TEMA:

CROMATOGRAFIA DE AZUCARES

OBJETIVOS

Generales

o Realizar la cromatografa de los azucares mediante el papel Whatman los

azucares que contiene una muestra desconocida y su respectivo calculo
(factor de retencin)

Especficos

o Conocer como se realiza una cromatografa

o Determinar la muestra desconocida mediante la cromatografa

o Calcular el factor de retencin (Rf) a las muestras de azcar

PROCEDIMIENTO

CROMATOGRAFIA ASCENDENTE EN PAPEL DE AZUCARES

Colocamos sobre el mesn las diferentes muestras

GLUCOSA ? SACAROSA FRUCTOSA

2cm

X XXXXX 2 cm
Colocamos debajo de cada una de las X el nombre de una de las muestras dadas

X X X X

Glu ? Sac fruc

Sostenemos los extremos del hilo y sumergimos el papel en la cuba de modo

que la lnea de lpiz, quede un poco mas arriba del nivel del solvente (butanol
acido actico ter agua (45:35:5:15)

Pegamos los extremos del hilo a los lados de la cuba con cinta, e
inmediatamente procedemos a cerrar la cuba.

Dejamos correr la cromatografa, hasta que el solvente llegue al margen

superior

Sacamos el papel de la cuba y esperamos que se seque

REVELADO DE LA CROMATOGRAFIA

El revelado se realiza al sumergir el papel cromatografico en:

1.- En solucin de 2.- En solucin de 3.-En solucin de

AgNO3 al 0.5% en KOH al 5% en NH3 al 3%
acetona etanol

Secar al aire libre, Esperar que Lavar con un

pasara a la aparezcan chorro de agua y
siguiente solucin manchas, lavar secar al aire
y asi con un chorro de
 Rf = factor de retencin Rf menor a 1
Clculos
X = distancia entre la superficie dejada por el
solvente hasta el centro de la mancha de la
muestra (cm)

Y = distancia entre la superficie dejada por el

solvente hasta el nivel del frente del solvente
(cm.)

Muestra de Glucosa Muestra de sacarosa

1.8
= = 0.15
11.3
 Muestra de fructosa
Muestra desconocida

RESULTADOS

# de Muestra aplicada x(cm) y(cm) Rf

Muestra

1. Glucosa 1.8 11.3 0.15

2 Fructosa 2.6 11.3 0.23

3 Sacarosa o.6 11.3 0.05

4 Muestra problema 1 11.3 0.08

(2)
2.7 o.23

OBSERVACIONES

PROCEDIMIENTO/REACTIVO AGREGADO CARACTERISTICAS OBSERVADAS

ADICION DE LA MUESTRA EN EL PAPEL DE Al colocar la cantidad necesaria de muestra con la

CROMATOGRAFIA ayuda del capilar en el papel whatman se absorbe
rpidamente, para secarlo se lo debe agitar
PAPEL EN LA CUBA Se puede observar la huella del nivel del solvente
sin presencia de manchas

REVELADO CROMATOGRAFICO

AgNO3 al 0.5% en acetona El cromatograma permanece igual su color

KOH al 5% en etanol El papel toma un color caf y las manchas toman un

color mas intenso del papel

NH3 al 3% Al igual con el reactivo anterior permaneca del

mismo color pero las manchas se notaban mucho
mas

Nota en muestro papel se torno totalmente oscuro talvez porque no fue papel whatman sino
papel filtro.

Conclusiones

Al realizar la presente prctica llegamos a la conclusin

o Para realizar la cromatografa de las muestras se debe utilizar sustancias puras o

estndares, para as poder determinar la muestra desconocida mediante las observaciones
de los resultados (lectura del revelado cromatografico )

o El revalo cromatografico se lo puede realizar mediante diversos reveladores es decir

diferente composicin de los reactivos

o El calculo para determinar el factor de retencin obtuvimos los siguientes resultados

Muestra aplicada Rf

Glucosa 0.15

Fructosa 0.23

sacarosa 0.05

Muestra desconocida 0.08

o.23
Se puede notar que el azcar que tiene un mayor Rf es la fructosa porque tienen un valor de 0.23
por lo que va a tener mayor facilidad de ser desplazado por el solvente desde la fase mvil a la
fase estacionaria lo que no ocurrir con la sacarosa

o En la muestra desconocida se podra concluir que es una mezcla de los 3 azucares primero
porque en el calculo del Rf tienen una valor similar al de la sacarosa (0.05- 0.08) aunque en
la lectura la sacarosa empieza la mancha desde el origen lo que no ocurre con la muestra.
Tambin contiene glucosa pues estn al mismo nivel pero con seguridad la muestra
desconocida tiene fructosa ya que se pudo observar que se encuentran al mismo nivel y
edemas tienen el mismo valor de Rf.

Bibliografa.

o ANGULO Ugalde, Y. Bioqumica Manual de laboratorio Universidad de Costa

o Biblioteca de Consulta Encarta 2009

o http://www.wiquipedia/wiki.disacridos/wiki/wiki.htm

Revelado cromatografico