Universidad de Concepcin

Facultad de Farmacia
Departamento de Anlisis Instrumental

Informe de Laboratorio N 1

ABSORCIOMETRA 1
Rango visible

Integrantes : Alejandro Aguila Garrido

Giselle Medina Zurita
Patricia Suarez Riquelme

Asignatura : Anlisis Instrumental

Profesora : Dra. Carola Vergara R.

Ayudantes :

Fecha Entrega Informe : 27-08-2017

 Objetivos
1) Observar el espectro visible.
2) Conocer los fundamentos y las caractersticas de un espectrofotmetro
simple y de un fotmetro de filtro.
3) Estudiar las caractersticas de absorcin de un sitema coloreado simple.
4) Aplicaciones cuantitativas.

Resumen

El objetivo del prctico corresponde al clculo de la concentracin de una solucin de KMnO4 de

concentracin desconocida. Para esto, se emplearn absorcimetros y fotmetros y se extraern
los datos necesarios para determinar la concentracin de la muestra problema.
Los mtodos de clculo a utilizar fueron el mtodo absoluto, mtodo del factor e interpolacin de
la curva de calibracin. La concentracin vara segn el mtodo y el instrumento utilizado pero
esta se encuentra entre el rango de 4,84 10-4 [M] y 5,86 10-4 [M].

Introduccin

La Absorciometra se basa principalmente en la capacidad de los tomos y molculas en poder

captar Radiacin electromagntica (REM) para as poder ser apreciados (en este caso) en el espectro
del visible (320-780[nm]). Tal absorcin va regida por distintos factores que la influyen directamente
como es la longitud de onda (), la naturaleza del compuesto que absorbe, la concentracin de la
especie molecular y el camino ptico que debe recorrer la REM.
Tal absorcin va regida por la Ley de Lambert-Beer, la cual es una ley que relacin la absorcin de la
luz (REM) con las propiedades del compuesto atravesado por ella. Esta ley aade el concepto de
Absorbancia, donde la absorbancia se ve expresado como:

= ( )
Donde:
A: Absorbancia de la REM por el compuesto.
a: Coeficiente de absortividad, expresado en [cm2/mg].
: Coeficiente de absortividad molar, expresado en [cm2/mmol].
b: Camino ptico, expresado en [cm].
c: Concentracin de la muestra, expresada en [M] [g/L].

Tales medidas absorciomtricas se pueden trabajar con un Absorcimetro, que son instrumentos
que se basan en la medicin de la potencia radiante de una especia atmica. Dos de estos
instrumentos son el Espectrofotmetro y el Fotocolormetro. Por norma estos instrumentos constan
de 7 partes en comn, diferencindose en los seleccionadores de longitud de onda. Estas partes son
la fuente luminosa (lmpara), un control de intensidad lumnica, un seleccionador de longitud de
onda (Filtro de absorcin para el fotocolormetro y Monocromador para el Espectrofotmetro), un
portamuestra (cubeta), un detector, un amplificador y un visualizador de datos entregados.
Para la aplicacin de tal tcnica (Anlisis Cuantitativo) se realizara la bsqueda de la concentracin
de una muestra problema (MP) por interpolacin de su absorbancia medida en las curvas de
calibracin. Para ello es necesario conocer la concentracin de un estndar a la MP y generar
soluciones de concentraciones conocidas para as con ellas generar un espectrograma con el
Espectrofotmetro, determinar las curvas de calibracin en ambos instrumentos y comprobar la
veracidad de la Ley de Lambert-Beer (posible linealidad en la recta) en tales datos graficados en las
curvas de calibracin. Es as como es posible determinar la concentracin de la MP y finalmente se
comparar con las concentraciones obtenidas de la MP por el mtodo del factor y el mtodo
absoluto.

Parte Experimental

Materiales:
-
-
-
-
-

Para el Espectrofotmetro: Se enciende el instrumento con el interruptor de poder y se

deja estabilizar por alrededor de 10 minutos. Posteriormente se selecciona la longitud de
onda deseada. Se deja estabilizar por 10 minutos. Pasado este tiempo se levanta la tapa
del compartimiento de cubetas y se ajusta a 0 %T con el mando de ajuste. Se coloca el
blanco y se cierra la tapa. Luego de llevar la lectura 100% T con el mando, se coloca la
muestra a analizar y se lee el %T a dos distintas a modo de comparacin.

