Scribd Logo
Cargar

¡Te damos la bienvenida a Scribd!

  • DisolucionMaraton4 11180

    Cargado por

    Natzi Monsalvo
    7 vistas15 páginas
    estudios de disolución

    Título original

    DisolucionMaraton4_11180

    Derechos de autor

    © © All Rights Reserved

    Formatos disponibles

    PDF o lea en línea desde Scribd

    ¿Le pareció útil este documento?

    ¿Este contenido es inapropiado?

    Denunciar este documento
    estudios de disolución

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF o lea en línea desde Scribd
    Marcar por contenido inapropiado
    7 vistas15 páginas

    DisolucionMaraton4 11180

    Cargado por

    Natzi Monsalvo
    estudios de disolución

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF o lea en línea desde Scribd
    Marcar por contenido inapropiado
    de 15
    es Pruebas de intercambiabllidad 2155 En virtud de que se encuentra en revisién la NOM-177-SSA1-1998, las condiciones de las monografias contenidas en este capitulo siguen siendo validas hasta la publicacion oficial de la modificacién de dicha NOM, momento en el! cual prevaleceran las condicio- nes indicadas en ella. ESTUDIOS DE PERFILES DE DISOLUCION INTRODUCCION El proceso de absorcién de un firmaco contenido en una, forma farmacéutica sélida, después de la administracién oral depende, entre otros aspectos, de la liberacién del principio activo del producto y de su disolucién o solubilizaci6n en las condiciones fsiolégicas. Debido a le naturaleza de estos fac- tores, la evaluaciin de la velocidad de disolucién in vitro puede ser una prediccién del compostamicnto in vivo, siem- pre y cuando el paso limitante para la absorcién sea la diso- lucida Las pruebas de disoluci6n farmacopeicas son prucbas limite puntuales, éslas tnicamente evalian la cantidad de principio activo disuelto en un tiempo determinado y el erterio de aceptacién es til para el control de calidad de! medicamen- to, pero no proporcionan informacion de Ia velocidad a la cual e firmaco se disuelve Um perfil de disoluctn considera diversos tiempos de mes- treo, lo que permite establecer la velocidad de disolucién. Un gran niimero de estudios reportados en la literatura, han de- Imostrado que si una prueba comparativa de tos perfiles de disolucién entre el medicamento de referencia y el de prucba, se diseRa y se leva a cabo de acuerdo con un procedimiento establecido, equivalentes farmacéuticos que muestran com- portamiento semejante en relacién con sus caracteristicas de velocidad de disolucién, probablemente tendrén también una biodisponibilidad comparable, Para comparar los perfiles de disolucién se utiliza el factor de similitad (f), que es un valor puntual que proviene de un modelo matemético y permite relacionar a través de una transformacién logaritimica la semejanza entre los perfiles de disolucién de los medicamentos de referencia y de prueba, Esta aproximacidn es valida bajo las siguientes considera- ‘¢ Los tiempos de muestreo son idénticos para ambos pro- ductos, ‘¢ Almenos se tienen 3.6 4 tiempos de muestreo, La norma establece 5 tiempos para lograr Ia mejor caracterizacién de ta curva Los perfiles de disolucién se realizan exactamente en las misinas condiciones operacionales. El cocticiente de variacién det por ciento disuelto no es mayor que el 20 por ciento para el primer tiempo de rmuesiteo y no es mayor que el 10 por ciento para los tiempos subsecuentes. + Lacurva de disolucion se evalia en su parte ascendente y ensu meseta Este modelo, mediante la prueba de f, eval la similitud de todo el perfil del producto de prueba en relacién con el pro- ducto de referencia Sil valor de fy es igual 0 mayor que 50 (entre 50 y 100), los perfiles son similares; es deci, para demostrar Ia simsitud de los perils, el valor de f obtenido no es menor que 50. GENERALIDADES. Una diferencia no mayor que el S por ciento en la Valo- recin del principio activo entre el producto de referen- cia y el producto de prueba, y una Uniformidad de dosis, apropiada, permiten el contol de factores adicionales en la comparacién de los perfiles