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Gram (II)
Gram (II)
OBJETIVOS:
Material necesario:
1.- INTRODUCCIN
Pared Gram +
capa densa y uniforme de 200 a 800 A)
cidos teicoicos
polisacridos
Pared Gram -
lipopolisacridos
lipoprotenas
protenas
GRAM + GRAM -
1) Cristal Clulas color violeta Clulas color violeta
violeta
2) Lugol Se forma el complejo CV-I. Se forma el complejo CV-I.
solucin Las clulas continan Las clulas continan
iodada teidas de color violeta. teidas de color violeta.
3) Alcohol Se deshidratan las paredes Eliminacin por extraccin
celulares. Se contraen los de grasas de las paredes
poros. Disminuye la celulares. Aumenta la
permeabilidad. El complejo porosidad. El complejo CV-I
CV-I no sale de las clulas se separa de la clula.
que continan teidas de
color violeta.
4) Safranina Clulas no decoloradas; Clulas decoloradas; se
quedan teidas de color tien de color rosado.
violeta.
2. TINCIN DE GRAM
2.1 Mtodo
2.1.1 Extensin: En un porta bien limpio (con alcohol, papel de
filtro y flameado) se coloca una gota de agua destilada a la que.
con el asa de siembra, previamente esterilizada a la llama, se
lleva una pequea cantidad de suspensin de bacterias o, en su
caso, de una colonia.
Con el asa se extiende la gota y las bacterias sobre el porta y
se fija la extensin por el calor, calentando suavemente a la
llama del mechero hasta que se seque.
2.1.2 Coloracin:
a) 1 minuto en cristal violeta de Hucker (colorante inicial)
b) se lava con agua destilada
c) 1 minuto en lugol (mordiente)
d) se decolora con alcohol de 95 (decolorante)
e) se lava con agua destilada
f) 1 minuto en fucsina bsica (colorante de contraste)
g) se lava con agua corriente
h) se seca suavemente y sin frotar con papel de filtro
Una vez que la preparacin est totalmente seca, poner una
gota muy pequea de aceite de cedro y observar al microscopio
con el objetivo de inmersin.
2.2. Observacin
Debe utilizarse el
objetivo de
inmersin.
Se coloca una
gota de aceite de
cedro sobre la
preparacin. Se
enfoca,
preferentemente,
con el
micromtrico.
Despus de
utilizar el
objetivo de inmersin debe limpiarse con xilol