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Eduardo Ortigoza-Medrano1
Susceptibilidad in vitro de Daniel Ivn Arroyo-Espinosa2
Interna.
Hospital de Especialidades, Unidad Mdica de Alta
Especialidades del Centro Mdico Especialidad, Centro Mdico Nacional de Occidente,
Instituto Mexicano del Seguro Social (IMSS).
Nacional de Occidente
RESUMEN
Antecedentes: la administracin indiscriminada de los antifngicos ha
seleccionado cepas de Candida resistentes a los mismos.
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Medicina Interna de Mxico Volumen 30, Nm. 4, julio-agosto, 2014
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Ortigoza-Medrano E y col. Susceptibilidad de las especies de Candida
aislamiento de especies de Candida no albicans puede ser secundaria, en la que cepas suscep-
en las ltimas dcadas en infecciones fngicas tibles se transforman en resistentes debido al
invasoras. Se ha observado que las especies de contacto previo con el antimictico, este ltimo
Candida no albicans tienden a ser ms resistentes tipo de resistencia es el ms frecuente en la ac-
a los antifngicos.3 tualidad y se observa principalmente en cepas
de C. glabrata.5
Existen dos mecanismos por los que Candida spp
puede adquirir resistencia a un azol. El primero Conocer el patrn de susceptibilidad de las cepas
es por mutaciones moleculares de la enzima de Candida a los antifngicos se haba dificulta-
diana del antifngico y el segundo por la for- do por la falta de una adecuada estandarizacin
macin de barreras de permeabilidad o sistemas de las tcnicas de susceptibilidad hasta la ela-
de bombeo del antifngico fuera de la clula, lo boracin y publicacin del documento M27-A2
que le impide alcanzar concentraciones eficaces por parte del Clinical Laboratory Standard Ins-
en el sitio de accin.4 titute (CLSI) que actualmente es el mtodo de
referencia para determinar la susceptibilidad
El gnero Candida es un agente cosmopolita y antifngica in vitro de Candida spp.8 Hoy da
forma parte de la flora del hombre, colonizando se han desarrollado otras alternativas, como
sus mucosas.5 las tcnicas basadas en mtodos colorimtricos
comerciales (Sensititre YeastOne, Fungitest y
En el decenio de 1980, Candida albicans era ASTY) y tcnicas basadas en la difusin en agar,
la especie que causaba mayor nmero de in- como la epsilometra E-test y el uso de discos
fecciones fngicas nosocomiales, seguida por que se han evaluado ampliamente en levaduras
otras especies no albicans.6 En los ltimos aos con los antimicticos de prescripcin comn.7
se han generado cambios epidemiolgicos, en-
tre los que destacan la aparicin de cepas que En la actualidad en el laboratorio del Hospital
han desarrollado resistencia secundaria a los de Especialidades del Centro Mdico Nacional
antifngicos y la sustitucin de algunas especies de Occidente del IMSS se utiliza la tcnica
susceptibles por otras con resistencia intrnseca.7 colorimtrica YestOne basada en el mtodo de
referencia M27-A2, que incorpora un indicador
Hasta hace unos aos se consideraba que los redox (azul alamar) en el medio de cultivo que
hongos eran, por lo general, susceptibles a los cambia de color cuando existe crecimiento
antifngicos; con los aos se descubri que C. fngico en el pocillo, con lectura visual del
krusei es intrnsecamente resistente a fluconazol mismo; esta tcnica tiene la ventaja de ser ms
y la susceptibilidad de C. glabrata a los azoles objetiva, porque los pocillos con crecimiento
es muy variable.2 cambian a color rosa, mientras que cuando
no hay crecimiento, los pocillos se mantienen
La resistencia a los antifngicos puede clasi- azules.9 El mtodo muestra buena correlacin
ficarse como clnica o in vitro, la primera es (70-100%) con el mtodo de referencia M27-
consecuencia principalmente de la baja biodis- A2, as como buena reproducibilidad; por ello,
ponibilidad del frmaco o del severo grado de la Direccin de Alimentos y Frmacos de Es-
inmunodepresin del paciente. La resistencia in tados Unidos (FDA) acept este mtodo como
vitro puede ser primaria, en la que la levadura es buena alternativa al mtodo de referencia para
naturalmente resistente, el mejor ejemplo es la estudios de sensibilidad in vitro de Candida spp
resistencia de C. krusei al fluconazol. Tambin a fluconazol, itraconazol y 5-fluorocitosina.10
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Un estudio demostr muy buena correlacin de Occidente del IMSS. Los criterios de inclu-
(> 90%) y reproducibilidad con el mtodo de sin fueron: pacientes mayores de 18 aos,
referencia para los nuevos antifngicos (vorico- de cualquier gnero y servicio, en quienes se
nazol, posaconazol, ravuconazol) y es capaz de tom cultivo de aspirado bronquial o hemocul-
detectar las cepas con sensibilidad disminuida tivo, con crecimiento de cualquier especie del
a caspofungina.11 El mtodo no es til para la gnero Candida y que se hubiera determinado
deteccin de cepas resistentes a la anfotericina susceptibilidad a seis antifngicos (anfoterici-
B, probablemente por la utilizacin de un medio na B, fluconazol, voriconazol, ketoconazol,
lquido.9 5-fluorocitosina e itraconazol). Los criterios
de exclusin fueron: cultivos con crecimiento
En algunos pases de Europa se ha estudiado la de Candida provenientes de expectoracin o
susceptibilidad de Candida spp a los antifn- cualquier otro fluido corporal. Los criterios
gicos.12 Tambin se han realizado estudios de de eliminacin fueron: cultivos de aspirado
susceptibilidad a los antifngicos en Amrica La- bronquial o hemocultivos con crecimiento de
tina2,5,7,8,13-20 en algunos pases como Argentina,15 Candida spp a los que por cualquier motivo no se
Chile,5,8,13 Colombia,2,7,16 Cuba17 y Venezuela.19 les determin susceptibilidad a los antifngicos.