de disolucién + Para que los perfles de disolucién sean validos ambos productos cumplen al menos con el segundo erterio de aceptecién de la prucba de disolucién de la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos (el promedio de 12 unidades es igual o mayor que Q y ninguna unidad es menor que Q-15 por cient). + La filtacion es una operacién que puede causarinterfe- rencia en Ja determinacién de la disolucién, causada por el efecto del material filtante sobre el principio activo. Este efecto se determina al comparar los resultados de seis datos de Ia solucidn de referencia fitrada y sin fil trar, cuya diferencia en la respuesta no es mayor que el 2 por cient. + Los gases disueltos en el medio pueden modificar el comportamiento de la disolucién, por tal motive, es ne- cesario que el medio de disolucién sea previamente des- gasificado, como se indica en el MGA 0291. + No efectuar ningin ajuste por peso para el eéleulo del porcentaje disuelto, + En todos los casos, cuando la Norma NOM-177-SSA1 vigente indica componentes de 1a muestra se vefiere a Jos aditivos VALIDACION DEL METODO ANALITICO La validacion del método analitico se justfica en virtad de {que al realizar las pruebas de perfil de disolucién se cuantifi can concentraciones menores que el valor de Q, ademas de InTRODUCCION 2156 ‘que hay que evaluar que no haya interfevencias debicas a tos adlitives 2 La validacién del méiodo para perfil de disolucién co mienza a partir de la filteacion La validacién del anétode aualitico se realize con el ae dicamento de referencia y con el medicamento de prue- ba, utilizar la misma técnica de validscién para ambos medicamentos, ya sea la técnica de porcentaje de recu peracidn o la técnica de esténdar adicionado. ¢ La validacién del método analitico se realiza con una muestra pulverizada homogénea y representativa del producto, Esta misma muestra se utiliza durante toda 1a validacién del método. PARAMETROS DE VALIDACION DEL SISTEMA Linealidad. BI error relativo debido a la regresin (Syuy) 8¢ relaciona con fa curva de calibracién del estindar. Preeisién, Calcular para cada punto de la linealidad del sis- tema ol factor de respuesta f (ver anexo estadistico en este capitulo) PARAMETROS DE VALIDACION DEL METODO- Reprodueibilidad, En caso de asignar un mismo analista y tun mismo equipo, sera suficiente evaluar inicamente la va- riabilidad de dia a dia Estabilidad de la muestra, Se reficre a la estabilidad de la solucién preparada para su anélisis. Leer la solucién de referencia al menos por triplicado al ini- cio y al final de cada corrida analitica, el coeficiente de va- riacién de todos los datos no es mayor que el 2 por ciento, La muestra conserva sus caracteristicas durante el tiempo del aniliss. CALCULOS ‘Con los datos de Ia curva de catibracién, realizar un andlisis de regresién lineal donde la variable independiente “X” es la ‘concentracién del principio activo (mg/mL) y la variable de- pendiente “Y” es la respuesta Calcular la ordenada al origen (4), la pendiente (B) y el co- eficiente de determinacién (r'), ‘CALCULO DEL POR CIENTO DISUELTO 1) Sin reposicién del medio de disolucién. 1) Cileulo de los miligramos det principio activo disuettos en el volumen de muestra tomada al /-¢simo tiempo de muestreo (Ei. ‘CALCULOS Farmacopea de fos Estados Unidos Mexicanos. Novena edioién. CY (FH 0) Donde: EL= Miligiamos dcl principio activo disueltos en el volu- men de muestra tomada al -ésimo tiempo de nuestteo. Coneenttacién del principio activo (mg/mL) al i-ésimo ticmpo de muestreo. Fa = Factor de dilucion de la muestra v= Volumen de muestra tomada. Yim Absorbancia del principio activo en la preparacién de Ja muestra al -ésimo tiempo de muestreo. A= Ordenada al origen de la curva de calibracién. B= Pendiente de la curva de calibracién, 1) Cileulo de los miligramos del principio activo disueltos al résimo tiempo de muestreo (Di). ma Di= (XA (Fd) (Vi) +E Bi 0 Donde: Vi=Vo-[(N-I¥] Donde: a Di= Miligramos de! principio activo disueltos al /-simo tiempo de muestreo. Concentracién del principio activo (mg/mL) al i-ésimo