La muestra para la medicin cuantitativa, debe estar cerca de la absorbancia de mnimo

error, por lo tanto, si se difiere mucho de este valor, es necesario diluir la muestra. Es
importante apuntar que cada vez que se cambie la longitud de onda, es necesario calibrar
el instrumento nuevamente por medio del blanco.

Para el Fotocolormetro: Se enciende el instrumento y se escoge un filtro adecuado, el

modo %T y se deja estabilizar por 15 minutos. Pasado el tiempo, con una cubeta negra
se calibra el instrumento presionando la tecla Calibrate. Luego se reemplaza la cubeta
negra por la del blanco y se Calibra la lectura al 100%T con la misma tecla anterior. Se
reemplaza el blanco y se lee la muestra a dos filtros distintos a modo de comparacin.
I) Estudio de un sistema coloreado empleando un espectrofotmetro.
Espectrograma de KMnO4
- Instrumento: Espectrofotmetro Spectronic 20
- Modelo y numero de serie: spectronic 20, n 0308C5
- Concentracin del estndar de KMnO4: 2,2 10-3 [M]
- Longitud de mxima absorcin (teorica):
- Ceficiente de absortividad molar (teorico): 2300 cm^2/mmol
- Coeficiente de absortividad (teorico):
- Espesor de la cubeta: 1 cm
- Absorbancia considerada: 0.8
- Disolvente: agua destilada
- Concentracin de la solucin para el espectrograma:
-
Tabla N 1: Tabulacin de datos para espectrograma

(nm) %T A (calculada)

600 75 0.125

580 49 0.310

560 26.5 0.577

540 16 0.796

530 16 0.796

525 16 0.796

520 17.5 0.757

515 20.5 0.68

510 23 0.638

500 29.5 0.530

490 40 0.398

480 52 0.284

460 73 0.137

440 85 0.071

420 88.5 0.053

400 82 0.086
Grfico N 1: absorbancia vs

Grfico de Esectrograma %T en funcin de

0.900
0.800
0.700
0.600
0.500
%T

0.400
0.300
0.200
0.100
0.000
350 400 450 500 550 600 650
Longitud de onda (nm)

Grfico N 2: %T versus

Grfico de Espectrograma Absorbancia en

funcin de
100

80

60
A

40

20

0
350 400 450 500 550 600 650
Longitud de onda (nm)

Longitud de onda de mxima absorcin (T): 525 [nm]

Coeficiente de absortividad molar, (practico): [cm2mmol-1]
coeficiente de absortividad, a (practico):
 II) Anlisis cuantitativo en el espectrofotmetro, curva de calibracin

Longitud de onda de trabajo: 525 [nm]

Disolucin del patrn:
Disolvente: agua destilada:
Coeficiente de absortividad molar practico:
Espesor de la cubeta: 1 [cm]
Concentracin:

Tabla N 2: Datos para verificacin del cumplimiento de la Ley de Lambert-Beer en

Espectrofotmetro

A Concentracin Volumen Volumen Concentracin %T A

Terica Terica [M] de Patrn del Patrn Real [M]
Requerido Tomado [cm2/
mmol]

0,20 8,5E-05 0,95 0,9 8,1E-05 67 0,17 2138

0,40 1,7 E-04 1,89 1,9 1,7E-04 39 0,41 2380

0,60 2,6E-04 2,84 2,8 2,5E-04 26 0,59 2311

0,80 3,4E-04 3,78 3,7 3,3E-04 18 0,74 2227

1,00 4,3E-04 4,73 4,7 4,2E-04 12 0,92 2167

1,20 5,1E-04 5,67 5,6 5,1E-04 8,5 1,07 2115

Curva de Calibracin: Absorbancia vs

Concentracin Real
1.2
y = 2128.9x + 0.0188
1 R = 0.9968

0.8
Absorbancia

0.6

0.4

0.2

0
0 0.0001 0.0002 0.0003 0.0004 0.0005 0.0006
Concentracin Real [M]
 Tabla N 3: transmitancia a longitud de onda de 420, alejada de la ley de Lambert- Beer (??)

%T A

93

Grafico N3: absorbancia frente

 III) Anlisis cuantitativo en fotocolormetro. Curva de calibracin.

