Introduccin

La contaminacin de suelos por hidrocarburos es un problema importante en la

mayor parte de los pases productores de petrleo. La matriz suelo es
espacialmente variable y est demostrado que las propiedades qumicas, que
juegan un papel importante en la adsorcin del contaminante, tales como pH,
textura y materia orgnica, muestran una distribucin altamente variable.
La Biorremediacin es considerada como la va ms efectiva para la remediacin
de suelos contaminados, en contraste a alternativas ms costosas como la
incineracin. Los tratamientos biolgicos de degradacin en suelos pueden ser
eficientes y econmicos si las condiciones de biodegradacin son optimizadas. Se
define como Biorremediacin al proceso de aceleracin de la tasa de degradacin
natural de hidrocarburos por adicin de fertilizantes para provisin de nitrgeno y
fsforo.
El proceso de degradacin requiere control de variables operacionales tales como
nutrientes, humedad y oxgeno.
Esta tcnica puede ser aplicada in-situ, en el lugar donde se encuentra el suelo
contaminado, o ex-situ, cuando el suelo se traslada a una instalacin para su
tratamiento.
El tratamiento ex-situ de suelos, sedimentos y otros slidos contaminados con
hidrocarburos se puede realizar en un variado nmero de procesos en fase slida
y en fase lodo. Los procesos en fase slida son aquellos en donde el suelo se
trata con un contenido de agua mnima. En los casos de los procesos en fase lodo
se suspende el suelo en agua.
La actividad de los microorganismos presentes en el suelo se puede favorecer
mejorando determinadas condiciones edficas, aadiendo nutrientes, agua,
oxgeno y modificando el pH. Otra forma es la introduccin de nuevas especies
para aumentar la concentracin de microbiota presente.
La medicin del CO2 producido por unidad de tiempo en un rea determinada es
una medida indirecta del proceso biodegradativo ya que tiene como objetivo
evaluar la actividad respiratoria de los microorganismos del suelo durante el
proceso de degradacin de los compuestos orgnicos (Infante, 2001).
Los componentes del petrleo son generalmente agrupados en cuatro clases de
acuerdo a su solubilidad en solventes orgnicos: saturados, aromticos, resinas y
asfaltenos. No todos los componentes del crudo son rpidamente degradables, las
parafinas de cadenas cortas son los sustratos fcilmente degradables por los
microorganismos seguidos en orden descendiente por las parafinas de cadena
larga, isoparafinas, cicloparafinas, aromticos, heterocclicos, resinas y asfaltenos.
Los compuestos polares y los asfaltenos son generalmente considerados
resistentes a la biodegradacin.
El material remanente se denomina "hidrocarburos totales de petrleo" (TPH, total
petroleum hydrocarbon) y es considerado biodegradable. La fraccin polar y los
hidrocarburos totales de petrleo, juntamente, se nombran petrleo total, el cual
puede ser estimado gravimetricamente por evaporacin de los solventes usados
para la extraccin (Ercoli, 2001).
El objetivo de este trabajo es ofrecer los resultados obtenidos en la aplicacin del
proceso de Biorremediacin a un rea de suelo afectado en la zona aledaa a un
pozo de petrleo en la zona central de la Repblica de Cuba, utilizando la tcnica
de bioestimulacin de los microorganismos autctonos del lugar.
Antecedentes