tiempo de muestreo. Factor de dilucién de la muestra Volumen del medio de disolucidn al /-ésimo tiempo de smuestreo. Miligeamos del principio activo disueltos en ef volu- men de muestra tomada al /-Esimo tiempo de muestreo. Yo™= Volumen inicial del medio de disolucién. N= Niimero de extracciones. y= Volumen de muestra tomada. ©) Cileulo del por ciento del principio activo disuelto al #-ésimo tiempo de muestreo (24D!) Di Di= (100) Dosis Donde: %Di= Por ciento del principio activo disuelto al i-ésimo tiempo de muestreo. Miligramos del principio activo disueltos al i-ésimo tiempo de muestreo. '= Miligramos de principio activo indicados en la eti- queta. errr errr reece eee ered 2) Con reposicion de medio de disolucion ‘Se utilizan las mismas f6rmulas det punto 1 con Ta siguiente ‘consideracién: Viz Vo Donde’ Vi= Volumen del medio de disolucién al (-ésimo tiempo de mwestreo Pruebas de intercambiablidad 2157 Vo = Volumen inicial 3) Equipos automatizados En caso de que se ulilice un equipo que después de realizar fa lectura, regrese la muestra al vaso de disolucién, no es ne- cesario efectuar los eéleulos de los puntos anteriores, ya que cl equipo procesa los datos y emit los resultados finales. MONOGRAFIAS DE PERFILES DE DISOLUCION ACETILSALICILICO, ACIDO. TABLETAS Metodologia. MG4 0291, Aparato I a 507m Medio. 500 inl. de SA de acetato de sodio trihidratado-écido acético 2.N pH 4,5 a 37°C +0,5°C. ‘Tiempos de muestreo, 5 min; 10 min; 20 min; 30 min y 45 min Andllsis. Método espectrofotométrico ultavioleta a 265 nm-t 2 nm, de acuerdo con la prueba de disolucién de la monografia correspondiente, Acido acetilsatictlico, tabletas. Q no menor que el 80 por ciento en 30 min, ALOPURINOL. TABLETAS Metodologia. MGA 0291, Aparato 2 a 75 rpm. Medio, 900 miL de dcid clorhidrico 0,1 Na 37°C £ 0,5°C. Tiempos de muestreo. 15 min; 20 min; 30 mins 45 min y 60 main, ‘Anillsis. Método espectrofotométrico ultravioleta 2 250 nm, de acuerdo con Ta prueba de disolucién de la monogratia co- rrespondiente a Alopurino, tabletas. Qnno menor que el 75 por ciento en 45 min AMBROXOL, CLORHIDRATO DE. TABLETAS Metodologia. MGA 0291, Aparato 2 a 50 rpm ‘Medio. 900 miL de agua purificada a 37°C + 0,5°C. ‘Tiempos de muestreo, 10 min, 15 min, 20 rin, 30. min y 45 min. Anélisis, Método espectrofotométrico ultravioleta a 308 nm, de acuerdo con la prueba de disolucién de la monografia co nespondiente a Clorhidrato de ambroxol, tablet. EI medicamento de prueba cumple con al factor de similitad (6) indicado en la NOM-177-SSA1 vigente BEZAFIBRATO. TABLETAS Metodologia. MGA 0291, Aparato 2 a 100 rpm. Medio. 500 ml de solucién de fluido intestinal simulado sin enzimas, pH 7,5 a 37°C £ 05°C. Tiempos de muestreo. 10 min; 15 min; 20 mia; 30min y 45 min. Procedimiento. Colocar cada tableta en el aparato con '500 mL del medio de disolucién y accionarlo a 100 rpm du- ante 45 min, Tomar alfcuotas a los tiempos de muestreo in- dicados y si es necesario diluirlas con medio de disolucién previamente filtrado, para obtener concentraciones dentro el rango de fa curva patron (1,0 je/ml-a 12,0 g/ml). ‘Anilisis, Método espectrofotométrico ultravioleta a 229 am, de acuerdo con la prueba de disolucién de 1a monografia correspondiente a Bezafibrato, tabletas. CAPTOPRIL. TABLETAS Metodologta. MG4 0291, Aparato | a 50 rom Medio. 900 mL. de icido clorhidrico 0,1 Na 37°C £0,5°C. Tiempos de muestreo. 10 min; 15 min; 20min; 25min y 30 min. ‘Anilisis, Método espectrofotomeétrico ultavioleta a 212 nm, de acuerdo con la prueba de disolucién de Is monografia co- rrespondiente a Captopril, tabletas. ‘Qnno menor que el 80 por ciento en 20 min, DIMENHIDRINATO. TABLETAS Metodologia, MGA 0291, Aparato 2 a 50 rpm Medio, 900 ml. de agua purificada a 37°C 4 0,5°C. ‘Tiempos de muestreo, 10 min, 15 min, 30 min, 45 min y 60 min. “Analisis, Método espectrofotométrco ultravioleta « 276 am, de acuerdo con la prueba de disolucién de la monografia co- rrespondiente a Dimenhidrinato,tabletas ‘Qno menor que el 75 por ciento-en 45 min, ACETILSALICILICO, ACIDO. TABLETAS INTRODUCCION Los métodos analiticas