INTRODUCCIN A LOS MTODOS ESPECTROSCPICOS

ENERGIA RADIANTE

La radiacin electromagntica es una forma de energa radiante que posee una naturaleza
doble:

1. Como funcin de onda con la cual estn relacionados los mtodos de reflexin, refraccin
e interferencia constructiva y destructiva.
2. Como pequeas partculas de energa llamadas fotones, que integran el espectro
electromagntico con radiaciones de diferente energa y longitud de onda.

Propiedades de onda.

Una onda electromagntica, como su nombre lo indica, est formada por un componente
elctrico y uno magntico, que oscilan en planos perpendiculares entre s y perpendiculares a
la direccin de propagacin de la onda. (Figura 1).

Direccin de la propagacin.

Figura 1. Movimiento ondulatorio de la luz.

Las propiedades de onda estn relacionadas con la velocidad de la luz mediante la expresin:

c = = 3 X 10 10
cm/s

= longitud de onda, es la distancia entre dos puntos correspondientes en la onda (Fig. 1).
= frecuencia, que es el nmero de ondas que pasa por un punto en la unidad de tiempo, o sea,
en un segundo.
 El Anlisis Instrumental

Unidades de medicin en espectroscopa.

Las unidades que se emplean en espectroscopa son:

Longitud de onda ; se expresa en centmetros y subdivisiones, las cuales son:

Amstrongs: 10-8 cm
Nanmetros : 10-7 cm
Micrmetros: 10-4 cm

Frecuencia.
La unidad de frecuencia en ciclos por segundo es el Hertz, o bien 1/ = =cm-1, llamada
nmero de onda.

EL ESPECTRO ELECTROMAGNETICO

Una gran parte de los mtodos analticos, estn basados en la interaccin de la energa
radiante con la materia. El ejemplo ms obvio de RADIACIONES
ELECTROMAGNETICAS es la luz (radiacin electromagntica visible) y ocupa slo una
pequea regin en un espectro de radiacin electromagntica.

Las ondas infrarrojas, Rayos X, ondas de radio, son clasificadas como radiacin
electromagntica y consiste en una seal simultnea alterna; elctrica y magntica.

Cada uno de estos tipos de radiacin, tiene una cantidad de energa diferente. La
clasificacin de la radiacin, de acuerdo a su energa nos da el espectro electromagntico. La
clsica descripcin de radiacin electromagntica nos dice que sta es continua y tiene una
onda sinusoidal mvil.

La onda mvil de la radiacin electromagntica puede ser descrita en trminos de

LONGITUD DE ONDA Y FRECUENCIA. La Longitud de Onda () de la radiacin es:

Longitud de Onda, es la distancia entre dos sucesivos mximos o mnimos de la onda

mvil.
Frecuencia, es el nmero de ciclos que pasan por un punto dado en segundo.

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 El Anlisis Instrumental

La Longitud de Onda y la Frecuencia estn relacionados de acuerdo a la siguiente

ecuacin:

C
= --------- = C

C Velocidad de la luz (3.0 X 10-10 cm/seg)

Nmero de Onda

A continuacin se encuentra una Nomenclatura de los trminos ms usuales.

NOMENCLATURA

= Longitud de Onda (CM) ()

= Nmero de onda (CM-1)
= 1/ (CM-1)
C = Velocidad de la luz = 3X10 10 (cm/seg)
= /C
= Frecuencia S-1 (Ciclos / seg )
1 m = 10-4 CM = 10 000 A
1 nm = 10-9 CM
1 A = 10-8 CM
%T = Por ciento de transmitancia
%T = (I/Io ) X 100
Io = Intensidad inicial
I = intensidad final
A = Log (Io/I)
A = Absorbancia

REGIONES DEL ESPECTRO ELECTROMAGNTICO.

Un haz de energa luminosa est formado por radiaciones de

diferente longitud de onda y frecuencia que abarcan el espectro
electromagntico.

3
 El Anlisis Instrumental

De acuerdo con la longitud de onda de las radiaciones se forman las

diferentes regiones que se describen en la figura 1 y en la tabla 1.