Desde el ao 1976 nuestro grupo de investigacin ha trabajado principalmente en

el campo de los procesos de biodegradacin microbiana aerbica de
hidrocarburos del petrleo a escala de laboratorio.
En las primeras fases de estudio, se aislaron cepas marinas degradadoras de
crudo de petrleo, entre las que cabe destacar la cepa Pseudomonas sp. F21,
capaz de degradar tanto la fraccin saturada como los compuestos aromticos de
un crudo de petrleo ligero (Solanas, 1981).
A continuacin se iniciaron estudios para analizar en mayor profundidad la
biodegradacin microbiana de diferentes crudos de petrleo utilizando la cepa
Pseudomonas sp. F21 (Solanas et al., 1984; Bayona et al., 1986; Grimalt et al.,
1991).
Los estudios de biodegradacin se combinaron con estudios de genotoxicidad
ambiental de matrices contaminantes enriquecidas en hidrocarburos aromticos
policclicos (HAPs) (Grifoll et al., 1990 y 1992a; Casellas, 1995), en los que qued
reflejado la importancia de los HAPs en la genotoxicidad en diferentes ambientes y
matrices ambientales.
Sobre la base de los conocimientos adquiridos en la biodegradacin de las
distintas fracciones qumicas del petrleo, y de la genotoxicidad de los HAPs y sus
metabolitos resultantes de la biodegradacin microbiana detectados en una gran
variedad de ambientes y matrices contaminantes, se inici una nueva lnea de
investigacin basada en el estudio del metabolismo bacteriano de HAPs
especficos. Se eligi como molcula modelo de estudio, el fluoreno, debido a que
se trata de un componente importante del crudo de petrleo y sus derivados
(Wise, 1988), y conjuntamente con la 9-fluorenona, ya se haba detectado en los
diferentes estudios de genotoxicidad ambiental realizados por el grupo con
diferentes matrices ambientales (Fernndez et al., 1992; Grifoll et al., 1992a;
Casellas et al., 1995).
A partir de entonces, se aislaron diferentes cepas degradadoras de fluoreno entre
las que cabe destacar Arthrobacter sp. F101 , que utilizaba como nica fuente de
carbono y energa el fluoreno (Grifoll et al., 1992b) y a partir de la cual fueron
descritas 2 vas metablicas productivas y una no productiva que acumulaba como
metabolito final la 9- fluorenona, la cual a concentraciones elevadas era txica
para la misma cepa bacteriana (Casellas et al., 1997). Con el objetivo de disear
un consorcio microbiano para evitar la acumulacin de 9-fluorenona en el medio,
se aisl una cepa degradadora de 9-fluorenona, Pseudomonas mendocina MC2,
que a su vez no era capaz de transformar el fluoreno. La presencia de
Pseudomonas mendocina MC2 en un co-cultivo con Arthrobacter sp. F101 en
presencia de fluoreno, permiti reproducir en el laboratorio un consorcio definido
que mostr un proceso de colaboracin metablica entre las dos cepas en la
degradacin total del fluoreno, sin la acumulacin de 9-fluorenona como
metabolito de oxidacin intermedia. Precisamente en el presente trabajo, lo que en
aquel momento se pudo considerar nicamente como un posible modelo de lo que
poda ocurrir en el medio ambiente, se ha confirmado.
Aos ms tarde, la investigacin se dirigi hacia la biodegradacin de HAPs
alquilados, los cuales se caracterizan por ser ms recalcitrantes a la
biodegradacin (Solanas et al., 1984; Bayona et al., 1986) y presentar una mayor
genotoxicidad que sus representantes no substituidos (LaVoie et al., 1979) mayor .
Para ello se consigui aislar y caracterizar las cepas Sphingomonas paucimobilis
JS5 (Sabat et al., 1999) y Sphingomonas sp. JS1 (Sabat et al., 2003), que
utilizaban como nica fuente de carbono y energa el 2-metilfenantreno y el 3,6-
dimetilfenantreno respectivamente. Se propuso la va metablica del 2-
metilfenantreno, caracterizada por una dioxigenacin inicial seguido de una meta-
ruptura del anillo no alquilado y seguir posteriormente la va comn del fenantreno.
Debido a la dificultad a la biodegradacin descrita para los HAPs substituidos
(alquilados y halogenados), a su elevada mutagenicidad (LaVoie et al., 1979) y a
su abundancia en crudos de petrleo y derivados, se estudi el proceso de
fotooxidacin (radiacin UV) en los HAP parentales y substituidos (Sabat et al.,
2001) como un posible tratamiento primario de destruccin no biolgica de estos
contaminantes, que se podra acoplar a posteriori con un tratamiento secundario
de tipo biolgico.
En el ao 1998 se inici una nueva lnea de investigacin de tipo aplicado, en
colaboracin con la empresa Tank Recovery Ibrica de Santander, en el campo de
la biorremediacin, una tecnologa que aprovecha la actividad metablica de los
microorganismos para descontaminar distintas matrices ambientales. Cabe
destacar que hasta la actualidad los suelos contaminados por hidrocarburos
constituyen los mejores candidatos para aplicar la tecnologa de la
biorremediacin. La biorremediacin puede utilizar dos estrategias distintas: la
bioestimulacin, basada en la activacin de las poblaciones microbianas
autctonas, y el bioaumento, basado en la inoculacin de cepas o consorcios
microbianos de laboratorio. Los trabajos iniciales se centraron en aguas
industriales contaminadas por hidrocarburos de la empresa CLH, donde se
estudiaron distintos procesos de bioestimulacin de la microbiota autctona, y en
la optimizacin de las condiciones de biodegradacin. Asimismo, se obtuvieron
consorcios microbianos no definidos, que se adaptaron a distintas familias de
hidrocarburos como el crudo ligero, el crudo pesado degradado, el gasoil y la
gasolina, que tambin fueron utilizados en ensayos de inoculacin de aguas o
suelos (bioaumento). En el grupo de investigacin tambin se dispona de
consorcios microbianos no definidos, degradadores de HAPs, obtenidos por el Dr.
J. Sabat para el aislamiento de cepas bacterianas degradadoras de HAPs
(Sabat,1998).
A partir del ao 1999, se ampla el campo de investigacin a la biorremediacin de
los suelos contaminados por hidrocarburos, con un nuevo convenio entre la UB y
la empresa Tank Recovery Iberica, mientras que en el ao 2001 se inicia un nuevo
proyecto financiado de la CICYT titulado Biorrecuperacin de suelos
contaminados: aplicacin de un protocolo de ensayos de tratabilidad y realizacin
de una prueba a escala piloto (REN 2001-3425). Es en el marco de estos dos
ltimos proyectos donde se ubica el trabajo aqu presentado.
Descripcin del Problema

