Calibracin

En el espectro de masas conseguido por el modo de EI (impacto electrnico) que es una tcnica de ionizacin dura en el cual las
molculas de la muestra sufren el impacto directo de un chorro de electrones y, como consecuencia, pierden uno de ellos y en
donde al mismo tiempo, la molcula gana mucha energa interna., se identificaron 24 compuestos presentes en el estndar.

En el espectro de masas conseguido por el modo de CI (ionizacin qumica) que es una tcnica de ionizacin suave en el cual el gas
sufre el impacto de un chorro de electrones y se ioniza. El gas ionizado impacta contra las molculas de la muestra que adquieren
un protn y muy poca energa interna, se identificaron 21 compuestos.

A estos compuestos se les calibro, para hallar los valores estadsticos necesarios para cuantificar los metilesteres del aceite de la
crislida del gusano de seda.

En los fragmentogramas por EI, que es el resultado grfico cuando en el espectro de masas de una sustancia se registran nicamente
algunos iones (preseleccionados) caractersticos o diagnsticos, las corrientes inicas parciales procesadas en funcin del tiempo;
en stos aparecen exclusivamente picos cromatogrficos de las sustancias de inters , se observan por lo general los iones 74 y 87
los cuales son los ms abundantes. En la figura 3 se observa el espectro de masas del metil estearato el cual muestra como iones
ms abundantes a los iones 74 y 87, y como iones de menor abundancia al in de peso molecular [M]+ (298 para el metil estearato)
y al in [M - 31]+ .

Los iones 74 y 87 se atribuyen al rearreglo de McLafferty, un estado de transicin de seis miembros que resulta en una transferencia
del hidrgeno gamma y una ruptura betha (fig. 5). La intensidad de los fragmentos de McLafferty depende del numero de enlaces
phi en la molcula y es comnmente observado en el espectro de esteres, cetonas y olefinas
Los iones [M - 31]+ fueron producidos por la perdida de CH3O [M]+ del (Fig. 6). Este in es producido cuando una simple ruptura
homoltica del enlace metoxi produce un in acilo comnmente observado

En los espectros por CI de los cidos grasos saturados el in que se observa por encima de una abundancia de 50 es el in [M +1]+
con una abundancia de 100.

Para la calibracin del mtodo se usaron diluciones del estndar de mezcla de FAMEs en concentraciones desde 7,5 hasta 100
ppm. Inyectando estos, y seleccionando los niveles que mejor correlacionaran con la recta.

En la figura 8, se presentan una de las curvas de calibracin realizadas por el modo de EI para uno de los metilesteres de cidos
grasos ms representativos.

Datos estadsticos, empleados para la calibracin de los compuestos.

R2: coeficiente de correlacin
SD: desviacin estndar
RSD: desviacin estndar relativa.
LD: limite de deteccin
LC: limite de cuantificacin
LOL: limite de linealidad
En la figura 9 se expone una de las curvas de calibracin para el anlisis de metilesteres de cidos grasos por el modo de CI.

Los coeficientes de correlacin (R2) obtenidos fueron mayores a 0,975; indicando que existe correlacin con una probabilidad
elevada. En cuanto a la precisin del mtodo evaluada con los parmetros de desviacin estndar (SD) y la desviacin estndar
relativa (RSD) se encuentran dentro de los valores aceptados (RSD < 50 ppmil) indicando que el grado de concordancia entre los
resultados obtenidos a partir de replicas de la misma muestra es alto y que los anlisis son repetibles

Tanto los valores de R2, SD y RSD fueron suministrados por el software del equipo.

Como se aprecia en la tabla 2, para la mnima cantidad de analito detectable (LD) todos los valores estn por encima de 0,0030
ppm; mientras que para la mnima cantidad de analito que se puede cuantificar (LC) todos estn por debajo de 0,0098 ppm;
teniendo en cuenta que los cidos grasos son componentes mayoritarios de los aceites de cualquier matriz oleica, evitando de esta
manera falsos positivos y falsos negativos.
Todas las curvas de calibracin realizadas fueron forzadas a pasar por cero para disminuir el error estadstico, por lo tanto las
pendientes de las curvas son iguales a la sensibilidad y el intercepto es 0.

Las sensibilidades obtenidas por ambos mtodos de ionizacin defieren mucho, se puede advertir fcilmente que la sensibilidad
por EI es mucho mayor que por CI, lo que nos indica que la habilidad de distinguir entre diferentes concentraciones del analito es
mucho mayor con la ionizacin por impacto electrnico. Para la determinacin de el lmite de linealidad, se tom como el rango
entre el limite de cuantificacin y la concentracin del analito a la cual la curva de calibracin pierde su linealidad (LOL).

3.2. Anlisis de muestras reales.

Se selecciono el aceite de la crislida de Bombix mori Linn Hibrido Pilamo 1 como muestra real por su importancia para el grupo de
investigacin de OLEOQUMICA en la Universidad Tecnolgica de Pereira.

El anlisis del aceite de crislida de Bombix mori Linn Hibrido Pilamo 1 (figura 10) reporta como cido mayoritario al cido oleico
con 43,752 % de abundancia (tabla 3). Demostrando que el mtodo es apto para el anlisis de FAMEs.

4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

La tcnica cromatogrfica acoplada a espectrometra de masas para el anlisis de metilesteres de cidos grasos, mostr valores
estadsticos adecuados para la cuantificacin de estos; coeficientes de correlacin (R2) cercanos a la unidad, intervalos de linealidad
amplios, entre 0,0098 hasta 75 ppm, cubriendo as un rango amplio de concentraciones, limites de deteccin por debajo de 0,0030
ppm y cuantificacin por encima de 0,0098, y altos valores de sensibilidad, especialmente con ionizacin por impacto electrnico
donde la curva con menor sensibilidad es la del metil docohexanoato con 4.4445,4; lo que permite una adecuada diferenciacin
entre dos concentraciones cercanas.

Aunque las curvas por el modo de EI fueron ms sensible que por CI, en promedio 60 veces (llegando hasta 300 veces), presenta la
desventaja de que la mayora de los compuestos tienen como in de mayor abundancia a m/z 74 y no presenta el in molecular, lo
que hace ardua la identificacin de los picos de los cromatogramas. Pero la ventaja de la ionizacin qumica en los metilesteres es
que la mayora de estos, presenta su in molecular como [M +1]+ y no tienen iones comunes, haciendo ms sencilla la identificacin
de los compuestos derivatizadosde cidos grasos de cualquier matriz. Aunque los dos modos de ionizacin tienen sus pros y sus
contras, se recomienda la realizacin del anlisis por ambos mtodos, debido a la fcil identificacin por el modo de CI y a la
adecuada cuantificacin por el modode EI.