DETERMINACIN DE BIOMASA

I. OBJETIVOS

Objetivo General:

Determinar la concentracin de clulas por conteo en cmara Neubauer. Expresndolas en

unidades de clulas/mL.

Objetivo Especfico:

Reconocer la tcnica de contaje en Cmara Neubauer.

Comparar estadsticamente los valores de concentracin obtenidos; de manera general y
manera aleatoria, mediante los mtodos de variabilidad y desviacin estndar.

II. FUNDAMENTO TERICO

Biomasa es un trmino general que se refiere a los microorganismos presentes en un sistema. A la vez
tambin se puede referir como la cantidad de clulas, de personas o masa de seres vivos. El objetivo de la
biomasa es la reproduccin de clulas.

La determinacin de biomasa es una de las variables ms importantes en un bioproceso, ya que su

determinacin nos lleva a la comprensin de la eficiencia del mismo. Se trata de una variable clara para
establecer las tazas de produccin, de consumo de nutrientes y el clculo de los balances dems de
cualquier proceso biolgico. Una variedad de anlisis estn disponibles para la determinacin de Biomasa
de muestras biolgicas (en nuestro caso de la levadura Saccharomyces cerevisae).

A. Mtodos directos de determinacin de biomasa: Se basan en el nmero de clulas o en el peso

celular, dentro de estos mtodos podemos distinguir a los siguientes:

1. Mtodos gravimtricos (Peso Seco)

La cantidad total de biomasa presente en una muestra puede medirse en trminos de peso seco por
unidad de volumen, ya sea como slidos en suspensin totales (SST) o slidos en suspensin voltiles
(SSV). Las clulas se separan del lquido bien por centrifugacin bien por filtracin. Se expresan en
g.m.s/mL.

2. Mtodos espectrofotomtricos.
Se basan en la existencia de una relacin directa entre el nmero total de microorganismos presentes
en una muestra y su valor de turbidez. Tras la determinacin de la turbidez de la suspensin celular
mediante espectrofotometra, el resultado se expresa en unidades de absorbancia.

3. Mtodos microscpicos de recuento celular en cmaras

El recuento de microorganismos se realiza en la cuadrcula central de la cmara y se multiplica por la

profundidad, obtenindose el nmero de microorganismos por unidad de volumen (nmero de
clulas/ml, generalmente).

a. CMARA DE NEUBAUER. Es una cmara de contaje adaptada al microscopio de campo claro o al

de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos con una depresin en el centro, en el fondo de la
cual se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrcula como la que se ve en la imagen.
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 Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separacin entre dos lneas consecutivas de 0.25 mm. As
pues el rea sombreada y marcada L corresponde a 1 milmetro cuadrado. La depresin central del
cubreobjetos est hundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un
cubreobjetos ste dista de la superficie marcada 0.1 milmetro, y el volumen comprendido entre la
superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 milmetro cbico, es decir 0.1 microlitro.

Si contamos las cuatro reas sombreada (L) observando un total de x clulas entre las cuatro reas,
la concentracin en la suspensin celular ser: concentracin en la suspensin (clulas / mL) = 10000
(x/4).

Conteo en cmara de Neubauer, Esta cmara se utiliza para conteo celular.

Limpie la cmara y la laminilla de cuarzo suavemente con alcohol.

Revise la laminilla de cuarzo que no debe estar desbordada o quebrada.
Coloque la laminilla de cuarzo sobre la cmara en forma vertical, este debe quedar centrada.
Proceda a llenar la cmara. Este paso es muy importante y definitivo en la distribucin de las
clulas. Es recomendable llenarla con micropipeta pequea o con una jeringa ya que la cmara
se llena con una gota. El llenado debe ser continuo en un solo intento.
La cmara no puede quedar seca esto se detecta porque en las esquinas del recuadro de llenado
se ven porciones secas. Tampoco se debe inundar, la apariencia en la cmara es de lquido
abundante en las terminaciones del recuadro.