Se realiz un muestreo no probabilstico de casos
En Mxico tambin se han desarrollado algunos consecutivos durante el periodo mencionado.
estudios de susceptibilidad de Candida spp a los La recoleccin de datos se realiz a travs de
antifngicos, todos ellos en hospitales de tercer la bsqueda en los registros del laboratorio del
nivel, como el Hospital General Dr. Manuel Gea citado hospital; las variables incluyeron datos
Gonzlez,14 el Centro Mdico Nacional Siglo XXI demogrficos de los pacientes, tipo de muestra,
del IMSS18 y el Hospital General de Mxico.20 especie identificada, concentracin inhibitoria
mnima (CIM) frente a los diferentes antifngicos
El estudio de la sensibilidad in vitro de Candida y categora de susceptibilidad. Las variables
a los antifngicos ofrece la posibilidad de contar cuantitativas se expresaron con media, des-
con informacin al momento de seleccionar un viacin estndar, mediana y rango intercuartil,
antimictico y elegir as el ms adecuado para segn se requiri. Las variables cualitativas se
el tratamiento de las infecciones fngicas.12 En expresaron con proporciones. Se recurri a m-
Mxico, son muy escasos los estudios que se todos de estadstica descriptiva para determinar
han publicado para conocer la susceptibilidad la frecuencia en porcentaje de aislamiento de
de Candida a los antifngicos. Este estudio fue las diferentes especies de Candida, se realiz un
el primero en este tema efectuado en el Hospital anlisis individual por especie para determinar
de Especialidades del Centro Mdico Nacional el porcentaje de sensibilidad a cada uno de los
de Occidente y su objetivo fue describir la sus- seis antifngicos estudiados. Los resultados se
ceptibilidad in vitro de las diferentes especies de comunican en cuadros de datos.
Candida a los antifngicos.
Las muestras incluidas en el estudio se proce-
MATERIAL Y MTODO saron de la siguiente manera: los cultivos de
aspirado bronquial y hemocultivos con creci-
Estudio descriptivo, no experimental, obser- miento de Candida spp se procesaron para la
vacional, transversal y retrospectivo efectuado identificacin de especie a partir de cultivos
de enero a diciembre de 2012 en el Hospital puros en agar Sabouraud por el mtodo cromo-
de Especialidades del Centro Mdico Nacional gnico CHROMagar Candida y por la tcnica
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automatizada de identificacin bioqumica por Cuadro 1. Puntos de corte para susceptibilidad a los anti-
fngicos de Candida spp segn el documento M27-A2 del
microdilucin MicroScan Yeast Identification
Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI M27-S3)22
Panel. Para determinar la susceptibilidad a los
antifngicos se utiliz el mtodo basado en colo- Antifngico Sensible Sensibilidad Resistente
rimetra Sensititre Alamar YeastOne, se utilizaron CIM (g/mL) dosis CIM
dependiente (g/mL)
placas con azul alamar incorporado con antifn- CIM (g/mL)*
gicos deshidratados. El control de crecimiento
estuvo incluido en el primer pocillo de la primera Anfotericina B 1 - 2
Fluconazol 8 16-32 64
fila. Se tomaron con el asa microbiolgica cinco
Voriconazol 1 2.0 4.0
colonias de Candida spp, se resuspendieron en Ketoconazol 0.125 0.25-0.5 1.0
un tubo de agua destilada, se agitaron y calibra- 5-fluorocitosina 4.0 8.0-16.0* 32
ron con un espectrofotmetro. Se inocularon 20 Itraconazol 0.125 0.25-0.5 1.0
L de esta suspensin a un tubo con 11 mL de
*En el caso de la 5-fluorocitosina, los valores mencionados
medio de cultivo RPMI 1,640. El panel con los en la fila sensibilidad dosis dependiente pertenecen a sen-
antifngicos deshidratados se rehidrat colocan- sibilidad intermedia.22
do 100 L de la suspensin del inculo en cada CIM: concentracin inhibitoria mnima.