utilizados para evaluat fa calidad de Jos productos farmacsuticos, estén sujetos @ varios requisitos de acuerdo con la normatividad vigente, asi como, con otros documentos normativos nacionales ¢ internacionales. La Farmacopea de los Estados Unidos Mexicenos (FEUM) es el documento legal instituido por la Ley General de Salud don- de se estabiecen los métodos de andlisis y los requisitos sobre la identidad, pureza, potencia y otras caracteristicas de calidad que garanticen que los farmacos (principios activos), aditivos, medicamentos (preparados farmacéuticos),radio- farmacos y productos biolégicos sean eficaces y seguros Los métodos analiticos de la FEUM no requieren ser valide- dos, sino inicamente verificar su aplicabilidad al producto, bajo las condiciones de operacién de! laboratorio y en fancién del propésito analitico deseado, PROPUESTA DE METODOS ANALITICOS Para proponer un método analitico se pueden considerar dos ‘+ Método revisado que prefende sustituir a un método pu- blicado por la FEUM, con cambios mayores 0 menores rya sea, en las caracteristicas o condiciones de operacién, aspectos instrumentales o reactivos, entre otros. ‘+ Método nuevo cuando se trate de un método analitico no publicado en la FEUM. ’ El proceso que sigue la FEUM para aceptar un método analt- tico propuesto comprende las siguientes etapas: 1, Propuesta de! método por una organizacién, que incluya una base racional, 2. Revisién de la fimdamentacién técnica que incluye la do- cumentacién necesaria, para que la Comisién Permanente de ln FEUM (CPFEUM) pueda tomar la decision respec- to a la posible aceptacién del método, en funcién de los resultados de la validacién del método propuesto, 3. Verificacién del método propuesto, A criterio de la CPFEUM se revisaré parcial o totalmente la documenta- cidn de la validacién del método propuesto y se realizaré tun estudio colaborativo. 4, Evalacién del método, 5. Aceplacién para publicacién en consulta pablica, andlisis, de las observaciones realizadas y su publicacién en la FEUM 4. BASE RACIONAL DEL METODO Los métodos analiticos que se propongan por una organiza cién para ser incluidos en la FEUM, deben presontarse por EEE Validacion de métodos analiticos 2427 medio de una solicitud ditigida a la Diteccién Ejecutiva de la CPEEUM, indicando el area de aplicacién farmacopeica (métodos generales de andlisis, preparados farmacéuticos, firmacos, aditivos, radiofarmacos y productos biolgicos) y su base racional, donde se identifique la necesidad del méto- do, su factibilidad y en su caso el porqué es preferide sobre el método farmacopeico. Para los métodos revisados se debe proporcionar una comparacién de las limitaciones del méto- do farmacopcico'en uso y las ventajas que ofrece el método analitico propuesio, por medio del andlisis estadistico correspondiente 2, FUNDAMENTACION TECNICA En esta etapa, la organizacién debe presentar a la CPFEUM la documentacién necesaria que describa completamente al método analitico y su validacién (protocolo e inferme), Io suficientemente detallada, que permita su evaluacién, La descripcién del método puede incluir, entre otvos, titulo, fundamento, objetivos, materiales, reactivos, instrumentos, ccaracteristicas operacionales importantes, instrucciones es- pecfficas, tales como: pruebas de verificacién, preparaci de las mucstras, uso de sustancias de referencia, soluciones, bblancos utilizados; precauciones que deben tomarse en cuen- tay las férmulas explicitas para realizar los céleulos requeridos, 3. VERIFICACION DE LA APLICACION ANALITICA DESEADA DE ACUERDO ASU PROPOSITO DE USO La verificacién es la confirmacién mediante la aportacién de evidencia de que se han cumplido los requisitos especifica- dos. La confirmacién puede comprender acciones tales como la ealizacién de ensayos/prucbas y demostraciones. La CPFEUM Ilevaré a cabo la revisién documental de los re- sultados completos de la validacién del método analitico propuesto, que presente la organizacién solicitante. Depen- diendo del resultado emitide por la CPFEUM la verificacién puede ser parcial o total