UNLaM-Kinesiologa-Bioqumica-Ciclo de Krebs

Ciclo de Krebs
 Ciclo del cido ctrico (o ciclo de Krebs)
El ciclo del acido ctrico es el modo habitual de degradacin oxidativa en
organismos eucariontes y procariontes. Tambin conocido como ciclo de los cidos
tricarboxlicos y ciclo de Krebs, es el punto central del metabolismo. A travs de su
estudio se explican los procesos ms importantes de la oxidacin de carbohidratos, cidos
grasos y aminocidos y se generan numerosos precursores biosintticos. Por lo tanto se
trata de una ruta metablica anfiblica.

Formacin de Acetil-CoA

El Acetil-CoA es el intermediario comn formado por la mayora de los

combustibles metablicos. A partir de este compuesto se producir el ingreso al ciclo de
Krebs del grupo acetilo, que se oxidara para dar dos molculas de CO2. La coenzima A (ver
anexo I) funciona como un transportador del grupo acetilo, mediante la formacin de un
enlace tioester de alta energa. La formacin de una unin tioester en un compuesto
metablico intermediario, conserva una porcin de la energa libre de su oxidacin.
Desde la glucolisis la sntesis del Acetil-CoA se produce mediante la
descarboxilacin oxidativa del piruvato. Primero el Piruvato debe atravesar la membrana
mitocondrial externa (la cual es permeable) y la interna, a travs de un transportador
simporte con H+, piruvato translocasa. En la matriz mitocondrial se produce la
descaboxilacin del piruvato, con formacin de una molcula de NADH, por accin del
complejo enzimtico piruvato deshidrogenasa. Este complejo multienzimatico se halla
constituido por 3 enzimas que catalizan 5 reacciones, y cuyas coenzimas y grupos
prostticos son: Tiamina pirofosfato (TPP), Flavina Adenina Dinucleotido (FAD),
Nicotinamida Adenina Dinucleotido (NAD+) y lipoamida.
La piruvato deshidrogenada regula el ingreso de las unidades de acetilo derivadas
de los carbohidratos, por lo que su regulacin es muy importante. La regulacin es
bastante simple, se halla regulada negativamente por sus productos, NADH y Acetil-CoA
que compiten con NAD+ y CoA por los sitios de unin.
Tambin la piruvato deshidrogenasa se halla regulada mediante modificacin
covalente (fosforilacin/desfosforilacin) que es inducida por un segundo mensajero, Ca2+.

Gr0=-33.4kJ/mol
Figura 1: Produccin de Acetil-CoA a partir de Piruvato.

Ciclo de Krebs

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 El ciclo consiste en una serie de 8 reacciones, donde se oxidan el grupo acetilo, de
Acetil-CoA a dos molculas de CO2. De las 8 reacciones, 4 son oxidaciones, en las cuales la
energa es eficientemente conservada, en forma de coenzimas reducidas, NADH Y FADH2,
para usarla a posteriori en la produccin de ATP. Durante el ciclo hay 8 enzimas
involucradas y al final por cada molcula de Acetil-CoA se generan 3 molculas de NADH,
una de FADH2 y una de GTP. En la Figura 2 se observa un esquema del ciclo de Krebs.

Figura 2: Ciclo del Acido Ctrico (tambin conocido como ciclo de Krebs)

A continuacin detallaremos las reacciones del ciclo de Krebs partiendo de la

condensacin del Acetil-CoA con el Oxalacetato:

Reaccin 1: Formacin de citrato.

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 La primera reaccin del ciclo es la condensacin del Acetil-CoA con Oxalacetato
(4 Carbonos) por accin de la citrato sintasa para producir Citrato (6 Carbonos). En esta
etapa el grupo metilo del Acetil-CoA se une al carbonilo del Oxalacetado (C2), formando el
intermediario Citril-CoA, que inmediatamente se hidroliza para dar Citrato y CoA libre
(que puede formar ms Acetil-CoA). La hidrlisis del enlace tioester de alta energa, es
fuertemente exergnica, por lo tanto esta reaccin es irreversible. Que esta reaccin
posea un G muy negativo (o sea, que sea altamente favorable e irreversible) es de suma
importancia para el funcionamiento del ciclo, como veremos ms adelante, ya que
mantiene bajos los niveles de Oxalacetato.

Reaccin 2: Isomerizacin del citrato.

Los siguientes dos pasos del ciclo implican reestructurar el citrato a un ismero
que se oxide con mayor facilidad. La aconitasa convierte el alcohol terciario en uno
secundario (oxidable), para ello, primero se deshidrata generando un doble enlace cis y
luego de hidrata con un grupo alcohol en el carbono 2.