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Cuadro 2. Susceptibilidad de las diferentes especies de resistencia al ketoconazol fue C. krusei (28.6%),
Candida a la anfotericina B
seguida por C. glabrata (23.8%). Cuadro 5
Susceptibilidad
Sensibles Sensibilidad Resistentes Con respecto a la 5-fluorocitosina lo ms lla-
dosis dependiente mativo fue que 50% de los aislamientos de
n % n % n % C. guilliermondii tuvieron sensibilidad dosis
C. albicans 78 93.9 0 0 5 6.1 dependiente (Cuadro 6). El itraconazol fue el
C. tropicalis 39 100 0 0 0 0 antifngico con mayor porcentaje de especies
C. glabrata 20 95.2 0 0 1 4.8 resistentes, C. glabrata fue la especie con mayor
C. parapsilosis 7 100 0 0 0 0 porcentaje de resistencia (38.1%) seguida por C.
C. krusei 7 100 0 0 0 0 krusei (28.6%). Cuadro 7
C. guilliermondii 2 100 0 0 0 0
C. kefyr 0 0 0 0 1 100
DISCUSIN
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Cuadro 7. Susceptibilidad de las diferentes especies de embargo, hay que recordar que es una especie
Candida a itraconazol
con resistencia intrnseca independientemente
Especies Susceptibilidad de la concentracim inhibitoria mnima. Durn
Sensibles Sensibilidad dosis Resistentes y colaboradores6 reportaron resistencia a itraco-
dependiente nazol en 80% de los aislamientos de C. glabrata,
n % n % n %
en nuestro estudio se encontr 32.4% de resis-
C. albicans 64 77.1 12 14.5 7 8.4 tencia en esta especie. En el estudio de Porte y
C. tropicalis 12 30.8 25 64.1 2 5.1 colaboradores8 C. glabrata mostr sensibilidad
C. glabrata 2 9.5 11 52.4 8 38.1
en 100% de los aislamientos a la anfotericina B,
C. parapsilosis 4 57.1 3 42.9 0 0
C. krusei 3 28.6 2 42.8 2 28.6
mientras en nuestro estudio se report 4.8% de
C. guilliermondii 2 100 0 0 0 0
resistencia a este antifngico. Una de las ventajas
C. kefyr 1 100 0 0 0 0 de nuestro ensayo es que la mayor parte de los
estudios realizados de la susceptibilidad de Can-
que tienen menor porcentaje de resistencia las dida a los antifngicos evalan de uno a cuatro
distintas especies de Candida; sin embargo, se antifngicos, mientras nosotros evaluamos seis
encontraron algunos aislamientos de Candida antifngicos, asimismo, nuestro estudio incluy
resistentes a estos antifngicos, los mayores siete especies y el mtodo con el que se evalu
problemas de resistencia los encontramos con la susceptibilidad a los antifngicos (Sensititre
itraconazol con porcentajes ms altos de resis- Alamar YeastOne) ha demostrado buena co-
tencia con C. glabrata y C. krusei. rrelacin con el mtodo de referencia M27-A2
para estudios de sensibilidad in vitro de Candida
Resultados similares a los nuestros los reportaron spp a fluconazol, itraconazol, 5-fluorocitosina y
De Bedout y su grupo,2 quienes encontraron voriconazol (> 90%).10
92.1% de sensibilidad en aislamientos de C.
albicans al fluconazol, as como resultados de Una de las debilidades de nuestro estudio es
sensibilidad muy similares a los reportados por que, al ser retrospectivo, no permite responder
nosotros de C. tropicalis y C. krusei. Carrillo y co- a una hiptesis, es descriptivo y no identifica la
laboradores12 comunicaron resultados similares resistencia de acuerdo con el tipo de cepa, slo
a los nuestros, en su estudio todas las cepas de de acuerdo con la especie. Otra debilidad es que
C. guilliermondii fueron sensibles a los derivados el mtodo por colorimetra no es muy til para la
azlicos, destacaron los elevados porcentajes de deteccin de especies resistentes a anfotericina
sensibilidad obtenidos con C. parapsilosis y C. B, por la utilizacin de un medio lquido.9
albicans a estos frmacos.
CONCLUSIN
A diferencia del estudio realizado por Durn y
colaboradores,6 donde no se encontr resisten- Aunque los resultados de resistencia in vitro no
cia a la anfotericina B, en nuestro estudio s se siempre se correlacionan totalmente con las ob-
encontr resistencia a este antimictico en C. servaciones clnicas, los datos obtenidos en este
kefyr (100%), C. albicans (6.1%) y C. glabrata trabajo muestran la existencia de este fenmeno en
(4.8%); en ese mismo estudio y en el de Fer- pacientes del Hospital de Especialidades del Centro
nndez y su grupo17 100% de los aislamientos Mdico Nacional de Occidente; lo anterior resalta
de C. krusei fueron resistentes a fluconazol; la importancia de realizar estudios de susceptibi-
nosotros encontramos este problema en slo lidad en pacientes con infecciones por Candida y
28.6% de los aislamientos de esta especie; sin vigilar el fenmeno de resistencia de este hongo.
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