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Biosíntesis de porfirinas (Hemo)

Síntesis de ác. δ-amino levulínico

a) En mamíferos.

b) en plantas, algas y algunas bacterias

Regulación: Inhibición por hemo libre.
Regulación: Inhibición por hemo libre.

8 moléculas de δ-amino levulinato generan el grupo hemo en una serie de reacciones mitocondriales y citosólicas

grupo hemo en una serie de reacciones mitocondriales y citosólicas (1), (6) y (7) en mitocondr

(1), (6) y (7) en mitocondrias; (2) a (5) en citosol.

hidroximetilbilano

hidroximetilbilano

La reacción de decarboxilación está acoplada al transporte a mitocondria

La reacción de decarboxilación está acoplada al transporte a mitocondria

Porfirias: deficiencias genéticas en la síntesis de hemo

Porfirias: deficiencias genéticas en la síntesis de hemo

Catabolismo del hemo

Degradación de la hemoglobina: esquema general

Degradación de la hemoglobina: esquema general

Reacción de la hemooxigenasa

Reacción de la hemooxigenasa

Características de la hemooxigenasa

- - Dos isoenzimas: HO-1 (inducible por hemo) y HO-2 (constitutiva)

- - Etapa limitante en la formacn de bilirrubina

- - Unica fuente endógena conocida de CO

- - El CO (como el NO) participa en la reacción

inflamatoria mediada por cGMP

- - Donor de electrones: NADPH citocromo P450 reductasa

- - Inhibida competitivamente por Sn-Hemo

La biliverdina es fácilmente excretada por el hígado, y es el producto final en aves, anfibios y muchos peces. En la mayoría de los mamíferos, en cambio es convertida a bilirrubina.

Características de la biliverdina reductasa:

- Requiere NADPH o NADH

- Tres isoformas descriptas de 70 kDa

- Amplia especificidad de sustrato

Reacción catalizada por la biliverdina reductasa

Reacción catalizada por la biliverdina reductasa

Puentes de hidrógeno intramoleculares y fotoisomerización de bilirrubina

intramoleculares y fotoisomerización de bilirrubina La fotoisomerización rompe los puentes de H

La fotoisomerización rompe los puentes de H intramoleculares e incrementa la solubilidad

Conjugación de bilirrubina con glucuronato

Conjugación de bilirrubina con glucuronato
ABC-transporters are responsible for primary bile formation Anionic Bil e sa lt s conjugates Mrp2
ABC-transporters are responsible for primary bile formation
Anionic
Bil
e sa
lt
s
conjugates
Mrp2
Mdr1a
Bsep
Mdr2
GSH
Mdr1b
Cholesterol?
Abca1
Abca2?
PC
Abca3
Abcc6
Abcg2
Sem.Liver Dis. 2000; 20:323-337.
©MM
2000

Mecanismos bioquímicos de la toxicidad de bilirrubina

Cuando la concentración de bilirrubina supera la capacidad de ligado de la albúmina (25-30 mg/dl) se acumula en las células donde:

-Inhibe síntesis de RNA y proteínas (DNA en ciertas células)

-Inhibe metabolismo de gcidos y desacopla la fosforilacn oxidativa en cerebro

- Inhibe enzimas hidrolíticas, deshidrogenasas, enzimas involucradas en el transporte de electrones y cinasas como PKC y PKA.

Altos niveles de bilirrubina no conjugada en infantes producen encefalopatías (quernictero)

Desórdenes no hemolíticos en el metabolismo de bilirrubina

Hiperbilirrubinemia no-conjugada Neonatal: Por inmadurez hepática, es común un incremento hasta 5-6 mg/dl que decrece en unos 10 días. Sindrome de Crigler-Najjar tipo I: Deficiencia total de UDP-glucuronil transferasa. Generalmente mueren en el período postnatal por quernictero o lo desarrollan en la infancia. Toda la bilirrubina (20-50 mg/dl) es no conjugada y no presentan bilirrubinuria. Sindrome de Crigler-Najjar tipo II y Síndrome de Gilbert: Deficiencias parciales en UDP- glucuronil transferasa (de curso más benigno). La enzima puede ser inducida con fenobarbital que se usa en el tratamiento de estos casos.

Hiperbilirrubinemia conjugada Síindromes de Dubin-Johnson y Rotor: Ictericias crónicas de curso benigno. Deficiencias en la excreción de aniones orgánicos. El primero se debe a mutaciones en MR2. Ictericias obstructivas: Reducción del flujo biliar intra- o extrahepático (colestasis) por tumores abdominales, cálculos biliares (los pigmentarios son originados por la bilirrubina no conjugada), hepatitis, cirrosis y otras. Ya que la bilirrubina sérica es mayormente la conjugada (que es soluble en agua), filtra por riñon y hay hemoglobinuria. Acompañadas por deficiencia en vitaminas liposolubles a menudo manifestadas como hipoprotrombinemia (por falta de vitamina K) y osteomalacia (por falta de vitamina D). Si el bloqueo es total, no hay urobilina ni estercobilina.

Ictericias por hemólisis incrementada:

Hemólisis isoinmune neonatal (eritroblastosis fetalis) Anemias hemolíticas

Determinación de bilirrubina en líquidos biológicos

La bilirrubina reacciona específicamente con el ácido sulfanílico diazotado generando un pigmento que se mide por su absorción a 530 nm. La bilirrubina conjugada (o directa) reacciona directamente con el diazoreactivo. En cambio, la bilirrubina no conjugada (indirecta) reacciona sólo en presencia de un “desarrollador” o “activador” que la libere de la albúmina (y rompa los puentes de hidrógeno intermoleculares). Metanol, etanol o benzoato de cafeína son usados con este propósito.

Niveles de bilirrubina en condiciones normales y algunas patologías

Valores de bilirrubina en mg/dl de suero

Condición

Total

No-conjugada ( indirecta)

Conjugada (directa)

Neonatal

 

1

día

0,2-0,9

3

días

0-6

7

días

0,3-11

Normal (adulto)

0,1-1

0,2-0,7

0,1-0,3

Desórdenes hemolíticos (adultos)

2,2-3,4

2-3

0,2-0,4

Síndrome de Gilbert

1,2-3 (<5)

1,1-2,7 (<5)

normal

Síndrome de Crigler-Najjar tipo I

15-48

15-48

despreciable

Síndrome de Crigler-Najjar tipo II

6-22 (40)

6-22 (40)

trazas

Síndrome de Dubin-Johnson

2,5-20

<50% del total

>50% del total

Colestasis severa

10

1

9

Cirrosis severa

11

5

6

Hepatitis aguda-severa

10

1,5

8,5

Proteínas plasmáticas específicas participan en la retención del hierro en la hemólisis intravascular:

La transferrina fija el hierro libre permitiendo su reutilización

La hemopexina (β -globulina de 57 kDa) fija un residuo de hemo por molécula y lo transfiere al hígado para su catabolismo por hemooxigenasa. En hemólisis intensas, la hemopexina se satura y el hemo puede unirse a albúmina.

La hemoglobina libre oxigenada se disocia en dímeros α,β, los que se unen con gran afinidad a una familia de α2-glubulinas (las haptoglobinas) que los transportan a las células reticuloendoteliales (el complejo completo es captado) Los niveles de haptoglobina se utilizan como índice del grado de hemólisis intravascular.

Proteínas involucradas en el transporte y almacenamiento de hierro:

Transferrina: transporte de hierro en suero Receptor de transferrina: participa en la captación celular del hierro Ferritina: encargada del almacenamiento intracelular del hierro Lactoferrina: une al hierro en la leche