Validacion La validacin de un método es el proceso que establece, me- dante estudios de laboratorio; que las earacteristicas de des- cempeiio del método, satisfacen los requisitos para su aplica- cién anaitica, INTRODUCCION 2428 HL proceso de validacién de los métodos analiticos puede omprender peco no esta limitado al estudio de las earacteris vas de desempeiio que se deseriben en la Tabla } Tabla 1. Caractevisticas de desempeilo analitico recomendadas en la validacin de los métodos analiticos, Verificacion del sistema Precision del sistema ‘Linealidad del sistema Bspecificidad/Selectividad del método Exactitud det método Linealidad e intervalo del método Procisién del método Limite de deteceién del método Limite de cuantificacién del método Robustez del método Tolerancia del método Los miétodos analiticos para fines de validacién se clasifican en cuatro categoria, ya que requieren de diferentes esque- mas de estudio: Categoria I. Métodos analiticos para cuantificar a un com- pponente especifico en muestras de producto terminado 0 en pruebas de estabilidad, ya sea en firmacos, aditivos o prepa radas farmacéuticos, w otros analitos de interés (conservado- res, solventes, ete.) Categoria I. Métodos analiticos para la determinacién de impurezas (productos de degradacién, sustancias relaciona- das, isémeros Spticos, etc.) en mucstras de firmacos, prepa rados farmacéuticos y aditivos, Estos métodos pueden inchuir determinaciones cvantitativas o prucbas limite. En estas tl- timas, el interés es establecer si el analito, excede 0 no, un valor limite. Los métodos de pureza quedan incluidos en esta categoria Categoria IHL. Métodos analiticos utlizados en la determina- cidn de un analito en una muestra con el objeto de evaluar una caracteristica de desempefto del preparado farmacéutico (disolucién en cépsulas, liberacién controlada en tabletas, centre otras). Categoria IV. Pruebas de identificacién de un analito en muestras de firmacos, aditivos o preparados farmacéuticos, cuyo propésito es establecer la presencia del analito de interés. Padieran presentarse casos de métodos no clasificables en alguna de estas categorias, por lo que el usuario debe esta- blecer con claridad ol propésito analitico. En términos del estudio de laboratorio, los requisites min ‘mos de las caracteristicas de desempefo, deben documentar- Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. Novena edicién. se en un protucolo, ejecuarse y, al término de éste, elaborar un informe donde se establezca su validex, ‘4 continuacida se establecen los lineanientos generales para ‘cada caracteristica de desempeiio, en términos de su defini- cin, ejecucién en el laboratorio y del analisis de los resulta dos. Es conveniente que en el protocolo de validacion se considere el orden de estudio de las caracteristicas indicadas ent la Tabla 2 CARACTERISTICAS DE DESEMPENO- ANALITICO YVERIFICACION DEL SISTEMA Si las mediciones son susceptibles a los cambios de las con- Giciones analiticas, éstas deben ser controladas adecuada- mente o debe incluirse en el método una nota de precauciéa al respecto; por lo que cs conveniente establecer una serie de pruebas de la verificacién del sistema, que aseguren un co- recto funcionamiento del método, durante su uso rutinaro. ‘Las pruebas de verificacién del sistema se basan en el con- ccepto de que: el equipo ¢ instrumentos de medicién, las ope- raciones analiticas y las muestras que van a ser analizadas cconstituyen un sistema integral, que puede ser evaluado co- ‘mo tal, Las caracteristicas que se establecen como represen tativas de la verificacién, dependen del tipo de método a ser ‘evaluado. Estas son importantes especialmente en el caso de los métodos cromatogriticos. Definicién. La verificacién del sistema son prucbas utiliza- das para verificar que el sistema funciona correctamente, con base en criterios establecidos previamente. Esta verificacién permite establecer la confiabilided del sis tema, antes del procesamiento de las muestras durante el uso rutinario del método; también se le conoce como buen 0 co- recto