GACETA DE CIENCIAS VETERINARIAS ANO 4, Nro. 1, pp. 36-61, 1998, EFECTO DEL LEVAMISOL SOBRE LA PERSISTENCIA DE INFECCIONES POR STAPHYLOCOCCUS AUREUS DURANTE EL SECADO Y EL DESARROLLO DE MASTITIS SUBCLINICA EN LA LACTANCIA EN VACAS (Levamisol effect in the persistence of infections by Staphylococcus aureus during the dry period and development of subclinic mastitis during the dairy period ) Francisco J. Vargas y Jorge Escalona Universidad Centroceidental “Lisandro Alvarado”. Decanato de Ciencias Veterinarias. Departamento de Medicina y Cirugia. Area de Medicina de Grandes ‘Animales.Barquisimeto, Venezuela, RESUMEN El levamisol utilizado como inmunoestimulante a la dosis de 2.5 mg/kg de peso quincenalmente durante el periodo de secado en vacas, aunado a la terapia con antibiéticos al inicio del secado, no tuvo ningin efecto cn la eliminacién de infecciones persistentes en este period causadas por Staphylococcus aureus, pero si mejoré los niveles de mastitis subclinica en la lactancia siguiente. De un total de 20 animales distribuidos en dos grupos de 10 cada uno (tratados y control), once (95 %) mantuvieron una infeccién persistente por Staphylococeus aureus durante el periodo de secado sin que existieran diferencias entre el grupo tratado con levamisol y el contiol. Sin embargo, en el primer mes de lactancia, en el grupo tratado se observé un nivel de mastitis, subclinica medido por la prueba de California Mastitis Test (CMT) de 17% comparado con el grupo control donde los resultados obtenidos fueron del 43 %. El comportamiento en el primer mes de lactancia fue determinante para que en los meses siguientes el grupo tratado se mantuviese con niveles de mastitis subclinica mas bajos. ‘Al realizar la discriminacién de los resultados de CMT como altos (grado 2 y 3) y bajos (grado Trazas y 1), se encontrd que en el grupo control, los niveles de mastitis subclinica alta fueron mayores a los tratados. As{ mismo, en el grupo tratado, los contajes celulares altos medidos como CMT grado 2 y 3, disminuyeron dristicamente luego del segundo mes de lactancia, siendo suplantados por contajes celulares bajos, medidos como CMT trazas y 1, los cuales pueden ser considerados como protectivos contra nuevas infecciones.Francisco J. Vargas y Jorge Escalona ABSTRACT The levamisol used as innunoestimulant at a dose of 2.5 mg per kg of body weight with an interval of 15 days during the dry period in cows, plus the therapy with antibiotics at the beginning of the dry period, did not have effect in the elimination of persistent infections in this period caused by Staphylococcus aureus, but reduced the levels of subclinical mastitis in the next lactation, From a total of 20 animals distributed in two groups of 10 each one (treated and control), eleven (55%) maintained a persistent infection by Staphylococcus aureus during the dry period without differences between the levamisol group and the control group. However, in the first month of lactation , the levamisol group had level of 17% of subclinical mastitis , measured by California Mastitis Test (CMT) compared with the group controt where the level of subclinical mastitis was of 43%. The paitern in the first month of lactation was decisive for the tried group to keep lower levels of subclinical mastitis in the followings months with When a discrimination was made to CMT results in higher counts of somatic cells (grade 2 and 3) and lower counts of somatic cells (grade traces and 1), it was found that in the control group, the Jevels of higher counts of somatic cells were greater than the treated. Also, in the treated group, the higher counts of somatic cells (CMT grade 2 and 3), lowered drastically in the second month of lactation, being replaced by lower counts of somatie cells (grade traces and 1), this situation could be considered as_prote against new infections. tive INTRODUCCION La mastitis subelinica por Staphylococcus aureus es una de las causas principales de grandes pérdidas econémicas en la ganaderia lechera de Venezuela y de ‘todo el mundo y quizas ia mas dificil de controlar ( Quiroga, 1993). Debido a la capacidad del microorganismo de evadir los mecanismos de defensa inmunolégica de Ja ubre, de inhibir la fagocitosis por polimorfonucleares (PMN) y ‘macrofagos, pudiendo permanecer en ef interior de estas células sin ser afectada por los antibisticos; se hace cada vez més dificil su control y erradicacién de los rchaiios lecheros (Nickerson, 1985). A posar de que la terapia con antibidticos en el secado ha demostrado ser uma de Ja més eficientes téenicas de contro! de infecciones durante este periodo y para la prevenei6n de nuevas infecefones en la lactancia, hasta ahora no se ha logrado un 100 % de efectividad por lo que un alto porcentaje de animales mantienen infecciones persistentes durante el periodo seco, que se manifiestan Iuego en la lactancia siguiente (Griffin, 1971. Por esta razén, on 10s diltimos affos, se ha dado gran importancia a la utilizacién de métodos de control que sean mis eficientes que la antibioticoterapia convencional y que estén dirigidos a aumentar la respuesta inmunolégica de la glindula38 Efecto del Levamisol sobre Ia Persistencia de Infecciones por Staphilococeus aureus ‘mamaria tanto de tipo celular como humoral, con el fin de prevenir las infecciones intramamarias por gérmenes patégenos (Quiroga, 1993). El levamisol, que inicialmente fue concebido como droga antihelmintica, ha demostrado tener potentes propiedades inmunopotenciadoras restableciendo el equilibrio inmunolégico perdido por situaciones de inmunosupresién como Jo es el inicio del periodo seco (final de la lzctancia) y el inicio de la nueva lactancia (después del parto), en donde se ha demostrado que ocurre la mayor proporcién de infecciones intramamarias (Vanselow, 1987). A pesar, que poco se ha estudiado sobre su efecto en el control de la mastitis bovina, si son numerosos los reportes que sefialan sus excelentes propiedades ‘como inmunoestimulante y sobre todo su efecto benéfico sobre el funcionamiento y actividad de Jos polimorfonucteares que son la principal linea de defense de ta ubre, por lo que pudiese pensarse en su utilizacién en el control de las infecciones de la ubre y muy especialmente en el perfodo de secado ( Jayappa y Loken, 1982) Por lo tanto, el objetivo del presente estudio es determinar el efecto del levamisol en el control de las infecciones naturales persistentes durante el periodo de secado de la uubre causadas por Staphylococcus aureus y evaluat la eficiepcia de este tratamiento sobre los niveles de mastitis subclinica en Ia Iactancia sucesiva, a fin de comprobar su posible incorporacién en los programas de manejo de la mastitis. REVISION DE LITERATURA. La