Figura 1. Conteo por Cmara Neubauer. Representacin de la cuadricula 10 X.

III. MATERIALES Y MTODOS

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 A. Materiales e Instrumentos

Levadura Saccharomyces cerevisae

Camara Neubauer
Jeringa
Laminilla cubreobjetos
Lmina Portaobjetos
Tubos de ensayo
Microscopio

B. Metodologa

Con una jeringa se tomar una cantidad de la solucin previamente preparada la cual se encuentra
en un tubo de ensayo en dilucin a la 10 -1 y se dejar caer unas gotas en la cmara de Neubauer.
Se colocar la laminilla cubreobjetos sobre la portaobjetos en la zona central, para apreciar una
zona cuadriculada.
Con la ayuda de una jeringa se obtendr una pequea muestra del tubo de ensayo, y se colocar
en el borde del cubreobjetos. Se dejar que la solucin ingrese a la cmara por capilaridad, sin que
pase a los canales laterales.
Una vez que la muestra ingrese por la cmara de Neubauer, se dejar reposar, y posteriormente,
se colocar en el microscopio.
Se realizar la cuantificacin de clulas en las zonas de los cuadrados ms pequeos de 0.05 mm.
tomando precauciones para evitar contar dos veces la misma clula u omitir alguna. Se contarn
las clulas que estn dentro de los cuadrados las que se noten bien y las clulas que estn en el
lado superior y lado izquierdo de cada cuadrado de 4 x 4.
Luego de calcular las clulas en los cuadrados intermedios, extremos y los determinados al azar,
se deber calcular el nmero de clulas/ mL (por cuadrado), y por medio de la siguiente frmula, se
determin el nmero de clulas por mililitro.
A la vez se deber calcular la desviacin estndar de las 25 celdas. Luego tomaremos 5 celdas al
azar de la cual deberemos calcular su variabilidad (coeficiente) y su desviacin estndar para luego
hacer una comparacin.

IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES

Tabla 1. Conteo de Clulas en Cmara Neubauer

dilucin 1dia 2dia 3 da

10-1 95000 43000 11000
-2
10 35000 20000 2500
-3
10 1600 1050 600
-4
10 650 380 150

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 Tabla 2. Concentracin de las clulas en las 25 celdas, Desviacin estndar y coeficiente
de Variacin

95000 + 43000 + 11000 + 35000 + + 600 + 650 + 380 + 150

=
= 17577;
Concentracin 12
de clulas
17577 3
10 3
= 3
( ) = 4394 106 /
(0.2 0.2 0.1) 1

Desviacin
27269.09
estndar

Coeficiente 27269.09
de Variacin = = 1.55
17577

Tabla 3. Al azar 5 Clulas de las 25 celdas de la Cmara Neubauer

Nmeros Desviacin Coeficiente de

Concentracin de Clulas
al azar estndar Variacin

43000 43000 + 35000 + 1050 + 380 + 150

=

35000 5
= 15916 19019.33
1050 19019.33 =
15916

15916 103 3 = 1.195
380 = ( )
(0.2 0.2 0.1)3 1
150 = 3979 106 /

V. CUESTIONARIO

1.- Cuales son los tipos de crecimiento poblacional explique cada uno de ellos

Las curvas poblacionales muestran como es el crecimiento de una poblacin, se puede presentar de
mltiples formas:

Crecimiento Exponencial: Es un modelo demogrfico y ecolgico para modelizar el crecimineto de

las poblaciones y la difusin epidmica de un rasgo entre una poblacin, basado en el crecimiento
exponencial representa el crecimiento de la poblacin en una fuente de presin constante. La fuente
de presin constante puede abastecer tanta energa como se necesita. Como consecuencia la
poblacin aumenta en grandes cantidades. Existe una aceleracin del crecimiento de la poblacin
de una especie a lo largo de la misma concentracin de abastecimineto de alimento. La curva de una
poblacin bajo estas condiciones se representa de la siguiente grafica:

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 Crecimiento Logstico: En otras palabras, es el balance entre produccin en proporcin a la
poblacin, y a las prdidas en proporcin a la oportunidad de interacciones individuales. Se puede
decir que una especie que sufra esta especie de crecimiento empez de manera exponencial, pero
como baj la cantidad de alimentos, el crecimiento debe cambiar. El modelo logstico no es limitado
por su fuente (presin constante no limita el crecimiento) es limitado por la super-poblacin.