funcionamiento del sistema. Determinacién. En funcién del sistema de medicién, se de- ben establecer as caracteristicas relacionadas con su funcio~ namiento correcto, basadas en el tipo de equipo e instrumen- tacién utilizado en el método, Estas pueden ser definidas en funcin de una respuesta analitica, como pueden ser sus pro- piedades, su variablidad, su forma, su tiempo de respuesta, indicadores de separacidn, indicadores de eficiencia, res- puesta de blancos, entre otro. En Ia fase de desarrollo del método, las caracteristicas men- cionadas anteriormente y sus criterios de aceptacién deben ser establecidas; durante la validacién, la verificacién debe ser Gnicamente verificada. Anilisis de datos. Los criterios de aceptacién deben set cumplidos. 3, VERIFICACION DE LA APLICACION ANALITICA DESEADA DE ACUERDO ASU PROPOSITO DE USO PRECISION DEL SISTEMA Et sistema: analista, equipo e instrumentos de medicién, so- luciones de referencia, etc. originan una varibilidad iaheren- te asociada a la respuesta analitica (absorbancia, transmit cia, mililitros consumides, érea det pico, altura del pico, drea relativa, peso, entre otros), que en general es aditiva ala del rétodo, por lo que, es importante verificar, que su valor no sea una fuente importante de la variabilidad. Definicion, La precision del sistema es el grado de concor- dancia relativa de la respuesta analitica de soluciones de ro- ferencia de concentracién o magnitud conocida, Determinacién, A partir de una sustancia de referencia, el ‘analista debe preparar por lo menos seis soluciones que re- presenten al 100% de la cantidad 0 concentracién del analito tn la muestra, ya sea, por dilucién o por pesadas indepen- dientes y medit la respuesta dentro de una misma corrida analitica, Andlisis de datos, Calcular el coeficiente de variacién de la respuesta analitica. Este valor debe cumplir con un criterio previamente establecido en funcién de Ia naturaleza de ta respuesta analitica (fisica, quimica o biolégica) 0 de la cate- sgoria del método. LINEALIDAD DEL SISTEMA Cuando a relacién entre Ia concentracién y la respuesta del analito (0 sus transformaciones materniticas) no es lineal dentro del intervalo de trabajo, dard lugar a inexacttud del ‘étodo analtico, por lo que, es conveniente verificarlo bajo Jas condiciones del laboratorio. Definicién. La linealidad del sistema es Ia verificacion de ‘que fa respuesta anaitica y la concentracién del analito (puc- de ser una sustancia de referencia) se ajustan al modelo ma- tematico, en un intervalo de concentraciones pertinentes 2 1a aplicacién analitica Determinacién. Se debe investigar la relacién concentra cién-respuesta en un intervalo que incluya al menos S niveles, por triplicado, de la concentracién del analito. EL intervalo debe incluir las concentraciones esperadas del ana- lito segiin la aplicacién analitica de! método. Este concepto generalmente se denomina “curva de calibra- cin” y es parte esencial de varios métodos analiticos en las determinaciones cuantitativas del analito. Analisis de datos, Estimar los parémetres dei modelo basa- do en métodos estadisticos (minimos cundrados, méxima ve~ rosimilitud, ete.). Deben establecerse critcrios de aceptacién para definit la calidad de ajuste al modelo, que como minimo Validacton de méfodos analiticos 2429 consideten un efecto significative del modelo, una magnitud ‘minima del coeficiente de determinacién o una prucba esta Bs importanie esiablecer Ia lineatidad ya sea bacada on ct ccoeficiente de determinacién o en la prueba de falta de ajus- te, para dar validez al céleulo. En el caso de los métodos que serén propuestos para ser con. siderados como un método incluido en la FEUM, casi munca es necesario determinar el limite de deteceién real, mis bien el limite de detecoién debe ser menor que la especificacién del nivel de la impureza. LIMITE DE CUANTIFICACION DEL METODO El limite de cuantificacién es una caracteristica de desempe- fio analitico, que determina la capacidad cuantitativa del m todo a concentraciones bajas del analito en la muestra y se debe determinar en los. métodos cuantitativos categoria I (ver Tabla 2) Definicién. 