Reaccin 3: Primera descarboxilacin oxidativa del isocitrato.

En esta primera oxidacin del isocitrato (recordar que posee 6 Carbonos) se

genera la primera molcula CO2 y -cetoglutarato (que posee 5 Carbonos) por accin de
la isocitrato deshidrogenasa. Esta enzima tiene como cofactor a NAD+ que acta como
aceptor de los electrones de alta energa generados en esta etapa para dar NADH. Esta es
la Segunda reaccin irreversible del ciclo y la principal reguladora del mismo.

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 Reaccin 4: Segunda descarboxilacin oxidativa del -cetoglutarato.

A travs del complejo enzimtico -cetoglutarato deshidrogenasa (formada por

3 enzimas anlogas a las del complejo enzimtico piruvato deshidrogenasa, y que
requieren los mismos cofactores TTP, NAD+, FAD, cido lipoico y Co-A), se produce la
segunda descarboxilacin del -cetoglutarato para dar succinil-CoA (el succinato posee 4
Carbonos) con la formacin de una nueva molcula de NADH a partir de NAD+. Al igual que
en el Acetil-CoA, en el succinil-CoA el enlace tioester formado es de alta energa.

Reaccin 5: Formacin de GTP a partir de Succinil-CoA

En esta etapa la energa del enlace tioester del Succinil-CoA se aprovecha para
llevar a cabo la fosforilacin a nivel de sustrato de GDP y generar GTP, Succinato y
regenerar la Coenzima A. La enzima que acta en esta etapa es la Succinil-CoA Sintetasa.
De aqu en mas no se producirn mas descarboxilacin, solo resta oxidar el succinato hasta
oxalacetato y reiniciar el ciclo.
Obtener GTP es equivalente a obtener ATP:

Reaccin 6: Oxidacin del Succinato a Fumarato

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 La Succinato deshidrogenasa es la nica enzima que no se encuentra en la matriz
mitocondrial, sino que es una enzima integral de la membrana interna de la mitocondria.
Esta forma parte de la cadena de transporte de electrones. Esta oxidacin implica la
formacin de un doble enlace, proceso que genera electrones de alta energa, pero de
energa menor que los que se requieren para reducir al NAD+, por ello esta enzima emplea
como cofactor al FAD para obtener FADH2. Ya que la enzima se halla asociada a la
membrana interna mitocondrial, los electrones obtenidos pasan directamente a la cadena
respiratoria, proceso metablico que veremos ms adelante, para la obtencin de ATP.
Como la mayora de la enzimas, la succinato deshidrogenasa en una enzima
estereoespecfica que solo cataliza la formacin del ismero trans (fumarato) y no el cis
(maleato).

Reaccin 7: Hidratacin del Fumarato

La Fumarasa cataliza la hidratacin del doble enlace del fumarato para obtener
malato. La Fumarasa, igual que la succinato deshidrogenasa tambin estereoespecfica,
solo cataliza la hidrlisis del fumarato (no maleato) para formar el ismero L-Malato.

Reaccin 8: Oxidacin de malato a oxalacetato

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 Es la ltima reaccin del ciclo de Krebs e implica la ltima oxidacin para obtener
el oxalacetato a partir de Malato con la reduccin de una molcula ms de NAD+ por accin
de la enzima Malato deshidrogenasa. Aunque la reaccin es poco favorable, solo
exergonica a muy bajas concentraciones de Oxalacetato, recordar que la siguiente reaccin
(reaccin 1 del ciclo) es una reaccin irreversible, y muy exergonica, por lo que el poco
oxalacetato que se produce es inmediatamente captado por la citrato sintasa para
producir la condensacin con el Acetil-CoA. De esta forma se mantiene bajas las
concentraciones de oxalacetato (alrededor de 10-6M), la reaccin de deshidrogenacion del
malato se hace termodinmicamente posible y el ciclo avanza. (Ver Anexo II)
A lo largo de una vuelta del ciclo de Krebs vemos como el grupo acetilo de dos
carbonos ingresa el ciclo, combinndose con oxalacetato, y como resultado se liberan a lo
largo del ciclo 2 carbonos en forma de CO2. Si embargo, tener en cuenta que estos 2
carbonos que se liberan no corresponden al acetilo, si no que son los pertenecientes al
oxalacetato. As los dos carbonos del acetilo formaran parte de la nueva molcula del
oxalacetato generada, que sern oxidados y liberados en las subsiguientes vueltas del
ciclo.
Como balance general del ciclo, tenemos que por cada molcula de Acetil-CoA que
ingresa al ciclo se generan una molcula de GTP, y tres de NADH y una FADH2 que luego en
la cadena respiratoria cedern sus electrones para la formacin de mas molculas de ATP.