Crecimiento en una fuente de flujo constante: Los ecosistemas utilizan muchas fuentes
cuyo flujo es controlado por sistemas externos. Ejemplos de fuentes de flujo constante son el
sol, la lluvia, el viento y las corrientes de ros. Las poblaciones en los sistemas no pueden
aumentar los flujos externos. Su crecimiento se limita a aquello que pueda ser mantenido por
el flujo interno de energa. Un ejemplo es la utilizacin de la luz solar por los rboles, no hay
nada que los rboles puedan hacer para aumentar o disminuir la incidencia de luz solar. Este
tipo de fuente es tambin llamado fuente renovable. El modelo de fuente de flujo constante
es limitado por la tasa de abastecimiento de su fuente.

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2.-Seale las etapas en un crecimiento poblacional?

Fase 1: Antiguo rgimen demogrfico

En el primer estadio -tpico de las sociedades preindustriales- las tasas de natalidad y de mortalidad son
muy altas, por lo cual el crecimiento natural o vegetativo de la poblacin es muy lento.

Este estadio es el que ha caracterizado la historia de la humanidad desde sus orgenes hasta el siglo XVIII
(ver la grfica 2). A modo de ejemplo: en la edad media y la edad Moderna las tasas de natalidad y mortalidad
se situaban cerca del 40 o 50, es decir, nacan muchos nios pero, al mismo tiempo, la mortalidad era
muy elevada incluso en los aos ordinarios (por la inseguridad vital, la deficiente alimentacin, higiene,
sanidad, etc.), y mucho ms en los aos de mortalidad catastrfica suscitada por una coyuntura de crisis
(mortalidad provocada por guerras, hambrunas o epidemias).

El crecimiento vegetativo es reducido, pero positivo en los aos normales, mientras que las variaciones
cclicas ligadas a la mortalidad catastrfica de los aos crticos hacen disminuir drsticamente la poblacin;
con lo que a largo plazo la poblacin no suele crecer mucho.

Fase 2: Comienzo de la transicin

Es propio de pases en vas de desarrollo. Los ndices de mortalidad bajan de forma repentina gracias a las
mejoras en las tcnicas agrcolas (que aumentan los rendimientos), las mejoras tecnolgicas, los avances
en medicina y alfabetizacin. Estos cambios contribuyen decisivamente a alargar la esperanza de vida de
las personas y a reducir la mortalidad.

Por el contrario, en este segundo estadio las tasas de natalidad se mantienen muy altas (puede incluso
elevarse si las mejoras econmicas incentivan una disminucin de la edad del matrimonio), razn por la cual
se produce un desequilibrio que se traduce en un incremento muy importante de la poblacin.

La tasa de mortalidad desciende, la tasa de natalidad se mantiene elevada; como consecuencia, el

crecimiento vegetativo es cada vez mayor.

Fase 3: Final de la transicin.

Los ndices de natalidad inician un importante descenso motivado por: el acceso a la contracepcin, la
incorporacin de la mujer a la educacin y al mercado laboral, el acceso al estado del bienestar, el proceso
de urbanizacin, la sustitucin de la agricultura de subsistencia por la agricultura de mercado, junto con otros
cambios sociales.

La tasa de mortalidad contina la tendencia bajista iniciada ya en el estadio 2 y, por esta razn, el crecimiento
demogrfico en esta tercera fase contina siendo relativamente alto.