mastitis subclinica, que no es més que Is inflamacién de la glindula mamaria sin signos clinicos observables, tiene una alta incidencia en los rebatios lecheros. de todo el mundo, estiméndose que en los Estados Unidos, at menos 1 40% de todas las vacas estin infectadas con alguna forma de mastitis en uno o mas de sus cuartos ( Philpot, 1984). En el estado Lara, en un estudio realizado en dos fincas del distrito Torres se demostrd un 41,34 % de infecciones subelinicas en 420 vacas en ordeio, sefialéndose como principal germen involucrado a Staphylococcus aureus ( Contreras, 1987). Otros estudios realizados en el pais sefialan cifras semejantes de infecciones subclinicas en vacas lecheras, que representan una alta incidencia de la enfermedad, Ia cual causa grandes pérdidas econémicas al productor por merma en la produccién de leche (70 % del total de las pérdidas), leche descariada (8 %), medicinas y gastos veterinarios (8 %) y eliminacién de animales que han perdido sus capacidad productiva (14 %) ( Ramirez, 1989). ‘Staphyococcus aureus, seBalado como uno de los patégenos mayores causante de mastitis contagiosa en bovinos, es uno de los principales microorganismos involucrados en la etiopatogenia de la mastitis y el més dificil de controlar debido a suFrancisco J. Vargas y Jorge Escalona 39 capacidad para evadir los mecanismos de defensa inmunol6gicos de la ubre, logrando permanecer en el interior de las células fagociticas (macr6fagos y polimorfonucleares) sin ser destruido por los mismos ni climinado por los antibiéticos, para luego causar ‘nuevas infecciones intramamarias. Segiin modelo presentado por Daley et al. (1991), se produce una presentacién de la infecciones intramamarias por este germen en forma Ciclica, teniendo la caracterfstica de que, a menores contajes de células somiticos, mayor niimero de bacterias y a menores contajes celulares mayor mimero de nuevas infecciones, mostrando, de esta manera, una relacién inversa entre estos dos elelmentos. La ciclicidad de las células sométicas y en especial los polimorfonucleares (95 % de estas células) en las secreciones de la gléndula mamaria, cumple un rol fundamental dentro de Ios mecanismos inmunitarios de defensa no especificos de la glindula mamaria bovina (Opdebeeck, 1982). Un aumento en la concentrracién de polimorfonucleares en la gkindula mamaria puede ser logrado mediante la introduceién de un dispositive de polietileno intramamario para causar un bajo grado de irritacion mecinica que induce a un aumento en ta resistencia a infecciones causadas. por ‘Staphylococcus aureus, lo que sugiere que un contaje de eétulas somaticas bajo, puede ser indicativo de proteccién de la ubre contra la mastitis ( Tyler, 1993), Rainard y Poutrel (1982), sefialaron también que las infecciones causadas por atégenos menores tales como Corynebacterium bovis compiten con la colonizacién del ducto del pezén por patégenos mayores. Asi mismo, los patégenos menores causan una mastitis subelinica con bajos contajes de células somiticas que pueden ser protectivos para la instauracién de otros patogenos mayores los cuales causan reacciones celulares altas que comprometen la produccidh y calidad de la leche. Para que se produzea una adecuada respuesta inmune contra los patégenos a nivel de la gldndula mamaria, es necesario que ocurra una integracién entre la respuesta mediada por eélulas y 1a mediada por anticuerpos; y son las células presentadoras de antigenos (macréfagos y linfocitos B) quienes se constituyen en artifices de esta integracién (Quiroga, 1993). El macréfago cumple un papel fundamental en la eliminacién de patigenos intracelulares como Staphylococcus aureus, ya que es capaz de presentar antigenos al linfocito Ty estimula, a través de la produccién de citocinas del tipo interleukina 12 (IL-12), una sub-poblacién de estas eélulas cooperadoras denominadas Tl, las cuales a su vez, activarin al macréfago a través de la produceién de Interferén Ganma (INF), integrando, de esta manera, una respuesta principaimente de tipo celular contra él patégeno intracelular (Kaufman, 1995). Estos mecanismos se dan también en la glindula mamaria, como lo demuestran diferentes estudios, en los cuales, se ha determinado que ‘Staphylococcus aureus es capaz de afectar Ia interaccién de eélulas T y macréfagos de la ubre a través de la expresién de moléculas clase Tl del complejo mayor de histocompatibilidad y la secresidn de interleukina-I (Politis et al., 1992),40 Efecto det Levamisol sobre ta Persistencia de Infecciones por Staphilococeus aureus En relacién a los mecanismos de defensa de tipo humoral, aunque son menos efectivos en la eliminacién de Staphylococcus aureus que los mecanismos celulares, también cumplen un papel importante en el control de la infecciones. Cabe resaltar, que entze Jos anticuerpos encontrados en la gléndula mamaria el més abundante es la IgGl (0.4 mg/m), la cual es derivada de! suero sanguineo, conjuntamente con la IgG2 (0.03 mg/ml); mientras que la IgM (0.05 mg/ml) y la IgA (0.15 mg/ml), son sintetizadas en el epitelio mamario. De estos anticuerpos, la IgG y la IgM, son los que cumplen funciones. de opsonizacién favoreciendo la fagocitosis de particulas bacterianas por macrofagos ¥ polimorfonucleares (PMN), lo cual representa el principal mecanismo de defensa inmanologico de la ubre contra los paidgenos causantes de la mastitis y especialmente ‘Staphylococeus aureus (Cullot y Tyler, 1990). En la actualidad, se han hecho miltiples esfuerzos por lograr la prevencién de nuevas infecciones intramamarias estimulando el sistema inmune. Entre estas podemos sefialar el uso de vacunas intramamarias y sistémicas, que han dado buenos resultados fen la disminucién de la severidad de los casos clinicos pero no en la prevencién de nuevas infecciones intramamarias (Tyler et al, 1993); uso de citocinas como interleukinas 1 y 2 (Daley et al, 1991 ; Sordillo et al., 1991); uso del factor estimulante de las colonias de granulocitos y macr6fagos (GMCS) (Khetli et al., 1991; Stabel et al, 1991); suplementacién con vitamina E y selenio (Ndiweni y Finsh, 1995), (Hogan, J et al. 1993), utilizacion de lactoferrina hidrolizada tratada con calor a pH éeido (Saito et al, 1991); uso de inmunoestimulantes inespecificos como el levamisol (Flesh et al., 1982; Tyler, 1993), Por su capacidad para estimular la respuesta inmunolégica tanto de tipo humoral como celular en el organismo, restableciendo el equilibrio de los mecanismos reguladores inmunolégicos, el levamisol se ha convertido en una potente droga con efectos inmunomoduladores (Vanselow, 1987). La aceién del levamisol va dirigida a normalizar las respuestas inmunologicas del huésped al aumentar la actividad metabdlica