Acetil-CoA + 3NAD+ + FAD + GDP + Pi + 2H2O CoA-SH + 3(NADH + H+) + FADH2 + GTP + 2CO2

Regulacin del ciclo de Krebs

El ciclo del cido ctrico presenta 3 puntos de regulacin, en las enzimas que
catalizan las reacciones irreversibles(Figura 3):
Citrato sintasa: se encuentra inhibida por su producto, citrato, por otro metabolito
intermediario del ciclo, succinyl-CoA y por los productos del ciclo NADH y ATP.
Isocitrato deshidrogenasa: esta enzima se encuentra regulada por el estado
energtico de la clula, as cuando la clula presenta un estado de alta energa, o
sea que las relaciones ATP/ADP y NADH/NAD+ son altas la actividad de la enzima
disminuye, mientras que cuando el estado energtico de la clula es bajo, o sea que
estas relaciones son bajas, la enzima se encuentra activada.
-cetoglutarato deshidrogenasa: Esta enzima se halla inhibida por
su producto, succinil-CoA. Tambin se regula por el estado energtico de la clula,
por la relacin ATP/ADP y NADH/NAD+, como la Isocitrato deshidrogenasa.

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 Figura 3: Regulacin del ciclo del acido ctrico.

Carcter anfiblico del ciclo de Krebs

Como ya se menciono, el ciclo del acido ctrico, a dems de ser una ruta catablica,
aporta muchos de los intermediarios de diversas rutas biosintticas, es decir que tambin
es una via anablica (Figura 4).
Las reacciones catapleroticas son aquellas que emplean intermediarios del ciclo de
Krebs como precursores biosintticos. Por ejemplo el -cetoglutarato y el y el oxalacetato
son precursores de los aminocidos aspartato y glutamato por simple transaminacin. A
partir de estos dos aminocidos se generan otros aminocidos as como nucletidos
puricos y pirimidicos. El oxalacetato puede convertirse en glucosa en la gluconeognesis y
el succinil-CoA es un intermediario en la sntesis del anillo porfirinico del grupo hemo.
As como los intermediarios del ciclo son consumidos como precursores
biosintenticos de muchas rutas metabolicas, se requiere su biosntesis para evitar el
vaciamiento del ciclo y mantener el equilibrio. Las reacciones que producen los
intermediarios del ciclo de Krebs se denominan reacciones anapleroticas. A continuacin
de muestran las reacciones anapleroticas ms comunes.

Piruvato + HCO3- + ATP Oxalacetato + ADP + Pi

Fosfoenolpiruvato + CO2 + GDP Oxalacetato + GTP

Fosfoenolpiruvato + HCO3- Oxalacetato + Pi

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Piruvato + HCO3- + NAD(P)H Malato 9 NAD(P)+

Figura 4: Reacciones Anapleroticas y Catapleroticas del ciclo de krebs

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 Apndice
Coenzima A
La coenzima A es un grupo -mercaptoetilamino unio mediante una unio amida a
la vitamina cido panttenico, que a su vez se une a un resto 3-fofoadenosina mediante
puente pirofosfato. Qumicamente un tiol que puede reaccionar con los cidos carboxlicos
para formar tiosteres, de modo que acta como un transportador del grupo acilo

Adenosina-3-fosfato

Residuo de Residuo de cido

-mercaptoetilamino pantotnico

Figura I: Coenzima A

Dependencia del G con la concentracin

Para dar una idea general de la espontaneidad de una reaccin se presentan los
valore de G0r, que corresponde a la energa libre de una dada reaccin en condiciones
estndares, esto es a presin 1 atm y temperatura de 0C (273K) y concentraciones de
reactivos y productos de 1M. En general las condiciones que encontramos en los sistemas
biolgicos difieren ampliamente de las condiciones estndares, para encontrar el G en las
condiciones de inters se debe aplicar la siguiente formula:
G = G0r RT ln ([reactivos]n/[Productos]m)
Donde R es una constante, T la temperatura en kelvin.
Si aumentamos la temperatura, vemos que el G se hace ms negativo, mas
espontanea es la reaccin. Tambin vemos que si la concentracin de productos es baja
respecto a la de reactivos (o sea [Reactivos]/[Productos]<<1) la reaccin tambin es ms
espontanea. A medida que aumenta la concentracin de productos, es decir que disminuye
la relacin [Reactivos]/[Productos], la reaccin se vuelve menos espontanea. Incluso
puede revertirse y ser favorable energticamente la reaccin inversa. (Ver figura II)

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 y

y=ln(x)

Figura II: Grafico del logaritmo neperiano

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