La tasa de natalidad desciende, la tasa de mortalidad ya ha alcanzado cifras bajas, con lo que el crecimiento
vegetativo se ralentiza.

Fase 4: Rgimen demogrfico moderno.

Este ltimo estadio es tpico de las sociedades postindustriales y se caracteriza porque la tasa de mortalidad
se reduce hasta alcanzar mnimos histricos y la de natalidad se iguala prcticamente con ella. Al estar las
tasas de mortalidad y natalidad en cifras similares y bajas el crecimiento natural de la poblacin se ralentiza
hasta hacerse mnimo o prcticamente nulo pero por razones totalmente opuestas a las del Antiguo Rgimen
Demogrfico en las que las altas cifras de mortalidad impedan el crecimiento de la poblacin

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3.- Que factores inhiben el crecimiento poblacional explique cada uno de ellos?

Existe un factor que se denomina Crecimiento Poblacional, que se define como la varianza del nmero de
individuos constituyentes de la poblacin. Existen mltiples factores que limitan su crecimiento y esto causa
que las poblaciones mantenga una cierta estabilidad, sobre todo en perodos largos y con poblaciones
cerradas, aquellas que carecen de individuos entrantes y salientes, inmigrantes y migrantes. Los factores
que califican el crecimiento poblacional son:

Densidad de Poblacin: Es el nmero de individuos que constituyen la poblacin en ralacin alguna

con unidades del espacio, cuando una poblacin no se autorregula (homeostasis), presentan
consecuencias que causadas por factores externos, puede transformarse en plaga. Sin embargo,
por lo comn existe un equilibrio de las poblaciones naturales, en el cual juegan un papel decisivo
los depredadores. A mayor densidad de poblacin, mayor ser la mortalidad ocasionada por los
depreadores. Los depredadores mantienen su poblacin gracias a que, al volverse escasa una de
las especies que les alimenta, lo comn es que recurran a otras especies, con lo cual dan tiempo a
que aquella se reponga y, a la larga, a unas oscilaciones alternadas de las poblaciones alimenticias.
Mientras mayor sea la diversidad de especies, mas presas tendran y habr mas competencia entre
las especies.
Tasa de Mortalidad: Similar a las tasa de natalidad, esto se refiere a el nmero de muerte de una
poblacin en un perodo de tiempo si factores limitantes. Cuando este valor es mayor que la tasa de
natalidad, la poblacin est bajando.
Potencial bitico: es el nmero de descendentes (nacimientos vivos) que una especie produce bajo
condiciones ideales. O tambin se le dice potencial reproductor para expresar la facultad privativa de
una poblacin para aumentar el nmero, cuando sea estable la proporcin de edades y ptimas las
condiciones ambientales. Cuando el ambiente no llega a ser ptimo, el ritmo de crecimiento de la
poblacin es menor, y la diferencia entre la capacidad potencial de una poblacin para crecer y lo
que en realidad crece es una medida de la resistencia del ambiente.
Emigracin:De modo opuesto a la inmigracin, la "emigracin" se define como el nmero de
personas que abandonan el pas. En este caso, los factores de "empuje" (las razones por las que las
personas abandonan) juegan un papel principal en el nmero de personas que emigran cada ao.
Por ejemplo, en los pases donde el hambre, los desastres naturales o la discriminacin que atenta
con la vida son abundantes, la tasa de emigracin puede ser mayor que en los pases en los que un
residente puede encontrar una paz relativa.
Resistencia ambiental: Se refiere al conjunto de factores que impiden a una poblacin alcanzar el
potencial bitico. Estos factores pueden ser tanto biticos como abiticos y regulan la capacidad
reproductiva de una poblacin de manera limitante. Estos factores pueden representar tanto recursos
(como agua, refugio, alimento) como la interaccin con otras poblaciones.
Patrones de crecimiento: El crecimiento poblacional es el cambio en el nmero de individuos que
tiene una poblacin a travs del tiempo. Por lo tanto, este factor depende directamente de la densidad
por unidad de tiempo. Se refiere al tipo de grfica que representa la tasa de crecimiento de una
poblacin. As podemos encontrar curvas con crecimiento sigmoideo, exponencial o decreciente,
determinadas tanto por el potencial bitico en su interaccin con la resistencia ambiental, como con
la capacidad de carga que representa la cantidad promedio de individuos que coexisten cuando la
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 curva de crecimiento se encuentra en la fase de equilibrio. Tambin se define capacidad de carga
como el nmero mximo de individuos que un medio determinado puede soportar. El desarrollo de
esta curva posee diferentes etapas, siendo representada en nmero de individuos por unidad de
tiempo y, con respecto a los ciclos biolgicos caractersticos de cada especie, diferentes etapas, a
saber: Fase lenta o fase lag.