de los macr6fages, monocitos y linfocitos T con la consecuente liberacién de interleukinas, aumento de Ia blastogénesis de estas células, aumento de la quimiotaxis de macrofafos y PMIN, aumento dc los receptores de superficie del linfocito T y un incremento secundario en los niveles de anticuerpos. Todos estos efectos son mediados por una elevacién en los niveles de nuclestidos ciclicos especialmente Guznosin monofosfato ciclico (GMPe) y del transporte de calcio intracelular, asi como la produceién de un factor sérico con efecto inmunoestimulante, siendo este un efecto contrario al producido por el cortisol en situaciones de estrés con aumento del Adenosin monofosfato cielico (AMPe) y la consecuente inmunosupresién (Espinet, 1988). Muchos autores sefialan que el efecto del levamisol en el huésped ocurre ‘inicamente cuando este se encuentra inmunosuprimido, en cuyo caso es capaz de llevar la respuesta inmunoldgica hasta sus niveles basales pero sin sobrepasar estos. Asi seFrancisco J. Vargas y Jorge Escatona al demuestra en el trabajo realizado por Maddux y Keeton (1987), quienes midieron el efecto del levamisol sobre la funcién de polimorfonucleares en cabras y determinaron ‘que no tuvo ningiin efecto sobre las funciones de estas células cuando fe administrado solo pero si en aquellos animales que habian recibido previamente una inmunosupresién inducida por dexametasona, en los cuales mejoré las funciones de quimiotaxis, migracién, actividad fijadora de complemento y anticuerpos, y a fagocitosis, entre otras. Actualmente se ha dado gran importancia al estado inmunol6gico de la ubre al momento del parto y la mayoria de Jos autores coinciden en que la ubre se encuentra especialmente inmunocomprometida en etapas tempranas del desarrollo reproductivo en. novillas y en el_periparto en vacas (Quiroga, 1993). En un estudio realizado por Oliver et al. (1990), se demosird que, para diferentes especies de Staphylococcus spp, el crecimiento bacteriano fue alto al final de 1a lactancia, al parto y al inicio de la nueva lactancia, lo cual estavo intimamente relacionado a una disminucién de lactofettina y aumento de citrato en este periodo, mientras que, por el contrario, el crecimiento fue pobre entre los dias 14 y 28 de la involucién de ta ubre, lo gue produjo una eliminacién espontanea de las infecciones en este momento del secado. Aunque se ha demostrado que la disponibilidad de hierro es fundamental pata diferentes especies de estafilococos (Tizard, 1995), y que este ion se hace menos disponible en presencia de lactoferrina, Staphylococcus aureus parece set menos sensible a estos cambios, por lo que puede permanecer erénicamente en !a ubre y manifestarse cuando se presenten las condiciones favorables de inmunosupresi6n. La mayoria de las infecciones, aproximadamente el 80 %, que se presentan después del parto persisten durante toda Ia lactancia sin importar el tipo de microorganismo involucrado y, sélo un 16 % eliminan su infeccién en el caso de até genos mayores como Staphylococcus aureus. Sin embargo, mas de la mitad de los cuartos suften re-infeceiones las cuales ocurren principalmente en Jos 3 primeros meses de la lactancia, y muy especialmente posterior al parto cuando el animal es sometido a una situacién de estrés (Rainard y Poultrel, 1982). Durante el parto, ocurren una serie de cambios que pueden inducir a inmunosupresién en la vaca, En primer lugar, se conoce del aumento del cortisol sangufneo especialmente en el feto, el cual tiene un efecto sobre la madre causando disminucién en el secuestro de leucocitos, principalmente PMN de la médula ésea. En la madre, se producen ademés las llamadas protefnas de fase aguda que contrarrestan este efecto del cortisol puesto que son capaces de inducir, entre otras cosas, leucocitosis. Sin embargo, si los niveles de cortisol son muy altos por una situacién de estrés prolongada en el parto, estas proteinas de fase aguda pueden verse deprimidas y el resultado neto de esto sera una inmunosupresion (Alsemgeest et al., 1993). Ademas de lo anteriormente dicho, algunos autores han demostrado que durante el periodo post-parto pueden ocurtir desbalances metabélicos tales como hipocalcemia y acetonemia, lo cual puede deprimir42 Bfecto del Levamisol sobre la Persstencia de Infecclones por Staphilococcus aureus las funciones normales de PMN causando por lo tanto inmunosupresién (Kherly y Goff, 1989). Debido a las condiciones de inmunosupresién que ocurren en el periparto involucrando Ia actividad fagocitica de los PMN, que son las células mas importantes en la eliminacién de Staphylococcus aurens de las secreciones lécteas en bovinos, el levamisol puede ser_una potente droga restauradora del equilibrio inmunologico de la ubre en este perfodo debido a, su efecto favorable sobre Ja quimiotaxis y fagocitosis de PMN (Jayappa y Locke, 1982); y su efecto adyuvante sobre los macréfagos que son las principales células de integracién de la respuesta inmune celular y humoral (Osebold, 1982). A pesar de que cl uso del levamisol se ha Timitado a 1a medicina humana en el tratamiento del edncer (Hadden, 1993) y en medicina veterinaria como adyuvante en la preparacién de vacunas para IBR (Irwin et al., 1976; Babiuk y Mirsa, 1981); algunos estudios confirman su utilizacién en la prevencién de mastitis, muerte fetal y endometritis en vacas lecheras utilizado por via subcutinea a la mitad de la dosis desparasitante (2.5 mg/Kg de peso) semanalmente por 6 semanas antes del parto, obtenigndose excelentes resultados en Ia prevencién de estas patologias (Flesh et al., 1982), ‘Asi mismo, se ha sefialado el efecto beneficioso que cl levamisol tiene sobre la transferencia de anticuerpos maternos de Ia madre al becerro a través del calostro. En trabajo realizado por Deshpande et al. (1991), se determiné que los niveles de anticucrpo ‘en suero y leche se inerementaron una semana despues del tratamiento con levamisol en vacas gestantes y por ende, la concentracién de inmunoglobulinas en el calostro de vacas tratadas fue de mejor calidad que aquellas no tratadas principalmente en las primeras 120 horas después del parto. La terapia con antibiéticos en el secado ha sido la principal medida de control utilizada contra los diferentes patégenos de Ia ubte, pero para el caso especifico de ‘Staphylococcus aureus, su utilidad ha sido muy limitada. La razén por la que no se obtiene un 100 % de eficiencia con la antobioticoterapia, es porque las toxinas producidas por la multiplicacién de la bacteria en las areas distales de la glindula mamaria, causan migracién de células inflamatorias y en especial PMN hacia Ios tejidos secretorios donde exteriorizan sus enzimas lisosomales causando dafio en el tejido, con formacién de microabscesos y obstruccién de pequefios ductos lo cual hace imposible la penetracién de los antibidticos, (Vestweber y Leipold, 1993). Las terapias inmunol6gicas, se convierten por lo tanto en una buena opeién para disminuir las infecciones por los patégenos de la mastitis, no en sustitucién de los antibidticos, sino en combinacién con estos y con otros métodos tradicionales dentro de Jos programas de control y erradicacién que se establecen en la finca (T'yler et al., 1993).Francisco J. Vargas y Jorge Escalona 4“ MATERIALES Y METODOS Ae DISENO EXPERIMENTAL EI presente estudio se realiz6 bajo un disefto experimental de caso-control, ciego y aleatorizado, B.