Instrumento:
Numero de serie:
nominal del filtro:
espesor de la cubeta: 1 [cm]:
disolvente: agua destilada

Tabla 5: Lecturas instrumentales en espectrofotmetro cuando = 520 [nm]

Concentracin Real % Transmitancia Absorbancia a = 520 [nm]

[M]
[cm2/mmol].

8,5E-05 67,3 0,172 2114

1,7E-04 41,3 0,384 2236

2,6E-04 29,1 0,536 2118

3,4E-04 21,2 0,674 2014

4,3E-04 13,6 0,866 2039

5,1E-04 9,7 1,013 2001

Grafico N: absorbancia frente a

Curva de Calibracin a = 520 [nm]: Absorbancia vs

Concentracin Real
1.2
y = 1992.8x + 0.0164
1 R = 0.9982

0.8
Absorbancia

0.6

0.4

0.2

0
0 0.0001 0.0002 0.0003 0.0004 0.0005 0.0006
Concentracin real [M]
 Tabla 6: Lecturas instrumentales en espectrofotmetro cuando = 430 [nm]

Concentracin Real % Transmitancia Absorbancia a = 430 [nm]

[M]
[cm2/mmol].

8,5E-05 83,7 0,077 950

1,7E-04 71,6 0,145 845

2,6E-04 65,3 0,185 731

3,4E-04 61,4 0,212 633

4,3E-04 55,2 0,258 607

5,1E-04 51,4 0,289 571

Grfico N 3:

Curva de Calibracin a = 430 [nm]:

Absorbancia vs Concentracin Real

0.35
0.3 y = 547.17x + 0.0281
R = 0.9686
0.25
Absorbancia

0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 0.0001 0.0002 0.0003 0.0004 0.0005 0.0006
Concentracin Real [M]
Ejemplos de Clculos:

Parte I.

1.- Determinacin de la Concentracin para el Espectrograma.

=

=

0,8
=
2300 1

= 3,48 04

2.- Determinacin de la Absorbancia en el Espectrograma a partir de la Transmitancia. (Para el

dato N6; =525 nm).

A= T% = 2-log (16)
A= 0,796

3.- Calculo del Volumen Requerido.

V1 x C1= V2 x C2
25 ml x 3,42E-04 M= V2 x 2,26E-03 M
V2= 3,7 ml

(El volumen a utilizar es 3,7 ml)

4.- Determinacin de la Concentracin Real de la Solucin.

V1 x C1= V2 x C2
25 ml x C1= 3,7 ml x 2,4E-03
C1= 3,34E-04 M
5.- Determinacin del Coeficiente de Absortividad Molar. (Para el dato N6; =530 nm)

() =

0,796
=
1 3,48 04

2
= 2383

6.- Determinacin del Coeficiente de Absortividad.

() =

2383
=
158
2
= 15,2

Parte II. Curva de calibracin

1.- Determinacin de la Concentracin Terica (M). (Para el dato N2; A= 0,4)

=

0,4
= 1
2381
C= 1,68x10-4 M

2.- Calculo Volumen del Patrn Requerido.

V1 x C1= V2 x C2
25 ml x 1,68E-04 M= V2 x 2,4E-03 M
V= 1,75 ml

(El volumen a utilizar es 1,8 ml)

3.- Determinacin de la Concentracin de la Solucin.

V1 x C1= V2 x C2
25 ml x C1= 1,80 ml x 2,4E-03 M
C1= 1,73E-04 M

4.- Calculo de la Absorbancia a partir de la Transmitancia leda. (Para el dato N2; A= 0,4)

A= 2-log (%T)
A= 2-log (40)
A= 0,39

5.- Determinacin del Coeficiente de Absortividad Molar. (Para el dato N2; A= 0,4)

=

0,39
=
1,73 04

2
= 2254

Parte III. Resultados Cuantitativos. (Ejemplo Curva de Calibracin de Espectrofotmetro)

Factor de Dilucin= 1:5 5

%T= 26
A M.P= 0,585

1.- Mtodo del Factor.

= . (5)

0,585 2,49 04
= 5
0,57
= 1,28 03

2.- Mtodo Absoluto (LLB).

=

= . (5)

0,585
= 5
2383
= 1,23 03

3.- Mtodo Curva de Calibracin.