4.-Factores que aceleran el crecimiento poblacional seale casa uno de ellos?

Tasa de Natalidad: Es una cifra que se refiere a los nacimientos presentes en un perodo de tiempo
por cada mil individuos. Es el mayor nmero de individuos que podran ser producidos por unidad de
tienpo en condiciones ideales, sin la influencia de factores limitantes.

Inmigracin
El nmero de personas que se desplaza a un pas juega un papel muy importante en el aumento o
disminucin de una poblacin. La inmigracin est determinada principalmente por el factor de
"atraccin" del pas. En otras palabras, cun atractivo resulta el pas para diferentes personas?.
Por ejemplo, Estados Unidos tiene una gran cantidad de factores de atraccin (puestos de trabajo,
la disponibilidad de alimentos, la atencin mdica de alta calidad) que atraen a muchos, a pesar de
los diversos elementos de disuasin para la inmigracin que la gente pueda encontrar.

5.-Defina:

Bioproceso

Un bioproceso es cualquier proceso que usa clulas vivas completas o sus componentes (por ejemplo
enzimas, cloroplastos, etc.) para obtener los cambios fsicos o qumicos deseados.

El transporte de materia y energa es fundamental para muchos procesos biolgicos y ambientales. Las
distintas reas, desde la fabricacin de alimentos al diseo trmico de edificios y desde dispositivos
mdicos hasta el control de la contaminacin y el calentamiento global, requieren de conocimientos sobre
cmo la materia y la energa pueden transportarse a travs de los materiales.

Biomasa

La biomasa es el conjunto de recursos forestales, plantas terrestres y acuticas, y de residuos y

subproductos agrcolas, ganaderos, urbanos e industriales.

Esta fuente energtica puede ser aprovechada mediante su combustin directa a travs de su
transformacin en biogs, bioalcohol, etc.

Los mtodos de conversin de la biomasa en combustible pueden agruparse en dos tipos: conversin
bioqumica y conversin termoqumica. De la primera, se puede obtener el etanol y metano mediante la
fermentacin alcohlica y digestin anaerobia. De la segunda, se puede obtener gas pobre, carbn y jugos
piroleosos mediante gasificacin y pirolisis.

ECOLOGIA Pgina 8
 Tipos de Biomasa.

La ms amplia definicin de biomasa sera considerar como tal a toda la materia orgnica de origen vegetal
o animal, incluyendo los materiales procedentes de su transformacin natural o artificial. Clasificndolo de
la siguiente forma:

2.1. - Biomasa natural: es la que se produce en la naturaleza sin la intervencin humana.

2.2. - Biomasa residual: que es la que genera cualquier actividad humana, principalmente en los procesos
agrcolas, ganaderos y los del propio hombre, tal como, basuras y aguas residuales.

2.3. - Biomasa producida: que es la cultivada con el propsito de obtener biomasa transformable en
combustible, en vez de producir alimentos, como la caa de azcar en Brasil, orientada a la produccin de
etanol para carburante.

En esta definicin quedan excluidas del trmino de biomasa todos los productos agrcolas que sirven de
alimentacin al hombre y a los animales domsticos, as como los combustibles fsiles. Estos ltimos,
aunque derivan de materiales biolgicos, a travs de transformaciones se ha alterado muy profundamente
su naturaleza.