- POBLACION Y MUESTRA Para el estudio se tomé una muestra de 25 vacas de razas Holstein, Jersey y Carora; con edades comprendidas entre 3 y 9 aflos y con una produccién promedio de 27 litros; procedentes de una finca ubicada en el distrito Moran del estado Lara con una poblacidn de vacas en ordefio de 350 animales en promedio. La seleccién de los animales, se realiz6 en forma aleatoria al momento del secado (final de la lactancia), tomando en cuenta que el tiempo de duracién del perfodo seco para todos los animales muestreados fuera igual a 2 meses. Todos los animales seleccionados fucron sometidos a un estudio bacteriolégico de la secrecién lactea para determinar Ja presencia de una mastitis subelinica por Staphylococcus aureus, lo cual era el requisito més importante para ser incluida en el ensayo, Los animales, asi seleccionados, recibieron el manejo rutinario que se aplica en la finca para el secado de las vacas como son: ordefio a fondo y escurrimiento de cada uno de los cuartos, aplicacién de un antibidtico intramamario, con todas las medidas asépticas para Ia infusién del mismo, y aplicacién de una solucién desinfectante en la punta del pezon como sellador a base de yodo al 2%, Posteriormente todas fueron mantenidas a potreto donde recibieron la misma alimentacién y manejo que el resto del rebafio que se encuentra en secado. Aproximadamente 15 dias antes de la fecha probable de parto, fueron llevadas a un corral aparte sin techo, donde recibieron la misma alimentacién y manejo que el resto de los animales en condicién de pre-parto Los vacas permanecieron en el ote de pre-parto un maximo de 3 dias y posteriormente fueron levadas al lote de produccién donde se ordefiaron 2 veces al dia con un equipo de ordefio mecdnico en perfectas condiciones de funcionamiento e higiene y recibiendo el manejo rutinario que se hace en fa finca durante el ordefio incluyendo, entre otras cosas, el pre-sellado con una solucién de yodo al 2 %, secado de cada pezén con papel absorbente, prueba de fondo negro para deteccién de mastitis clinica, ordefio y sellado con la misma solucién desinfectante.44 Ffecto del Levamisol sobre la Persistencia de Infecclones por Staphilococeus aureus 1. Grupos Los animales seleccionados para el estudio fueron divididos alcatoriamente en dos grupos de 10 animales cada uno ; un grupo control que recibié tnicamente el tratamiento intramamario aplicado en la finca y un grupo tratado que recibié la aplicacién de antibiético intramamario mas ¢l fosfato de levamisol a la dosis de 2.5 milkg de peso corporal por via subcutinea cada 15 digs desde el momento del secado hasta el parto, para un total de 5 dosis (0, 15, 30, 45, y 60 dias ), en forma similar a la sefialada por Flesh et al.(1982). Los antibiéticos usados durante el ensayo fueron espiramicina, novobiocina y cloxacilina, Un grupo de 5 animales que dieron negativos al cultivo antes del secado, no fueron incluidos en los grupos de tratamiento y control pero permanecieron en el estudio para monitorear la ocurrencia de infecciones durante este periodo y la ocurrencia de nuevas infecciones durante la lactancia, 2.- Determinacién de la persistencia de infecciones por Staphylococcus aureus en el secado ‘Al momento del secado se tomé una muestra de Ia secrecién ldctea en forma aséptica para la determinacién de infeccién natural por Staphylococcus aureus. Lucgo del parto, se permitié al becerro el consumo de calostto y se procedié a tomar la muestra para estudio baceriol6gico en las primeras 24 horas. Todas las muestras de leche fueron mantenidas temperatura de congelacién hasta el momento de ser procesadas en un Japso no mayor de 72 horas, lo cual no afecta el aislamiento bacteriano, (Coles, 1986). Con Ios datos obtenidos del estudio bacteriolégico antes y después del secado, se pudo determinar el poreentaje de animales que permanecicron infectados persistentemente durante este perfodo para cada uno de los grupos. Durante la lactancia sucesiva al secado, se procedi6 a detetminar por un periodo. de 4 meses post-parto, los niveles de mastitis sub-clinica para ambos grupos de tratamiento y control. Para esto, se utiliz6 una prueba indirecta de medicin de eélulas somaticas en la leche, como lo es la prueba de California Mastitis Test (CMT). La prueba de CMT, eonsiste en hacer reaccionar Ja leche de cada cuarto de la uubre, a partes iguales, con el reactivo de CMT que contiene sulfato de alquilarilo y un indicador de pH que es el pérpura de bromocresol. La reaccién es muy especifica y ‘ocurre entre el resetivo y el Acido dexosirribonucleico (ADN) del nucleo del glébulo blanco con la formacién de un gel que puede set observado ditectamente, lo que da un cstimado de la cantidad de células somaticas, principalmente leucocitos, presentes en laFrancisco J. Vargas y Jorge Escalona 4s uubre como respuesta a una infeccién por agentes patégenos. El indicador de pH es decolorizado en presencia de leche alcalina, Io que ocurre en caso de leche mastitica (Rosemberger,1979). Para realizar la prueba de CMT, se lavan y se secan los cuartos de la ubre, se decartan los primeros chorros de leche, se colectan aproximadamente 2 mil de leche en una paleta especial que contiene un compartimiento separado para cada cuatto e ‘identificado con letras (A, B, C y D). Luego, se agregan 2 ml del reactivo realizando movimientos giratorios de la paleta y se hace la lectura en los primeros 10 a 15 segundos. La reaccién observada puede ser clasificada, dependiendo del grado de viscosidad del gel formado, en $ categorias cualitativas que representan diferentes cantidades de células sométicas por ml de leche ; a saber : Negative (N) (0- 200.000 leucocitos/ml), Trazas (T) (150.000 - 500.000 leucocitos/ml), 1 (400.000 - 1.000.000 leucocitos/ml), 2 (800.000 - 5.000.000 leucocitos/ml) y 3 (superior a 5.000.000 Jeucocitosiml). (Contreras, 1992). Este método, para estimacién de mastitis sub-clinica, es sencillo, econémico y sus resultados han demostrado tener una alta correlacién eon los contajes electrénicos de eélulas somaticas (Pearson, 1971), Mensualmente se realizé, como manejo rutinario de Ia explotacién, Ja prucba de CMT para la detecoién de mastitis sub-clinica. Los animales del ensayo que se incorporaron en el lote de produccién también fueron incluidos en esta prueba y los resultados de a misma fueron registrados en una planilla individual por animal, donde ademés se registraron otros eventos tales como desarrollo de mastitis clinica, tratamientos, registtos reproductivos y de produccién , entre otros, Para los efectos del trabajo, se ealculé en primer lugar el porcentaje de animales que tuvieron al menos un cuarto con una infeccién subclinica incluyendo todos los grados (T, 1, 2 y 3) usando el valor del cuarto més alto en CMT para elasificar al animal Posteriormente se hizo una discriminacién de los casos de mastitis sub-clinica alta y bajas, para lo cual se considerd como niveles de mastitis subclinica bajos aquellos cuartos que dieron un CMT de T (trazas) y 1, y como mastitis subclinicas altas aquellas reaceiones que dieron un grado 2 y 3 en el CMT. 4 Andi de datos Para medir el efecto del levamisol sobre la persistencia de infecciones durante el secado se procedié a calcular el Porcentaje de Persistencia como el mimero de animales infectados después dei secado, en funcién del totel de animales muestreados, determinandose un porcentaje de persistencia total y para cada grupo. Asi mismo, s¢ realiz6 una prueba de chi-cuadrado para los resultados de cultivo después del secado en Jos grupos tratados y no tratados, a fin de determinar si existen diferencias significativas.46 Efecto del Levamisot sobre la Persistencla de Infecciones por Staphilococeus aureus ee eee eee ee eeeeeeeeee et er Steere teers teeeree eee eretaee Los resultados de CMT se analizaron calculando y graficando por separado los porcentajes de mastitis subclinica totales, altos y bajos en los primeros 4 meses de lactancia para grupos tratados y no tratados del total de animales muestreados. De esta misma manera se analiz6 el progreso de los casos de mastitis subclinica alta (CMT =2 y 3) para animales que resultaron con infecciones persistentes a fin de evaluar el comportamiento de este grupo en la lactancia y medir el efecto del tevamisol en cllos. Los casos de mastitis subclinica bajos (CMT T y 1) se analizaron por separado en virtud de que el levamisol pudiese inducir cierto grado de respuesta celular a nivel de la bre, que algunos autores sefialan como protectivos para prevenir Jos casos de mastitis ‘ms graves (Nickerson, 1985). Para determinar diferencias significativas entre los grupos tratados y no tratados ‘en telacién al CMT, se realizé una prucba de chi-cuadrado para cada uno de los 4 meses siguientes a la lactancia, RESULTADOS En la medicién det efecto del levamisol sobre Ja persistencia de infecciones durante el secado causadas por Staphylocaccus aureus, se pudo determinar que no existieron diferencias significativas entre el grupo tratado y no tratado en los cultivos después del secado en cuanto @ la presencia de Staphylacoccus aureus. Por tal motivo se pudo constatar que el levamisol no tuvo efecto en la eliminacién de la persistencia de infeociones causadas por esta bacteria durante el secado, Estos resultados se muestran en el CUADRO 1 donde se observa que el porventaje de persistencia de infeccibn para el ‘grupo tratado y no tratado fue similar, lo que represent6 un porcentaje de persistencia de 55 % para ambos grupos. En el grupo de 5 animales que fueron negativos a cultivo antes del secado utilizados como monitoreo, se comprobé que el 100 % de ellos permanecieron negativos hasta el momento del parto lo que demuestra una baja ocurrencia de nuevas infeeciones intramamarias durante el secado (CUADRO 2). Como puede observarse en el CUADRO 3, el 80 % de estos animales desarrollaron mastitis sub-clinica en los primeros 2 meses (60 % en el primer mes y el 20 % restante en e! segundo mes), lo que indica la ocurrencia de nuevas infecciones en este periodo de la Tactancia Se encontraron diferencias significativas (P<0,05) entre el grupo tratado y no tratado en los resultados del CMT (T, 1, 2 y 3), en el primer mes post-parto, aunque no fue significativo para los meses siguientes. Como puede observarse en el CUADRO 4, el porcentaje de mastitis subclinica en el primer mes para el grupo tratado fue de 17 % comparado con 43 % en el grupo control. Sin embargo, se observé que en el segundoFrancisco J. Vargas y Jorge Escalona a7 mes los casos de mastitis subelinica en el grupo tratado, aumenté casi hasta igualarse con cl grupo control para mantenerse por debgjo de este en los meses siguientes. La FIGURA | demuestra la forma como se distribuyen mensualmente los porcentajes de CMT en los grupos tratados y no tratados , pudiendo observarse que en el primer grupo se mantuvo por debajo del control en los 4 primeros meses de lactancia, siendo especialmente manifiesta esta diferencia en el primer mes, donde el grupo tratado tavo un porcentaje de mastitis subelinica, medido por CMT, por debajo del grupo control, En Ja discriminacion del CMT en mastitis subelinica alta y baja, se pudo constatar que ocurtieron mastitis subelinicas altas ( grado 2 y 3) en 48 % de los animales en el primer mes de lactancia, continuindose con poreentajes de 64, 50 y 36 % respectivamente pata los meses siguientes , lo cual representa porcentajes altos que se corresponden con altos contajes de células somaticas en todos los meses (CUADRO 5). Al revisar el comportamiento de cada grupo, se pudo constatar que el nivel de mastitis subclinica en el primer mes de tactancia fue menor en el grupo tratado comparado al grupo control mostrando diferencias significativas. En los meses siguientes no hubo diferencias estadisticamente significativas, pero como puede observarse en la FIGURA 2, el comportamiento del grupo tratado fue mejor que el control, mostrando un menor poreentaje de animales con mastitis subelinica alta, lo cual, se hace mis evidente en la curva luego del terver mes, donde los resultados del grupo tratado disminuyeron drasticamente comparado con el grupo control En la determinacién del porcentaje de animales que desarrollaron niveles bajos en el CMT (Trazas y 1) se pudo constatar que esta fue alta especialmente en el segundo (56 %) y encl cuarto mes (83 %). Sin embargo, se encontré que en los animales tratados los niveles de mastitis subclinica baja estuvieron siempre por encima del grupo control (CUADRO 6). En la FIGURA 3, puede apreciarse que los porcentajes de animales con mastitis sub-clinica baja, que representan menores contajes de células somaticas, fueron mayores en el grupo tratado con mayores diferencias en los meses | y 4 de lactancia, 3s importante destacar, que