Fundamentos y aplicaciones

de fotoluminiscencia molecular
Dr. Claudio D. Borsarelli
Instituto de Bionanotecnologa del NOA (INBIONATEC)
CONICET- Universidad Nacional de Santiago del Estero (UNSE)
cdborsarelli@gmail.com

Clase N11 _ 2017

1 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

Fluorescencia como propiedad multi-paramtrica
La gran mayora de las molculas orgnicas y muchas inorgnicas presentan
fluorescencia detectable. Las caractersticas de esta fluorescencia depende de
varios factores externos: solvente (polaridad y viscosidad), temperatura,
interaccin con otras molculas, etc.

El efecto de estos
factores hacen de la
seal de fluorescencia
una propiedad multi-
paramtrica

2 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

Fluorescencia como propiedad multiparamtrica
Varios factores modifican al espectro de emisin (F, FWHM), F y F

Polaridad y Velocidad de
viscosidad Relajacin Cambios
del solvente del Solvente conformacionales
del fluorforo

Cambios en vel. Fluoerscencia (u.a.)

Transferencia
de decaimiento
interna de
radiativa y no
energa o de
radiativa
carga

Transferencia 500 600 700

Interacciones
de protn y Longitud de onda (nm) intermoleculares
reacciones de Rigidez del
estado entorno
excitado molecular

3 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

 Efectos del solvente
En la mayora de los casos, el momento dipolar en el estado excitado E aumenta respecto al
del estado fundamental G , de forma tal que se observa un corrimiento batocrmico del
espectro de emisin con aumento de polaridad del solvente.

Relajacin
interna de
energa Relajacin
adicional
de energa
inducida
por el ste

En gral., la relajacin por el ste es ms rpida que la emisin de fluorescencia, y por

tanto la emisin ocurre desde el estado excitado relajado por ste

4 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

Relajacin del solvente

Corrimientos de Stokes
dependientes del tiempo
(relajacion por el ste)

Estado excitado
(NO relajado por ste)

hlaser
Estado excitado
(relajado por ste)

Estado fundamental

5 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

Efectos del solvente y del entorno local

H= 1.9 Bu = 17
Cloruro de dansilo en
diferentes solventes
orgnicos:

H: n-hexano
Bu: Butanol
CH: Ciclohexano
T: Tolueno
EA: Acetato de Etilo

6 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

Efectos del solvente y del entorno local
De esta forma se puede extrapolar o estimar la propiedad de una interfaz o membrana, por
ejem. En vesculas de dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC)

Vesculas de DPPC

CH= 2.1 EA = 5.4 Bu = 17

7 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

El modelo de Lippert-Mataga para los corrimientos de Stokes
Este modelo considera una molcula de simetra esfrica de radio a, inmersa en un solvente
cuyas propiedades son uniforme (, n) :

Produce la re-
orientacin de las
molculas y la Solo modifica la
polarizabilidad polarizabilidad
de los e- de ste de los e- de ste

2( EG ) 2 1 n2 1
A F = cte + f con f = 2
2 + 1 2n + 1
3
hca

Orientacin de
la polarizabilidad

8 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

El modelo de Lippert-Mataga para los corrimientos de Stokes

En fase gaseosa Molcula de ste

En solucin
con electrones
polarizados (f(n))

Molcula de ste
re-orientada (f())

Molcula de ste
no perturbada

9 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

El modelo de Lippert-Mataga para los corrimientos de Stokes

10 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

El modelo de Lippert-Mataga para los corrimientos de Stokes

Sulfonaftilaminas
(aumenta el con la
incorporacion de grupos
donores de electrones)

11 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

Desviaciones: interacciones especficas
El modelo no tiene en cuenta la polarizabilidad del fluorforo y tampoco considera interacciones
especficas con el solvente o entre solutos

N
H

O
H
H

Al 5% EtOH en CH, el Stokes shift es mucho mayor que el esperado para el cambio de cte
dielctrica estabilizacin por enlaces hidrgenos

12 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

Desviaciones: interacciones especficas
El 3-metilindol en benceno (solvente), forma un complejo en el estado excitado por interaccin
especfica (charge-transfer) con el solvente, generando una nueva especie fluorescente
(exciplejo)
8
MeOH
PrOH
EtOH
6
ab- em (kK)

Bz DCE
EA
4
CHx
Hp
2
0.0 0.1 0.2 0.3
f

13 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

Desviaciones: interacciones especficas
Las interacciones especficas pueden detectarse por cambios importantes en
los espectros de emisin, como desaparicin (quenching) o formacin de
nuevas bandas.
Fluorescence (a.u.)

[Bz] (M) 20
0
o/

10
3.2

0
0 1 2 3 4
[Benzene] (M)

300 350 400 450

(nm)
3-MI en Ciclohexano + Benceno 2-anilinonaftaleno en CH + EtOH

14 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

Desviaciones: interaccin soluto-soluto
En este, caso el mismo fluorforo de asocia para formar agregados (nuevas
especies) fluorescentes.

15 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

Desviaciones: cambios en propiedades fotofsicas
En este, caso la constante radiativa o la no radiativa knr se modifica
abruptamente por cambio de la estructura del estado excitado: ej. Local-
Excited (LE) y Intramolecular Charge-Transfer (ICT) states

LE
(no polar, = 4.9D)

ICT
(polar, = 17D)

16 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

Efectos del entorno: resumen
El efecto del entorno sobre los estados excitados es complejo, y por tanto la
interpretacin de los Stokes shift () debe ser cuidadosa, ya que en muchos
casos varios de estos procesos ocurren simultneamente:

17 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

Efectos dinmicos: temperatura
El cambio de la temperatura modifica tanto la velocidad de relajacin del solvente (ks) como el
tiempo de vida del flurforo ().

Si ks >> 1/, la emisin se produce desde el estado relajado (R).

Si 1/ >> ks , la emisin se produce desde el estado no relajado o de Frank-Condon (F).

Si 1/ ks , la emisin ocurre simultneamente desde ambos estados. En gral el FWHM del

espectro observado es mayor.

18 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

Efectos dinmicos: temperatura
Efecto de la temperatura sobre la fluorescencia de Trp
25 C

60 C

Depende de T

La fluorescencia disminuye por el incremento de los procesos de decaimiento NO radiativos

(rotmeros, acoplamiento vibracional con solvente, etc.)

19 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

Efectos dinmicos: relajacin vs reaccin

Relajacin espectral continua Reaccin de estado excitado

(ambos estados tienen ) (Los estados tienen diferentes)

20 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC

El espectro de emisin resuelto en el tiempo (TRES)
En cualquier caso, los decaimientos de Relajacin espectral continua
intensidad de fluorescencia dependen de la
longitud de onda de emisin:

Reaccin de estado excitado

21 Fotoluminiscencia 2017 - Clase 11 UNSE-INBIONATEC