1. Rayos csmicos y rayos gamma. Por ser los rayos de menor longitud de
onda, su energa es muy alta (1 X 10 6 eV) y dan lugar a reacciones
nucleares.

2. Rayos X. Su energa es elevada ( 10 2 a 103 eV) y producen transiciones

de electrones cercanos al ncleo.

3. Ultravioleta lejano. Corresponde a una energa (1.24 X 10 2 a 6.2 eV)

suficiente para exitar un electrn de unin sigma de su estado basal al
orbital de antiunin *.

4. Ultravioleta cercano ( 6.2 a 3.1 eV); excita los electrones y los de no

unin n.

5. Visible. ( 3.1 a 1.65 eV). Como en el caso del ultravioleta cercano excita
electrones y n. Las sustancias que se analizan son coloridas.

6. Infrarrojo cercano ( 1.65 a 0.5 eV). En esta regin se observan picos

debidos a vibraciones de estiramiento entre el hidrgeno y otros tomos,
as como bandas de sobretono y bandas combinadas. Debido a la baja
intensidad de las bandas, esta parte del espectro es de poca utilidad.

7. Infrarrojo medio o fundamental. Corresponde el espectro situado entre

2.5 y 50 micrometros ( 0.5 a 0.025 eV). Se observan vibraciones
fundamentales. Entre 2.5 y 15 micrmetros se usa mucho en la
determinacin de grupos funcionales orgnicos y, por lo tanto, es la parte
que tiene mas aplicaciones en el anlisis tanto cualitativos como
cuantitativos. Las absorciones entre 15 y 50 micrmetros se deben a
flexiones de tomos de peso relativamente alto o a compuestos cclicos.
Este espectro no tiene mucha aplicacin en qumica analtica.

8. Infrarrojo lejano. La longitud de onda de esta parte del espectro se

encuentra entre 50 y 1000 micrmetros ( 0.025 a 0.00124 eV). En ellas se

4
 El Anlisis Instrumental

observan vibraciones y rotaciones de baja frecuencia. No tiene

actualmente aplicaciones en qumica analtica.

9. Microondas. Comprende la regin del espectro entre 0.1 y 100 cms.

( 0.00124 a 1.24 X 10 6 eV). En esta regin, al igual que en el infrarrojo
lejano, se observan rotaciones y vibraciones de baja frecuencia.

10. Radioondas. La regin de longitud de onda entre 1 y 1000 m. registra

las orientaciones de los spines fenmeno en el que se basan la resonancia
magntica nuclear y la resonancia de spin electrnico.

La regin del espectro visible ( figura 1) representa el color que absorbe un

compuesto a determinada longitud de onda. El color que se observa en el
compuesto es el complementario del que absorbi.

(seg-1)
FRECUENCIA
Rayos V Microondas
csmi- Rayos Rayos ultra- i Infrarrojo (radar) Radio-
Longitud de onda cos X violeta s ondas

Espectro visible

Luz
Luz ultravioleta infrarroja

Figura 1 Regiones del espectro electromagntico.

5
 El Anlisis Instrumental

Tabla 1
Regiones del espectro electromagntico

Regin del seg-1 cm-1

espectro
Rayos csmicos 0-10-2 1020 - 3.2x1019
Rayos 10-2 - 3x10-2 3.2x1019 - 1x1018
Rayos X 3x10-2 - 10-2 1x1018 - 1x1016
Ultravioleta lejano 10 - 200 nm 1x1016 - 1x1015
(Uv. al vaco)
Ultravioleta 200 - 400 nm 1x1015 - 7.5x1014
cercano
Visible 400 - 750 nm 7.5x1014 - 4.0x1014 2.5x104 - 1.3x104
Infrarrojo cercano 0.75 - 2.5 m 4.0x1014 - 1.2x1014 1.3x104 - 4x103
Infrarrojo medio 2.5 - 50 m 1.2x1014 - 6x1012 4x103 - 2x102
Infrarrojo lejano 50 - 1000 m 6x1012 - 1x1011 2x102 - 10
Microondas 0.1 - 100 cm 1x1011 - 1x108 10 -1x10-2
Radio-ondas 1 - 1000 m 1x108 - 1x105

La tabla 2 representa el color que absorbe un compuesto a la longitud de

onda correspondiente, y el color que presenta el mismo.