=
0,585 = 2326
= 2,52 04 5
= 1,26 03

4.- Conversin de Concentracin M a mg/L. (Ejemplo Curva de Calibracin)

= 1,26 03 158 1000


= 199,08

Discusin y Anlisis de resultados

Terminado el Trabajo Prctico y planteado los resultados finales es posible comprender como poder
determinar la concentracin de una muestra problema (MP) por medio de los dos instrumentos
utilizados en esta experiencia; el Espectrofotmetro Spectronic 20 y el Fotocolormetro Jenwey.
Para la determinacin de la concentracin de la MP fue necesario realizar medidas absorciomtricas
de antemano para as poder crear una curva de calibrado (propia de cada instrumento) y as poder
verificar que se cumpliese la ley de Lambert-Beer.
En el laboratorio y con el espectrofotmetro se pudo obtener los datos necesarios para poder crear
la curva de calibrado (Absorbancia experimental vs Concentracin) y as poder determinar el valor
del coeficiente de absortividad (); dado a que el valor de este coeficiente es igual a la pendiente de
la curva en el grafico (m= e*b) con un espesor ptico (b) de 1 cm. Con el coeficiente de absortividad
prctico es posible determinar por interpolacin el valor de la concentracin de la MP. A su vez,
tambin fue posible determinar el valor de la concentracin de la MP por medio de otros 2 mtodos;
el mtodo absoluto y el mtodo del factor. Comparndolos es posible determinar lo siguiente:
 Concentraciones Muestra Problema (Espectrofotmetro):

Mtodo del Factor. Mtodo Absoluto. Mtodo Curva de Calibracin.

1,28E-03 [M] 1,23E-03 [M] 1,26E-03 [M]

Debido a que el valor de se obtienen como un valor promedio entre los valores de varias
soluciones, el mtodo de la cura de calibrado es la mejor manera de determinar tal concentracin
de la MP.
Con el Fotocolormetro, fue posible obtener la concentracin de la MP por medio de la interpolacin
de la concentracin con la absorbancia de la MP en la curva de calibrado (A vs C) y descifrando el
valor del coeficiente de absortividad molar () como la pendiente de la curva. Es posible comparar
los coeficientes de absortividad molar de la longitud de onda de trabajo donde se presenta una
cercana a la mxima absorbancia ( = 520) y de una longitud de onda alejada ( = 580),
obtenindose los siguientes resultados:

Coeficientes de Absortividad Molar () (Fotocolormetro):

= 520 = 580

1897 601

Si comparamos los datos de los coeficientes de absortividad molar y el entregado en el atlas en el

laboratorio es posible darnos cuenta que el ms cercano al valor de la Terica del KMnO 4 a su
longitud de onda mxima (=2300 [cm2/mmol]) es el de la = 520. Por lo que se puede concluir que
es importante trabajar a la longitud de onda adecuada, o por ende ms cercana a la terica.
Finalmente, en cuanto a los dos instrumentos utilizados en el laboratorio, podemos decir que el
valor del coeficiente de absortividad molar del Fotocolormetro se aleja ms del valor de terico
del atlas que si lo comparamos con el del espectrofotmetro.

con Espectrofotmetro. con Fotocolormetro. Terico.

2326 [cm2/mmol] 1897 [cm2/mmol] 2300,0 [cm2/mmol]

Es as como podemos concluir que utilizar un instrumento como el espectrofotmetro es mucho

ms exacto que el uso de un fotocolormetro, esto debido a que el espectrofotmetro en s nos
permite de antemano poder construir un espectrograma y as poder determinar la longitud de onda
mxima; siendo esto no posible con un fotocolormetro, que es necesario adecuarse a un filtro de
longitud de onda cercana al ya conocido previamente, debido a que posee un limitado barrido de
longitudes de onda.
Es importante destacar que como toda experiencia de laboratorio lleva de por s un margen de error;
los valores que se vieron afectados por esto, si los comparamos con los datos empricos, los
podemos atribuir a que, en primer lugar, las condiciones experimentales de trabajo no son las
mismas (temperatura, presin, instrumentos). Tambin cuando se determinan las concentraciones
de diferentes analitos, debemos tomar en cuenta la precisin del resultado, con respecto al
analizador; ya que este puede incurrir en cientos errores mecnicos, como mal enrase del matraz,
tomar una alcuota inexacta, entre otros.