entre Jos meses 3 y 4 (FIGURA 3), se produce un aumento significativo del porcentaje de animales que fueron tratados y que presentaban valores de CMT bajo, comparado con la disminucién de los porcentajes de animales que presentaban CMT alto que se produce entre estos meses (FIGURA 2): dando como resultado un aumento neto en el CMT total FIGURA 1). Quiere decir, que entre estos meses se produjo un aumento en los valores del CMT total, pero este estuvo dado principalmente por un aumento de animales con bajos contajes de eélulas somaticas representadas, en forma indirecta, por niveles bajos en el CMT. Al analizar el comportamiento de estos animales persistentemente infectados en Ia lactancia siguiente, se puede notar que e! porcentaje de animales que desarrollaron.48 Efecto det Levamisol sobre ta Persistencla de Infecclones por Staphilococcus aureus mastitis subelinica alta (CMT 2 y 3), fue de 22 % en el primer mes y 36, 30 y 45% en los meses siguientes, (CUADRO 7), Sin embargo, al observar el comportamiento por grupos, se puede apreciar que los porcentajes de mastitis subclinica alta (CMT=2 y 3) fueron mayores en el grupo control y no mostraron la caracteristica ciclica observada en los animales tratados. Por lo tanto, estos animales mostraron reacciones eclulares altas a lo largo de los 4 primeros meses de su Jactancia y muy posiblemente en el resto de la misma, lo cual no ocurrié con el grupo tratado (FIGURA 4). DISCUSION EL ‘tratamiento de vacas durante el secado con levamisol a la dosis inmunoestimulante (2,5 mg/kg por via sub-cuténea cada quince dias), no tuvo ningin efecto sobre la persistencia de infecciones causadas por Staphylococcus aureus durante el secado, pero si mejor6 los niveles fa aparicion de mastitis subclinica en la lactancia siguiente, resultando en menores contajes de células sométicas medidos en forma indirecta por la prueba de California pata mastitis (CMT) (CUADRO 1), En estudio realizado por Kherli et al. (1991), se determiné que la administracién del factor estimulante de las colonias de granulocitos (G-CSF), que también tiene un efecto inmunoestimulante, produjo un aumento en el nimero de leucocitos y especialmente PMN y un aumento en su actividad fagocitica y otras funciones in vitro pero no sobre la eliminacién de Staphylococcu aureus, lo cual representa un resultado semejante al encontrado en el presente trabajo. Los niveles de persistencia de infecciones para Staphylococcus aureus durante el secado fueron de un 55 % en este estudio (CUADRO 1), lo cual representa un valor relativamente alto si se considera que los animales fueron tratados adecuadamente con antibiéticos en el secado, Sin embargo, los resultados de otros estudios, indican solo un 60% de reduccién de infecciones causadas por diferentes especies de Staphylococeus spp. cuando se realiza la terapia con antibidticos en infecciones subclinicas en el secado, (Griffin, 1971). Para el caso de Staphylococcus aureus, muchos trabajos han sefiaiado una rata de curacién de cuartos infectados en forma subelinica, de un 25 al 55 % con diferentes antibiéticos y combinaciones de los mismos, por lo que, muchos de estos cuartos permanecen crénicamente infectados a lo largo del periodo seco y en la lactancia siguiente. Por lo tanto, la eliminacién de estas infecciones no puede lograrse usando nicamente los antibiético y deberén considerarse otras medidas de control (Erskine et al.,1993),Francisco J. Vargas y Jorge Escalona 9 La terapia con levamisol como inmuncestimulante, no elimin6 la persistencia de casos crénicos en el secado, sin embargo, la disminucién observada en los contajes de células somaticas al inicio de Ia lactancia, demuestran que estas infecciones erénicas pueden mantenerse controladas al disminuir el principal efecto adverso de las mismas, como lo son los altos contajes celulares en Ia leche, que alteran su calidad. El Consejo Nacional de la Mastitis (1996), establece que el tratamiento més costo-efectivo para Staphylococcus aureus, es 1a eliminacién, por cultivos bacteriolégicos, de animales crénicamente infectados. Sin embargo, para aquellas fincas que no cuentan con el recurso de laboratorio, situacién comunmente observada en nuestro medio, el uso del Jevamisol, en combinacién con antibioticos, podria ser una buena opeién para disminuir los efectos producidos por este patégeno. Sin embargo, la decisién entre eliminar animales crdnicamente infectados o mantener estas infecciones controladas, dependera de que la finca se encuentre en una fase de erradieacién o control de la enfermedad. Diferemtes estudios han demostrado que la terapia del secado con antibidticos, previene la ocurrencia de nuevas infecciones en este periodo, pero no previene las nuevas infecciones intramamarias que ocurren Inego del parto (Consejo Nacional de la Mastitis, 1996). Los primeros 7 dias del periodo seco son muy importantes, puesto que en ellos ocurre el mayor niimero de infecciones sobre todo cuando no se Hevan a cabo medidas sanitarias adecuadas, ya que, en este momento, no esti bien formado aiin el tapén de queratina en la punta del pezén y el didmetro del canal es mucho més amplio que en los dias siguientes lo que hace a la ubre mas susceptible a la infeccién, siendo la terapia con antibiéticos al inicio del secado muy efectiva para controlar estas infecciones (Vestweber y Leipold, 1993). En este trabajo, el nimero de infecciones que ocurrieron durante el secado fue rnulo, como to demuestran los resultados en el grupo de animales de monitoreo (CUADRO 2), Io cual es indicativo de tun buen manejo en el secado. Sin embargo, un alto porcentaje de ellos desarrollaron mastitis sub-clinica alta especialmente en el primer mes post-parto (CUADRO 3), lo que sugiere ta ocurrencia de nuevas infecciones en este periodo, a pesar de que en la finca se aplican medidas adecuadas de control Asi mismo, puede apreciarse en las diferentes grificas (FIGURAS 1, 2, 3. y 4), «que en el primer mes de lactancia los animales tratados con levamisol presentaron bajos contajes de células sométicas en la leche, pero, en todos los casos se produjo un aumento de estas células en el segundo mes. La presentacién cfclica con aumento de células sométicas observada en todas las arficas, puede set explicado por Ia ocurrencia de nuevas infecciones intramamarias en este momento o la reactivacién de las infecciones crénieas que se mantuvieron en forma persistente luego del secado, como fue sefialado por Daley et al, (1991) en su modelo de presentacién ciclica de los contajes celulares en relacién a los cultivos bacteriolégicos, quienes explican que Ia ocurrencia de esta ciclicidad se debe a que la presencia de la bacteria produce quimiotaxis de PMN, lo que se manifiesta