Esta tabla es vlida cuando el color observado proviene de una sola

sustancia colorida.

Tabla 2

Color absorbido Color observado

380 - 450 violeta amarillo-verdoso
450 - 495 azul amarillo
495 - 570 verde violeta o rojo violeta

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 El Anlisis Instrumental

570 - 590 naranja azul

590 - 620 amarillo azul-verdoso
620 - 750 rojo verde-azuloso

LEYES QUE RIGEN LA ESPECTROFOTOMETRA

Absorcin

Cuando un rayo Po pasa a travs de una solucin, parte de este rayo se absorbe y el rayo que
sale P es de una intensidad menor al incidente ( figura 8).

Muestra absorbente

P0 P

Figura 8 paro de la luz a travs de una celda con una solucin que absorbe luz.
La relacin entre el rayo que sale y el rayo que incide se denomina transmitancia, T:

T = P/ Po (1)

La cantidad de luz absorbida es proporcional al nmero N de iones o molculas

capaces de absorber energa; por lo tanto, T disminuye a medida que la concentracin
aumenta.

Ley de Lambert y Beer, conocida generalmente como ley de Beer. Si se divide la

solucin en pequeas secciones (figura 9), en cada seccin se absorber una pequea cantidad
de radiacin P, que es proporcional a N, la cual sta dada por la relacin:

P = -KPN (2)

K = Constante de proporcionalidad
P = Poder radiante

7
 El Anlisis Instrumental

El signo negativo se debe a que la radiacin disminuye.

Si las secciones se hacen infinitamente pequeas la ecuacin (2) se puede dar

en forma diferencial:

Po
p N

Figura 9 Celda dividida en pequeas secciones.

dP = -KPdN (3)

dP / P = -KdN (4)

Si se integra entre los lmites P o y P y cero y N para el nmero de iones o molculas

presentes en la solucin:

P N
dP
P P k 0 dN (5)
o

P
ln kN (6)
Po

Como N es proporcional a la concentracin y ala longitud de la celda por donde

atraviesa el rayo:

N = Kbc (7)

b = longitud de la celda
c = concentracin de la solucin
K= constante de proporcionalidad

Sustituyendo la ecuacin (7) en la (8) y combinando K y la K y la conversin del

logaritmo natural a logaritmo base 10, se obtiene una constante llamada absortividad a.

8
 El Anlisis Instrumental

P
log abc (8)
Po
Cambiando signo:
P
log abc (9)
Po
-log T = abc (10)
-log T = A (11)
A = Absorbancia
A = abc (12)

Ley de Beer o ley de Lamber y Beer

La ecuacin (12) se conoce como la ley de Beer o ley de Lamber y Beer; el valor de la
absortividad es caracterstico de cada sustancia y se emplea cuando la concentracin de la
solucin es estudio est dada en partes por milln o por miligramos; pero si la concentracin
es molar, la a se constituye por y la constante se denomina absortividad molar.

A = bc (13)
En los aparatos ms sencillos la escala est dada en porciento de transmitancia:

%T = (T) (100) (14)

Pero si se emplea la absorbancia en lugar de transmitancia y se grfica contra
concentraciones, se obtiene una lnea recta como la que aparece en la figura 10.

C
Figura 10 Grfica de absorbancia contra concentraciones.

En cambio s se grfica porciento de transmitancia contra concentraciones, se obtiene

una curva como la de la figura 11.

C
Figura 11. % de transmitancia contra concentraciones

9
 El Anlisis Instrumental

Para pasar de porciento de transmitancia a absorbancia se emplea la relacin:

A = 2-log %T
ESPECTROMETRIA ULTRAVIOLETA

La absorcin molecular en la regin ultravioleta y visible del

espectro depende de la estructura electrnica de una molcula. La
absorcin de energa se cuantifica y da por resultado la elevacin de
los electrones desde orbitales en el estado bsico a orbitales de
mayor energa en un estado excitado. Para muchas estructuras
electrnicas, la absorcin no ocurre en una porcin fcilmente
accesible de la regin ultravioleta.