Cuando la contaminacin ya se ha producido, es necesario restaurar el

ecosistema contaminado, para lo que se pueden utilizar diversas estrategias. En
los ltimos aos se ha desarrollado una rama de la ingeniera llamada "Ingeniera
de la Remediacin", surgida de la necesidad de desarrollar tcnicas y tecnologas
para la recuperacin ambiental, de sitios degradados por la actividad humana.

Riego con la solucin de microorganismos

y mezcla del contenido de las celdas de tratamiento

Actualmente esta disciplina sigue en constante evolucin, a la luz de normativas

ambientales, esfuerzos de investigacin, actividades de las diferentes ONG,
organismos gubernamentales, entre otros.

El crecimiento de la poblacin y el avance de las actividades industriales a partir

del siglo XIX, trajeron aparejados serios problemas de contaminacin ambiental.
Desde entonces, los pases generan ms desperdicios, muchos de ellos no
biodegradables o que se degradan muy lentamente en la naturaleza, lo que
provoca una acumulacin en el ambiente sin tener un destino seguro o un
tratamiento adecuado.

Es as como en lugares donde no existe control sobre la emisin y el tratamiento

de los desechos, es factible encontrar una amplia gama de contaminantes.

Habitualmente, los casos de contaminacin que reciben mayor atencin en la

prensa, son los derrames de petrleo. Pero, en el mundo constantemente estn
sucediendo acontecimientos de impacto negativo sobre el medio ambiente, incluso
en el entorno directo, generados por un gran abanico de agentes contaminantes
que son liberados al ambiente.

Operacin de saneamiento en locacin

En las ltimas dcadas, entre las tcnicas empleadas para contrarrestar los
efectos de los contaminantes, se comenz a utilizar una prctica llamada
bioremediacin. El trmino fue acuado a principios de la dcada de los '80, y
proviene del concepto de remediacin, que hace referencia a la aplicacin de
estrategias fsico-qumicas para evitar el dao y la contaminacin en suelos.

Los cientficos se dieron cuenta que era posible aplicar estrategias de

remediacin que fuesen biolgicas, basadas esencialmente en la capacidad de los
microorganismos de degradar en forma natural ciertos compuestos contaminantes.
La bioremediacin surge como una rama de la biotecnologa, que busca resolver
los problemas de contaminacin, mediante el uso de seres vivos
(microorganismos y plantas), capaces de degradar compuestos que provocan
desequilibrio en el medio ambiente, ya sea suelo, sedimento, fango o mar.

Los contaminantes no degradables son aquellos materiales que no se

descomponen, o que lo hacen muy lentamente en el medio natural. Es decir,
que los procesos de tratamientos naturales que degradan estas sustancias, no
pueden nivelarse con la tasa de productos elaborados por el hombre que entran
al ambiente. Se incluyen en esta clase de contaminantes, las latas de aluminio,
algunos detergentes, plsticos, vidrios, y algunos metales pesados como el
plomo, el mercurio y el cadmio, entre otros.

Los contaminantes biodegradables son aquellos para los cuales existen

mecanismos eficientes de tratamiento natural, es decir que la naturaleza por s
misma los descompone, dispersa o recicla rpidamente. Se incluyen en esta
categora la mayora de los compuestos orgnicos naturales. Adems existen
compuestos sintticos que pueden ser degradados naturalmente por
organismos que estn en el ambiente. Sin embargo, su composicin qumica
hace que el ritmo de degradacin natural sea demasiado lento en comparacin
con el ritmo de acumulacin en el ambiente, por lo que podran considerarse no
biodegradables.