como picos de aumento de50 Efecto del Levamisol sobre la Persisiencla de Infecctones por Staphilococeus aureus células somiticas, las cuales, posteriormente, disminuyen cuando estas eélulas han eliminado gran parte de los mictoorganismos, quedando un remanente de estos en forma intracelular que son capaces de reactivar nuevas eélulas y comenzar un nuevo cielo. E| levamisol no previno la ocurrencia de nuevas infecciones en la lactancia ni la reactivacién de las infecciones crénicas ya existentes, pero si indyjo una respuesta celular de menor grado a la observada en el grupo control, lo cual es un aspecto favorable si se toma en cuenta el efecto negativo que tienen los altos contajes celulares en la leche sobre la calidad y produceién de Ia misma., En el grupo de animales con infecciones persistentes durante el secado, se observa un mayor efecto del levamisol sobre los contajes de células somiticas representados por el CMT. De estos, en el grupo control hubo mastitis subelinica alta a partir del primer mes, manteniéndose casi constante en los meses siguientes de fa lactancia, lo cual no ocurié en el grupo tratado, donde el porcentaje de animales con mastitis subclinica alta tendié a mantenerse muy por debajo del anterior, mostrando su forma ciclica particular. Por lo tanio, en animales con infecciones erénicas persistentes por Staphylococcus aureus el levamisol redujo la severidad de la mastitis subelinica durante la lactancia al mantener bajos los niveles de células somaticas que se producen como consecuencia de la reactivacién ciclica de estas infecciones. El efecto que tuvo el Jevamisol sobre la mastitis sub-clinica durante la lactaneia se muestra en el CUADRO 4 y FIGURA 1, donde puede verse que el porcentaje de animales con mastitis subclinica es menor en el grupo tratado que en el control, especialmente en el primer mes post-parto, -y se mantiene asi a lo Jango de fa lactancia La curva resultante ¢s siempre ciclica pero el nivel de la misma esta determinado muy especialmente por el primer mes de lactancia, ya que como puede apreciarse en la grdfica, si en el primer mes se logran bajos contajes de células somiticas , la curva tenderd a mantenerse més baja durante el resto de la lactancia, Los hallazgos sefialados refuerzan ain mas la importancia que tiene el primer mes de lactancia en el comportamiento de la mastitis subclinica en el resto de la misma, puesto que, como fue sefialado por Rainard y Poultrel (1982), un alto porcentaje de los animales que adquieren infecciones en el primer este primer mes, permanecen cronicamente infectadas a lo largo de la misma y en lactancias sucesivas. El uso del evamisol, asegura que las vacas inicien su produccién mAs protegidas contra las muevas infecciones que ocurren en este periodo y puedan ser capaces de mantener bajos contajes celulares aiin en presencia de infecciones erénicas, El momento en que ocurren las re-infecciones es importante en la patogenia de la enfermedad. Se ha determinado que mis de la mitad de las nuevas infecciones ocurren en los tres primeros meses de la lactancia y muy especialmente al final de la misma y en el periparto (Oliver et al., 1990). En el grupo de animales control, la severidad de estas ‘nuevas infecciones en el primer mes post-parto fue mucho mayor a In observada en el ‘grupo tratado con levamisol, lo cual puede observarse en las graficas (FIGURA 1, 2 y 3),Francisco J. Vargas y Jorge Escalona st donde se aprecia la diferencia significativa entre ambos grupos. Por lo tanto, el levamisol, administrado durante el secado, fue capaz de prevenir Ia ocurrencia de nuevas infeecioncs en el primer mes de lactancia y disminuir la severidad de la mastitis subclinica en animales con infecciones persistentes luego del secado (FIGURA 4) Al analizar en forma discriminada los resultados del CMT dividiéndoios en altos (CMT- 2 y 3) y bajos (CMT=T y 1), podemos damos cuenta de que en el segundo mes ‘ocurre un aumento de los casos con mastitis subclinica alta y baja con mayor proporcién del primero, pero entre el tercero y cuarto mes se produce una diferencia significativa ‘con aumento de los casos con contajes de células bajos (FIGURA 3) y disminucién de Jos casos con contajes alto (FIGURA 2), sin que esto deje de producir un aumento neto en el contaje total (FIGURA 1). Esto quiere decir, que para este momento habré mayor niimero de animales con contajes de células somiéticas bajos, pero que en el céleulo de un CMT como se realiza normalmente se observaria como un aumento. La importancia que pueden tener los contajes de células somaticas bajos ha sido sefialado por algunos autores (Nickersson, 1985) quienes sostienen que estos pueden ser protectivos para la ubre, puesto que la mayorla de fas infecciones durante la lactancia curren precisamente cuando disminuyen los contajes de eélulas en las ubre. Por lo tanto, es preferible en muchos casos sacrificar un nivel de produceién mucho mayor para obtener una mejor proteccién de los cuartos al desarrollo de nuevas infecciones. Asi mismo, si la mastitis subclinica se presenta en forma ciclica a lo largo de la lactancia, con picos producidos por aumento de células somiéticas, lo ideal seria que la mayoria de los animales desarrollaran respuestas celulares bajas que sean protectivas pero que no alteren ni la produccién ni la calidad de la leche como ocurre con los contajes celulares altos. Como puede observarse en este estudio esto puede lograrse con el levamisol. Por todo lo anterior, puede verse que el levamisol, aplicado como inmunoestimulante durante el secado no controla la persistencia de infecciones causadas por Staphylococcus aureus, pero si mejora significativamente los niveles de mastitis subeliniea tanto en los animales con infecciones erSnicas persistentes como en los que se infectan durante la lactancia, lo cual se manifiesta prineipalmente, por una respuesta ‘celular a nivel de la ubre caracterizada por ser de baja intensidad en el CMT lo que se correlaciona con bajos contajes de células somaticas. Por otta parte, Ja terapia con levamisol, al igual que otras inmunoterapias, abren nuevas posibilidades en el control de la mastitis, en combinacién con la antibioticoterapia o como adyuvante en ef uso de futuras bacterinas. Las bacterinas contra Staphylococcus aureus no han sido capaces de prevenir la ocurrencia de nuevas infeccioncs intramamarias, pero si han mejorado la severidad de los casos clinicos. Sin embargo, Ia combinacién con adyuvantes tales como el levamisol, podrian mejorar los resultados obtenidos con el uso de estas bacterinas, ya que, hasta ahora, ninguno de los procedimientos de control han dado resultados satisfactorios por separado, pero si cuando se aplican en combinacién con