En la prctica, la espectrometra ultravioleta est limitada en

gran parte a los sistemas conjugados.

Sin embargo se tiene gran ventaja en cuanto a la selectividad

de la absorcin ultravioleta: los grupos caractersticos pueden
reconocerse en molculas de complejidad ampliamente variable. Una
gran parte de la molcula relativamente compleja puede resultar
transparente en el ultravioleta de modo que existe la posibilidad de
obtener un espectro similar al de una molcula bastante mas simple.
El espectro ultravioleta est formado por una grfica de la
longitud de onda en funcin de la intensidad de absorcin . ( Vase
figura 13)

Los datos frecuentemente se muestran en forma de grfica o

presentacin tabular de la longitud de onda en funcin de la
absorptividad molar o el logaritmo de la absorptividad molar max o
log mx
1.5
Figura 13. Espectro tpico de DNA ledo de 220 a 330nm

El uso de la absorptividad
A molar como unidad de la intensidad
de absorcin tiene la1.0ventaja de que todos los valores de intensidad
se refieren al mismo nmero de especies absorbentes.
Las longitudes de onda en la regin ultravioleta generalmente
se indican en nanmetros(lnm=10
0.0
-7
cm) o angstroms, (1A= 10-8 cm).
Ocasionalmente, la absorcin
220
se nmindica en
330
nmeros de onda;

10
 El Anlisis Instrumental

nosotros estamos principalmente interesados en la regin de

ultravioleta que se extiende desde 200 hasta 300 nm. La atmsfera
es transparente en est regin que resulta ser fcilmente accesible
con la ptica del cuarzo.

Las principales caractersticas de una banda de absorcin

son su posicin e intensidad. La posicin de la absorcin corresponde
ala longitud de onda de la radiacin cuya energa es igual a la
requerida para la transicin electrnica. La intensidad de la absorcin
depende principalmente de dos factores : la probabilidad de
interaccin entre la energa de radiacin y el sistema electrnico
para elevar el estado bsico al estado excitado, as como la polaridad
del estado excitado.

La absorcin intensa se presenta cuando la transicin va

acompaada de un gran cambio en el momento de transicin. La
absorcin con mx 104 es una absorcin de alta intensidad; la
absorcin de baja intensidad corresponde a los valores de mx 103.
Las transiciones de baja probabilidad son transiciones prohibidas.

La intensidad de la absorcin puede expresarse como

trasmitancia (T) definida por

T = I / I0
donde
I0=intensidad de la energa radiante que incide en la muestra e
I=intensidad de la energa radiante que sale de la muestra.
C
E
I0 L I
D
A

Figura 14. Energa radiante a travs de una celda con una solucin que absorbe luz.

Una expresin ms conveniente para la intensidad de absorcin es la

que se deriva de la ley de Lambert-Beer:

11
 El Anlisis Instrumental

log10 = (I0/I) = kcb = A

donde
k = constante caracterstica del soluto
c = concentracin del soluto
b = longitud de la trayectoria a travs de la muestra
A = absorbancia

Cuando c se expresa en moles por litro = A = cb donde el termino

se conoce como absorptividad molar.

Si ahora se define la concentracin c del soluto como g/litro, la

expresin se transforma en
A = abc

donde a es la absorptividad y consecuentemente relacionada con la

absorptividad molar mediante
= aM

donde M es el peso molecular del soluto.

La intensidad de una banda de absorcin en el espectro ultravioleta

generalmente se expresa como la absorptividad molar a la mxima
absorcin, mx o log mx. Cuando se desconocen la constitucin de
un material absorbente, la intensidad de la absorcin puede
expresarse en la forma:
Ecm% =A / cb
donde
c = concentracin en gramos por 100 ml
b= longitud de la trayectoria a travs de la muestra en centmetros.

12
 El Anlisis Instrumental

IDENTIFICACION ESPECTROMETRICA DE
COMPUESTOS ORGANICOS

Es necesario definir algunos trminos que

frecuentemente se utilizan en la descripcin de los espectros
electrnicos.

