DICIEMBRE 2009
SEBBM DIVULGACIN
LA CIENCIA AL ALCANCE DE LA MANO
Ratones transgnicos en investigacin biomdica
Sagrario Ortega
Centro Nacional de Investigaciones Oncolgicas (CNIO)
SUMMARY
Genetically engineered mice (GEMs)
are an important tool for
understanding gene function and the
genetic basis of disease as well as
for the generation of animal models
of many genetic disorders. Here we
summarize the different types of
transgenic mice and their
applications.
http://www.sebbm.es/
HEMEROTECA:
http://www.sebbm.es/ES/divulgacion-
ciencia-para-todos_10/la-ciencia-al-
alcance-de-la-mano-articulos-de-
divulgacion_29
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Resumen
Los ratones modificados
genticamente (RMGs) son
herramientas clave para el estudio
de la funcin gnica y de las
bases genticas de las
enfermedades, as como para la
generacin de modelos animales
de mltiples patologas. A
continuacin se resumen los
diferentes tipos de ratones
modificados genticamente que se
pueden obtener mediante
transgnesis y sus aplicaciones.
En el ratn podemos diferenciar
claramente dos tipos de modelos
transgnicos: los ratones
transgnicos convencionales y los
modelos de gene targeting o de
mutagnesis dirigida del genoma.
Ratones transgnicos
Descripcin.- Son RMGs portadores
de un transgn (material gentico
externo) integrado al azar en su
genoma. Son generalmente modelos
de ganancia de funcin: conducen a
la expresin de un nuevo gen o a la
sobre-expresin de un gen ya
existente. En este tipo de modelos
se puede controlar con total
precisin la estructura del transgn
pero no la posicin del genoma en
ste que se integra. Generalmente
se utilizan construcciones
transgnicas compuestas por un
promotor eucaritico y la secuencia
codificante del gen de inters para
expresar dicho gen, o
sobreexpresarlo, en todas las clulas
del ratn (expresin ubicua) o en un
tejido concreto (expresin tejido-
especfica) (Figura 1). Transgenes
de mayor tamao clonados en
cromosomas artificiales de bacteria
(BACs) o de levadura (YACs)
normalmente incluyen todas las
secuencias reguladoras de la
expresin del gen de inters y en
general son menos sensibles a
efectos posicionales reproduciendo
ms fielmente el patrn de expresin
deseado. Los sistemas de expresin
condicional permiten, adems,
controlar la expresin del transgn
en el tiempo. El sistema ms
utilizado en el ratn es el regulado
por tetraciclina que tiene dos
modalidades: tet-ON (la expresin
del transgn slo ocurre cuando se
administra doxiciclina al ratn en el
agua de bebida) o tet-OFF (la
doxiciclina impide la expresin del
transgn).
Tecnologa.- La tcnica ms utilizada
para la generacin de ratones
transgnicos es la microinyeccin del
ADN transgnico directamente en
uno de los dos proncleos del
embrin de una clula (cigoto)
(Figura 1). Normalmente el ADN se
integra en el genoma del 5-30% de
los cigotos inyectados.
Aplicaciones.- Los modelos
transgnicos han sido ampliamente
utilizados para la identificacin y el
estudio de secuencias reguladoras
de la expresin gnica en
construcciones transgnicas en que
estas secuencias se fusionan a una
molcula fcil de detectar (lacZo
EGFP) dirigiendo su expresin. La
sobre-expresin de un gen o la
expresin de mutaciones dominantes
mediante transgnesis es tambin
una herramienta muy til para el
estudio de la funcin gnica en el
contexto del animal completo y para
la generacin de modelos de
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enfermedades genticas causadas vector contiene dos fragmentos de pequeas deleciones o inserciones
por dichas mutaciones. ADN genmico llamados brazos de que se encuentran en patologas
Mutagnesis dirigida del genoma homologa (5y 3respectivamente) humanas o que son relevantes para
(gene targeting) que pertenecen al gen que interesa el estudio de la funcin gnica. Por
Descripcin.- Estos modelos se modificar y que dirigen la integracin ejemplo, mutaciones oncognicas
diferencian de los anteriores en que de dicho vector en el gen de inters identificadas en tumores humanos.
la integracin del ADN que se mediante recombinacin homloga. La posibilidad de generar ratones