La naturaleza de la biomasa es muy variada, ya que depende de la propia fuente, pudiendo ser animal o
vegetal, pero generalmente se puede decir que se compone de hidratos de carbono, lpidos y prtidos.
Siendo la biomasa vegetal la que se compone mayoritariamente de hidratos de carbono y la animal de lpidos
y prtidos.

Densidad Poblacional

La densidad de poblacin es una medida de distribucin de poblacin de un pas o regin, que es equivalente
al nmero de habitantes dividido entre el rea donde habitan. Indica el nmero de personas que viven en
cada unidad de superficie, y normalmente se expresa en habitantes por km2. En el ao 2006 la densidad de
poblacin mundial se estimo en 49 hab/km2.

VI. CONCLUSIONES

Se pudo determinar el promedio de levaduras (Saccharomyces cerevisae) contadas

en las 25 celdas, por el mtodo de conteo directo, usando la cmara de Neubauer,
que es un mtodo eficaz para el conteo de dichas levaduras.

Se logr determinar la concentracin de clulas de la levadura en las 25 celdas la

que nos dio 4394*10^6 clulas /mL y en las 12 celdas y al azar nos dio un valor de
3979x 10^6 clulas / mL por lo que nos damos cuenta que la muestra de 5 celdas al
azar es una muestra representativa de la general.

Se compar estadsticamente los valores de la concentracin de la levadura en las

12 celdas y las de las 5 celdas al azar, del mismo modo se compararon su desviacin
estndar y coeficiente de variacin dando valores en las de 12 celdas de desviacin
de 27269.09 y coeficiente de variacin de 1.55 y en el caso de 5 celdas desviacin
de 19019.33 y coeficiente de variacin de 1.195. Por lo que la muestra de las 5
celdas al azar es representativa.

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 VII. RECOMENDACIONES
Se recomienda calibrar bien el microscopio, con la finalidad de poder observar de manera
ms clara las levaduras, de esta forma facilitaremos el conteo de las clulas.

Se debe agitar la dilucin a emplear (10-1), de manera homognea para que esta se
encuentra debidamente preparada y ser llevada adecuadamente a la lmina
portaobjetos.

Verificar que mediante el uso de la jeringa se pueda hacer un correcto llenado de la

muestra en la cmara de Neubauer.

Mirar en el microscopio y contabilizar bien las clulas, las cuales no se tomarn las
clulas que estn la parte derecha del cuadro ni las de la parte inferior del mismo cuadro,
ya que ellas formaran parte del siguiente cuadro.

Una inadecuada distribucin de la muestra sobre la superficie del portaobjetos puede

ocasionar serios errores.

VI. BIBLIOGRAFA
UNAM, (1986); Biologa Celular, Manual de Prcticas. Departamento de Biologa, Facultad
de Ciencias, Universidad autctona de Mxico. Pg. 20 28.

RODRGUEZ, E., GAMBOA, M., HERNNDEZ, F. GARCA, J. (2005). Bacteriologa

General: Principios y prcticas de laboratorio. Editorial Universidad de Costa Rica.

SILVA, C., GARCA, J. (2004). Manual del Tcnico Superior de Laboratorio de Anlisis
Clnicos. Editorial lMAD, S.L. Sevilla.

MADIGAN M. et al (1998). Brock Biologa de los microorganismos Octava Edicin, Prentice

Hall, Espaa, P.155 156.

VALENCIA, H. (2001). Manual de Prcticas de Microbiologa Bsica. Universidad Nacional

de Colombia.2001.

AQUIAHUATI M. (2004), Manual de Prcticas: Laboratorio de Microbiologa Celular,

Universidad Autnoma Metropolitana, Unidad Iztapalapa, Departamento de Biotecnologa,
1era Edicin, Pg. 63-68.

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