CROMFORO . Un grupo insaturado covalentemente que

es responsable de la absorcin electrnica por ejemplo

C=C
C=O
O=N=O

AUXCROMO . Un grupo saturado que, cuando se

encuentra unido a un cromforo, altera tanto la longitud de
onda como la intensidad del mximo de absorcin; por ejemplo

OH
Cl

Desplazamiento batocrmico.Es el desplazamiento de

la absorcin a una mayor longitud de onda debido al efecto del
solvente.

Desplazamiento hipsocrmico. Es el desplazamiento de

la absorcin a una menor longitud de onda debido a un efecto
de solvente.

Efecto hipercrmico. Aumento de la intensidad de

absorcin.

13
 El Anlisis Instrumental

Efecto hipercrmico. Disminucin de la intensidad de

absorcin.

Las caractersticas de absorcin de la molculas orgnicas

en al regin ultravioleta dependen de las transiciones
electrnicas que pueden ocurrir y del defecto del medio atmico
en las transiciones.

INSTRUMENTACION UV-VIS

Cmo es un equipo de UV-Vis por dentro?

Los aparatos diseados para la medicin de absorcin o emisin

de radiacin electromagntica en funcin de la longitud de onda
se denominan:
Fotmetros
Espectrmetros
Espectrofotmetros

Fotmetro.

Es un instrumento que proporciona la relacin o alguna funcin

de la relacin de los poderes de radiacin de 2 haces
electromagnticos. Utilizan como monocromador simplemente
filtros.

Espectrmetro.

Es un instrumento con un sistema monocromador con el que se

llevan a cabo mediciones de un intervalo espectral. La cantidad
detectada esta en funcin del poder de radiacin. Utilizan
rejillas difractoras o prismas para dispersar la luz.

Espectrofotmetro.

14
 El Anlisis Instrumental

Es un espectrmetro con equipo accesorio que proporciona la

relacin o una funcin de la relacin, del poder de radiacin de
2 haces electromagnticos con respecto a la longitud de onda
espectral. Utilizan rejillas difractoras o prismas para dispersar la
luz.

Monocromador

Lentes
Muestra
Lmpara absorbente Amplificador Registrador

Figura 16. Componentes bsicos de un espectrofotmetro.

Como se conforma un espectrofotmetro de luz

ultravioleta-visible.

Un espectrofotmetro de luz ultravioleta-visible se compone

basicamente de 7 partes:

Fuente de luz lapara

Lentes
Monocromador
Celdas donde se coloca la muestra
Detector
Amplificador
Registrador

Las lamparas o fuentes luminosas son usualmente:

15
 El Anlisis Instrumental

Para UV: Deuterio, Mercurio, Xenon.

Para Visible:Tunsteno.
Otra diferencia significativa en los equipos es que los
espectrofotmetros de luz Ultravioleta visible suelen ser de dos
tipos

a) de un haz
b) de doble haz

a continuacin se presenta un diagrama para su mejor

comprencin de un espectrometro de un haz o haz simple y
posteriormente un diagrama esquemtico de un
espectrofotometro de doble haz.

Fuente
luminosa lente Ranura de
Retcula
entrada

Ranura de
salida
clula

Control de Luz

Tubo de Filtro para uso de

rayos encima de 650nm
catdicos

Figura 17. Espectrofotmetro de haz simple.

16
 El Anlisis Instrumental

Clula de
Cortador referencia
de haz
Ranuras
S2
Separador Tubos
de haz fotomultiplicad
ores

Prismas
littrow Clula de
muestra

Lmpara de
S1 H2
Lmpara de
tungsteno
Monocromador

Figura 18. Espectrofotmetro de doble haz.

Manejo de muestras para la tcnica ultravioleta visible.

Para realizar un anlisis eficiente se requiere de un buen manejo de la muestra,

para las requiones de ultravioleta visible usualmente se manejan muestras en fase
lquida (soluciones) o en fase vapor.

Soluciones.

Las muestra en estado lquido deben manejarse en forma de soluciones debido a

que en las regiones ultravioleta y visible el porcentaje de transmitancia de los
compuestos a los que se les pueden determinar espectros deben quedar dentro de
20 y 65% porque a valores fuera de este rango existe mucha incertidumbre. Es
preferible para cmpuestos cuyas absorciones molares sean altas en su mximo de
absorcin, es recomendable manejar soluciones diluidas, ya que a
concentraciones altas los compuestos dan porcentajes bajos de transmitancia.

