ANTIBIOGRAMA

"ANTIBIOGRAMA "
El antibiograma es el estudio in vitro del
comportamiento de los antimicrobianos frente a
los diferente microorganismos.
Factores que afectan la actividad antibacteriana in vitro
pH del medio de cultivo: algunos antibiticos son activos a
pH cido (nitrofurantona) y otros lo son a pH alcalino
(aminoglucsidos).
Componentes del medio de cultivo: pueden antagonizar al
antibitico (extracto de levadura antagoniza a sulfonamidas).
Estabilidad del medicamento: algunos antibiticos se
inactivan a la temperatura de cultivo (clortetraciclina, en
menor grado penicilina)
Tamao del inculo: si hay muchas bacterias, la
susceptibilidad es menor y pueden aparecer mutantes
resistentes.
Tiempo de incubacin: si es muy breve los microorfanismos
no mueren; si es muy largo, pueden aparecer mutantes
resistentes o inactivarse el medicamento.
 Cuando debe realizarse un
antibiograma?:

Cuando de una muestra biolgica

relacionada con un proceso infeccioso se
asle perfectamente un microorganismo
considerado responsable de dicho proceso.
En microorganismos que muestran un
patrn de susceptibilidad muy constante, no
es necesario el antibiograma.
Antes de realizar un antibiograma se
debe saber
1. Tipo de bacteria o, al menos, sus
caractersticas morfolgicas y tintoriales
con la tincin de Gram.

2. Procedencia de la muestra.

3. Edad y sexo del paciente.

 Pruebas de susceptibilidad antimicrobiana
in vitro
CIM

Test por dilucin

Test por difusin

Se realizan segn ciertas normas previamente estandarizadas

(NCCLS)
Antibiograma por difusin
(Tcnica de Kirby-Bauer)

Es el mtodo ms usado
Es prctico y sencillo de realizar e
implementar
Permite analizar un gran nmero
de antibiticos al mismo tiempo y
bajo las mismas condiciones
Entrega un resultado cualitativo
(bacteria sensible o resistente)
 Prueba de Difusin por Disco
(Tcnica de Kirby-Bauer)

Seleccionar la colonia
bien aislada para el
inculo

Tomar colonia de cultivos

puros

Preparar el inoculo
correspondiente
 Estandarizar la Suspensin del
Inculo
(Tcnica de Kirby-Bauer)
Suspensin Directa de
Colonias
Las colonias no deben
sobrepasar las 1824
horas de aislamiento.
Mtodo de Fase
Logartmica
Inocular la colonia en un
caldo, incube a 35 C
para lograr un
crecimiento en fase Comparar el inoculo con el tubo
logartmica. 0.5 de la escala de Mar Faldan
 Siembra
(Tcnica de Kirby-Bauer)

Estandarizado el
inoculo introducir un
hisopo estril

Remover el exceso de
lquido del hisopo
Prueba de Difusin por Disco
(Tcnica de Kirby-Bauer)

Inocular la placa
 Aplicar los discos sobre el medio

Presionar los discos para asegurar contacto

Puntos que hay que recordar sobre los discos de
antimicrobianos

No use discos despus de su fecha de caducidad.

No almacene discos en un congelador libre de
escarcha.
Use productos aprobados por la FDA.
Use discos con el contenido especificado en los
estndares de NCCLS.
No reubique un disco una vez que ste ha tocado la
superficie del agar.
 Prueba de Difusin por Disco
(Tcnica de Kirby-Bauer) Halo de inhibicin

Incubar las placas y leer

a las 24 horas los halos de
inhibicin
Cmo Medir las Zonas de Inhibicin Luz
Reflejada

Despus de retirar la placa de la incubadora:

Examine detenidamente la placa para
verificar que el crecimiento sea uniforme y
confluente de tal modo que pueda
identificar zonas sin crecimiento bacteriano.
Antibiograma por difusin

(Tcnica de Kirby-Bauer)

Anlisis de Resistente Sensible

varios antibiticos en (No hay halo de (Presencia de halos de
un mismo ensayo inhibicin) inhibicin)
 Lectura con luz reflejada

Sostenga la placa
unos pocos
centmetros sobre
una superficie de
color negro que no
refleje la luz.
medir las zonas
desde la parte
posterior de la placa
Mida redondeando
al milmetro ms
cercano con una
regla o un
calibrador.
ANTIBIOGRAMA POR DIFUSION EN PLACA

Medicin del halo de difusin

Lectura con luz reflejada

Zona doble de Inhibicin

Mida la zona ms interna.
 Lectura con luz reflejada

Zona con colonias internas

Mida la zona sin colonias (anillo verde zona a ser leda)
Interpretacin de colonias internas
 Zona afelpada

Mida el punto en el cual se puede ver una demarcacin obvia

entre crecimiento y ausencia de crecimiento.
 Zonas con brotes Proteus mirabilis

Mida la zona que es obvia. Ignore el brote an si este cubre

la zona de inhibicin.
 Trimetoprima-Sulfamethoxazole (SXT)

Las zonas con Trimetoprima-Sulfamethoxazole (SXT)

(y tambin sulfonamidas, y trimetoprima) podran ser difciles de leer
porque este agente podra no inhibir el crecimiento de las bacterias
hasta que las bacterias hayan pasado por varias generaciones
de crecimiento.
Antibiograma por dilucin
Tcnica de referencia en la mayora de los estudios clnicos de
susceptibilidad a antimicrobianos.
Entrega un resultado cuantitativo, ya que permite determinar la
concentracin inhibitoria mnima (CIM).
Se puede realizar en medio lquido (dilucin en caldo) o en medio
slido (dilucin en agar).
Mtodo complejo y de alto costo.

Lectura del CIM

Dilucin seriada en caldo CIM

Antibiograma por dilucin
Definiciones

Concentracin inhibitoria mnima (CIM)

Corresponde a la menor concentracin de

antimicrobiano que inhibe el crecimiento bacteriano
luego de 18 a 24 horas de incubacin.

Concentracin bactericida mnima (CBM )

Corresponde a la menor concentracin capaz de matar

un 99,9% la poblacin bacteriana.
Diluciones en placa

Los antibiticos concentrados se aaden a

las microplacas donde se prepararan las
diluciones de los antibiticos.

Las diluciones dobles de los antibiticos se realizan pasando

consecutivamente 150l con una pipeta multicanal a otro pocillo con 150l
del medio de crecimiento sin antibitico. La placa con las diferentes
concentraciones de antibitico queda lista. En cada placa se dejan pozos
control con medio sin antibitico para los controles de pureza y la
evaluacin del crecimiento de la poblacin a 0 y 48 h.
Las diluciones de antibitico preparadas se
traspasan a las placas de ensayo.

Las cepas se
preparan a partir
de un cultivo
reciente y se
estandariza el
En cada pocillo de inoculo.
las placas de ensayo
tenemos una
concentracin y un
antibitico diferente,
tal y como se van a
ensayar.
 Diluciones en placa

Se coloca un volumen determinado de inoculo en la placa se

incuba 24 horas y se realiza la lectura de forma manual o
automatizada