otras medidas. Asi mismo, estas terapias52 Efecto del Levamisol sobre la Persstencia de Infecciones por Staphilococcus aureus eee eee inmunolégicas no serin efectivas, a menos que se combinen con los métodos tradicionales de contro! tales como, sellado de pezones post-ordefo, antibioticoterapia en el secado, medidas de higiene y fimcionamiento de equipos de ordefio y la identificacién y eliminacion de animales crénicamente infectados (Lawrence y Gay, 1993), CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES, Fl levamisol puede ser utilizado como inmunoestimulante durante el secado de vacas como parte de un programa de control de mastitis en fincas con alta incidencia de Staphylococcus aureus, para reducit los contajes de células sométicas durante la lactancia y ofrecer un mejor nivel protectivo a las ubres contra este ¥ otros patégenos Mayores, puesto que el mismo es capaz. de inducir respuestas cclulares bajas que son Protectivas y no afectan la produccién nila calidad de la leche. Segiin los resultados obtenidos, es factible fa utilizacién del levamisol en forma de fosfato a la dosis de 2,5 mg/Kg de peso por via sub-cuténea quincenalmente durante todo el perfodo seco hasta el parto. Sin embargo, futuros estudios deberfan ir dirigidos a probar diferentes dosis a diferentes intervalos de tiempo, ya que otros autores han sefialado su utilizaciOn semanal, pero ésta tiene el inconveniente de que en algunas fincas puede ser impréetico este uso si el secado de las vacas no se realiza semanalmente sino quincenal como ocurrié en la finca donde se realizé el ensayo. Debido a que los resultados sobre la mastitis subclinica fueron mas significativos durante el primer mes de lactancia, en vista de que Ia mayoria de las infecciones ocurren «en los dos primeros meses de la misma y que estos son determinantes sobre el desarrollo de la mastitis subcliniea en los meses siguientes, pudiese estudiarse la posibilidad de prolongar este tratamiento al menos hasta el primer mes de lactancia, acompafiado de una observacién y tratamiento temprano de los casos de mastitis clinica que puedan sucederse. sto permitiria una mayor proteccién en tas fases tempranas de la lactancia y reduciria el niimero de nuevas infecciones que ocurren en este petiodo, lo que resultaria en un menor nimero de ubres infectadas y menores contajes celulares. Por otra parte, debe recordarse que ¢l tratamiento con levamisol no es efectivo contra la eliminacién de infecciones durante el secado, por lo que deben tomarse en cuenta otras medidas de control complementarias para hacer més efectiva esta climinacién como lo son: el uso de antibidticos en el secado de todas las vacas, adecuadas medidas de higiene y sanidad cn el secado y en el ordefo, el reemplazo de animales mas viejos por otros de menor edad y un funcionamiento adecuado de los equipos de ordefio, Asi mismo, deberd considerarse el sactificio de animales crénicamente infeetados identificados por cultivos bacteriolégicos, ya que este tipo de animales se considera la principal suente de contaminacién de este patégeno en el rebaio.Francisco J. Vargas y Jorge Escalona 3 eee eee eee eee ee Eee eeSEESE PES FEET Debido a la dificultad para controlar las infecciones por Staphylococcus aureus, se debe profundizar atin més en el conocimiento de la inmunologia de la ubre para lograr métodos mds efectivos de control de este patégeno, con miras a la obtencién de bacterinas adecuadas que den una respuesta eficiente. En este caso, podrfa considerarse 4a utilizacién del levamisol como adyuvante en el uso de estas bacterinas por la adecuada repuesta celular que produce a nivel de la ubre, especialmente sobre los PMN que son la linea de defensa principal de la glindula mamaria contra las infecciones bacterianas, Es también importante para futuras investigaciones Io relacionado al efecto del levamisol sobre la respuesta de tipo humoral, ya que como se sabe, el mismo puede inducir también un aurnento de estos mecanismos de defensa en el organismo, que en el caso de la ubre pueden ser importantes para la eliminacién de agentes patSgenos.54 Efecto det Levamisol sobre la Persistencla de Infecciones por Staphilococeus aureus Se ae ae BIBLIOGRAFIA |- ALSEMGEEST, S. P., TAVERNE, M. A. M., BOOSMAN, R., VAN DER WEYDEN, B. Cand GRUYS, E. 1993. Peripartum acute-phase protein serum amyloid-A concentration in plasma of cows and fetuses, Am. J. Vet. Res., Vol 54, No 1, pp. 164-168, 2.- BABIUK, L. 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Virulence, defence mechanisms and stablishment of infection, Continuing Education, Vol. 15, No. 11, pp. 1561-1569,58 Efecto del Lesamisol sobre la Persistencia de Infecciones por Staphilococcus aureus CUADRO 1 PORCENTAJE DE PERSISTENCIA DE INFECGION DE STAPYLOCOCCUS AUREUS DESPUES DEL SECADO EN RELAGION A LEVAMISOL, TOTAL POSITIVOS % ‘TRATADOS, 10 5 50% NO TRATADOS 10 6 60%. TOTAL 20 “ 55% CUADRO2 PORCENTAJE DE INFECCION POR STAPHYLOCOCCUS AUREUS DURANTE EL SECADO EN ANIMALES MONITORES (NEGATIVOS AL CULTIVO INICIAL) Tora positives % TRATADOS 2 0 0 |vo TRATADOS 3 ° ° TOTAL 5 0 ° CUADRO3 DISTRIBUCION POR MES DE MASTITIS SUB-CLINICA ALTA (CMT=2 Y 3) EN ANIMALES MONITORES. WEST __WES2_ TOTAL casos 3 1 4 % 60 20 20Francisco J. Vargas y Jorge Escalona 79 CUADRO4 DISTRIBUCION POR MES DE LOS PORCENTAJES DE MASTITIS SUB-CLINICA (CMT =T,1,2y 3) MEST MES2_[ MESS | WES@ [FRATADOS | — 17%" a% 20% 36% INOTRATAD] 43%" 48% 35% 48% [FOTAL 61% 86% 65% 62% "*Diferencias significativas (P=0.05). FIGURA1 | __ DISTRIBUCION POR MES DE LOS PORCENTAJES. DE MASTITIS SUBCLINICA (CMT=T, 1, 2y 3) CUADROS DISTRIBUCION POR MES DE LOS PORCENTAJES DE MASTITIS SUBCLINICA ALTA (CMT =2y 3) MES{_JWES2——MES3_—_— [MES @ [FRATADOS [13%" arm [20% o% INO TRATAD |35% 36% [20% [40% [roraL___[48%" [sa [50% [36% *Diferencias significativas (P<0.05)Efecto del Levamisol sobre ta Persistencia de Infecclones por Staphilococcus aureus FIGURA2 ene See cimeccneae 40% 35% 158% 10% MeSiMES2 MESS (MES CUADRO 6 DISTRIBUCION POR MES DE LOS PORCENTAJES DE MASTITIS SUBCLINICA BAJA (CMT=1) MEST WES? MESS | MES TRATADOS | 17%" 33% 2% 7% INOTRATAD| 22%" 22% 11% 17% TOTAL, 33%" 56% 33% 83% *Diferencias significativas (P=0.05)Francisco J. Vargas y Jorge Escalona 6 FIGURA 3 DISTRIBUCION POR MES DEL PORCENTAJE DE | MASTITIS SUBCLINICA BAJA (CM | | | Mest MES? ONES CMS | CUADRO7 DISTRIBUGION POR MES DE LOS PORCENTAJES DE MASTITIS SUBCLINICA ‘ALTA (CMT= 2 Y 3) EN ANIMALES CON INFECCION PERSISTENTE. [MEST WES? [__WESS Esa TTRATADOS | __ 4%" 14% 3% 718% INO TRATAD| 17%" 23% 25% 27% roTAL 22% 36% 30% 45% *Diferencias significativas (P=0.05) FIGURA 4 ' DISTRIBUCION POR MES DE LOS PORCENTAJI I DE MASTITIS SUBCLINICA ALTA EN i INFECCIONES PERSISTENTES: