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Este documento proporciona instrucciones para determinar cuantitativamente el colesterol en suero o plasma mediante un método enzimático. El método mide el colesterol presente en la muestra que origina un compuesto coloreado cuya intensidad es proporcional a la concentración de colesterol. Se proveen detalles sobre los reactivos, el procedimiento, cálculos, control de calidad, características, interferencias y valores de referencia.
Este documento proporciona instrucciones para determinar cuantitativamente el colesterol en suero o plasma mediante un método enzimático. El método mide el colesterol presente en la muestra que origina un compuesto coloreado cuya intensidad es proporcional a la concentración de colesterol. Se proveen detalles sobre los reactivos, el procedimiento, cálculos, control de calidad, características, interferencias y valores de referencia.
Este documento proporciona instrucciones para determinar cuantitativamente el colesterol en suero o plasma mediante un método enzimático. El método mide el colesterol presente en la muestra que origina un compuesto coloreado cuya intensidad es proporcional a la concentración de colesterol. Se proveen detalles sobre los reactivos, el procedimiento, cálculos, control de calidad, características, interferencias y valores de referencia.
CLCULOS IVD ( A ) Muestra Conservar a 2-8C x Conc. Patrn = mg/dL de colesterol en la muestra ( A ) Patrn PRINCIPIO DEL MTODO Factor de conversin: mg/dL x 0,0258= mmol/L. El colesterol presente en la muestra origina un compuesto coloreado segn la reaccin siguiente: CONTROL DE CALIDAD CHE Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control steres colesterol + H2O Colesterol + cidos grasos valorados: Colesterol + O2 CHOD 4-Colestenona + H2O2 SPINTROL H Normal y Patolgico (Ref. 1002120 y 1002210). Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se POD 2 H2O2 +Fenol + 4-Aminofenazona Quinonimina + 4H2O debe revisar los instrumentos, los reactivos y la calibracin. La intensidad del color formado es proporcional a la concentracin de Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y 1,2 colesterol presente en la muestra ensayada . establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias. SIGNIFICADO CLNICO VALORES DE REFERENCIA El colesterol es una sustancia grasa presente en todas las clulas del Evaluacin del riesgo5,6: organismo. El hgado produce naturalmente todo el colesterol que Menos de 200 mg/dL Normal necesita para formar las membranas celulares y producir ciertas hormonas. La determinacin del colesterol es una de las 200-239 mg/dL Moderado herramientas ms importantes para el diagnstico y clasificacin de 240 o ms Alto las lipemias. El aumento del nivel de colesterol es uno de los Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio 5,6 principales factores de riesgo cardiovascular . establezca sus propios valores de referencia. El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los CARCTERSTICAS DEL MTODO datos clnicos y de laboratorio. Rango de medida: Desde el lmite de deteccin 0,113 mg/dL hasta el lmite de linealidad 750 mg/dL. REACTIVOS Si la concentracin de la muestra es superior al lmite de linealidad, diluir PIPES pH 6.9 90 mmol/L 1/2 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2. Fenol 26 mmol/L Precisin: Colesterol esterasa (CHE) 1000 U/L Intraserie (n=20) nterserie (n=20) R Colesterol oxidasa (CHOD) 300 U/L Media Peroxidasa (POD) 650 U/L 99.789 185.309 96.346 184.962 (mg/dL) 4 - Aminofenazona (4-AF) 0,4 mmol/L SD 1.213 1.405 4.196 12.773 (mg/dL) CHOLESTEROL CAL Patrn primario acuoso de Colesterol CV (%) 1.216 0.758 4.355 6.906
Sensibilidad analtica: 1 mg/dL = 0,0015 (A).
PREPARACIN Exactitud: Los reactivos SPINREACT no muestran diferencias sistemticas Todos los reactivos estn listos para su uso. significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales. Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes: CONSERVACIN Y ESTABILIDAD Coeficiente de correlacin (r): 0,9968. Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de Ecuacin de la recta de regresin: y= 0.9797x + 2.2803. caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen Las caractersticas del mtodo pueden variar segn el analizador utilizado. los viales bien cerrados a 2-8C, protegidos de la luz y se evita su INTERFERENCIAS contaminacin. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. No se han observado interferencias de hemoglobina hasta 5 g/L y Indicadores de deterioro de los reactivos: bilirrubina hasta 10 mg/dL1,2. Se han descrito varias drogas y otras - Presencia de partculas y turbidez. substancias que interfieren en la determinacin del Colesterol3,4. - Absorbancias (A) del Blanco a 505 nm 0,26. NOTAS MATERIAL ADICIONAL 1. CHOLESTEROL CAL: Debido a la naturaleza del producto, es - Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 505 nm. aconsejable tratarlo con sumo cuidado ya que se puede contaminar con - Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. facilidad. - Equipamiento habitual de laboratorio. 2. LCF(Lipid Clearing Factor) est integrado en el reactivo. 3. La calibracin con el Patrn acuoso puede dar lugar a errores MUESTRAS sistemticos en mtodos automticos. En este caso, se recomienda Suero o plasma1,2. Estabilidad de la muestra 7 das a 2-8C y 3 utilizar calibradores sricos. 4. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensacin. meses si se mantiene la muestra congelada (-20C). 5. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicacin de este reactivo en distintos analizadores. PROCEDIMIENTO 1. Condiciones del ensayo: BIBLIOGRAFA Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 505 nm (500-550). 1. Naito H.K. Cholesterol. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1194-11206 and 437. Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz 2. Meiattini F. et al. The 4-hydroxybenzoate/4-aminophenazone Chromogenic Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37C /15-25C System. Clin Chem 1978; 24 (12): 2161-2165. 2. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada. 3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995. 3. Pipetear en una cubeta: 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001. Blanco Patrn Muestra 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999. 6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995. R (mL) 1,0 1,0 1,0 Patrn (Nota1-2) ( L) -- 10 -- PRESENTACIN Muestra ( L) -- -- 10 Ref: 41020 2 x 50 mL Cont. 4. Mezclar e incubar 5 min a 37C 10 min a 15-25C. Ref: 41022 . 2 x 100 mL 5. Leer la absorbancia (A) del patrn y la muestra, frente al Ref. 41021 2 x 250 mL Blanco de reactivo. El color es estable como mnimo 60 Ref. 41019 1 x 1000 mL minutos.
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Universidad Nacional Experimental Francisco de Miranda Aprendizaje Dialógico Interactivo Programa Municipalizado Carirubana Ciencias de la Salud – Medicina Medicina Interna