Los contaminantes biodegradables son aquellos para los cuales existen

mecanismos eficientes de tratamiento natural, es decir que la naturaleza por s
misma los descompone, dispersa o recicla rpidamente.

Se incluyen en esta categora la mayora de los compuestos orgnicos naturales.

Adems existen compuestos sintticos que pueden ser degradados naturalmente
por organismos que estn en el ambiente.
Sin embargo, su composicin qumica hace que el ritmo de degradacin natural
sea demasiado lento en comparacin con el ritmo de acumulacin en el ambiente,
por lo que podran considerarse no biodegradables.

Definicin del Problema

El tratamiento y recuperacin de suelos contaminados se puede definir como el

conjunto de operaciones realizadas con el objetivo de controlar, disminuir o
eliminar los contaminantes presentes. Tcnicas de Remediacin in situ y ex situ.

Las tcnicas sin situ son de menor costo, de bajo impacto ambiental inducido pero
existen muchas dudas sobre los resultados finales.

Las tcnicas ex situ se destacan por su efectividad, dado que el suelo

contaminado es fsicamente eliminado y el suelo nuevo que se incorpora se
homogeniza con el anterior no contaminado, pudiendo controlarse mejor el
proceso.

El sistema se opera prescindiendo de los factores externos como el clima. Estas

tcnicas tienen el problema del alto costo.

Objetivo General:
El estudio del tratamiento del suelo contaminado mediante la
biorremediacin en la degradacin de hidrocarburos presentes en los
sedimentos generados en el suelo.

Objetivo Especfico:
Comparar el efecto de la bioaumentacin (adicin de microorganismos
adaptados a hidrocarburos) y la bioestimulacin (adicin de fertilizante
como fuente de nutrientes, la estimulacin con la adicin de agua y volteo
manual como fuente de oxigeno) en la biodegradacin de hidrocarburos.
 Establecer las tasas de degradacin de hidrocarburos totales, en los
diferentes mesocosmos de biorremediacin de sedimentos a implementar.

Definir la estrategia de biorremediacin aplicable acorde a las condiciones

in situ de los sedimentos generados por el derrame de hidrocarburo.

Justificacin

El estudio de los residuos slidos y lquidos contaminados con aceites e

hidrocarburos son considerados como residuos peligrosos.
Cada vez son ms los casos de contaminacin medioambiental producidos en
nuestra sociedad debido a suelos contaminados de las estaciones de servicio o
parques de almacenamiento, fugas en oleoductos de tierra, fugas en grandes
tuberas de descarga, derrames en plantas industriales, perforaciones en
depsitos y tuberas de hidrocarburos, vertidos incontrolados de basura, etc.

La creacin de un sistema serio de limpieza o recuperacin de la zona afectada,

conlleva llevar un alto grado de exactitud de cul es la fuente de contaminacin,
caractersticas fsicas y qumicas del elemento contaminante, superficie, volumen,
direccin y velocidad de desplazamiento.

Una vez se conocen con exactitud los parmetros que caracterizan al

contaminante, es cuando se puede empezar con las tareas de descontaminacin.

En la actualidad, los trabajos de evaluacin de una zona contaminada aparente,

suele ser muy agresiva con el terreno debido a la necesidad de realizar sondeos
mediante excavaciones y perforaciones para tomar muestras del terreno.
La investigacin consider la tecnologa de biorremediacin con las estrategias de
bioestimulacin y bioaumentacin, que se pueden llevar a cabo dentro de las
instalaciones de la estacin de servicio, contribuyendo a si a la disminucin de los
impactos negativos a los recursos naturales, dados por esta actividad, adems de
aportar un referente cientfico-prctico de estas estrategias, que pueden ser
consideradas parte de las actividades dentro del plan de contingencia, que estas
instalaciones deben presentar a las autoridades ambientales, segn Decreto 3930
de 2010. Con base a esta investigacin se pueden plantear estrategias similares
para la remediacin de los sitios contaminados anteriormente, tanto por
actividades de estaciones de servicio de combustible, como talleres mecnicos,
diagnsticentros, lavaderos de autos, entre otros, con similares condiciones,
traducindose as en empresas que llevan a cabo iniciativas de soluciones
ambientales, que promueven el desarrollo y difusin de tecnologas amigables y
como consecuencia empresas ms competitivas y con mayor responsabilidad
social.