17
 El Anlisis Instrumental

Disolventes.

En estudios espectrofotomtricos, los disolventes deben disolver o diluir la

muestra y transmitir en la regin de longitudes de onda en estudio.
Para la region ultravioleta se emplean disolventes que no absorben arriba de
200-220nm (agua, alcohol metlico, alcohol etlico, alcohol isopropilico,
hexano, ciclohexano, octano, ter dietlico, dioxano, acetonitrilo..)

Celdas para contener las muestras.

Existen en variedad de formas y materiales. Los espectrofotmetros se equipan

con portaceldas, ya sea para celdas rectangulares estndar de 10 mm de trayecto
optico o de otras medidas, adems un accesorio para conservar la temperatura
constante en las celdas. Las caras opticas de las celdas estn altamente pulidas y
se construyen con mucha precisin esto, para evitra prdidas por flexin o
difusin de la luz en su superficie.

Tamao de las celdas:

Las celdas de 1,2 y 5 mm de trayecto optico se utilizan cuando la muestra

tiene un coeficiente de extincin alto y no es conveniente realizar una
dilucin.

Las celdas de 20 y 40 mm de trayecto optico se emplean cuando la

sensibilidad analtica esta limitada y adems su uso puede evitar una
extraccin de solvente.

Clculos aplicando directamente la ley de Beer.

Como el coeficiente de absortividad molar de gran nmero de compuestos

se encuentra en tablas, es posible calcular la concentracin del compuesto
aplicando la ley de Beer:

18
 El Anlisis Instrumental

C=A/ b

Sin embargo, es preferible emplear un estndar de referencia, ya que la

concentracin determinada en esta forma est sujeta a muchas fuentes de error,
como la reproductividad de las condiciones, errores instrumentales, etc.

Mtodos de comparacin con estndar

Cuando se prepara un estndar con una concentracin semejante y en las

mismas condiciones que la muestra, la concentracin del compuesto en estudio
se puede determinar aplicando la ley de Beer:
AM = M bM cM
AE = E bE cE
La relacin de absorbancias entre la muestra y el estndar est dada
por:

AM M bM c M
AE E bE c E

Si se emplea la misma celda en ambas determinaciones: b M =bE, y como el

coeficiente de absortividad molar es el mismo para la muestra y el estndar, M
E; por lo tanto:

AM/AE = CM/cE
De donde:
cM= AMcE/AE
Este mtodo es rpido y sus resultados son confiables.

Mtodo de adicin de estndar.

Generalmente se emplea para concentraciones pequeas de muestra.

19
 El Anlisis Instrumental

Para este mtodo se emplean dos soluciones:

1. Solucin A, que slo contiene la muestra en estudio.
2. Solucin B, que contiene un volumen exactamente medido de la solucin A y
un volumen medido de la solucin estndar.

Preparacin de curvas de calibracin.

Este mtodo es necesario preparar una serie de diluciones del estndar. Se

miden las absorbancias y s grafican contra las concentraciones respectivas; se
obtiene una grfica de absorbancia contra concentracin. De la absorbancia de la
muestra en estudio se calcula, por medio de la grfica, la concentracin.
Las curvas de calibracin proporcionan resultados ms exactos que los
mtodos aplicando la ley de Beer.

Aplicaciones cuantitativas.

1. Compuestos orgnicos. Los compuestos que tienen un coeficiente de

absortividad molar alto se pueden determinar directamente; en caso contrario, se
debe preparar un derivado con coeficiente molar alto. Cuando un compuesto es
puro o se encuentra en una mezcla en la que dicho compuesto es el nico que
absorbe, la determinacin es relativamente sencilla. La absorbancia se mide a la
longitud de onda mxima, la cual se puede encontrar en tablas o bien obteniendo
previamente un espectro del compuesto.

2. Compuesto inorgnicos. Es necesario preparar complejos.

20
 El Anlisis Instrumental

21