1 limite de cuantificacién (LC) es la cantidad ‘minima de analito en una muestra que puede ser determinada ‘con exactitud y precisiin aceptable, bajo las condiciones de aplicacién del método. Las unidades del limite se expresan como se indica en el método analitico (por ejemplo porcenta~ je, ppm, partes por billn, mg/g, et.) Determinacién para méfodos no instrumentals. Es nece- sario generar una relacién concentracién adicionada vs res- puesta anelitca, con al menos tres niveles de concontracién por tiplicado, lo que permit investigar la linealidad, esti- ‘mar Ia pendiente (b) y una medida del error de ta respuesta analitica (8, ), como lo es la desviacin estindar de la regre- sién (S,,) 0 la desviacién estindar de la ordenada al origen (6,). También una medida dei error se obtiene con el célculo Ge Ia desviacion esténdar de la respuesta analitica de al me- nos cinco blancos o de cinco matrices analiticas no adiciona~ das de analito (sy). Anilisis de datos para métodos no instrumentales. Elli tne eesrenctn ae cael ne a age eect: 106, 6 Es importante establecer la linealidad ya sea basada en el co- eficiente de determinacién o en la prueba de falta de ajuste, ppara dar validez al céleulo del LC. LCs Determinacién para métodos instrumentales. El limite de cuantificacién se puede determinar empleando el procedi- miento de la sefial-ruido o el de linealidad. En el primero, se evalia obteniendo las respuestas analiticas de muestras de concentraciones conocidas del analito y por el establecimien- to de la respuesta analitica a una concentracién cero del ana- 43, VERIFICAGION DE LA APLICAGION ANALITICA DESEADA DE ACUERDO [ASU PROPOSITO DE USO lito (blanco © matriz analit ‘mente se llama sefal-ruido, ica sin analito) a Je que comin- En el procedimiento de linealidad, es necesario generar una relacién concentracién vs respuesta analitica, con al menos. tres niveles de concentracién por triplicado, lo que permitiré Flecetén de los niveles. Para fijar los niveles de cada factor, 8 conveniente utilizar Ia Tabla A2, en la cual para cada fac” tor se manejen tres columnas denominadas nivel bajo, nivel notmal y nivel alto. Bt nivel normal es el valor del factor re~ portado y ejecutado en el método analitico, lo que comiin- mente se dice como condiciones normales de operacién. La scleccién de los niveles bajo (-) y alto (+) deben ser fijados bajo el concepto de “cambios pequefios y deliberados”. ‘También es posible que por cuestiones experimentales, el ni- vel normal del factor pueda ser utilizado como nivel bajo 0 alto o se investiguen grandes cambios. No es necesatio incluir aquellas filas asignadas a factores, falsos, como se observa en Ja Tabla A3, Determinacién de las corridas. Las cotridas analiticas son determinadas anxilindose de la denomirada matriz de tae tamicntos (Table Ad), 8.ANEKOA 2436 Table 42, Formato para fijar los niveles de end factor Nivel otra Factor "Normal Tabla A3. Bleceién de niveles. Letra Factor Nivel Bajo) Normal Alto A pH 58 6 62 © %dereactive 9,5 to 10,5 D— Volumen (ul) 48 sa 38 F —Flujo(mLémin) 0.75 08085 G Temperatura Baja Ambiente Ambiente de fase movil Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. Novena edicién. Cerrida 3: 6.2 de pll, 10,5 % del reactive, 45 wl. de vow. mien de inyeceidn, 0.85 ml Imin de velocidad de Slujo y temperatura baja de la fase mével (hielo en el reservorio de ki fase movil) Corrldia 4: 5,8 de pH, 10,5 % del reactivo, 55 ji. de vou men de inyeccién, 0.75 mL/min de velocidad de Fujo y temperatura amibiente de la fase mil Corrida 5: 6,2 de pH, 10,5% del reactivo, 55 pl. de volu- rien de inyeceién, 0,75 mL/min de velocidad de flujo y temperatura baja de la fase mévil (hielo enel reservorio de la fase movil), Corrida 6: 5,8 de pH, 9,5 % del reactivo, 55 nL de volumen de inyeccidn, 0,85 mL/min de velocidad de flujo y temperatura baja de la fase mévil (hielo en el reservorio de la fase mévil). Corrida 7: 5,8 de pH, 10,5 % del reactive, 45 wl de volu- men de inyeccién, 0,85 mL/min de velocidad de flujo y