla limpia y desinfectada se seca para que alcance un porcentaje de humedad adecuado para su almacenamiento y para que pierda su dormancia de la manera mas rapida y natural posible, procediendo de la manera siguiente: , Coloque fa semilla desinfectada en papel secante o papel filtra bien extendido, tratando de obtener una capa delgada de semilla para que el secado sea unifor- me. Seque la semilla a una temperatura controlada de 30°C por 24 horas. Al Cabo de ese tiempo la semilla tendra una humedad de mas 0 menos 7% que no es suficiente para su almacenamiento, de modo que deberé someterse a un segundo proceso de secado. Para esta segunda fase, use bolsas de pape! con 50 g de semilla cada una y acomddelas dentro de una Campana de vacio que contiene silica gel en una proporcion de dos volumenes de silica gel por un volu- men de semiila, durante mas 0 menos una semana, hasta que la humedad ilegue al 4.5%. El porcentaje de secado requerido no se alcanza en el mismo tiempo en todas las progenies. Finalmente, la semilla que ha alcanzado un contenido de humedad del 4.5% mas o menos el 0.5%, se guarda en sobres de papel aluminio herméticamente cerra- dos. Almacene los sobres a 30°C. Evalue mensualmente y cantrole el momento en que la dormancia empieze a perderse. CENTRO INTERNACIONAL DE LA PAPA (CaP)6. Evaluacién de la Calidad de la Semilla Sexual de Papa Objetivo Comprobar que la semilla esté en condiciones dptimas para germinar y verificar penodcamente si ha perdido la dormancia Materiales Incubador @ 27°C Invernedere con luces controladas Termohidrégrafo Plecas petri de 9 cm Papel ce filtro Whatman # 2 de 9 cm Frascos de vidrio de boca ancha . Muestreador . Escilete de punta curva 9, Hoja de carton (para contar ia semiliad 10. Agua desionizada 11. Bandejas de plastico 12, Suelo preparads 13. Surcadores de madera 14, Estacas pequenas de plastica 15. Hojes de evaluscién 16. Sobres de papel 17. Regadera Procedimiento ‘@. Muestreo: Coloque la semnilia en un frasco grande y agite el frasco hasta que la servilla esté bien mezclada: luego, con un muastreadar saque cuatro mues- tras y dividalas en cuatro submuestras. De cada grupo retire las semillas al ‘azar, una par una, es decir, sin escoger (método del pastel) En total debe abte- ner cinco muestras de 100 semilas cada une. 'b, Acondicionamiento: Consiste en hidratar la semilla por 24 horas a 22°C (tem. peratura cel leboratorio), dentro de uns cémara humeda cerrada hermética- mente, para que la humedad de la atmésiera llegue a la saturacion. c, Prueba de laborstorio: Coloque cuatro de !as cinco muescras de 100 semilas ‘en placas petri con papel Whetman # 2 de S.cm. Agregue § mi deagua desionizada yen las evaluaciones subsiguientes agregue agua segin el requerimiento. Tape @ incube @ 27°C usando diferentes zonas de! incubador para cada repeticion Evalue diariamente, contando y seperando la semilla germinada, Al octava dia pase todas las placas petri a 17°C y continue la evaluacién hasta el dia 14. wesc and. Prueba de bandejas: La prueba de almécigo se realiza en el invernadero, donde la temperature y la humedad del ambiente se controlan con un termohidrégrafo. Liene las bandejas con una mezcia de rusgo y arena en una proporcién 1:1 y fertilice adecuedamente. Fercilizacién del sustrato para le siembra en bancejas (para 100 kg de suelo) 200 g de Supe” simple 50 g de Nitrato de amonio 40 g de Sulfate de magnesia Lene las tandejas con el sustreto y con un surcador de madera divida los sur- cos. Luego siemibre 20 semilias a 1.5 cm de distancia y 1 cm de profundidad: Use un SUrco por cada tratamiento 0 progenie, Siembre las cinco bandejas cinco repeticiones completas al azan tape cuidadosamente los surcos y riegue suavemente en forma de llwia, tratando de ro golpear el suelo Evalde diariamente. Las plantulas de las semilas més vigorosas emergen mas 0 menos al tercer dia: cuente las plantulas que emergen en cada surca y a partir del désime dia slimine éstas. Estes pléntules se eliminan para evaluar la semilla de manera drastice y obtener el dato de la semilla que germina antes de los 10 das. Estas plantas tienen mayor posibilidad de supervivencia en el campa. Trans- curridos 17 dias de la siembra, haga un conteo final, corte las plantulas @ ras del suzlo y determine el peso fresco. Embolse por separada las pléntulas de los diferentes surcos y repeticiones y llevelas al horno 3 70°C por 24 horas. Deter rmine e! peso seco para obtener el porcentaje de materia seca A mayor canti- dad de materia seca, mejores la calidad de Ia semilla y, por lo tanto. las posibi- Jidades de subsistencia de esa semilla en el campo también son mayores.Los Manuales de Capacitacion consiituyen materales impresos de estuios para los profesonales involucrados en actividades de capacitacion desarrolledas por o! CIP estén constituidos por una serio de fasciculos susceptiblas 9 cor actuaizadhs. Copyrighted material