introduce en el genoma se dirige a Las clulas ES, una vez modificadas knockout o knockin condicionales
una posicin concreta del mismo, por recombinacin homloga se permite controlar el tipo celular y el
con el objetivo de generar una incorporan a un embrin husped momento del desarrollo en que se
mutacin intencionada y previamente donde compiten con las clulas ES expresan estas mutaciones. Todos
diseada en dicha posicin. En del propio embrin para generar estos modelos son de gran utilidad
general se puede hablar de dos tipos todos los linajes celulares en el desarrollo de nuevas y mejores
de modelos generados mediante embrionarios, incluida la lnea terapias.
gene targeting: germinal. Los animales que nacen se
Ratones knockout: Son ratones en denominan quimeras porque derivan
los que se inactiva un gen del embrin husped y de las clulas Referencias
determinado en el genoma, ES introducidas (ver Figura). La
generalmente por delecin de toda o recombinacin homloga permite 1. http://jaxmice.jax.org
parte de su secuencia codificante. tambin dirigir la integracin de sitios 2. http://sanger.ac.uk
Tambin se puede interrumpir la de reconocimiento de enzimas 3. http://mshri.on.ca
secuencia codificante por la llamadas recombinasas (Cre y Flp) a 4. http://www.cnb.uam.es
integracin de otro gen. cualquier posicin en el genoma del 5. http://roslin.ac.uk
Ratones knockin: Son ratones en ratn. Estas enzimas catalizan la 6. Nagy A. Gertsenstein M.
los que se introducen mutaciones recombinacin entre dos de sus Vintersten K. and Behringer R.
dirigidas en la secuencia de un sitios diana (loxP y frt (2002) Manipulating the Mouse
determinado gen; por ejemplo la respectivamente). La combinacin Embryo: a Laboratory Manual. 3rd
modificacin de un codn concreto de tcnicas de recombinacin edition. Cold Spring Harbor
en la secuencia codificante para homloga y de los sistemas Cre/loxP Laboratory Press, Cold Spring
generar una cambio de aminocido y Flp/frt permiten introducir cualquier Harbor, New York.
en la protena correspondiente o la tipo de mutacin en el genoma y 7. Voncken J.W. and Hofker M.
sustitucin de la secuencia adems controlar el momento y el (2005). Transgenic mice in
codificante de un gen, o de uno de lugar dnde sta se expresa biomedical research.
sus dominios, por la de otro. (modelos knockout y knockin Encyclopedia of Molecular Cell
Tecnologa.- Se basa en la condicionales y tejido especficos). Biology and Molecular Medicine
utilizacin de las clulas madre Aplicaciones.- Un ratn knockout es 2nd Edition. Vol 14. Ed. Robert A.
embrionarias (clulas ES) como el mejor modelo para estudiar la Meyers. Wiley-Verlag-Weinheim.
vehculo para introducir funcin de un gen en el contexto 8. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Geno
modificaciones genticas en la lnea fisiolgico, analizando el fenotipo mes/
germinal del ratn (Figura 1). A que resulta de la prdida de su 9. European Bioinformatics Institute:
diferencia de los modelos funcin. Los modelos knockin se http://www.ebi.ac.uk/Databases/g
transgnicos, el ADN exgeno o utilizan sobre todo para reproducir en enomes.html
vector de targeting se introduce en el ratn alteraciones genticas tales 10. J. Craig Venter Institute:
las clulas ES, no en el cigoto. El como mutaciones puntuales o http://www.jcvi.org/cms/home/

A) B) PGK-neo Vector de targeting

Promotor Gen X
Transgn Identificacin de
clones en los que
el vector se integra
por recombinacin
homloga

Clulas ES
en las que se introduce
Clones neoR
Esquema de la generacin de ratones transgnicos
el vector de targeting
clsicos A) y de modelos de gene targeting:
Microinyeccin del transgn en
el proncleo de cigotos de ratn
knockout o knockin B).
Microinyeccin de las
Gen X clulas ES recombinantes
en blastocistos

Ratn transgnico en el que

el gen X se expresa bajo el control
del promotor elegido Quimeras con diferente grado de Agregacin de las
contribucin de las clulas ES. clulas ES recombinantes
La pigmentacin oscura indica el con mrulas
grado de contribucin de las clulas ES
inyectadas o agregadas.

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