temperatura ambiente de la fase mévil 5,8 de pH, 9,5 % del reactivo, 45 u. de volumen de inyeccién, 0,75 mL/min de velocidad de flyjo y temperatura baja de la fase mévil (hielo en el reservorio de la fase movil. Corrida 8: Tabla AS. Corvidas analiticas. Nota; a nivel prictico, la temperatura baja de la fase mévil se consigue vaciando hielo al reservorio. Tabla Ad. Mawriz de tratemientos. Corrida Nivel del factor analitica ABC DE FG T +o 2 eee eet ae eet tt 3 BE Ee ee ae Bare pe 4 PEE Ee Eee Eee eeee eee 5 SEE eee eee 6 EE Ee ee eee Eee eee 7 soe ee Re Ejemplo: Considerando los niveles de los factores y Ja matriz. de tratamientos, se fijan fas condiciones de las ocho corridas analiticas y se establece la matriz para este caso (Ver Ta bla AS): Corrida 1: 6,2 de pH, 9,5 % del reactivo, 55 uL de volumen de inyeccién, 0,85 mL/min de velocidad de flujo y temperatura ambiente de la fase mévil. 2 de pH, 9,5 % del reactivo, 45 uL de volumen de inyeccin, 0,75 mL/min de velocidad de flujo y temperatura ambiente de la fase movil Corrida 2: 6. ANEXOA ‘Nivel del factor ie a A OT anal; Fae yg, VOR pata, dye Tempera ee pt or 620, wn OY Barnet fie feo per Ta ss TRF Ambiente 2 62 + Os 4+ O75. Ambiente 362 + 108 43> ORS Bae 4058 $105 35-075 Ambione $62 - WS 58 4 OS By 6 Sk + 0s ss + 08S ae 758+ 105 45+ 085. Ambiente se oss O75 Baa Ejecucién de las corridas y resultados. Un analisia debe cjecutar las ocho corridas analiticas bajo un orden previa~ mente establecido, siendo esencial que las comridas sean in- dependientes, Se debe emplear para todas las corridas la misma muestra homogénea, manteniendo constantes todas las ottas condiciones establecidas en el método (materiales, equipos, reactivos, soluciones, ete.). Los resultados pueden ser reportados utitizando el formato mostrado en el ejemplo de la Tabla A6, donde y es el resultado del contenido, valo- racién 0 potencia del analito en la muestra segtin el método. Ejemplo: Los resultados del estudio de robustez. de] método analitico de cromatografia de liquids de alta resolucién se informan en la Tabla A7: 2437 Validacién de métodos snaiiticos Tabla AG, Resultados del estudio de robustez. Corride analitlea Nivel del factor Respuesta BoC DE e +]s y va » = + oy - - Ms ar SE ee eee terete c tee bate Analisis de resultados, El anilisis de los resultados con- siste en: 1, Célculo de los contrastes de cada factor y de los fectores falsos: Cpe Wt Vat Vat Vs~ Vat Yor Vr tM) Yat at Vat Ve~ Ont Ys + Vy tM) + Yet Yet Vr (Uta FY AM) Com Wit Yat Ys Ye — (a Yat tM) Ce = Vat V+ Yet Vy ~ Ot Is + Yat Ya) Ce = Itt Yet Yr — (Wat Ya ts + Ye) Co = + Vat Yat Vy — Os + Ys + Ye + Ye) 2, Céileulo de la suma de cuadrados de cad factor. La suma de cuadrados de cada factor se calcula con Ja si guiente ecuacién: Donde: C= Cada uno de los factores. 3, Céleulo de la suma de cuadrados del error y la media de ‘cuadrados del error. La suma de cuadrados del error, se calcula al sumar las SC, de todos los faciores falsos. oe SC, DS Donde: i= Cada factor falso La media de cuadrados del error se calcula con la siguiente cuacién: Me, «5 f Donde: f= Niimero de factores falsos. 4, Cileulo de la Fy para cada factor. Para cada factor se calcula su Fx, com la siguiente ecuacién: Tabla A?. Resultados de los estudios de robustez del método analitico por cromatografia de liquidos de alta resolucién, Nivel del factor Corrida ry B c D E F cS (meee caattorg analiten Factor %de Volumen Factor Flujo” Temperaturade de producto) PH tatso_reactivo (ub) falso_(ooL/min) fase movil 7 2 ~ SSS 085 Ambiente wa 2 62 + sas + 075 Ambiente 745,26 3 62 + 19s 48 + 085 Baia 681,37 4 58 + 1S 55 © 075 Ambiente 865,82 5 62 - 10358 + 075 Baja 342,78 6 58 os 38 + 085 Baja 755662 7 58 Ss + 085 Ambiente 39.54 § 58 ws 8 = 078 Baja 63347 6. ANEXO A, a este caso SCe = Mc. daclo que a cada uno de los facrnras te rovvesponvte an solo grade de libeviad Toma de decision respecte al efecto de cada factor La toma de decisin respecto al efecto de cada Factor, se basa en la siguiente regla Sic Fi, gf, se presenta efecto del factor SiFur

    También podría gustarte